CC BY
367
УДК: 615:322:547.56:577.114
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИИ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ VIOUIODORATAL.
Курский государственный медицинский университет, 305041, г. Курск, ул. КМаркса, 3
Р.А. Бубенчиков
Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в сырье фиалки душистой (Viola odorata L), основанная на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом. Оптимальными условиями для извлечения флавоноидов является степень измельчения 1-2 мм, экстракция 70% спиртом этиловым в соотношении сырье-экстрагент (1:100) в течение 45 минут. Содержание суммы флавоноидов в надземной части фиалки душистой колебалось от 1,15 до 3,21%.
e-mail: fg.ksmu@mail.ru
Ключевые слова: фиалка душистая (Viola odorata L), трава, флавоноиды, спектрофотометрия.
Введение
Фиалка душистая - многолетнее травянистое растение семейства фиалковых (Ую1асеае), широко распространенное на Европейской части России, Кавказе [7].
Надземная часть фиалки душистой входила в Фармакопеи Нидерландов, Германии, Польши, Турции [5], цветки - в I издание отечественной Фармакопеи, входят в Фармакопеи ряда стран: Аргентины, Бразилии, Франции, Португалии и др. [7].
Изучение химического состава фиалки душистой показало присутствие в них флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, полисахаридов и др. соединений
Фармакологические исследования показали, что одной из групп действующих веществ наряду с полисахаридами являются фенольные соединения, и в частности, флавоноиды. Флавоноиды фалки душистой представлены гесперидином, витекси-ном, виценином и рутином [3].
Поэтому нами была проведена оценка сырья фиалки душистой по содержанию флавоноидных соединений.
Цель работы заключалась в разработке методики количественного определения суммы флавоноидов в надземной части фиалки душистой.
Объектом исследования служила воздушно-сухая надземная часть фиалки душистой, заготовленная в 2009 г. в Курской области (окр. Г. Курска, ур. Знаменская роща) в период массового цветения растений.
В основу количественного определения положен спектрофотометрический метод, основанный на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом [1, 6]. В качестве стандартного образца был взят РСО рутин, т.к. он является преобладающим флавоноидным соединением фиалки душистой. Максимумы поглощения комплексов рутина стандарта с алюминия хлоридом и извлечений из травы фиалки душистой 70% спиртом этиловым с алюминия хлоридом совпадают и находятся в области 410 нм.
Нами использован дифференциальный вариант спектрофотометрии, т.е. в качестве раствора сравнения использовали исходный раствор извлечения без алюминия хлорида, что позволяет исключить влияние на результаты анализа сопутствующих растительных веществ, имеющих оптическую плотность в области максимума поглощения извлечений из сырья [2, 6].
[3, 7].
Объекты и методы исследования
При проведении анализа пробы подкисляли уксусной кислотой для переведения флавоноидов и сопутствующих им веществ в недиссоциированную форму с целью улучшения воспроизводимости результатов [2, 6].
Первым этапом наших исследований было изучение влияние степени измель-ченности на экстракцию флавоноидов. При этом установили, что максимальное извлечение флавоноидов достигается при степени измельчения сырья 1-2 мм (табл. 1).
В качестве экстрагентов использовали этиловый спирт различной концентрации. Наиболее полное извлечение флавоноидов достигалось при экстрагировании 70% этиловым спиртом (табл. 1).
Для обеспечения полноты извлечения сумы флавоноидов навеску сырья нагревали на кипящей водяной бане до наступления равновесия, которое в данном случае наступает через 45 минут [6].
Таблица 1
Влияние условий экстракции на содержание суммы флавоноидов
Условия экстракции Содержание суммы флавоноидов,%
Степень измельченности сырья, мм:
0,5 2,63
1,0 2,79
2,0 2,83
3,0 2,21
Экстрагент: этиловый спирт, %
30 2,54
50 2,71
70 3,20
96 2,10
Время экстракции, мин (70% спирт этиловый, соотношение сырье-экстрагент 1:100):
30 2,60
45 3,20
60 3,21
Методика определения. Аналитическую пробу сырья, измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито (ТУ 23.2,2068-89) с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1.0 г (точная навеска) измельченного сырья, помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 70% этилового спирта и взвешивают с погрешностью +0,01 г. Колбу присоединяют к обратному водяному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Колбу с содержимым искусственно охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом этиловым 70%. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.
2 мл извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл 5% раствора алюминия хлорида в 70% этиловом спирте и через 10 мин 1 мл 3% раствора кислоты уксусной. Объем раствора доводят тем же спиртом до метки и оставляют на 30 минут.
Оптическую плотность полученного раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл извлечения, 1 мл 3% раствора кислоты уксусной и доведенный спиртом этиловым 70% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца рутина (РСО), приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в процентах (Х) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляется по формуле:
Б • то • 1 • 100 • 100 • 100
Во • т • 2 • 100 • (100 - Ш)
где Б - оптическая плотность испытуемого раствора;
Бо- оптическая плотность раствора стандартного образца (РСО) рутина; т - масса сырья в граммах;
Шо- масса РСО рутина в граммах;
Ш - потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Статистическая обработка проведена по общепринятой методике [4]. Результаты показали, что ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 3,63% (табл. 2).
Таблица 2
Метрологическая характеристика метода
N п/п X п X й2 йх р,% 1(Р£) ДХ Еотн
1 2,02 2,00 2,03 1,99 2,01 5 2,01 0,00025 0,007 95 2,78 0,044 2,21%
2 2, 2, 2, 2, 2, ^ Ю со о ^ 5 2,74 0,00100 0,014 95 2,78 0,089 3,25%
3 1, 1, 1, 1, 1, 8 8 8 8 8 4^ 00 ГО ГО 5 1,84 0,00060 0,011 95 2,78 0,067 3,63%
4 2,29 2,35 2.33 2,30 2.33 5 2,32 0,00060 0,011 95 2,78 0,067 2,88%
5 2,40 2,38 2.41 2,44 2.42 5 2,41 0,00050 0,010 95 2,78 0,061 2,54%
Таблица 3
Опыты с добавками
Содержание суммы флавоноидов в 1 г сырья, мг Добавлено рутина, мг Вычислено с добавкой, мг Найдено, мг Относительная ошибка, %
15,3 - 15,3 15,30 -
15,3 3,2 18,5 18,34 - 0,87
15,3 7,2 22,5 22,26 - 1,07
15,3 14,4 29,7 30,06 + 1,21
Проведение опытов с добавками известного количества РСО рутина в извлечение из сырья фиалки душистой показало отсутствие систематической ошибки метода (см. табл. 3).
Предложенной методикой проанализировано 5 партий сырья фиалки душистой. Согласно полученным данным (см. табл. 2), содержание суммы флавоноидов находится в пределах от 1,15 до 3,21%.
Таким образом, по разработанной методике можно оценивать качество сырья фиалки душистой по содержанию флавоноидов.
Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в сырье фиалки душистой (Viola odorata L), основанная на реакции комплексообразо-вания с алюминия хлоридом. Оптимальными условиями для извлечения флавоноидов является степень измельчения 1-2 мм,экстракция 70% спиртом этиловым в соотношении сырье-экстрагент (1:100) в течение 45 минут. Содержание суммы флавоноидов в надземной части фиалки душистой колебалось от 1,15 до 3,21%
1. Беликов В.В., Шрайбер М.С. Методы анализа флавоноидных соединений // Фармация. 1970. №. 1. С. 68-72.
2. Беликов В.В., Точкова Т.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов // Фенольные соединения и их физиологические свойства. - Алма-Ата, 1973. С. 168-172.
3. Бубенчиков Р.А. Фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода Фиалка: Автореф. дис. ... канд. фармац. наук. Купавна, 2002. 24 с.
4. Государственная фармакопея СССР. - 11- изд. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. -277 с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Раеотасеае - ТЬуте1аеасеае. Л., 1985.
6. Точкова Т.В., Бубенчикова В.Н. Спектрофотометрический метод количественного определения суммы флавоноидов в цветках липы // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР. Науч. тр. Т. XXIX. М., 1991. С. 150-155.
7. Флора СССР: В 30-ти т. М., Л: Изд-во АН СССР, 1934-1964. Т. VI, 1941.
SPECTROPHOTOMETRIC METHOD OF FLAVONOID CONTENT IN VIOIA ODORATAL.
Выводы
Список литературы
Kursk State Medical University, Kursk K. Marks St., 3,305041
e-mail: fg.ksmu@mail.ru
RA Bubenchicov
The technique of quantitative determination of the flavonoid sum in Viola odorata L. with the use of differential spectrophotometry is elaborated on the bases of the reaction of complex formation the aluminium chloride solution. The content of flavonoid in plant Viola odorata L. in counting again on state standart sample of rutin is in the range of 1,15-3,21%.
Key words: Viola odorata L., herb, flavonoid, spectrophotometry
