CC BY
39
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
риотипом (р=0,39). Мутации IDH1/2 определены у 17,6% пациентов. В этой группе определялась равно высокая частота мутаций NPM1 и DNMT3 (p=0,04) и низкая частота FLT3-ITD/D835 (р=0,05) в сравнении с wtIDH1/2. Мутация IDH1(R132H) идентифицирована в 2,5% случаев и сочеталась с НК и NPM1A. Частота IDH2 мутации составила 14,7%: R172 - 2,9%(в сочетании с НК и NPM1A), R140 - 11,8% (в сочетании с DNMT3AR882 у 3/4 пациентов, в 1 наблюдении выявлено 4 аберрации IDH2+DNMT3AR882+ASXL1+NPM1A). Только в 1 случае R140 выявлялась изолированно. Мутация DNMT3AR882 определена у 18,9% пациентов и кроме сочетания с IDH2R140(3/7) у 2/7 выявлена мутация FLT3-ITD. В 1 случае выявлено сочетание 4-х абер-раций: DNMT3AR882+RUNX1-RUNX1T1+ASXL1+CKit. Частота мутаций RUNX1-RUNX1T1, ASXL1, CKit, IDH1/2, NPM1, FLT3-ITD/D835 и НК достоверно не отличалась в группах с mut и wt DNMT3A. Мутация ASXL1 выявлена у 14,7% (pQ748, pQ768, pG652S) и чаще сочеталась (3/5) с RUNX1-RUNX1T1 и FLT3-ITD (р=0,019). Выявление мутаций DNMT3AR882, IDH1/2 и ASXL1 не влияло на достижение ПР как в случае каждой отдельной мутаций, так и в общей группе (р=0,7, р=0,3, р=0,4, р=0,08 соотв.). Достоверное влияние отсутствовало и при анализе БРВ (р=0,9, р=0,07, р=0,26, р=0,9 соотв.)
Заключение. Мутации генов эпигенетической регуляции с высокой частотой сочетаются с другими генетическими аберрациями. Выявлено отсутствие достоверного влияния мутаций DNMT3AR882, ШН1/2 и ASXL1 на частоту достижения ПР и БРВ. Влияние на исход заболевания, вероятно, связано с вариантами сочетания генетических аномалий и глубиной ответа. Эти направления дальнейшего анализа могут быть наиболее перспективными с учетом расширяющихся возможностей таргетной терапии.
Таблица 1
Мутации Пол Возраст Кариотип NPM1 FLT3-ITD RUNX1 -RU NX1T1 CKIT ASXL1 IDH2
DNMT3A (R882) м 46 46, XY, t(8;21 ) (q22;q22) wt wt 802,3% ITD11 экзона p.Q748 wt
DNMT3A (R882) м 24 46,XY (19)/47, XY, +Y, der(14) wt mut wt wt wt wt
DNMT3A (R882) м 46 46,XY[20] 375,2% mut wt wt wt wt
DNMT3A (R882) ж 62 46 хх, del(11 )(q23)[3] /46,xx[15] wt wt wt wt wt wt
DNMT3A (R882) м 63 46 ху [20], FISH: 5q-,+7,+17, MLL/11Q23, MECOM 3q26 wt wt wt wt wt R140
DNMT3A (R882) ж 57 46,XX[20] wt wt wt wt wt R140
DNMT3A (R882) ж 55 46XX [20] 612% wt wt wt p.G652S R140
IDH1 (R132H) ж 39 46,XX[20] 3183% wt wt wt wt wt
IDH2 (R140) м 60 46, XY[20] wt wt wt wt wt wt
IDH2 (R172) м 32 46,XY[20] 524,8% wt wt wt wt R172
ASXL1 p.G652S ж 30 46XX [20] 2037% mut wt wt wt wt
ASXL1 p.G652S м 29 46 ху [20] t(8;21 )(q22;q22) wt mut 519,1% wt wt wt
ASXL1 p.Q768 ж 40 46, XX, FISH t(8;21)(q22;q22) wt mut 652,4% wt wt wt
Головкина Л. Л., Каландаров Р. С., Стремоухова А. Г., Пушкина Т. Д., Хасигова Б. Б., Пшеничникова О. С., Сурин В. Л., Гемджян Э. Г.
СЛОЖНООПРЕДЕЛЯЕМЫЕ АНТИГЕНЫ СИСТЕМЫ РЕЗУС
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Для профилактики аллоиммунизации и посттрансфу-зионных осложнений при гемотрансфузиях большое значение имеет выявление слабоэкспрессируемых эритроцитарных антигенов системы Резус. Актуальной задачей иммуногематологии является изучение серологических свойств этих вариантных антигенов для оптимизации подбора пар донор-реципиент.
Цель работы. Изучить варианты, частоту и серологические свойства трудноопределяемых антигенов системы Резус, встречающихся среди населения России.
Материалы и методы. Материалом были эритроциты 9974 человек и ДНК 149 человек. Применяли серологические и молекулярные методы: агглютинацию на плоскости Цоликлоном анти^ Супер (фирма «Гематолог», Россия), солевую агглютинацию с этим
же Цоликлоном в 96-луночных планшетах, прямую агглютинацию в гелевых картах (ID Diaclon, БиоРад, Швейцария), непрямой анти-глобулиновый тест классический в про-бирках с неполными анти-D Цоликлонами и в гелевых картах (LISS/Coombs), полимеразную цепную реакцию с аллель-специфическими праймерами фирмы BAG (Германия), прямое секвенирование по Сэнгеру.
Результаты и обсуждение. Ослабление экспрессии антигена RhD выявили у 2,2% обследованных при скрининге с Цоликлонами анти-D IgM класса. Генетически обнаружены 9 типов гена RHD*Dweak (D weak type 1, D weak type2, D weak type3, D weak type 4.2 (DAR), D weak type 6, D weak type 15, D weak type 67, D G255R, D JVS5-38deL4) и два парциальных гена (RHD*DNB и RHD*DVII), определена их частота в российской популяции (табл. 1). Серологически выявили разную
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
агглютинабельность эритроцитов даже с одним типом слабого антигена RhD (табл. 2). Самый эффективный серологический метод обнаружения вариантных антигенов — непрямой антиглобулино-вый тест в гелевой методике. Обнаружен один образец эритроцитов без антигенов системы Резус, но с генами RHD*D и RHCE*Cce ^ЬпиП регуляторного типа). Секвенированием (А. Doescher, Германия) найдена новая мутация в гене резус-ассоциированного гликопроте-ида (RHAG) (табл. 1). Заподозрить наличие слабых и парциальных антигенов можно при сочетании слабой (смешанной) агглютинации с Цоликлонами и сильной реакции в гелевом методе. Применение только гелевой методики может привести к пропуску парциальных антигенов и неправильному выбору донорских эритроцитов. Частота антигена RhCw - 5,54%, антигена RhСu — 0,0224% (табл. 3). Присутствие вариантных антигенов RhC было заподозрено по расхождению результатов: с Цоликлонами эритроциты не реагировали, в гелевом методе реакция 4+. Ген RHCE*Ce.09, кодирующий антиген Сх, был найден только прямым секвенированием. Частота антигена RhCx —
Таблица 1. Частота вариантов гена RHD в российской популяции
n=139)
Тип RHD*D weak Полиморфизм Фенотип Частота встречаемости
% abs
D weak type 1 c.809T>G p.Val270Gly CcDwee 25,9 (95 % CI: 18,31-35,26) 36
D weak type 2 1154G>C p.Gly385Ala ccDwEe 12,23 (95 % CI: 7,17-20,08) 17
D weak type 3 c.8 C>G p.Ser3Cys CcDwee ccDwee CCDwee 53,96 (95 % CI: 44,21-63,39) 75
D weak type 4.2 (DAR) 602C>G (p.T201R) 667T>G (p.F223V) 1025T>C (p.I342T) ccDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type 6 c.29G>A p.Arg10Gln CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type 15 c.845G>A p.Gly282Asp CCDwee Ccdee ccdEe 2,16 (95 % CI: 0,62-7,23) 3
D weak type 67 c.722C>T p.Thr241Ile ccDwEe 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type G255R c.763G>A p.Gly255Arg CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
D weak type JVS5-38del4 c.802-38 del tctc p. нет данных CcDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHD* DNB partial c. 1063G>A p.Gln355Ser CCDwee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHD* DVII partial c.329T>C p.Leu110Pro CCDwEe 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
RHnull RHAG c. 571 C>T (exon 4) stop codon p. R191 c.724G>A (exon 5); RHD*D+RHCE*Ccee 0,72 (95 % CI: 0,10-4,98) 1
0,0448%. В обоих найденных случаях RhСх сочетался с антигеном Rhс (фенотипы СxcDEe и CxcDee).
Заключение. Самый эффективный серологический метод определения слабых антигенов системы Резус — гелевый, но он выявляет не все слабые варианты. Генетическое типирование позволяет установить точную причину снижения экспрессии антигенов и различить слабые и парциальные варианты (при относительно сильных типах слабого RhD можно переливать D-положительные эритроциты, при парциальных RhD — только D-отрицательные эритроциты). Установить тип антигена RhС тоже можно только молекулярными методами.
Таблица 2. Серологическая характеристика эритроцитов со слабыми и парциальными типами антигена
№ Тип weak RhD Реакция прямой агглютинации c aнти-D IgM Реакция непрямой агглютинации c aнти-D IgG
метод 1 (время появления агглютинации) метод 2 (разведение антител) метод 3 (IgM+IgG) (сила агглютинации) метод 4 (время появления агглютинации) метод 5 (сила агглютинации)
1 D weak type 1 2'-3' 1:2-1:32 1+-3+ 1'-3' 1+-3+
2 D weak type 2 отр 1:8-1:64 1+-2+ 2'-3' 4+
3 D weak type 3 1'-3' 1:8-1:1024 2+-4+ 20''-2' 3+-4+
4 D weak type 4.2 (DAR) 3' 1:32 3+ 1, 4+
5 D weak type 6 3' 1:64 3+ 1 4+
6 D weak type 15 отр. отр. отр. 2 4+
7 D weak type 67 отр 1:2 1+ 2' 3+
8 D weak type G255R отр 1:2 отр. 2' 4+
9 D weak type JVS5-38del4 отр отр нд 4' 4+
10 D partial type DNB 2-3, 1:256 3+ 2 3+-4+
11 D partial type DVII Химера 70% 1:512 3+ 25" нд
Таблица 3. Варианты и частоты гена RHCE*C в российской популяции
n=4470 человек)
Фенотип n % (95% ДИ)
RHCE*Ce.09 CxcDEe 1 0,02 (0,001-0,04)
CxcDee 1 0,02 (0,001-0,04)
CwcDee 92 2,06 (0,50-7,11)
RHCE*Ce.08 CoDEe 29 0,66 (0,10-4,79)
C^e 126 2,82 (0,92-8,10)
RHCE*Ce CuCDee 1 0,02 (0,001-0,04)
Всего RhC 250 5,60 (2,50-12,00)
Горбенко А. С., Бахтина В. И., Мартынова Е. В., Столяр М. А., Комаровский Ю. Ю., Ольховский И. А. СОМАТИЧЕСКАЯ МУТАЦИЯ C.7541_7542DELCT В ГЕНЕ NOTCH1 АССОЦИИРОВАНА С ЭКСПРЕССИЕЙ МРНК ГЕНОВ HIF ПРИ ХЛЛ
Красноярский филиал ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; КГБУЗ «Красноярская краевая клиническая больница»; ФИЦ КНЦ СО РАН; КГБУЗ «Красноярская межрайонная клиническая больница №7»; ФГБОУ ВО «КрасГМУ» Минздрава России
Введение. Мутация c.7541_7542delCT в гене NOTCH1 — наиболее частая мутация при первичной постановке диагноза ХЛЛ, и частота ее выявления увеличивается с прогрессированием заболевания. Для пациентов с мутаций NOTCH1 характерен короткий период ремиссии при терапии анти-CD20 препаратами, менее благоприятный прогноз и негативный пролиферативный профиль опухолевых клеток. Недавно у пациентов с мутацией NOTCH1 была обнаружена повышенная экспрессия мРНК циклинов, регулирующих переход от G1 к S фазе клеточного цикла (ASH 2019: https://doi.org/10.1182/ blood-2019-127960). Известно также участие факторов транскрипции HIF в регуляции клеточного цикла и гипоксического ареста деления онкотрансформированных клетках.
Цель работы. Оценка влияния мутации c.7541_7542delCT в гене NOTCH1 на экспрессию мРНК НШ1а и HIF2a в лейкоцитах крови при ХЛЛ.
Материалы и методы. В исследование были включены 40 пациентов с первично выявленным В-ХЛЛ. Определение мутации
с.7541_7542delCT в гене NOTCH1, а также экспрессии мРНК НШ1а и НШ2а в лейкоцитах крови осуществляли методом ПЦР-РВ, разработанным в лаборатории Красноярского филиала НМИЦ гематологии. Статистическую оценку полученных результатов проводили с использованием пакета R.
Результаты и обсуждение. У 11 (27%) пациентов была выявлена мутация с.7541_7542delCT в гене NOTCH1. Нами впервые показано, что мутация NOTCH1 ассоциирована с более низким коэффициентом экспрессии мРНК НШ1а/НШ2а (Ме = 0,04 против 0,6; р<0,05) .
Заключение. Преобладание экспрессии НШ2а над экспрессией НШ1а в лейкоцитах пациентов с мутацией NOTCH1 при ХЛЛ, вероятно, определяется особенностями нарушенного мутацией сигнального пути Wnt и метаболического взаимодействия с белками, регулирующими клеточный цикл в условиях гипоксической экспозиции. Молекулярные механизмы такого взаимодействия и пролифератив-ного ответа онкотрансформированных лимфоцитов на гипоксию требует дальнейшего исследования.
