CC BY
71
Мк
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК Б18.14Б-00Б.5:Б15.37
СОСТОЯНИЕ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТЯЖЕСТИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ШЕЙКИ МАТКИ
Л.Д. Андосова,
ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Андосова Лариса Дмитриевна - e-mail: [email protected]
При заболеваниях шейки матки, обусловленных папилломавирусной инфекцией, отмечены повышение значений интерферонов альфа и гамма на репродуктивной стадии папилломавирусной инфекции «Е7-» и снижение значений на стадии интегративной формы инфекции «Е7+». При прогрессии неопластического процесса наблюдается снижение концентрации ИЛ 18. На конечных этапах опухолевой прогрессии - «HSIL Е7+» и рак шейки матки «Е7+» - имеет место повышение цитокинов ИЛ 10, TGFpi, что сопровождается формированием локальной иммуносупрессивной среды.
Ключевые слова: папилломавирусная инфекция, иммунитет, шейка матки.
In diseases of the cervix caused by HPV infection, have increased values and gamma interferon alpha and gamma at reproductive stage of human papillomavirus infection «Е7-» and the decrease in the values at the stage of integrative forms of infection «Е7+». With the progression of the neoplastic process, the decrease of the concentration of IL 18. In the final stages of tumor progression - «HSIL Е7+» and cervical cancer «Е7+» increase of cytokines IL 10, TGFpi that is accompanied by the formation of local immunosuppressive environment.
Key words: human papilloma virus infection, immunity, cervix uteri.
Высокая распространенность урогенитальной папилломавирусной инфекции (ПВИ), доброкачественных и злокачественных новообразований половых органов представляют на сегодняшний день серьезную медикосоциальную проблему [1, 2].
В настоящее время имеется достаточно данных, подтверждающих причинную связь между папилломавирусной инфекцией и предраковыми заболеваниями шейки матки [3, 4]. Практически все дисплазии содержат вирус папилло-
мы человека (ВПЧ) либо в виде инфекционных вирионов, либо в виде эписомальной или интегративной ДНК [5]. Хроническая папилломавирусная инфекция, обусловленная типами высокого канцерогенного риска, интегративная стадия, при которой ДНК вируса встраивается в геном инфицированных клеток, является необходимой частью для создания предопухолевого и злокачественного фонотипа [6].
Однако, считая вирус папилломы человека главным фактором риска предрака и рака шейки матки, нельзя не учиты-
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
вать другие возможные влияния. Развитие заболеваний на фоне вирусной инфекции во многом определяется состоянием иммунной реактивности организма, в первую очередь, локальной защиты репродуктивного тракта женщины [7, 8].
Цель исследования: определить уровень цитокинов, интерферонов в цервикальной слизи для оценки роли факторов местного иммунитета в манифестации патологических процессов шейки матки, ассоциированных с вирусами папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР).
Материалы и методы
Для реализации поставленной цели изучали иммунологические показатели цервикальной слизи у 280 женщин (средний возраст 32±2,56 года), у которых предварительно методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) выявили ВПЧ ВКР. Пациентки были разделены на группы по апостериорным критериям: 1-я группа - 20 практически здоровых женщин, с отрицательным результатом ВПЧ-теста, п=20; 2-я группа - латентная форма ПВИ, онкобелок Е7 отрицательный результат «ВПЧ+ Е7-», п=40; 3-я группа - латентная форма ПВИ, онкобелок Е7 положительный результат «ВПЧ+ Е7+», п=40; 4-я группа - низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (1_Б!1_), онкобелок Е7 отрицательный результат «1_Б!1_ Е7-», п=40; 5-я группа - низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (ЬБЮ, онкобелок Е7 положительный результат «1_Б!1_ Е7+», п=40; 6-я группа - высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (ИБП), онкобелок Е7 отрицательный результат «ИБП Е7-», п=20; 7-я группа - высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (ИБП), онкобелок Е7 положительный
результат «HSIL Е7+», n=40; 8-я группа - рак шейки матки «РШМ Е7+», n=40. Изучение профиля экспрессии цитокинов было направлено на выявление иммунологических особенностей репродуктивной «Е7-» и интегративной «Е7+» стадий папилломавирусной инфекции.
Материалом для исследования методом ПЦР-РВ служили образцы эпителия шейки матки, забранные с использованием одноразовых универсальных зондов в транспортную среду торговой марки «Ампли Сенс» для материала из урогенитального тракта женщин. Материал исследовали с использованием анализатора «iQ5» Cycler («Bio-RAD», США) комплекта тест-ситем ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора. ВПЧ-скрининг осуществлялся с применением набора реагентов для выявления ДНК ВПЧ ВКР 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 60, 70 типов «Ампли Сенс ВПЧ ВКР скрин-EPh». Определение онкобелка Е7 ВПЧ 16 и 18 типов проводилось с применением набора реагентов для иммуноферментного выявления - «Е7-ВПЧ-16/18-Диагност» производства ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова, Россия, регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07581 от 24 мая 2010 года. Количественное исследование цитокинов ИЛ 18, ИЛ 10 проводилось иммуноферментным методом, с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Россия), определение трансформирующего фактора роста бета-1 (TGFp1) с использованием набора компании DRG (DRGELISA-TGFp1, Германия). Количественное определение интерферонов проводилось иммуноферментными наборами Bender Med Systems (США). В наборах для измерения уровня цитокинов и интерферонов применялся твердофазный иммуно-ферментный метод с использованием прибора «Expert+» (Австрия). Полученные результаты были обработаны обще-
ТАБЛИЦА 1.
Содержание цитокинов у ВПЧ-позитивных женщин в зависимости от стадии папилломавирусной инфекции
Показатели Контрольная М±<г 1-я группа ВПЧ+ Е7-М±<г 2-я группа ВПЧ+ Е7+ М±<г 3-я группа LSIL E7-М±<г 4-я группа LSIL E7+ М±<г 5-я группа HSIL E7-М±<г 6-я группа HSIL E7+ М±<г 7-я группа Рак шейки матки М±<г 8-я группа
ИФНа 1,85±1,24 31,24±15,94 р21=0,000026 37,98±17,80 р3,1=0,000032 р3 2=0,014 29,26+12,20 р41=0,000020 р 4,з=0,004 16,00+6,47 р51=0,000019 р5,2=0,000022 р55,,23=0,000008 р5,4=0,000010 10,35+6,17 р6,1=0,00996 р62=0,000008 р6'3=0,000017 р6,4=0,000022 р6,5=0,03844 4,58+6,10 р72=0,000017 р7,3=0,00020 р7,4=0,00008 р7,5=0,00010 р7,6=0,03434 3,24+3,57 р8 2=0,000020 р83=0,000026 р84=0,000017 р8,5=0,000024 р^,6=0,02485
ИФН7 14,25±10,57 240,30±167,34 р21=0,000020 284,05+215,16 р31=0,000032 255,25+161,09 р41=0,000026 162,58+142,17 р51=0,00019 р5'2=0,02461 р53=0,00251 р5,4=0,00202 107,25+117,54 р6,1=0,0360 р6,2=0,00037 Рб 3=0,000020 Р6,4=0,00012 39,80+61,99 р7,2=0,000008 р/3=0,000020 р74=0,000017 р'^0,0011 25,75+48,67 р82=0,000017 р8,3=0,000026 р84=0,000020 р8,5=0,00050 р8,6=0,04839
ИЛ 18 54,90±63,79 63,93±50,79 38,75+38,15 Рз,2=0,0433 52,48+56,96 14,53+15,01 р51=0,0004 р5,2=0,00003 р54=0,0007 17,20+12,58 р61=0,0008 Р6 2=0,000035 Р6,4=0,0014 20,33+22,34 р71=0,0018 Р7 2=0,00007 р7,4=0,0023 12,78+14,72 р81=0,00025 р8,2=0,00003 р84=0,0005
ИЛ 10 38,10±25,84 52,08±39,43 62,93+35,70 62,60+35,14 166,78+80,83 р51=0,000020 р5’2=0,000020 р5'3=0,000031 р5,4=0,000026 118,60+56,78 р6,1=0,0029 Р6,2=0,0155 Р6 3=0,0128 р6,4=0,0328 Р6,5=0,031 255,20+146,70 р7,1=0,000026 р7,2=0,000020 р7’3=0,000008 р74=0,000017 р7'5=0,000084 р7,6=0,000022 280,50+147,44 р8,1=0,000032 р8,2=0,000026 р83=0,000017 р84=0,000020 р8,5=0,000023 р8,6=0,000008
TGFP 95,15±119,91 102,93±67,07 214,53+156,99 133,38+105,64 223,38+145,23 508,50+316,90 р6,1=0,0056 р6,2=0,0049 р6’з=0,0032 Р6,4=0,0075 р6,5=0,0149 1884,60+846,50 р7,1=0,000026 р77,,12=0,000020 р7,3=0,000008 р7,4=0,00002 р75=0,00002 р7,6=0,000009 1899,38+835,29 р8,1=0,000032 р8,2=0,00003 р8,3=0,000020 р84=0,000020 р85=0,000008 р8,6=0,000022
Мк
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
принятыми методами вариационной статистики, с использованием пакета статистических программ Statistica for Windows 6.0. При сравнительном анализе рядов переменных для случаев множественного сравнения использовали критерий Ньюмена-Кейлса, во всех случаях критическое значение уровня достоверности принималось р<0,05.
При анализе иммунологических показателей выявлены повышенные концентрации интерферонов в группах женщин с латентной формой ПВИ «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», с легкими дисплазиями «LSIL Е7-» по сравнению с группой контроля. При сравнении групп с латентной формой ПВИ между собой по показателям интерферонов отмечается незначительное повышение в третьей группе ИФН-а (р=0,014). При сравнении группы с легкими дисплазиями «LSIL Е7-» с группой «ВПЧ+ Е7-» различия не выявлены, с группой «ВПЧ+ Е7+» отмечается снижение концентрации ИФН-а (р=0,004). В группе женщин с легкими дисплазиями «LSIL Е7+» наблюдается повышение концентрации интерферонов по сравнению с группой контроля (ИФН-а р=0,00002, ИФН-7 р=0,00019), снижение значений во всех описанных группах сравнения. Анализ в категориях тяжелых дисплазий «HSIL Е7-», «HSIL Е7+» и РШМ показал достоверное снижение интерферонов по сравнению с группами с латентной формой ПВИ и с легкими дисплазиями. В категории «HSIL Е7-» значения различны с группой контроля в сторону повышения (ИФН-а р=0,0100, ИФН-7 р=0,0360). Количество интерферонов в группах «HSIL Е7+» и РШМ не отличается от значений в группе контроля и не изменено при сравнении данных групп между собой. При сопоставлении концентраций интерферонов в группах с латентными формами ПВИ (2-я и 3-я группы), с легкими дисплазиями и с группой тяжелых дисплазий «HSIL Е7-» имеет место снижение значений.
Анализ содержания цитокинов показал, что концентрации ИЛ 18 в группах женщин с латентной формой ПВИ «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», с дисплазиями легкой степени «LSIL Е7-» не отличаются от группы контроля (р>0,05). Имеет место достоверное отличие содержания ИЛ 18 в группе «ВПЧ+ Е7+» в сторону уменьшения по сравнению с группой «ВПЧ+ Е7-» (р=0,0433). В группе легких дисплазий «LSIL Е7+» выявлено снижение концентраций цитокина ИЛ 18 по сравнению с группами контроля (р=0,0004), латентной формы ПВИ «ВПЧ+ Е7-» (р=0,000030) и легких дисплазий «LSIL Е7-» (р=0,0007), с группой «ВПЧ+ Е7+» отличия недостоверны (р>0,05). В группе тяжелых дисплазий «HSIL Е7+» ИЛ 18 снижен по сравнению с группой контроля (р=0,0018) и с группами с «ВПЧ+ Е7-» (р=0,00007) «LSIL Е7-» (р=0,0023), нет отличий с группами «ВПЧ+ Е7+», «LSIL Е7+», «HSIL Е7-» (р>0,05). У женщин с РШМ снижение концентрации ИЛ 18 также наблюдается по сравнению с группами контроля (р=0,00025), «ВПЧ+ Е7-» (0,00003), «LSIL Е7-» (0,0005), в
ТАБЛИЦА 2.
Отношение экспрессии цитокинов к супрессирующим факторам
группах «ВПЧ+ Е7+», «ЬБП Е7+», тяжелых дисплазий «НБН Е7-», «НБІЬ Е7+» отличия не достоверны или их нет.
Супрессирующий цитокин ИЛ 10 обнаружил следующую тенденцию: в группах с латентной формой ПВИ «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», легких дисплазий «15ІІ_ Е7-» отличия не выявлены; в группе «І_БІІ_ Е7+» наблюдаются достоверные отличия с группой контроля (р=0,000020) и группами сравнения в сторону повышения, та же тенденция имеет быть в группе тяжелых дисплазий «НБН Е7-», «НБН Е7+» и РШМ. Трансформирующий фактор роста 31 не выявил различий в содержании по категориям «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», «ЬБН Е7-», «ЬБИ. Е7+», повышение концентраций отмечено в группе «НБІІ_ Е7-» по сравнению с группой контроля (р=0,0056) и в группах сравнения, то же в группах «НБІІ_ Е7+» и РШМ. Обращает на себя внимание отсутствие отличий в группах тяжелых дисплазий «ИБП Е7+» и РШМ по анализируемым иммунологическим показателям (р>0,05).
Для оценки возможности диагностики нарушений в системе местного иммунитета было использовано отношение уровня экспрессии интерферонов, цитокина ИЛ 18 к супрессирующим факторам - ИЛ 10, ТСЕ 31. Установлено, что соотношение уровней выработки ИФН-а /ИЛ 10, ИФН-а/ТСЕ (31, ИФН-7/ИЛ 10, ИФН-7/ТСЕ 31, ИЛ 18/ИЛ 10, ИЛ 18/ТСЕ 31 в слизи цервикального канала пациенток с легкими «І_БІІ_ Е7+» и тяжелыми дисплазиями «НБІІ_ Е7+», РШМ было снижено. При этом наиболее заметное снижение было в группах больных с тяжелыми дисплазиями «НБІІ_ Е7+» и РШМ.
Полученные результаты свидетельствуют об особенностях цитокинового профиля у женщин с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями шейки матки в зависимости от стадии папилломавирусной инфекции. Отмечены повышение значений интерферонов альфа и гамма на репродуктивной стадии папилломавирусной инфекции «Е7-» и снижение значений на стадии интегративной формы инфекции «Е7+». При прогрессии неопластического процесса наблюдается снижение концентрации ИЛ 18. На конечных этапах опухолевой прогрессии - «НБІІ_ Е7+» и рак шейки матки «Е7+» - имеет место повышение цитокинов ИЛ 10, ТСЕ 31, что сопровождается формированием локальной имму-носупрессивной среды.
Выводы
Таким образом, продуктивная форма папилломавирус-ной инфекции характеризуется индукцией выработки интер-
феронов альфа и гамма на стадиях латентной формы папил-ломавирусной инфекции («ВПЧ+ Е7-») и эпителиальных дисплазий низкой степени («І_БІІ_ Е7-»). Интегративная форма папилломавирусной инфекции («І_БІІ_ Е7+», «НБІІ_ Е7+», «РШМ Е7+») обнаруживает снижение концентрации интерферонов альфа и гамма, интерлейкина 18, а также локальную иммуносупрессию - повышение значений интер-
Исследуемые показатели Контрольная 1-я группа ВПЧ+ Е7-2-я группа ВПЧ+ Е7+ 3-я группа LSIL E7-4-я группа LSIL E7+ 5-я группа HSIL E7-6-я группа HSIL E7+ 7-я группа Рак шейки матки 8-я группа
ИФН-а/ИЛ 10 0,0486 0,5999 0,6035 0,4675 0,0959 0,0873 0,0179 0,0115
ИФН-а/TGF |} 0,0194 0,3035 0,177 0,2194 0,0716 0,0204 0,0024 0,0017
ИФН-7/ИЛ 10 0,374 4,6145 4,5141 4,0775 0,9748 0,9043 0,156 0,0918
ИФН-7/TGF |} 0,1498 2,3347 1,3241 1,9138 0,7278 0,2109 0,0211 0,0136
ИЛ 18/ИЛ 10 1,4409 1,2276 0,6158 0,8383 0,0871 0,145 0,0796 0,0455
ИЛ 18/TGF |} 0,577 0,6211 0,1806 0,3934 0,065 0,0338 0,0108 0,0067
1^
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
лейкина 10 и трансформирующего фактора роста бета. Увеличение локальной экспрессии интерлейкина 10 и трансформирующего фактора роста бета на фоне снижения показателей цитокинов при тяжелой дисплазии и раке шейки матки и в соответствии с формой папилломавирусной инфекции может служить дополнительными диагностическими и прогностическими критериями тяжести плоскоклеточного интраэпителиального поражения шейки матки.
ЛИТЕРАТУРА
1. Прилепская В.Н., Роговская С.И. Новые технологии профилактики рака шейки матки. В кн.: Патология шейки матки и генитальной инфекции. М.: МЕДпресс-информ, 2008. С. 8-14.
2. Семенов Д.М., Занько С.Н., Дмитраченко Т.И. Папилломавирусная инфекция. СПб.: Диалект, 2008. 84 с.
3. Бебнева Т.Н., Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки: скрининг (обзор литературы). Научно-практический медицинский журнал «Доктор.Ру». 2009. № 6 (50). С. 14-15.
4. Папилломавирусная инфекция / под ред. В.М. Говоруна. М.: НПФ Литех, 2009. С. 43-45.
5. Питер Л. Стерн, Китченера Генри С. Вакцины для профилактики рака шейки матки: пер. с англ. / под общ. ред. акад. РАМН Г.Т. Сухих, проф., В.Н. Прилепской. М.: МЕДпресс-информ, 2009. С. 49-58.
6. Киселев В.И., Муйжнек Е.Л. Молекулярные механизмы развития дисплазии шейки матки: новые знания - новые возможности. М. 2011. 20 с.
7. Клиническая онкогинекология: пер. с англ. / под ред. Е.Г.Новиковой. М.: Рид Элсивер, 2011. Т. 1. С. 22-73.
8. Сухих Г.Т., Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки. М.:
МЕДпресс-информ, 2012. С. 116-139. ГЛ!
