CC BY
11
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
агглютинабельность эритроцитов даже с одним типом слабого антигена RhD (табл. 2). Самый эффективный серологический метод обнаружения вариантных антигенов — непрямой антиглобулино-вый тест в гелевой методике. Обнаружен один образец эритроцитов без антигенов системы Резус, но с генами RHD*D и RHCE*Cce ^ЬпиП регуляторного типа). Секвенированием (А. Doescher, Германия) найдена новая мутация в гене резус-ассоциированного гликопроте-ида (RHAG) (табл. 1). Заподозрить наличие слабых и парциальных антигенов можно при сочетании слабой (смешанной) агглютинации с Цоликлонами и сильной реакции в гелевом методе. Применение только гелевой методики может привести к пропуску парциальных антигенов и неправильному выбору донорских эритроцитов. Частота антигена RhCw - 5,54%, антигена RhСu — 0,0224% (табл. 3). Присутствие вариантных антигенов RhC было заподозрено по расхождению результатов: с Цоликлонами эритроциты не реагировали, в гелевом методе реакция 4+. Ген RHCE*Ce.09, кодирующий антиген Сх, был найден только прямым секвенированием. Частота антигена RhCx —
Таблица 1. Частота вариантов гена RHD в российской популяции
n=139)
Тип RHD*D weak Полиморфизм Фенотип Частота встречаемости
% abs
D weak type 1 c.809T>G p.Val270Gly CcDwee 25,9 (95 % CI: 18,31-35,26) 36
D weak type 2 1154G>C p.Gly385Ala ccDwEe 12,23 (95 % CI: 7,17-20,08) 17
D weak type 3 c.8 C>G p.Ser3Cys CcDwee ccDwee CCDwee 53,96 (95 % CI: 44,21-63,39) 75
D weak type 4.2 (DAR) 602C>G (p.T201R) 667T>G (p.F223V) 1025T>C (p.I342T) ccDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type 6 c.29G>A p.Arg10Gln CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type 15 c.845G>A p.Gly282Asp CCDwee Ccdee ccdEe 2,16 (95 % CI: 0,62-7,23) 3
D weak type 67 c.722C>T p.Thr241Ile ccDwEe 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type G255R c.763G>A p.Gly255Arg CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type JVS5-38del4 c.802-38 del tctc p. нет данных CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHD* DNB partial c. 1063G>A p.Gln355Ser CCDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHD* DVII partial c.329T>C p.Leu110Pro CCDwEe 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHnull RHAG c. 571 C>T (exon 4) stop codon p. R191 c.724G>A (exon 5); RHD*D+RHCE*Ccee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
0,0448%. В обоих найденных случаях RhСх сочетался с антигеном Rhс (фенотипы СxcDEe и CxcDee).
Заключение. Самый эффективный серологический метод определения слабых антигенов системы Резус — гелевый, но он выявляет не все слабые варианты. Генетическое типирование позволяет установить точную причину снижения экспрессии антигенов и различить слабые и парциальные варианты (при относительно сильных типах слабого RhD можно переливать D-положительные эритроциты, при парциальных RhD — только D-отрицательные эритроциты). Установить тип антигена RhС тоже можно только молекулярными методами.
Таблица 2. Серологическая характеристика эритроцитов со слабыми и парциальными типами антигена
№ Тип weak RhD Реакция прямой агглютинации c aнти-D IgM Реакция непрямой агглютинации c aнти-D IgG
метод 1 (время появления агглютинации) метод 2 (разведение антител) метод 3 (IgM+IgG) (сила агглютинации) метод 4 (время появления агглютинации) метод 5 (сила агглютинации)
1 D weak type 1 2'-3' 1:2-1:32 1+-3+ 1'-3' 1+-3+
2 D weak type 2 отр 1:8-1:64 1+-2+ 2'-3' 4+
3 D weak type 3 1'-3' 1:8-1:1024 2+-4+ 20''-2' 3+-4+
4 D weak type 4.2 (DAR) 3' 1:32 3+ 1, 4+
5 D weak type 6 3' 1:64 3+ 1 4+
6 D weak type 15 отр. отр. отр. 2 4+
7 D weak type 67 отр 1:2 1+ 2' 3+
8 D weak type G255R отр 1:2 отр. 2' 4+
9 D weak type JVS5-38del4 отр отр нд 4' 4+
10 D partial type DNB 2-3, 1:256 3+ 2 3+-4+
11 D partial type DVII Химера 70% 1:512 3+ 25" нд
Таблица 3. Варианты и частоты гена RHCE*C в российской популяции
n=4470 человек)
Фенотип n % (95% ДИ)
RHCE*Ce.09 CxcDEe 1 0,02 (0,001-0,04)
CxcDee 1 0,02 (0,001-0,04)
CwcDee 92 2,06 (0,50-7,11)
RHCE*Ce.08 CoDEe 29 0,66 (0,10-4,79)
C^e 126 2,82 (0,92-8,10)
RHCE*Ce CuCDee 1 0,02 (0,001-0,04)
Всего RhC 250 5,60 (2,50-12,00)
Горбенко А. С., Бахтина В. И., Мартынова Е. В., Столяр М. А., Комаровский Ю. Ю., Ольховский И. А. СОМАТИЧЕСКАЯ МУТАЦИЯ C.7541_7542DELCT В ГЕНЕ NOTCH1 АССОЦИИРОВАНА С ЭКСПРЕССИЕЙ МРНК ГЕНОВ HIF ПРИ ХЛЛ
Красноярский филиал ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; КГБУЗ «Красноярская краевая клиническая больница»; ФИЦ КНЦ СО РАН; КГБУЗ «Красноярская межрайонная клиническая больница №7»; ФГБОУ ВО «КрасГМУ» Минздрава России
Введение. Мутация c.7541_7542delCT в гене NOTCH1 — наиболее частая мутация при первичной постановке диагноза ХЛЛ, и частота ее выявления увеличивается с прогрессированием заболевания. Для пациентов с мутаций NOTCH1 характерен короткий период ремиссии при терапии анти-CD20 препаратами, менее благоприятный прогноз и негативный пролиферативный профиль опухолевых клеток. Недавно у пациентов с мутацией NOTCH1 была обнаружена повышенная экспрессия мРНК циклинов, регулирующих переход от G1 к S фазе клеточного цикла (ASH 2019: https://doi.org/10.1182/ blood-2019-127960). Известно также участие факторов транскрипции HIF в регуляции клеточного цикла и гипоксического ареста деления онкотрансформированных клетках.
Цель работы. Оценка влияния мутации c.7541_7542delCT в гене NOTCH1 на экспрессию мРНК НШ1а и HIF2a в лейкоцитах крови при ХЛЛ.
Материалы и методы. В исследование были включены 40 пациентов с первично выявленным В-ХЛЛ. Определение мутации
с.7541_7542delCT в гене NOTCH1, а также экспрессии мРНК НШ1а и НШ2а в лейкоцитах крови осуществляли методом ПЦР-РВ, разработанным в лаборатории Красноярского филиала НМИЦ гематологии. Статистическую оценку полученных результатов проводили с использованием пакета R.
Результаты и обсуждение. У 11 (27%) пациентов была выявлена мутация с.7541_7542delCT в гене NOTCH1. Нами впервые показано, что мутация NOTCH1 ассоциирована с более низким коэффициентом экспрессии мРНК НШ1а/НШ2а (Ме = 0,04 против 0,6; р<0,05) .
Заключение. Преобладание экспрессии НШ2а над экспрессией НШ1а в лейкоцитах пациентов с мутацией NOTCH1 при ХЛЛ, вероятно, определяется особенностями нарушенного мутацией сигнального пути Wnt и метаболического взаимодействия с белками, регулирующими клеточный цикл в условиях гипоксической экспозиции. Молекулярные механизмы такого взаимодействия и пролифератив-ного ответа онкотрансформированных лимфоцитов на гипоксию требует дальнейшего исследования.
