CC BY
26
Фармакология и фармакогнозия
УДК 543.544.943.3.068.7:615.07
А.М. Лазицкая1, Н.В. Чмелевская1, Е.А. Илларионова2
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ БРОМДИГИДРОХЛОРФЕНИЛБЕНЗОДИАЗЕПИНА
Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы, 664022, бул. Гагарина, 4, тел. 8-(3952)-24-37-67; 2Иркутский государственный медицинский университет, 664003, ул. Красного Восстания, 1, тел. 8-(3952)-24-08-26, г. Иркутск
Резюме
Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенил-бен-зодиазепин в субстанции и таблетках, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения метилового красного. Обоснованы оптимальные условия определения: выбор раствора сравнения, растворитель - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, аналитическая длина волны - 290 нм. Определен коэффициент пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило не более 0,003, для таблеток не более 0,008.
Ключевые слова: бромдигидрохлорфенилбензодиазепин, УФ-спектр, спектрофотометрическое определение, оптический образец сравнения, коэффициент пересчета, метиловый красный.
A.M. Lazitskaya1, N.V. Chmelevskaya1, E.A. Illarionova2 SPECTROPHOTOMETRIC ANALYSIS OF BROMDIGIDROHLORFENILBENZODIAZEPIN
'Irkutsk regional agency judicial-medical expert operation;
2Irkutsk State Medical University, Irkutsk
Summary
The unified technique of spektrofotometrichesky definition of a bromdigidrohlorfenilbenzodiazepin in substance and tablets differing in use as an example of methyl red comparison is developed. Optimum conditions of definition are proved: a comparison solution choice, solvent - 0,1 M hydrochloric acid solution, analytical wavelength - 290 nm. The recalculation coefficient is defined. The relative standard deviation of the developed technique for substance made no more than 0,003, for tablets no more than 0,008.
Key words: bromdigidrohlorfenilbenzodiazepin, UV spectrum, spectrophotometry determination, optical reference sample, conversion factor, methyl red.
Широкое применение в медицинской практике в качестве анксиолитического средства находит бромди-гидрохлорфенилбензодиазепин (I) [6]. Существующие методы оценки качества I в субстанции и таблетках не соответствуют современным требованиям [3, 7]. Они имеют ряд недостатков: трудоемкость, длительность выполнения, применение токсичных органических растворителей, дорогостоящих реактивов. Это свидетельствует о том, что проблема совершенствования существующих и разработка новых методов анализа I является актуальной. Перспективно использование нового варианта спектрофотометрического метода, осно-
ванного на применении оптических образцов сравнения. Использование этого метода позволит выполнять количественное определение препарата в субстанции и лекарственных формах одним и тем же методом, повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить трудоемкость, стоимость, токсичность и погрешность анализа.
Целью настоящего исследования является разработка новой методики количественного определения I спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения.
Материалы и методы
В работе использовали фармацевтическую субстанцию I и таблетки I по 0,001 г, отвечающие требованиям нормативных документов [3, 7], метиловый красный квалификации «х.ч.», 0,1 М раствор натрия гидроксида, приготовленный из фиксанала, 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, приготовленный из фиксанала, воду очищенную. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-
2000 в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью универсального ионо-метра ИТ-1101.
При статистической обработке результатов анализа использовали методы Стьюдента и Фишера [1]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
Для оптимизации условий спекгрофотометриче-ского определения I был изучен спектр поглощения в интервале рН 1,1-13,0 в диапазоне длин волн 220400 нм. Спектр поглощения I в интервале рН от 10-13,0 характеризуются двумя полосами с максимумами поглощения при длинах волн 230±4 нм и 342±4 нм. При уменьшении кислотности среды (рН 1,1) наблюдается увеличение интенсивности поглощения вещества с одновременным батохромным смещением максимума поглощения. Спектр поглощения в этом случае имеет два максимума при 245±1 нм и 290±2 нм.
Изучение стабильности растворов I показало, что наиболее устойчив раствор I с рН 1,1. Поэтому в качестве оптимального растворителя для спектрофото-метрического определения I нами был выбран 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,1).
Для количественного определения I в субстанции спектрофотометрическим методом необходимо выбрать образец сравнения. Выбор оптических образцов сравнения осуществляли исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения [4, 5].
В качестве оптического образца сравнения для определения I использовали вещество органической природы метиловый красный. Метиловый красный выпускаются серийно промышленностью квалификации хч, на него имеется ТУ (ТУ 6-09-5169-84), регламентирующий его качество, он доступен, имеет низкую стоимость, содержание в нем основного вещества определено химическим методом и составляет не менее 99,9 %.
Спектры поглощения растворов метилового красного в интервале рН 1,1 характеризуются двумя полосами с максимумами поглощения при 290±1 нм и 515±5 нм [2].
Аналитическая длина волны I (290 нм) входит в интервал оптимальный для метилового красного (280300 нм), поэтому метиловый красный может быть предложен в качестве оптического образца сравнения для спектрофотометрического определения I. Следует отметить, что у метилового красного и I совпадают максимумы поглощения 290±1 нм. Следовательно, можно предположить, что погрешность анализа I при отмеченных выше оптимальных условиях не будет превышать допустимую.
Значения удельных показателей поглощения исследуемого вещества и оптического образца сравнения различаются, поэтому для учета данных факторов в формулу расчета результатов количественного определения I необходимо ввести коэффициент пересчета,
который представляет собой отношение удельного показателя поглощения оптического образца сравнения и удельного показателя поглощения рабочего образца сравнения. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа I по метиловому красному приведены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты определения коэффициента пересчета бромдигидрохлорфенилбензодиазепина по метиловому красному
Метрологические характеристики (п=10, Р=95 %)
К З2 8 Эх DX Е %
1,0999 0,0828 0,2871 0,0910 0,2056 0,21 0,003
Разработанные оптимальные условия спектрофо-тометрического определения I были использованы для количественного определения субстанции и таблеток данного препарата. Результаты количественного определения I в субстанции и таблетках приведены в таблице 2.
Таблица 2
Результаты спектрофотометрического определения феназепама в субстанции по оптическому образцу сравнения метиловому красному
Метрологические характеристики (п=10, Г=95%)
Субстанция бромдигидрохлорфенилбензодиазепина
X Э2 ЭХ АХ Е%
99,91 0,0922 0,3037 0,0960 0,2170 0,22 0,003
Таблетки бромдигидрохлорфенилбензодиазепина по 0,001 г
108,70 0,8424 0,9178 0,3469 0,8326 0,77 0,008
108,90 0,5774 0,7599 0,2872 0,6893 0,63 0,007
108,72 0,1564 0,3955 0,1495 0,3588 0,33 0,004
Из представленных в таблице 2 данных следует, что спектрофотометрическое определение I в субстанции и таблетках по оптическому образцу сравнения метиловому красному соответствует нормативным требованиям. Относительная ошибка определения не превышает 0,22 % для субстанции и 0,77 % для таблеток. Методика спектрофотометрического определения с использованием оптического образца сравнения характеризуется хорошей воспроизводимостью не превышает 0,008). В таблице 3 представлены результаты сравнительной оценки методов количественного определения I по разработанной методике и методике нормативного документа [3]. Видно, что метод спектрофотометрического определения I по метиловому
красному и метод нормативного документа дают правильные результаты (; < . ) и не различаются по
г ^ 4 выч. таолУ г
воспроизводимости ^выч^табл). Однако методика нормативного документа не является правильной, так как имеет систематическую погрешность (; > , ), усту-
^ г ч выч. табл/' ^ ^
пает спектрофотометрическому методу по продолжительности анализа и требует использования токсичных и летучих растворителей (ледяная уксусная кислота, уксусный ангидрид).
Таблица 3
Сравнительная оценка методов количественного определения I (п=9, t (Р, 1)(т„б,)=2,26; Р=95 %; F (Р, f1, f2)(т„íл)=5,47; Р=99 %)
Валидационную оценку разработанной методики спектрометрического определения бромдигидрохлор-фенилбензодиазепина с использованием оптического образца сравнения метилового красного проводили по критериям: специфичность, правильность, прецизиоз-ность, линейность результатов, аналитическая область методики. Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствуют о пригодности предложенной методики.
Таблица 4
Результаты валидационной оценки методики спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенилбензодиазепина
Наименование метода
Ациди-метрия в ледяной уксусной кислоте
Спектрофо-тометрия по метиловому красному
100
100
Х,%
98,50
99,96
S2
0,25
0,09
0,5
0,3
Е,%
0,69
0,27
8,49
0,39
2,78
Продолжительность анализа, мин.
40
25
Число опера-
Параметры Критерии валидности Результаты испытания
Специфичность Специфична
Правильность tBbi4<tia6i t =0,39, С=2,36х n=9
Прецизионность RSD<2 % 0,30 %
Линейность результатов r>0,999 r=0,9990; у=0,2683-х-0,2273
Аналитическая область методики интервал концентраций 0,008-0,012 г/мл
1. Государственная Фармакопея. - Т. 1. - 13-е. изд. -2015. - 1470 с.
2. Илларионов А.И., Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А., Сыроватский И.П. Количественное определение натриевой соли 4-(никотиноиламино) масляной кислоты спектрофотометрическим методом // известия высших учебных заведений. Физика. - 2011. -№ 2. - С. 174-179.
3. Нормативный документ 42-14110-06. Феназе-пам. - 5 с.
4. Теплых А.Н., Илларионова Е.А. Количественное определение метронидазола спектрофотометриче-
Разработанная методика спектрофотометрического определения бромдигидрохлорфенилбензодиазе-пина по оптическому образцу сравнения метиловому красному отличается доступностью, экспрессностью, высокой воспроизводимостью, отсутствием высокотоксичных реактивов.
Литература
ским методом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2009. - Т. 88, № 5. - С. 48-50.
5. Теплых А.Н., Илларионова Е.А. Количественное определение тинидазола спектрофотометрическим методом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). -2010. - Т. 99, № 8. - С. 64-66.
6. Регистр лекарственных средств России. - 19-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РЛС-МЕДИА, 2010. -1368 с.
7. Фармакопейная статья предприятия ОАО «Ва-лента Фармацевтика» № 42-5293-08 Таблетки феназе-пама по 0,5 мг, 1 мг и 2,5 мг.
Literature
1. State Pharmacopoeia. - Vol. 1. - 13 ed. -2015. -1470 p.
2. Illarionov A.I., Chmelevskaya N.V, Illariono-va E.A., Syrovatskii I.P. Quantitative determination of sodium salt of 4-(nicotinoyl amino) butyric acid by spectrophotometry method // News of Higher Educational Establishments. Physics. - 2011. - №. 2. - P. 174-179.
3. Normative document 42-14110-06. Phenazepam. -M., 2006. - 5 p.
4. Teplykh A.N., Illarionova E.A. Quantitative definition of Metronidazole by spectrophotometrical method //
Siberian Medical Journal (Irkutsk). - 2009. - Vol. 88 (№ 5). - P. 48-50.
5. Teplykh A.N., Illarionova E.A. Quantitative definition of Tinidazole by spectrophotometrical method // Siberian Medical Journal (Irkutsk). - 2010. - Vol. 99 (№ 8). -P. 64-66.
6. Register of Medicines of Russia. - 19 ed., Revised and updated. - Moscow: RLS-MEDIA 2010. - 1368 p.
7. Pharmacopoeial monograph of the JSC «Valenta Pharmaceuticals» No. 42-5293-08 Tablets of phenazepam 0,5 mg, 1 mg and 2,5 mg.
Координаты для связи с авторами: Лазицкая Анна Марковна - аспирант, врач судебно-медицинский эксперт ГБУЗ МЗ «Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», тел. 8-(3952)-22-93-90, e-mail: [email protected]; Чмелевская Наталья Владимировна - канд. фарм. наук, зав. судебно-химическим отделением ГБУЗ МЗ «Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», тел. 8-(3952)-22-93-90, e-mail: [email protected]; Илларионова Елена Анатольевна - д-р хим. наук, профессор, зав. кафедрой фармацевтической и токсикологической химии ИрГМУ, тел. +7-914-876-09-23, e-mail: [email protected].
S
F
6
