CC BY
3
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
возниклиу 13 (35,1%), из ниху 2 (92,3%) — однократно,у 1 (7,7%) — повторно; общее число эпизодов ИК составило 14. .Медиана возникновения первого эпизода ИК была позже после повторной алло-ТГСК и составила 16 дней (1—28 дней) в сравнении с первой алло-ТГСК (р=0,014). Всего после повторных алло-ТГСК было выделено 14 микроорганизмов, из них 7 (50,0%) — грамотрицательных бактерий, 7 (50,0%) — грамположительных. Частота карбапенем-устойчивых бактерий была выше после повторной алло-ТГСК (57,1% (4/7) против 14,0% (8/57), р=0,048). В их число входили КиЬ^сеНа, рпеитоп1ае (п=11) и Аст&оЬас&г ЬаитапИ (п=1). По результатам однофакторного анализа тип донора и продолжительность нейтропении >22 дней были достоверно ассоциированы с более высоким риском развития ИК до приживления трансплантата после первой алло-ТГСК. При многофакторном анализе трансплантации от неродственных частично совместимых доноров являлись единственным независимым фактором риска развития ИК до приживления после первой алло-ТГСК (ОР=2,93; 95% ДИ:1,55—5,51;
р=0,008). Факторов риска развития ИК до приживления после повторной алло-ТГСК выявлено не было (таблица 2). Общая 30-дневная выживаемость после всех эпизодов ИК до приживления трансплантата составила 94,4%. Выживаемость после ИК была ниже после повторной по сравнению с первой алло-ТГСК (71,4% vs. 97,9%; р<0,0001). Выживаемость была в особенности ниже после ИК, вызванных карба-пенем-устойчивыми штаммами после повторной по сравнению с перВОЙ алло-ТГСК (25,0% 100,0%; Р<0,0001).
Заключение. ИК до приживления трансплантата остаются частым осложнением после алло-ТГСК, в особенности при алло-ТГСК от неродственных частично совместимых доноров. Частота ИК после повторной алло-ТГСК несколько выше по сравнению с первой. Грамотрицательные бактерии превалируют в этиологической структуре. Частота ИК, вызванных карбапенем-устойчивыми штаммами, была выше после повторной алло-ТГСК, что сопровождалось неблагоприятным прогнозом.
Бархатов И. М., Садыков А. М., Карпунина У. Д., Зубаровская Л. С., Кулагин А. Д.
ОЦЕНКА ВЗАИМОСВЯЗИ ИЗМЕНЕНИЯ ДЛИНЫ ТЕЛОМЕР КЛЕТОК ДОНОРСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ И КИНЕТИКИ
ВОССТАНОВЛЕНИЯ ГЕМОПОЭЗА ПОСЛЕ АЛЛО-ТГСК
ФГБОУ ВО «ПСПбГМУ им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России
Введение. Теломеры представляют собой участки ДНК, расположенные на концах хромосом, состоящие из тандемных нуклеотидных повторов (ТТАООО)п, длиной от 2 до 20 кб у человека, обеспечивающих защиту от слипания и недорепликации генетически значимых участков ДИК. При этом длина теломер варьирует в зависимости от типа клеток, их пролиферативного потенциала и степени дифферен-цировки, что предполагает возможность применения этого показателя в оценке кинетики реконституции гемопоэза при проведении аллоген-ной трансплантации гемопопоэтических стволовых клеток (ТГСК).
Цель работы. Исследование взаимосвязи между длиной теломер в клетках доноров и реципиентов после ТГСК и показателями приживления трансплантата.
Материалы и методы. В исследование был включен материал 27 доноров и реципиентов после ТГСК. Все пациенты демонстрировали полный донорский химеризм, рецидивов в исследуемой выборке зарегистрировано не было. Анализ измерения абсолютной длины теломер проводился с помощью метода ПЦР в режиме реального времени с использованием двух наборов стандартных олигомеров
для измерения длины теломер и оценки уровня однокопийного гена. ДИК для проведения исследования выделяли из ядросодержащих клеток костного мозга, цельной венозной крови и аферезного материала.
Результаты и обсуждение. Медиана длины теломер у доноров нашей выборки составила 2,4 кб. Нами была обнаружена прямая корреляционная зависимостьу реципиентов после ТГСК на фоне достижения полного донорского химеризма между длиной теломер и количеством тромбоцитов (г=0,26, р=0,018) и лимфоцитов (г=0,28, р=0,016). На фоне снижения сроков приживления трансплантата длина теломер у реципиентов на 40—60-й день после ТГСК была достоверно выше, что подтверждается наличием отрицательной корреляционной зависимости между длиной теломер и сроком восстановления пула лейкоцитов (р = 0,029), тромбоцитов (р=0,038) инейтрофилов (р = 0,01).
Заключение. Полученные намирезультатыуказываютнаналичие взаимосвязи между кинетикой восстановления гемопоэза и длины теломер ядросодержащих клеток костного мозга в посттрансплантационном периоде.
Беловежец Т. Н., Горчаков А. А., Кулемзин С. В.
СОЗДАНИЕ И АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ САЯ Т-КЛЕТОК, СПЕЦИФИЧНЫХ ОДНОВРЕМЕННО К СБ19 И СБ20
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, г. Новосибирск
Введение. Несмотря на успех одобренных FDA и появление все новых CAR Т-клеточных продуктов, нельзя сказать, что такая терапия оказывается неизменноуспешной для всех пациентов. На сегодняуже получены данные, что примерно половина случаев неудачного применения С019-специфичных CAR Т-клеток — это С019-негативные рецидивы заболевания (Gardner R. et al., 2016; Pan J. et al., 2020), связанные с ускользанием опухолевых клеток из-под контроля CAR Т. Для таких пациентов имеет смысл применять CAR Т-клетки другой специфичности, например к CD20 или к CD22. Кроме того, данную проблему может частично решить создание биспецифичных CAR, одновременно распознающих два или более антигена (Zah Е. et al., 2016; Martyniszyn A. et al., 2017; Stab N. N. et al., 2020).
Цель работы. Создание и сравнение активностей двух вариантов CAR Т-клеток двойной специфичности (CD19-CD20) — биспецифич-ного и бицистронного вариантов — с моноспецифичными вариантами.
Материалы и методы. Были сконструированы лентивирусные плазмиды, кодирующие CAR с антигенраспознающими доменами от антител 2F2 (антиС020) и FMC63 (антиС019) в двух вариантах: биспецифическом (scFv соединены через гибкий линкер в одной полипептидной цепочке) и бицистронном (два отдельных рецептора находятся под контролем общего промотора и соединены через Р2А). С использованием псевдотипированных лентивирусных частиц на основе данных плазмид и Т-клеток здорового донора были получены целевые
CAR Т-клеточные продукты, для которых проводился анализ поверхностной экспрессии CAR, а также фенотипирование и анализ цито-токсичности против опухолевых клеток-мишеней.
Результаты и обсуждение. Мы получили Т-клетки здорового донора, экспрессирующие различные варианты CAR двойной специфичности (CD19—CD20): биспецифичном и бицистронном, а также показали достаточный уровень экспрессии CAR на поверхности и специфическое связывание целевых антигенов каждым из антиген распознающих модулей. Кроме того, была показана специфическая цитотоксичность CAR Т-клеток против CD20+ CD19+ клеток-мишеней на уровне, сравнимом с моноспецифичными CAR на основе антител FMC63 и 2F2. Также был изучен субпопуляци-онный состав полученных CAR Т-клеточных продуктов, поскольку известно, что коммитированные CAR Т-клетки хуже персистируют в организме (Xu X. J. et al., 2016; Viaud S. et al., 2018).
Заключение. Используемая нами методика позволяет получать популяцию CAR Т-клеток с высокимуровнем экспрессии CAR, которые способны перенаправлять цитотоксическую активность Т-клеток на опухолевые антигены, причем каждый модуль в составе CAR является функциональным. Разработка CAR двойной специфичности является актуальной задачей, так как такой вариант может обеспечить более полный контроль над опухолью, а также помочь пациентам с исходно гетерогенными опухолями.
