CC BY
120
2010. - 20 c.
15. Baudin B. Polymorphism in angiotensin II receptor genes and hypertension // Exp Physiol. - 2005. - Vol. 90. №3. - P.277-282.
16. Mottl A.K. Shoham D.A., North K.E. Angiotensin II type 1 receptor polymorphisms and susceptibility to hypertension: a HuGE
review // Genet Med. - 2008. - Vol. 10/ №8. - Р.560-574. Review.
17. Информационная система по медицински-значимым нуклеотидным полиморфизмам генома человека: сайт ФМБА НИИ Физико-химической медицины. - 2007. [Электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.genepassport.ru. - загл. с экрана (дата обращения 06.09.2013).
REFERENCES
1. Avdonina M.A., Nasedkina T.V., Ikonnikova A.Yu., et al. Association study of polymorphic markers of F12, PON1, PON2, NOS2, PDE4D, H1F1a, GPIpa, CYP11B2 genes with ischemic stroke in Russian patients // Zhurnal nevrologii i psikhiatrii imeni S.S. Korsakova. - 2012. - №2. - P51-54. (in Russian)
2. Voronina E.N., Filipenko M.L., Sergeyevichev D.S., Pikalov
I.V. Platelet membrane glycoprotein receptors: function and polymorphism // Vestnik VOGiC. - 2006. - Vol. 10. №3. - P553-564. (in Russian)
3. Gayfullina R.F., Katina M.N., Rizvanova F.F., et al. Role of genetic polymorphism in the pathogenesis of cerebrovaskular disease // Kazanskiy medicinskiy zhurnal. - 2012. - Vol. 93. №4.
- P663-677. (in Russian)
4. Kapustin S.I., Saltykova N.B., Kobilyanskaya V.A., et al. Hemostatic genes polymorphisms in patients with distinct clinical manifestations of venous thromboembolism // Vestnik gematologii. - 2009. - Vol. V. №1. - P16-24. (in Russian)
5. Katina M.N., Gayfullina R.F., Valliulin V.V., Rizvanov A.A. The role genetic polymorphism in the formation of atherosclerosis in the vessels of lower extremities // Kazanskiy medicinskiy zhurnal. - 2012. - Vol. 93. №3. - P513-516. (in Russian)
6. Markov Kh.M. Brain blood flow and cerebral insult. Part 1. Regulation of cerebral circulation // Patologicheskaya fisiologiya i eksperimental’naya terapiya. - 2013. - №1. - P86-96. (in Russian)
7. Matveeva V.A. Molecular-genetic study of hypertension: polymorphism and transcriptionant genetic activity of inflammatory response: Avtoref. dis. ... cand. of medical science.
- Ufa, 2012. - 23 p. (in Russian)
8. Nguen Thi Trang Association between polymorphism T174M and M235T of the angiotensinogen gene and ischemic heart trouble in the Rostov population // Fundamental’nye issledovaniya. - 2010. - №3. - P114-121. (in Russian)
9. Radkov O.V., Kalinkin M.N., Zavarin V.V. Association of insertion deletion polymorphism of the ACE gene with factors of circulating rennin-angiotensin-aldosterone system
and endothelial function of skin microvassals in preeclampsia // Byulleten’ sibirskoy meditsiny. - 2011. - №4. - P32-36. (in Russian)
10. Seminsky I.J. The medical genetics: look into the future (Lecture 6) // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2001. - Vol. 29. №5. - P68-73. (in Russian)
11. Seminsky I.J. The structure of human genome // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2002. - Vol. 34. №5. - P101-103. (in Russian)
12. Tereshchenko S.N., Zateishchikov D.A., Zhirov I.V., et al. Polymorphism of ACE, Angiotensin II, NO-Synthase, estrogen receptor genes and gender differences in their effects on development of cardiovascular pathology // Kardiologiya. - 2009.
- №4. - P58-62. (in Russian)
13. Chukanova E.I., Khodzhamzharov B.E., Chukanova A.S. Chronic ischemia of the brain (the etiology, pathogenesis, treatment). Prevention of stroke and ischemic dementia // Rossiyskiy Meditsinskiy Zhurnal. - 2012. - №10. - P517-521. (in Russian)
14. Shestakov A.M. A Comprehensive molecular genetic analysis of polymorphisms of candidate genes responsible for essential hypertension in Russian inhabitants of Central Chernozem region of Russia: Avtoref. dis. ... cand. of medical science. - Moscow, 2010. - 20 p. (in Russian)
15. Baudin B. Polymorphism in angiotensin II receptor genes and hypertension // Exp Physiol. - 2005. - Vol. 90. №3. - P277-282.
16. Mottl A.K. Shoham D.A., North K.E. Angiotensin II type 1 receptor polymorphisms and susceptibility to hypertension: a HuGE review // Genet Med. - 2008. - Vol. 10/ №8. - P560-574. Review.
17. Information system on the medically important human genome polymorphisms to be: Federal Medical & Biological Agency SRI of Physical-Chemical Medicine site. Available at: http://www.genepassport.ru. - The title screen (accessed 6 September 2013). (in Russian)
Информация об авторах:
Наталья Николаевна Страмбовская - заведующая лабораторией молекулярной генетики, к.м.н., доцент, 672090, г. Чита, ул. Горького 39а, НИИ молекулярной медицины, тел. (3022) 322861, факс (3022) 323058, e-mail: [email protected]
Information About the Author:
Natalya Nikolaevna Strambovskaya - head of the molecular genetics laboratory in Research Institute of molecular medicine for Chita State Medical Academy, candidate of medical sciences, associate professor; 39a Gorky Str., Chita, 672090 Research Institute of molecular medicine, phone 8(3022)322861, fax 8(3022)323058, mobile phone 89244770095, e-mail: [email protected]
© ИЛЛАРИОНОВА Е.А., КУЗНЕЦОВА А.Н. - 2014 УДК 543.42.062
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛОТРИМАЗОЛА
Елена Анатольевна Илларионова, Анастасия Николаевна Кузнецова (Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. - д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)
Резюме. Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения клотримазола в субстанции, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения калия феррицианида и калия дихромата. Обоснованы оптимальные условия определения: растворитель - 0,1М раствор кислоты хлористоводородной, аналитическая длина волны - 264 нм. Определены коэффициенты пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило 0,01.
Ключевые слова: спектрофотометрия, оптический образец сравнения, коэффициент пересчета, клотримазол, калия феррицианид, калия дихромат.
DEVELOPMENT OF THE METODS OF THE QUANTITATION DETERMINATION OF CLOTRIMAZOLE
E.A. Illarionova, A.N. Kuznetsova (Irkutsk State Medical University, Russia)
Summary. Developed a unified method of spectrophotometric determination of clotrimazole in substance, characterized using as a comparison sample of potassium ferricyanide m potassium dichromate. Justified optimal conditions definitions: solvent - 0.1 M solution of hydrochloric acid, analytical wavelength - 264 nm. Defined conversion factors. The relative standard deviation of the developed technique for the substance amounted to 0.01.
Key words: spectrofotometric determination, optical sample comparison, conversion factor, clotrimazole, potassium ferricyanide, potassium dichromate.
Широкое распространение грибковых заболеваний среди людей разных возрастных групп, длительное и часто хроническое их течение, трудности их лечения обусловливают все более пристальное внимание исследователей к этой проблеме медицины. Клотримазол обладает широким спектром противогрибкового действия [3]. Существующие методы оценки качества клотримазола имеют ряд недостатков: трудоемкость, длительность выполнения, применение токсичных органических растворителей, дорогостоящих реактивов и приборов [2].
Цель настоящего исследования разработать новую методику количественного определения клотримазола спектрофотометрическим методом с использованием оптических образцов сравнения.
Материалы и методы
В работе использовали: субстанцию клотримазола, отвечающую требованиям нормативного документа, калия феррицианид (чда), калия дихромат (чда), 0,1 М раствор натрия гидроксида, приготовленного из фиксанала,
0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, приготовленного из фиксанала, спирт этиловый 95%.
Электронные спектры регистрировали на спектрофотометре Specord UV VIS. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометрах СФ-26 и СФ-46 в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью универсального ионо-метра эВ-74.
Результаты исследований обработаны статистически с использованием пакета программ Microsoft Excel для Windows XP. Проверка распределения, которому подчиняются результаты исследования, дала возможность использовать для анализа критерий Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
С целью оптимизации условий спектрофотометрического определения клотримазола нами были изучены спектры поглощения растворов клотримазола в интервале рН 1,1-13,0 (рис. 1).
Из приведенных экспериментальных данных видно, что УФ-спектр поглощения клотримазола характеризу-
ется одной полосой поглощения с максимумами поглощения при длине волны 264±1 нм (рН 1,1) и при длине волны 261±1 нм (рН 8,05). Следует отметить, что при переходе от рН 8,05 к рН 1,1 происходит незначительное батохромное смещение максимума поглощения с одновременным гиперхромным эффектом (рис. 1). Изучение стабильности растворов клотримазола в течение суток (рис. 2) показало, что при всех значениях рН изменение оптических свойств клотримазола не происходит. В ка-
честве растворителя для анализа клотримазола был выбран 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты, обеспечивающий наибольшую стабильность оптической плотности для исследуемого вещества. Спирт этиловый 95% использовался для приготовления растворов первого разведения, так как анализируемое вещество хорошо в нем растворяется.
Методом наименьших квадратов было рассчитано уравнение градуировочного графика клотримазола А=(0,00305±0,00004)С, SA=0,001 (рН=1,1) при длине волны 264 нм (А-оптическая плотность, С-концентрация, мкг/мл).
В качестве оптического образца сравнения для определения клотримазола использовали калия феррициа-нид и калия дихромат. Калия феррицианид и калия дихромат выпускаются серийно промышленностью квалификации «чда», на них имеются ГОСТы (ГОСТ 4206-75, ГОСТ 4220-75 соответственно), регламентирующие их качество.
Спектры поглощения растворов используемых оптических образцов в интервале рН от 1,1 до 13,5, зависимость оптической плотности растворов данных стандартных образцов от времени хранения, зависимость погрешности измерения оптической плотности от длины волны и уравнения градуировочного графика были описаны в работе [1,4].
Спектр поглощения раствора калия фер-рицианида при рН 1,1 характеризуется тремя полосами поглощения с максимумами при 261±1 нм, 303±1нм и 421±1нм и минимумами при 243±1нм, 273±1нм и 355±1нм [4]. Для калия феррицианида определены оптимальные области для использования его в качестве оптического образца: 255-267 нм, 290-316 нм, 402-440 нм.
Спектр поглощения калия дихромата характеризуется двумя максимумами поглощения при длинах волн 257±1нм и 350±1нм. Оптимальные области поглощения, в которых калия дихромат может быть использо-
А
230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330
Рис. 1. УФ спектр 0,014% раствора клотримазола при различных значениях рН.
А
0.46
0,44
0,42
0.4
0,38
0,36
0,34
0,32
0,3
-----------pH 1,1
-----------pH 8,05
0 5 10 15 20 25 , час
Рис. 2. Зависимость оптической плотности растворов клотримазола от времени хранения.
ван в качестве оптического образца сравнения в спектрофотометрическом анализе лекарственных средств, установлены в пределах 247-267 нм, 340,5-349,5 нм [1].
Аналитическая длина волны клотримазола при рН 1,1 (264 нм) входит в интервал, оптимальный для калия феррицианида (255 нм - 267 нм) и калия дихромата (247 нм - 267нм). Спектр поглощения клотримазола имеет сходный характер с предложенными оптическими образцами сравнения в области аналитической длины волны. Это дает основание предполагать, что калия феррицианид и калия дихромат являются оптимальными оптическими образцами сравнения для спектрофотометрического определения анализируемого вещества при использовании в качестве растворителя 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
В связи с тем, что удельные показ а-тели поглощения клотримазола и калия феррицианида, клотримазола и калия дихромата не совпадают, необходимо рассчитать коэффициент пересчета [3].
Коэффициент пересчета клотримазола по калия феррицианиду равен 3,3749, по калия дихромату - 4,6565.
Разработанные условия спектрофотометрического определения клотрима-зола позволили предложить методику количественного определения клотримазола в субста-ции.
Методика количественного определения клотримазола в субстанции: точную навеску препарата (около 0,0700 г клотримазола) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл спирта этилового 95%, доводят объем раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной и перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 264 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора оптического образца сравнения калия феррицианид или калия дихромат.
Методика приготовления растворов оптического образца сравнения калия дихромата и калия феррициа-нида: точную навеску препарата (около 0,5000 г калия
феррицианида или около 0,1500 г калия дихромата) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл воды очищенной, доводят объём раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл для калия феррицианида или 50 мл для калия дихромата, доводят объём раствора 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают.
Таблица 1
Результаты спектрофотометрического определения клотримазола в субстанции
№ серии Образцы сравнения Метрологические характеристики (n= 7, p=95%)
Х S2 S S * ДХ Е% S
Калия феррицианид 100,30 0,05 0,23 0,09 0,22 0,21 0,002
17176 Калия дихромат 100,30 0,05 0,22 0,08 0,20 0,20 0,002
РСО 99,36 0,08 0,28 0,11 0,26 0,26 0,003
Калия феррицианид 99,91 0,64 0,80 0,30 0,74 0,74 0,008
18560 Калия дихромат 99,94 0,93 0,97 0,37 0,89 0,89 0,010
РСО 99,69 0,33 0,58 0,22 0,53 0,54 0,006
Калия феррицианид 100,37 0,22 0,46 0,18 0,43 0,42 0,005
30241 Калия дихромат 99,40 0,16 0,40 0,15 0,37 0,37 0,004
РСО 99,53 0,15 0,39 0,15 0,36 0,36 0,004
Результаты количественного определения клотри-мазола в субстанции представлены в таблице 1.
Анализ приведенных результатов показывает, что относительная погрешность количественного определения клотримазола по различным образцам сравнения не превышает 0,89%. Методика спектрофотометрического определения с использованием оптических образцов сравнения характеризуется хорошей воспроизводимостью (Бг не превышает 0,01). Следует отметить, что результаты, полученные при определении клотримазо-ла по калия феррицианиду и калия дихромату, сопоставимы. Поэтому в условиях контрольно-аналитических лабораторий количественное определение данных лекарственных средств можно проводить по наиболее доступному образцу сравнения.
Проведена сравнительная оценка разработанной методики с методикой нормативного документа, которая показала преимущества методики спектрофотометрического определения по оптическому образцу сравнения: доступность, экспрессность, высокая воспроизводимость, отсутствие высокотоксичных реактивов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Спектрофотометрическое определение бендазола // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2009. - Т. 82. №8. - С.42-44.
2. Клотримазол. Нормативный документ 42-0244-07. -М., 2007. - 3 с.
3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15 изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая Волна, 2005. - 1200 с.
4. Пантелеева Н.М., Илларионова Е.А., Артасюк Е.М., Сыроватский И.П. Спектрофотометрическое определение пиразинамида // Сибирский медицинский журнал (Иркутск).
- 2007. - Т. 71 №4. - С.48-51.
REFERENCES
1. Illarionov E.A., Syrovatsky I.P., Inozemtsev P.O. Spectrophotometric determination of bendazola // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2007. - Vol. 82. №8. - P42-44. (in Russian)
2. Clotrimazole. Normative document 42-0244-07. - Moscow, 2007. - 3 p. (in Russian)
3. Mashkovskii M.D. Drugs. - 15 ed., Rev., Rev. and add. -Moscow: Novaya Volna, 2005. - 1200 p. (in Russian)
4. Panteleeva N.M., Illarionova E.A., Artasyuk E.M., Syrovatsky I.P. Spectrophotometric determination ofpyrazinamide // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2007. - Vol. 71. №4. - P48-51. (in Russian)
Информация об авторах:
664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, тел. (3952) 243447, e-mail: [email protected], Илларионова Елена Анатольевна - д.х.н., профессор;
Кузнецова Анастасия Николаевна - аспирант кафедры.
Information About the Authors:
664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstaniya street, 1, ISMU, department of pharmaceutical and toxicological chemistry, tel. 3952) 243447, e-mail: [email protected], Illarionova Elena Anatolievna - doctor of chemical sciens, professor;
Kuznetsova Anastasia Nicolaievna - graduate student of the department.
