CC BY
116
сч со
ев
и
Молекулярные основы D-отрицательного фенотипа (обзор литературы и описание случаев)
Л.Л. Головкина, А.Г. Стремоухова, Т.Д. Пушкина, Б.Б. Хасигова, Г.В. Атрощенко, М.Н. Васильева, Р.С. Каландаров, Е.Н. Паровичникова
ФГБУ«Гематологический научный центр» Минздрава России; Россия, 125167, Москва, Новый Зыковский проезд, 4
Контакты: Лариса Леонидовна Головкина [email protected]
et
В обзоре приводятся молекулярные основы формирования D-отрицательного фенотипа у людей. Описаны причины появления ев истинного и ложного D-отрицательных фенотипов. Основа истинного D-отрицательного фенотипа — изменения в геноме, следствием которых становятся либо полное отсутствие экспрессии белковой молекулы антигена RhD на поверхности эритроцитов, либо экспрессия неполноценного антигена RhD, не выявляемого серологическими методами исследования. Причина ложного D-отрицательного фенотипа — недостаточная чувствительность рутинных серологических методов исследования. Описаны = случаи истинного и ложного D-отрицательных фенотипов, выявленные при обследовании россиян. Нам удалось выявить 1 случай истинного (RHDy) и 5 случаев ложного D-отрицательного фенотипа (RHDweak тип 2 — 2 случая, RHDweak тип 15 — 1 случай о и RHDweak тип 20 — 2 случая).
т Ключевые слова: ген, генотип, фенотип, система Резус, резусный комплекс, аллоиммунизация, истинный D-отрицательный g фенотип, ложный D-отрицательный фенотип, аллели, мутации, антигены эритроцитов
еч _
п DOI: 10.17650/1818-8346-2015-10-3-64-69
о Molecular basis of D-negative phenotype (literature review and case reports)
о L.L. Golovkina, A.G. Stremouchova, T.D. Pushkina, B.B. Khasigova, G.V. Atroshchenko,
M.N. Vasilyeva, R.S. Kalandarov, E.N. Parovichnikova
® Hematological Research Center, Ministry of Health of Russia; 4a Novyy Zykovskiy Pr-d, Moscow, 125167, Russia
о The molecular basis of the D-negative phenotype formation in humans is presented in this article. Causes of true and false D-negative pheno-* type appearance are described. The basis of true D-negative phenotype are changes in the genome, that lead to complete lack of RhD antigen о expression on the red blood cells surface, or defective expression of RhD antigen, not detectable by serological methods. The reason for the false D-negative phenotype is the insufficient sensitivity of routine serological methods. Cases of true and false D-negative phenotype identified during the examination of the Russia residents are described. We were able to identify one case of true (RHDy) and five cases of false D-negative phenotype (RHD weak type 2 — two cases, RHD weak type 15 — one case and RHD weak type 20 — two cases) by molecular method.
Key words: gene, genotype, phenotype, Rhesus, rhesus complex, alloimmunization, true negative D-phenotype, false negative D-phenotype, alleles, mutations, erythrocyte antigens
Введение
Среди выявленных в настоящее время 33 групповых эритроцитарных систем система резус является самой полиморфной. Она состоит из 59 антигенов и более 200 аллелей. Антигены системы Резус кодируются 2 генами — RHD и ЯИСЕ, расположенными на коротком плече хромосомы 1 (1р34.3-1р36.1) и имеющими 10 экзонов [1]. Эти гены расположены на малом расстоянии друг от друга и навстречу друг другу \RHCE (5'->3')-(3'<5') RHD}, имеют высокую степень гомологии — до 98 %, что может приводить к обменам гомологичными участками — генной конверсии, кроссинговеру, способствующим формированию гибридных генов. Ген RHD фланкирован 2 «резусными боксами» — повторяющимися последовательностями в 9000 пар оснований и гомологией в 98,6 % [2]. Гены RHD и RHCE определяют биосинтез полипептидов ЯИ с молекулярной массой 30—32 кДа [3], состоящих из 417 аминокис-
лот. Гидрофобные белки пронизывают мембрану эритроцита в 12 местах, образуя 6 петель, состоящих из внеклеточной, внутримембранной и внутриклеточной частей [4] и имеющих внутримембранные N и С-концевые последовательности. Ген RHD кодирует синтез антигена Б, ген RHCE — антигенов С / с и Е / е. Лиц, на эритроцитах которых антиген Б присутствует, относят к резус-положительным, а тех, кто не имеет данного антигена, — к резус-отрицательным.
Серологические методы фенотипирования эритроцитов, основанные на агглютинации эритроцитов моноклональными антителами, доступны, экономичны, легковоспроизводимы и быстры в исполнении. Они специфичны и обладают достаточной чувствительностью, пригодны для рутинных скрининговых исследований. Однако только сочетание серологических методов с молекулярными методами исследования позволяет понять истинные механизмы формиро-
вания Б-отрицательного фенотипа у людей. В зависимости от причин его появления принято различать истинную и ложную Б-негативности. Молекулярную основу истинной Б-негативности составляют изменения в геномной организации, а ложная Б-негативность обусловлена лимитированием возможностей серологических методов исследования.
Причины появления истинного Б-отрицательного фенотипа кроются в возникновении изменений в геноме, следствием которых является либо полное отсутствие экспрессии белковой молекулы антигена КИБ на поверхности эритроцитов, либо экспрессия неполноценного антигена КИБ, не выявляемого серологическими методами исследования.
Белки ЯИ, в которые интегрированы антигены системы резус, могут экспрессироваться только при условии присутствия на мембране эритроцитов другого белка — ЯИ-ассоциированного гликопротеина (RhAG, КИ50), являющегося продуктом гена ЯНАЭ, расположенного на хромосоме 6 (6р11-р21) [5—7]. Вместе они представляют семейство резусных белков, входящих в большой резусный комплекс, включающий дополнительные гликопротеины СБ47, гликофо-рин В и гликопротеины с антигенами систем LW и Бу [8], белок полосы 3 [9]. Доказано, что белковая молекула протеина RhAG представляет собой обязательный посттранскрипционный фактор, влияющий на экспрессию резусных белков [10]. Для транспортировки КИ-белков к эритроцитарной мембране необходим белок RhAG, хотя сам он может интегрироваться в мембрану эритроцита без резусных протеинов. Однако для оптимальной транспортировки и сборки ре-зусного комплекса необходимы сами резусные белки, играющие роль стабилизатора всего комплекса за счет взаимодействия с некоторыми компонентами скелета мембраны эритроцитов. Для нормального взаимодействия белков RhAG и КИ необходимы как С-, так и К-концевые последовательности белков Rh [8, 11]. Нарушение связей между ними приводит к отсутствию синтеза самих резусных протеинов и формированию резус-дефицитных фенотипов. Примером может служить так называемый фенотип Rhnull, при котором на эритроцитах отсутствуют все антигены системы Резус. Существуют 2 генетические причины появления данного фенотипа, касающиеся изменений исключительно в генах ЯН и ЯНАЭ.
Во-первых, аморфный тип RhшШ является следствием делеции гена RHD и появления гомозиготности по молчащим аллелям в локусе RH из-за мутаций в гене ЯНСЕ (делеция 2 нуклеотидов в кодонах 322 и 323 7-го экзона и замена нуклеотидов ТСА на С), приводящих к разрыву рамки считывания генетического материала. Синтезированный на основе такого транскрипта потенциальный белок состоял из 398 вместо 417 аминокислот и имел 10 вместо 12 трансмембранных цепей [8]. Другой причиной появления аморфного типа RhшШ может быть мутация в интроне
4 — замена T на G на границе с 4-м экзоном, которая активирует 3 скрытых сплайсинговых сайта. Из них 2 генерируют транскрипты, присоединямые к нукле-отидам 16 и 11 интрона 4, после чего обнаруживаются стоп-кодоны в 7-м и 5-м экзонах соответственно. Активация 3-го скрытого сплайсингового сайта инициирует появление транскрипта, который способствует делеции последнего, 6-го нуклеотида в 4-м экзоне и формированию стоп-кодона [12]. C.H. Huang и со-авт. также описали мутации, приводящие к делеции 4-го и 5-го экзонов в гене RHCE [12]. Феномен Rhnull ассоциирован с отсутствием или снижением экспрессии иных гликопротеинов (RhAG, CD47, LW, глико-форин B), входящих в гетерополимерный резусный комплекс [8].
Во-вторых, регуляторный тип фенотипа Rhnull встречается наиболее часто и является следствием го-мозиготности по супрессорному мутантному аллелю гена RHAG, подавляющему синтез антигенов Rh. Все мутации в гене RHAG, приводящие к сдвигу рамки считывания (сплайсинговые [13] или несмысловые мутации [14]), приводят к незавершенной или поздней конечной трансляции белковой молекулы. Такой же эффект имеют и несмысловые мутации, приводящие к замене единичных аминокислот в протеине RhAG [15, 16]. Иными словами, любые мутации в гене RHAG приводят к синтезу неполноценного протеина, неспособного формировать функционирующий комплекс с белковой молекулой системы Резус. Лица с фенотипом Rhnull регуляторного типа передают своему потомству нормально функционирующие гены системы резус, поскольку сами гены RHD и RHCE не повреждены. Описан случай полной делеции гена RHAG, которая привела к формированию Rh^-фенотипа [17].
К регуляторному Rh^-фенотипу относят фенотип Rhmod. Первоначально предполагали, что экспрессия антигена D сильно угнетена вследствие гомозиготно-сти по супрессорному гену XQ расположенному на ау-тосомной хромосоме, не связанной с хромосомой
1 [18]. Позже было установлено, что различные нуклео-тидные замены в гене RHAG ответственны за повреждение белка RhAG. Описан вариант фенотипа Rhmod, при котором в белковой молекуле имеется единственная замена аминокислоты серина на аспаргин в позиции 79 и отмечается снижение количества молекул на эритроците [6]. Сами гены RHD и RHCE не повреждены, но на эритроцитарной мембране присутствует малое количество протеинов Rh, выявляемых только в методах адсорбции-элюции, не применяемых в рутинной практике (ложный D-отрицательный фенотип).
Гены RHD фланкированы 2 фрагментами ДНК, названными резусными боксами (Rhesus boxes). Высокая степень гомологии ДНК резусных боксов способствует неравновесному кроссинговеру между ними, выпадению целого гена RHD и появлению
2 гаплотипов cde [2, 19, 20]. Описанный D-отри-
cv со
es
es u
см со
cv со
ев
es u
см со
цательный фенотип встречается в основном у представителей белой расы и передается по наследству. Его имеют около 17 % россиян [21], а у представителей негроидной расы делеция целого гена RHD встречается в 43 % случаев [22]. Описан эпизод полного выпадения гена RHD в процессе химиотерапии хронического миелолейкоза (ХМЛ), т. е. приобретенный D-отрицательный фенотип [23].
Этот фенотип может формироваться при возникновении функционально неактивных аллелей гена RHD вследствие несмысловых мутаций (например, RHD (Q41X), RHD (Y330X) [24]), выпадения каких-либо его нуклеотидов (например, RHD (488 del 4), он характеризуется выпадением 4 нуклеотидов в 4-м эк-зоне [25]) или целых экзонов, приводящих к неспособности измененных генов кодировать синтез белка Rh. Делецию экзонов гена RHD чаще встречали у лиц с фенотипами D—Ce и D—cE [26], D—CCee [27], D— CCEE [28].
D-отрицательный фенотип может формироваться вследствие замен единичных нуклеотидов в гене RHD, которые способствуют появлению стоп-кодона. Примером может служить появление гена RHCE*ceHAR, когда в нормальном гене RHD происходит единичная замена C на T в позиции 121 [24], или замена 5-го эк-зона гена RHce эквивалентным экзоном гена RHD [29, 30]. Доказано, что антиген RJ" является иммуноген-ным для резус-отрицательных пациентов [30]. Такой генотип иногда обозначают как RHD+D- аллели, или D при обозначении берут в скобки, например (D) Ce/ Ce.
Для представителей негроидной расы характерно появление генотипа RHD+ с D-отрицательными аллелями (D-отрицательный фенотип) вследствие отсутствия активности гена RHD, обусловленного в основном 2 молекулярными механизмами:
— появление псевдогена RHD (RHDy) (43—66 %), возникающего вследствие вставки 37 пар оснований на границе интрона 3 и 4-го экзона, приводящей к сдвигу рамки считывания, появлению стоп-кодона в экзоне 6 [22]. Псевдоген RHDy у лиц белой расы встречается с частотой 1:14 748 [31];
— возникновение гибридных генов RHD-CE-D (15 %) вследствие генной конверсии между экзонами генов RHD и RHCE. Такие гибридные гены не способны кодировать синтез антигена D на поверхности мембраны эритроцитов. Они часто ассоциированы с гаплотипом CdeS [2]. У людей европеоидной расы чаще встречаются гибридные гены RHD-CE (2-9)-D [32] и RHD-CE (4-7) - D [33].
Причиной ложного D-отрицательного фенотипа могут быть варианты антигена D, не распознаваемые серологическими методами, применяемыми в рутинной практике, например типы weak D или DEL. Появление слабых вариантов антигена D обусловлено аминокислотными заменами в трансмембранной или внутриклеточной частях белковой молекулы, воз-
никающими вследствие нуклеотидных замен в гене RHD [34]. В настоящее время выявлен 81 тип антигена weak D [35].
H. Moussa и соавт. [36] описали случаи расхождения между результатами серологических тестов фено-типирования и молекулярных методов исследования, когда не были выявлены такие варианты слабого антигена D, как weak D типы 11, 29, 4.0 и парциальный D тип DBT-1. P. Gowland и соавт. [37], суммируя сведения из 3 банков крови Швейцарии, показали, что только молекулярные методы позволили идентифицировать RHD weak типы 11, 31, 38, аллели RHD*delEx10.5.4 kb (weak D), RHD*DVL-2 (weak D), RHD*IVS3+5G>A (weak D) и DEL, не выявленные при рутинном серологическом скрининге.
Вариантом антигена D, не распознаваемым моно-клональными анти^-реактивами, но идентифицируемым методами адсорбции-элюции [37], является фенотип DEL (Del), часто встречающийся у представителей монголоидной расы [38—40]. Молекулярная основа данного варианта гена RHD — делеция 1013 пар оснований между интронами 8 и 9, выпадение почти всего экзона 9 и присутствие аллеля 1227А [41, 42]. Эритроциты с антигеном DEL обычно идентифицируют как RhD-отрицательные при использовании серологических методов. Этот антиген иногда нельзя выявить даже методами адсорбции и элюции [43], хотя азиатский его тип имеет все эпитопы RhD-белка [44]. Антиген RhDEL имеет клиническое значение, так как вызывает аллоиммунизацию у RhD-отрицательных реципиентов [45, 46], и доноры с таким антигеном должны быть отнесены к резус-положительным [28].
Иммуногематологи все больше сходятся во мнении, что для предупреждения анти^-аллоиммунизации резус-отрицательных реципиентов необходимо выполнять генотипирование по локусу RHD D-отрицательных доноров. Швейцарский иммуногематолог P. Gowland и со-авт. показали, что из 26 243 D-отрицательных доноров 65 (0,25 %) имели аллели гена RHD, и 31 из них были отнесены к D-положительным после проведения исследования на молекулярном уровне [37], 28 из которых имели фенотип RhCcee. Иными словами, проведение генотипирования генов RHD особенно актуально при определении у доноров фенотипов с изолированными антигенами С и/или Е (без антигена D) ввиду редкой частоты их в популяции.
Цель нашей работы — изучение молекулярных основ D-отрицательного фенотипа у россиян.
Материалы и методы
Мы выполняли фенотипирование эритроцитов по системе Резус в реакции агглютинации на плоскости Цоликлонами IgM-класса со специфичностями анти-D, анти-С, анти-Cw, анти-с, анти-Е, анти-е производства ООО «Гематолог» (Москва) и в гелевых картах с IgM антителами фирмы «BioRad», США. При от-
Фенотипы и генотипы D-отрицательных обследованных лиц
№ Обследуемое лицо Генотип Фенотип
RHD RHCE
1 З. Dv cc*ee ccdee
2 Б. weak D type 2 cc*Ee ccdEe
3 А. weak D type 2 cc*Ee ccdEe
4 Ч. weak D type 15 СС*ее ССdее
5 М. weak D type 20 Cc*ee Ccdee
6 Л. weak D type 20 cc*Ee ccdEe
7 П. D- Cc*ee Ccdee
8 И. D- Cc*ee Ccdee
9 К. D- Cc*ee Ccdee
■
CV со
CS
CS U
рицательном результате с моноклональным антителом анти-D проводили: реакцию солевой агглютинации в 96-луночных планшетах для иммунологических реакций с полными моноклональными антителами ан-ти-D (ЭритротестТМ-Цоликлон анти-D Супер производства ООО «Гематолог» (Москва)) 2 серий, непрямой антиглобулиновый тест с неполными моно-клональными антителами анти-D 2 серий (Эритроте-стТМ-Цоликлон анти-D производства ООО «Гематолог» (Москва)) в пробирках с последующей детекцией агглютинации на плоскости и в геле, содержащем ан-тиглобулиновую сыворотку («Bio-Rad», США). Для выявления фиксирования неполных анти^-ан-тител на исследуемых и контрольных эритроцитах (D-положительных и D-отрицательных) после проведенной инкубации применяли в реакции на плоскости антиглобулиновую сыворотку 3 серий производства ООО «Гематолог» (Москва).
Геномную ДНК выделяли с помощью реактивов фирмы «BAG» (Германия) по методике производителя. Концентрацию и чистоту ДНК определяли на спектрофотометре. Одна оптическая единица (OD) соответствовала концентрации ДНК 50 нг/мкл. Чистота ДНК, определяемая по отношению показателей при 260 и 280 нм (OD 260/280), составляла 1,6-1,8, концентрация конечной ДНК — 50-100 нг/мкл.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) выполняли с праймерами для выявления генотипов системы резус (RH-Type) и вариантов антигена Dweak (Weak D-Type) производства фирмы «BAG» (Германия). Детекцию полученных результатов осуществляли посредством электрофореза продуктов амплификации в 2 % агарозном геле, содержащем бромистый этидий (1 мкг/мл) в TBE-буфере при напряженности электрического поля 10—15 В/см. В лунки геля вносили по 10 мкл амплификационной смеси. Результаты визуализировали в ультрафиолетовом свете (к = 310 нм) при помощи трансиллюмина-
тора в виде полос ярко-оранжевого цвета. Наличие полос амплификации внутреннего положительного контроля свидетельствовало о корректности проведенной ПЦР.
Результаты
В 2014 г. определение фенотипа эритроцитов системы Резус выполнено у 3205 человек, из них D-отрицательный фенотип выявлен у 481 (15 %). Генотипирование для идентификации причины D-отрицательного фенотипа проведено у 9 человек.
По реакции агглютинации на плоскости с анти-D-моноклональным антителом все исследуемые образцы эритроцитов были идентифицированы как D-отрицательные (таблица). Один образец эритроцитов имел фенотип ccdee (№ 1), 4 образца — Ccdee (№ 5, 7, 8, 9), 3 - ccdEe (№ 2, 3, 6) и 1 - CCdee (№ 4). В реакциях солевой агглютинации, в гелевых картах все исследуемые эритроциты не реагировали с анти-D-реактивом, за исключением эритроцитов пациентки А. (№ 3), которые агглютинировались в разведении анти^-антитела 1:32 (положительный контроль в среднем 1:4000). В непрямой пробе Кумбса с анти-D-моноклональными антителами IgG эритроциты № 1, 5-9 не агглютинировались антиглобулиновой сывороткой, но она агглютинировала эритроциты пациенток Б. (№ 2) и А. (№ 3) после инкубации с неполными анти^-антителами. Агглютинация была мелкая и формировалась на 2-й и 3-й минуте соответственно, в то время как контрольные D-поло-жительные эритроциты склеивались в течение 10 с. Эритроциты Ч. (№ 4) после проведения непрямой пробы Кумбса показали положительный результат на 4+ только при использовании гелевых карт с ан-тиглобулиновой сывороткой.
Генотипирование позволило выявить у 7 обследованных лиц присутствие гена RHD: у № 1 — RHDy, у № 2, 3 - weak D type 2, у № 4 - RHD weak type 15
сч со
сч со
es
es u
см со
и у № 5, 6 — RHD weak type 20. Пациенты № 7—9 гена RHD не имели. Генотип локуса RHCE у всех обследованных лиц соответствовал определенному фенотипу.
Заключение
Представительство антигенных детерминант слабых вариантов D на эритроцитах колеблется довольно значительно. При очень низкой их экспрессии они не выявляются серологическими методами. Нам удалось выявить 1 случай истинного (RHDy) и 5 случаев ложного D-отрицательного фенотипа (RHD weak type 2 — 2 случая, RHD weak type 15 — 1 случай и RHD weak type 20 - 2 случая). Молекулярная основа выявленных вариантов слабого антигена D: для RHD weak type 2 характерны нуклеотидные замены 1154G>C [34]; для RHD weak type 15—845G>A [34]; для RHD weak type 20 -1250T>C [47]. У этих лиц фенотип антигенов системы резус был определен как ccdee, Ccdee, CCdee и ccdEe.
Принято считать, что варианты антигена RHD weak type 2 и RHD weak type 20 чаще ассоциированы с фенотипом ccdEe [48]. Нам удалось показать, что эритроциты с RHD weak type 20 могут иметь фенотип Ccdee. В 5 случаях мы подтвердили ассоциацию вариантов слабого антигена D с присутствием антигенов С или Е.
На наш взгляд, важно применять молекулярные методы исследования для установления истинной резус-принадлежности у D-отрицательных лиц, особенно доноров эритроцитов с фенотипами, содержащими
антигены С и/или Е. Особенно это важно для доноров крови в целях предупреждения аллоиммунизации резус-отрицательных больных, поскольку иммуноген-ность вариантов антигена D изучена недостаточно полно. Для больных эта же проблема актуальна в свете возможности переливания эритроцитсодержащих сред от резус-положительных доноров с целью более бережного использования донорских резус-отрицательных эритроцитов. Моноклональные анти^-антитела должны распознавать наиболее часто встречающиеся варианты антигена D, так же как и антиглобулиновая сыворотка должна выявлять адсорбированные на эритроцитах антитела при постановке непрямой пробы Кумбса. Непрямой антиглобулиновый тест, применяемый для идентификации слабых вариантов антигена D, должен быть дополнен молекулярными методами исследования. Особенно актуально данное предложение для специалистов станций переливания крови Российской Федерации, которые отходят от классических иммуногематологических методов, заменяя их гелевы-ми технологиями. Как показали наши исследования, в гелевых картах не всегда можно определить слабые варианты антигена D. Некоторые антигены weak D мы выявили только с помощью классической непрямой пробы Кумбса с идентификацией фиксации неполных анти-D антител в гелевых картах с антиглобулином, в то время как агглютинация эритроцитов, нагруженных неполными анти^-антителами, при использовании обычной антиглобулиновой сыворотки на плоскости отсутствовала.
ЛИТЕРАТУРА
1. Cherif-Zahar B., Mattei M.G., Le van Kim C. et al. Localization of the human Rh blood group gene structure to chromosome region 1p34.3-1p36.1 by in situ hybridization. Hum Genet 1991;86:398-400.
2. Wagner F.F., Flegel W.A. RHD gene deletion occurred in the Rhesus box. Blood 2000;95:3662-8.
3. Agre P., Saboori A.M., Asimos A. et al. Purification and partial characterization
of the M, 30,000 integral membrane protein associated with the erythrocyte Rh(D) antigen. J Biol Chem 1987;262:17497-503.
4. Hermand P., Mouro I., Huet M. et al. Immunochemical characterization
of Rhesus proteins with antibodies raised against synthetic peptides. Blood 1993;82:669-76.
5. Gahmberg C.G. Molecular characterization of the human red cell Rh0(D) antigen. EMBO J 1983;2:223-7.
6. Cherif-Zahar B., Raynal V., Mattei M.G. et al Candidate gene acting as a suppressor of the RH locus in most cases of Rh-deficiency. Nat Genet 1996;12:168-73.
7. Chou S.T., Westhoff C.M. The Rh and RhAG blood group systems. Immunohematology 2010;26(4):178-86.
8. Cherif-Zahar B., Matassi G., Raynal V. et al. Molecular defects of the RHCE gene in Rh-deficient individuals of the amorph type. Blood 1998;92:639-46.
9. Avent N.D. New insight into the Rh system: structure and function. ISBT Science Series 2007;2:35-43.
10. Mouro-Chanteloup I., D'Ambrosio A.M., Gane P. et al. Cell-surface expression of RhD group polypeptide is posttranscriptionally regulated by the RhAG glycoprotein. Blood 2002;100:1038-47.
11. Eyers S.A., Ridgwell K., Mawby W.J. et al. Topology and organization of human Rh (rhesus) blood group-related polypeptides. J Biol Chem 1994;269: 6417-23.
12. Huang C.H., Chen Y., Reid M.E. et al. Rhnull disease: the amorph type results from a novel double mutation in RhCe gene on D-negative background. Blood 1988;92:664-71.
13. Cherif-Zahar B., Matassi G., Raynal V. et al. Rh-deficiency of the regulator type caused by splicing mutation in the human RH50 gene. Blood 1998;92:2535-40.
14. Hyland C.A., Cherif-Zahar B., Cowley N. et al. A novel single missence mutation identified along the RH50 gene
in a composite heterozygous Rhnull blood donor of the regulatory type. Blood 1998;91:1458-63.
15. Carton J.P. Rh blood group system and molecular basis of Rh-deficiency. Baillieres Best Pract Res Clin Haematol 1999;12:655-89.
16. Huang C.H., Liu P.Z., Cheng J.G. Molecular genetics of the Rh blood group system. Semin Hematol 2000;37:150-65.
17. Gomez-Torreiro E., Eiras-Martinez A., Rodriquez-Calvo M.I. et al. Rh-null phenotype caused by a complete RHAG deletion. Transfusion 2015;55:197-8.
18. Cherif-Zahar B., Raynal V., Kim L.V. et al. Structure and expression of the RH locus in the Rh-deficiency syndrome. Blood 1993;82(2):656-62.
19. Arce M.A., Thompson E.S., Wagner S.
et al. Molecular cloning of RhD cDNA derived from a gene present in RhD-positive, but not RhD-negative individuals. Blood 1993;82: 651—5.
20. Carton J.P. Defining the Rh blood group antigen. Blood Rev 1999;8:199-212 (abstract).
21. Дашкова Н.Г. Система обеспечения иммунологической безопасности гемокомпо-нентной терапии. Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 2006. [Dashkova N.G. System providing immunological safety
of blood transfusion. Dissert. D. Sci. M., 2006 (In Russ)].
22. Singleton B.K., Green C.A., Avent N.D. The presence of an RHD pseudogene containing 37 base pair duplication
and a nonsense mutation in Africans with the RhD negative blood group phenotype. Blood 2000;95:12-8.
23. Murdock A., Assip D., Hur-Rove K. et al. RHD deletion in a patient with chronic myeloid leukemia. Immunohematology 2008;24(4):160-4.
24. Avent N.D., Martin P.G., ArmstrongFisher S.S. et al. Evidence of genetic diversity underlying RhD, weak D (Du), and partial D phenotypes as determined by multiplex polymerase chain reaction analysis
of the RHD gene. Blood 1997;89: 2568-77.
25. Andrews K.T., Wolter L.C., Saul A. et al. The RhD trait in a white patient with
the RhCCee phenotype attributed to a four-nucleotide deletion in the RHD gene. Blood 1998;92:1839-40.
26. Okuda H., Kawano M., Iwamoto S. et al. The RHD gene is highly detectable in RhD-negative Japanese donors. J Clin Invest 1997;100:373-9.
27. Hyland C.A., Wolter L.C., Saul A. Three unrelated RhD gene polymophisms identified
among blood donors with Rhesus CCee (r'r') phenotypes. Blood 1994;84:321.
28. Londero D., Florino M., Miotti et al. Molecular RH blood group typing
of serologically D-/CE+ donors: the use of a polymerase chain reaction-sequence-specific primer test kit with pooled samples. Immunohematology 2011;27(1):25-8.
29. Beckers E.A.M., Faas B.H.W.,
von dem Borne A.E.G.K. et al. The ROHar Rh:33 phenotype results from substitution of exon 5 of the RHCE gene by the corresponding exon of the RHD gene. Br J Hematol 1996;92:751-7.
30. Beckers E.A.M., Porcelijn L., Ligthart P. et al. The R0Har antigenic complex
is associated with a limited number of D epitopes and alloanti-D production: a study of three unrelated persons and their families. Transfusion 1996;36:104-8.
31. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. et al. RHD positive haplotypes in D-negative Europeans. BMC Genet 2001;10: 471-86.
32. Huang C.H. Alteration of RH gene structure and expression in human dCCee and DCW- red blood cells: phenotypic homozygosity versus genotypic heterozygosity. Blood 1996;8:2326.
33. Faas B.H.W., Beckers E.A.M., Simsek S. et al. Involvement of Ser103 of the Rh polypeptides in G epitope formation. Transfusion 1996;36:506.
34. Wagner F.F., Gassner C., Muller T.H. et al. Molecular basis of weak D phenotypes. Blood 1999;93(1):385-93.
35. http://uni-ulm.de/~fwagner/RH/RB2/P_ RHDweakDtype.htm.
36. Moussa H., Tsochandaridis M., Chakroun T. et al. Molecular background of D-negative phenotype in the Tunisian population. Transfus Med 2012;22:192-8.
37. Gowland P., Gassner C., Hustinx H. et al. Molecular RHD screening of RhD negative donors can replace standart serological testing for RhD negative donors. Transfus Apher Sci 2014;50:163-8.
38. Okubo Y., Yamaduchi H., Tomita T. et al. A D variant, Del? Transfusion 1984;24:542.
39. Fukumori Y., Hori Y., Ohnoki S. et al. Further analysis of Del (D-elute) using polymerase chain reaction (PCR) with RHD gene-specific primers. Transfus Med 1997;7(3):227-31.
40. Daniels G. Variants of RhD-current testing and clinical consequences. Br J Haematol 2013;161:461-70.
41. Chang J.G., Wang J.C., Yang T.Y. et al. Human Rh-del is caused by a deletion
of 1,013 bp between introns 8 and 9 including exon 9 of RHD gene. Blood 1998;92:2602-4.
42. Chen J.C., Lin T.M., Chen Y.L. et al. RHD 1227A is an important genetic marker
for RhD(el) individuals. Am J Clin Pathol 2004;122(2):193-8.
43. Shao C.P., Maas J.H., Su Y.Q. et al. Molecular background of Rh D-positive, D-negative, D(el) and weak D phenotypes in Chinese. Vox Sang 2002;83:156-61.
44. Gu J., Wang D.X., Shao C.P. et al. Molecular basis of DEL phenotype
in the Chinese population. BMC Med Genet 2014;15:54.
45. Wagner T., Kormoczi G.F., Buchta C.
et al. Anti-D immunization by DEL red blood cells. Transfusion 2005;45:520-6.
46. Yasuda H., Ohto H., Ishikawa Y. Secondary anti-D immunization by DEL
red blood cells. Transfusion 2005;45:1581-4.
47. Witter B. http://vts.uni-ulm.de/doc. asp?id=765.
48. Van Kim C.L., Colin Y., Carton J.P. Rh proteins: Key structural and functional components of the red cell membrane. Blood Rev 2006;20:93-110.
cv со
cs
es u
сч со
