CC BY
29СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ ТРИХИНЕЛЛЕЗА У СВИНЕЙ НА ПЕРЕРАБАТЫВАЮЩИХ ПРЕДПРИЯТИЯХ
DOI 10.24412/cl-33489-2021-2-110-112 УДК: 616:619
Написанова1 Л.А. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории паразитарных зоонозов e-mail: napisanova2015@yandex.ru Жданова1 О.Б., доктор биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории паразитарных зоонозов e-mail: oliabio@yandex.ru
Успенский1 А.В., член-корр. РАН, заведующий лабораторией паразитарных зоонозов, e-mail: a.v.uspensky@yandex.ru
Мартусевич2 А.К. доктор биологических наук, профессор, e-mail: «yst-mart@yandex.ru.
1 ФНЦ ВНИИ Экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р Коваленко РАН.
2 ФГОУ ВПО Нижегородская ГСХА
Аннотация. Трихинеллез является одним из самых опасных гельминтозоонозов. Методы компрессорной трихинеллоскопии мышц, как и другие, современные методы, используемые для постмор-тальной диагностики трихинеллеза, достаточно надежны, позволяют обнаружить трихинеллез и предотвратить развитие гельминтозооноза у человека. Экспертиза также может быть комплексной: c использованием компрессорной трихинеллоскопии и иммунологических методов, таких как дот-ИФА и др.
Ключевые слова: Trichinella spiralis, компрессорная трихинеллоскопия, дот-ИФА.
Современные технологии позволили сделать свиноводство одной из самых выгодных отраслей аграрного бизнеса. Однако, как и в любом бизнесе, связанном с переработкой продукции, в нем есть ряд проблем, решение которых требует внедрения современных технологий, и одной из таких проблем по-прежнему остается диагностика трихинеллеза. Трихинеллез является одним из самых распространенных зоонозов в мире и в ряде регионов Российской Федерации [1-3]. Поэтому на всех предприятиях страны проводится диагностика свиных туш на трихинеллез, которая является не только трудоемким, но и длительным процессом. За данный технологический процесс отвечает ветеринарная служба перерабатывающих предприятий, которая формируется в соответствии со штатным расписанием и объединяет ветеринарных врачей - экспертов, фельдшеров, лаборантов, трихинеллоскопистов, ветсанитаров, дезинфекторов. Как и по всем остальным видам работ на перерабатывающих предприятиях, при трихинеллоскопии помимо непосредственного процесса микроскопирова-ния, также тратится достаточно много времени
Abssract. Trichinellosis is one of the most dangerous zoonosis. Methods of compressor trichinelloscopy of muscle tissue of animals etc. can be used for postmortal-diagnostics of trichinellosis is aimed at detection of sources of infection and prevention of helminth zoonosis in human. Expertise may be conducted using a complex methods: compressor trichinelloscopy and immunological methods as dot-ELISA etc.
Keywords: Trichinella spiralis, compressor trichinelloscopy, dot-ELISA.
на подготовительно-заключительные и оперативные работы. Трихинеллоскописты, как и все ветеринарные специалисты перерабатывающих предприятий, свою деятельность осуществляют по трудовому договору в соответствии с должностными инструкциями. К работам, выполняемым трихинеллоскопистами, относятся:
подготовка рабочего места, трихинеллоскопа к работе, поддержание в санитарном состоянии рабочего места в течение смены и уборка рабочего места в конце рабочей смены;
регистрация поступающих проб для трихинеллоскопии;
микроскопирование срезов проб мышц; выписка заключений по результатам проведенных лабораторных исследований;
своевременное информирование главного ветеринарного врача, руководства предприятия о случаях регистрации трихинеллеза.
Несмотря на то, что постмортальная диагностика гельминтоза является общепринятой и осуществляется на всех предприятиях по переработке мясной продукции с двадцатых годов прошлого столетия. В настоящее время основными
ЭФФЕКТИВНОЕ № 2 март ЖИВОТНОВОДСТВО 2021
т
111
методами диагностики трихинеллеза по-прежнему являются компрессорная трихинеллоскопия (КТ) и исследование осадка после переваривания в искусственном желудочном соке (ПИЖС), однако, современные технологии позволяют помимо идентификации личинок также проводить диагностику по исследованию мясного сока (как иммунологическими, так и кристаллографическими методами) [4-8].
Цель исследования: оценка диагностической эффективности варианта иммуноферментного анализа (ИФА) - метода дот-ИФА.
Материалы и методы. Использовали беспородных белых крыс, зараженных личинками трихинелл; мясной сок, полученный из ножек диафрагмы и сыворотку от свиней клинически здоровых и вакцинированных антигенами трихинелл и инвазированных животных. Метод дот-ИФА позволяет определять как антигены, так и антитела. Все стадии инкубации и промывки выполняются при комнатной температуре. Вначале диски с антигеном обрабатывают блокирующим 5% раствором очищенного бычьего сывороточного альбумина в триэтаноламиновом буферном растворе (БСА-СТБ) или 1 %-й раствор нормальной сыворотки кролика в фосфатном буферном растворе NaCl (СФБ) при обнаружении антител: 50 мкл сыворотки, и/или мясного сока, в 1%-ном растворе БСА-СТБ инкубируют на диске, антитела связываются с антигеном, сорбированном на диске. Далее диск трехкратно промывают в растворе детергента. Для этого используют 0,05%-ный раствор нонидета Р-40 в СТБ, который является мягким неионным поверхностно активным веществом и/или 0,05 % раствор твина 20 в солевом растворе трис-НС1. После промывания диски инкубируют с 50 мкл конъюгата афинноочи-щенных антивидовых антител с ферментом. При данном иммуноанализе как и в классическом
Рисунок 1. Процесс титрования (при положительной реакции дот-ИФА при трихинеллезе), проводимый для определения минимального диагностического титра.
варианте эффективны конъюгаты антител с пе-роксидазой, так как молекулы этого фермента меньше по размерам молекул щелочной фосфа-тазы и их избыток легче вымывается из пор ни-троцеллюлозной мембраны.
Результаты исследований. На первом этапе проводили отработку оптимальных параметров для постановки реакции: оптимальную концентрацию антигена и минимальный диагностический титр (рис.1). В результате установлено, что минимальный расход антигена при сохранении высокой чувствительности (100%) и специфичности, составил 15 мг/мл, что и является оптимальной концентрацией для работы на нитроцеллюлозной мембране. Минимальный диагностический титр для мясного сока оказался выше, чем для классического варианта ИФА, и составил 1:5, при этом 100% специфичность установлена только среди клинически здоровых животных, а у вакцинированных свиней появлялись ложно-положительные реакции, поэтому итоговая специфичность дот-ИФА в данном исследовании составила 97,8%.
Этот метод имеет важное преимущество перед классической ИФА (а также кристаллоскопией и трихинеллоскопией) так как образцы сока можно получить и из замороженной мышечной ткани для уточнения диагноза. Так, например, в ряде случаев, при сомнительных результатах, мясо, подозрительное в отношении трихинеллеза, можно замораживать до подтверждения окончательного диагноза и далее следовать инструкциям Сан ПиН. При сравнительной характеристике дот-ИФА, ИФА и кристаллографических методов отметили превосходство дот - ИФА (табл.1). Второй особенностью данного метода является возможность длительного хранения (более 10 лет) первичного материала в темных контейнерах без изменения окраски нитроцеллюлозной мембраны.
В настоящее время работники ветеринарной службы предприятия руководствуются законом Российской Федерации «О ветеринарии», Техническими регламентами Таможенного Союза и т.д. К наиболее важным обязанностям, выполняемым ветеринарными врачами на перерабатывающих предприятиях, относится контролирующая деятельность: во-первых, за выполнением требований ветеринарного законодательства Российской Федерации, во-вторых, за поступающими на перерабатывающее предприятие животными и готовой продукцией. Учитывая большой объем
Таблица 1.
Сравнительная характеристика дот-ИФА, ИФА и кристаллографических методов.
Показатели, характеристики дот-ИФА ИФА кристаллография
Продолжительность 2 ч. 3 - 6 ч. 12 ч.
Число этапов постановки 4 - 5 4 - 5 5- 6
Специальная подготовка персонала нет да да
Применяемость в полевых условиях да нет да
работ выполняемым трихинеллоскопистами на перерабатывающих предприятиях, с целью оптимизации рабочего времени возможно использование дополнительных современных высокоэффективных методов исследования, в частности, дот-ИФА, который позволит в оперативном порядке, до выявления трихинелл в мясе принять срочные меры по изоляции и обезвреживанию туши. Причем, возможность появления ложно-положительных реакций в случае вакцинаций или перекрестного реагирования с другими антигенами не позволяет полностью исключить классическую трихинеллоскопию в производственном процессе
Заключение. Важным этапом переработки является проведение ветсанэкспертизы мяса, продуктов убоя и сырья животного происхождения и оформление, регистрация и выдача ветеринарных сопроводительных документов. В связи с вышесказанным несомненно, что ветеринарная служба перерабатывающего предприятия призвана обеспечить выпуск качественной и безопасной продукции путем регулярного ветеринарно-санитар-ного контроля на всех участках производства и в т.ч. трихинеллоскопии. Несмотря на то, что в системе ветеринарно-санитарных мероприятий на этапе диагностики мясного сырья на трихинеллез ведущее место занимает трихинеллоскопи-ческий контроль, становятся крайне актуальными современные разработки для оптимизации ветеринарной экспертизы. Одним из перспективных методов может стать исследование мясного сока, с последующей уточняющей трихинеллоскопией.
ЛИТЕРАТУРА
1. Жданова О.Б., Ашихмин С.П., Окулова И.И., Бельтю-кова З.Н. Распространенность Т. spiralis и некоторые особенности профилактики трихинеллеза в Кировской области//Здоровье населения и среда обитания. 2017. № 1 (286). С. 46-49.
2. Успенский А.В., Скворцова Ф.А. Метод ветеринар-но-санитарной экспертизы мяса промысловых животных при паразитарных зоонозах. Российский парази-тологический журнал. 2014. №3-С.151-157.
3. Cui J., Wang Z.Q. An epidemiological overview of swine trichinellosis in China // Vet. J., 2011, V.190 (3), P.323-328.
4. Мартусевич А.К., Жданова О.Б. Исследование зависимости кристаллогенной активности биосреды от интенсивности инвазии Trichinella spiralis // Российский паразитологический журнал. - 2013. - №2. - С. 64-71.
5. Мартусевич А.К., Жданова О.Б., Написанова Л.А., Ашихмин С.П. Применение dot-ELISA и биокристаллоскопии для прижизненной диагностики трихинеллеза // Российский иммунологический журнал. - 2013.
- Т. 7, №2-3. - С. 187.
6. Мартусевич А.К., Жданова О.Б., Хайдарова А.А., Бе-режко В.К., Написанова Л.А. Анализ физико-химических свойств антигенов некоторых гельминтов как технология паразитологической метаболомики//Фунда-ментальные исследования. 2014.- № 12-7. С. 1437-1441.
7. Написанова Л.А. Диагностическая эффективность им-муноферментных тест-систем (ифр и дот-ифа) при трихинеллезе свиней//Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук / Москва, 2004.
8. Написанова Л.А., Жданова О.Б., Ашихмин С.П., Окулова И.И., Андреянов О.Н., Хайдарова А.А. Трихинеллез: некоторые аспекты его мониторинга и профилактики// Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. 2016. № 17. С. 280-282.
9. Zhdanova O.B., Haidarova A.A., Napisanova L.A., Rossohin D., Lozhenicina O. The possibility of using Тrichinella spiralis as an experimental model in the field of high dilutions. International Journal of High Dilution Research. 2015. Т. 14. № 2. С. 60-61.
\0L INTEKPROM
WjRO 2021
РОССИЙСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ «ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ
ПРЕДПРИЯТИИ ПТИЦЕВОДСТВА И СВИНОВОДСТВА 2021»
Стратегические вопросы конференции:
• Опыт внедрения бережливого производства на предприятиях птицеводства и свиноводства и достигнутые результаты
• Опыт внедрения системы энергоменеджмента на предприятиях птицеводства и свиноводства
и достигнутые результаты
• Оптимизация инраструктуры предприятий
• Опыт производства продукции с высокой добавленной стоимостью
• Развитие экспсвриродукции: меры, зависящие от предприятия
Более подробная информация: +7 (495) 777-96-71
8 июня 2021 года Челябинск, Гранд-отель «Видгоф»
