CC BY
12
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Единичный ВПЧ 16 генотипа обнаружен в 54 (34,2 %) случаях (таблица). Его ассоциации с другими вирусами выявлены у 68 (43 %) пациенток. Всего па-пилломавирус 16 генотипа найден у 122 (77,2 %) из 158 женщин.
Остальные генотипы вирусов рода а9 (31, 33, 35, 52, 58) обнаружены в 17 (10,8 %) случаях.
Папилломавирусы рода а7 (генотипы 18, 39, 45, 59) выявлены у 8 (5,1 %), вирусы рода а6 (генотипы 56, 66) - у 3 (1,9 %) пациенток.
Ассоциации ВПЧ а9 (без 16 генотипа) и а7 родов обнаружены в 4 (2,5 %) случаях, вирусов а9 (без 16 генотипа) и а6 родов - в 3 (1,9 %) наблюдениях, вирусов а7 и а6 родов - в 1 (0,6 %) случае.
Наиболее часто выявляемым при латентной форме ПВИ был 16 генотип ВПЧ или его ассоциации с вирусами других генотипов, которые обнаружены у 32 из 54 (59,3 %) женщин. При их морфологическом исследовании в трети случаев наблюдали отсутствие изменений эпителия шейки матки, в двух третях - критерии эндоцервикоза.
У больных лейкоплакией шейки матки в 2 случаях (66,7 %) обнаружены ВПЧ 16 генотипа или его ассоциация с ВПЧ 45 генотипа, в 1 (33,3 %) выявлен 56 генотип ВПЧ рода а6. При морфологическом исследовании в препаратах видны дискератоциты и безъядерные клетки поверхностного слоя многослойного плоского эпителия.
ВПЧ 16 генотипа или его ассоциации с другими вирусами рода а9, а также с папилломавирусами родов а5, а6, а7 обнаружены у 10 (62,5 %) больных дис-плазией плоского эпителия 1 степени (СШ1), при мор-
фологическом исследовании которых на фоне критериев LSIL наблюдали койлоцитоз и дискератоз плоского эпителия. ВПЧ 31, 33, 59 генотипов или их комбинации с 39 и 18 генотипами ВПЧ выявлены только у 6 (37,5 %) пациенток.
У больных умеренной формой дисплазии (CIN2) ВПЧ 16 генотипа или его ассоциации с другими вирусами рода a9, а также с папилломавирусами родов a6, a7 обнаружены у 17 (89,5 %) женщин. ВПЧ 31, 52 генотипов обнаружены лишь в 2 (10,5 %) случаях.
Из 40 больных тяжелой формой дисплазии (CIN3) у 37 (92,5 %) женщин обнаружен ВПЧ 16 генотипа или его комбинации с папилломавирусами a9-, a7-, a5-родов. ВПЧ 31, 33, 59 генотипов отмечены лишь в 3 (7,5 %) случаях.
При морфологическом исследовании больных дис-плазиями 2 и 3 степеней наблюдали критерии HSIL на фоне эпидермизирующего эндоцервикоза.
ВПЧ 16 генотипа или его ассоциации с другими вирусами рода a9, а также с папилломавирусами рода a7 обнаружены у 16 (94,1 %) больных интраэпители-альным раком (CIN3) и у 8 (88,9 %) больных плоскоклеточным раком шейки матки (SCC). ВПЧ 33 генотипа выявлен у 1 женщины с Ca in situ (5,9 %), ВПЧ 31 генотипа - у 1 женщины (11,1 %) с SCC.
ВЫВОДЫ
1. У инфицированных ВПЧ ВКР женщин в 77,2 % исследований выявили вирус 16 генотипа и его ассоциации с другими генотипами папилломавируса.
2. Частота встречаемости ВПЧ 16 генотипа возрастает с 59,3 % случаев у больных латентной формой ПВИ до 94,1 % у больных интраэпителиальным раком шейки матки.
© В. А. Ершов, А. С. Лисянская, О. А. Татаринова, 2011 г. УДК 618.146-002-06:616-006.52
В. А. Ершов, А. С. Лисянская, О. А. Татаринова
СК10 В ЦЕРВИКАЛЬНОМ ЭПИТЕЛИИ БОЛЬНЫХ ИНТЕГРИРОВАННОЙ ФОРМОЙ ПВИ, РАЗВИВШЕЙСЯ НА ФОНЕ ЭНДО-ЦЕРВИКОЗА
Городской клинический онкологический диспансер; Санкт-Петербург
Цитокератин 10 (СК10), по данным зарубежной литературы, считается одним из критериев процесса дифференцировки многослойного плоского эпителия
(МПЭ). У женщин с неповрежденным эпителиальным пластом СК10 более характерен для «ороговеваю-щих» клеток - клеток с избыточным накоплением ке-ратогиалина, формирующихся в результате белковой дистрофии в поверхностных слоях эктоцервикса.
Интегрирование вируса папилломы человека (ВПЧ) в клетки эпителия приводит к нарушению процесса их дифференцировки, проявляющегося формированием цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) с возможной трансформацией в рак шейки матки.
Целью исследования является определение характера распределения СК10 в клетках эпителия шейки матки у больных с интегрированной формой папилло-мавирусной инфекции (ПВИ), развившейся на фоне эндоцервикоза.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Проведен анализ результатов цитологического, им-муноцитохимического, гистологического и молекуляр-
m
'irw кF
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
Таблица 1
Количество инфицированных ВПЧ женщин
Морфологическое заключение
Количество случаев выявления ВПЧ
16 16 с 9 (без 16) 9 (без 16) и 5
9 7 7
2 2 2
7 2 1 1 1 1
3 2 1
12 4 3 4 1 1
Дисплазия 2 Дисплазия 3 Ca in situ Всего
но-генетического методов исследования эпителия шеи-ки матки 25 женщин 24-74 лет, находившихся на лечении по поводу цервикальных интраэпителиальных неоплазиИ Городском клиническом онкологическом диспансере Санкт-Петербурга с октября по декабрь 2010 г.
У 25 пациенток на фоне эндоцервикоза выявлена высокая степень интраэпителиального повреждения плоского эпителия (HSIL). Из них у 6 больных диагностирована умеренная форма дисплазии (CIN2), у 13 женщин - тяжелая форма дисплазии (CIN3), у 6 пациенток - интраэпителиальныИ рак (carcinoma in situ, CIN3).
Во всех случаях обнаружены генотипы ВПЧ (табл. 1).
Наибольшее количество больных Ca in situ - 3 (50 %) - выявлено в возрастноИ группе 30-39 лет, больных умеренной формоИ дисплазии - 3 (50 %) - в возрастноИ группе 20-29 лет, больных тяжелоИ формоИ дисплазии - 6 (46,15 %) - в возрастноИ группе 40-49 лет.
Всем пациенткам в материале соскобов цервикаль-ного канала методом полимеразноИ цепноИ реакции (ПЦР) определили наличие папилломавируса человека и проводили его генотипирование. Для постановки ПЦР использовали наборы реагентов «АмплиСенс»
Всего
6 13 6
25
(«ИнтерЛаб-Сервис», РФ) и ампли-фикатор РТС 100 (MJRes. Inc., USA).
Материал соскобов с влагалищной части шейки матки и из церви-кального канала помещали в транспортный буферный раствор, в течение 10 минут с помощью центрифуги «Rotofix 32A» при скорости 6000 об./мин распределяли на 3 предметных стекла, после чего сразу в течение 5 минут фиксировали в 95 %-м растворе этилового спирта.
Цитологические препараты окрашивали по методу Папаниколау.
Полученные результаты цитологического исследования оценивали в соответствии с классификацией «The Bethesda System for reporting cervical cytologic diagnoses».
Во всех случаях проводили иммуноцитохимичес-кие исследования с использованием системы детекции «Ultra Vision LP Detection System HRP Polymer & Dab Plus Chromogen» (TL-015-HD) и моноклональных антител к СК10 (DE-K10, MS-611-PO), производства фирмы «Thermo Scientific» для «Lab Vision Corporation» (USA).
Реакцию на антитела к СК10 оценивали в не менее чем 500 клетках препарата. Для обобщения результатов рассчитывали процентное отношение численности клеток с положительной реакцией на антитела к СК10 среди клеток соответствующих слоев МПЭ и метаплазированных резервных клеток, в том числе атипичных.
Гистологические препараты из материала, полученного в ходе электроэксцизии шейки матки, готовили по стандартной методике и окрашивали гематоксилином и эозином.
Таблица 2
Экспрессия С 10 у больных ПВИ
Клетки шейки матки Количество клеток с экспрессией С 10 у больных ПВИ ( %)
Патология ВПЧ 16 ассоциация ВПЧ 16 с ВПЧ 9 ВПЧ 9 и 5 ВПЧ ?7
ВПЧ 9 ВПЧ 7
Дисплазия 2 П Пр ПБ Б 75,93±0,86 57,62±0,99 18,75±0,78 35,48±0,96 63,48±0,96 29,56±0,91 9,07±0,57 1,33±0,23 67,94±0,93 72,09±0,9 7,69±0,53 0
Дисплазия 3 П 62,19±0,97 60,34±0,97 57,14±0,99 64,06±0,96 42,31±0,99 84,62±0,72
Пр 57,27±0,98 37,1±0,96 18,52±0,77 8,69±0,56 50,48±0,99 78,84±0,81
ПБ 11,92±0,65 15,63±0,72 31,03±0,92 17,24±0,76 0 40,22±0,98
Б 7,07±0,51 64,71±0,95 63,64±0,96 100
МР 21,69±0,82 59,38±0,98 55,56±0,99 12,27±0,66
Ca in situ П Пр ПБ Б МР 65,65±0,94 48,63±1 19,14±0,78 0 12,16±0,65 63,89±0,96 41,74±0,99 6,06±0.48 38,75±0,97 28,21±0,9 58,62±0,98 56,92±0,99 5,88±0,47 0
Примечание: П К клетки поверхностного слоя МПЭ; ПрК клетки промежуточного слоя МПЭ; ПБК парабазальные клетки МПЭ; БК клетки базального слоя МПЭ; МРК метаплазированные резервные клетки.
Заключения результатов гистологических исследований формулировали в соответствии с последними редакциями классификаций ВОЗ.
Достоверность различий между исследуемыми показателями оценивали на основании критериев Стью-дента с уровнем значимости p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Экспрессия СК10 обнаружена в безъядерных поверхностных клетках во всех исследованиях независимо от характера интраэпителиальных повреждений эктоцер-викса и генотипов ВПЧ. Остальные результаты иммуно-цитохимического исследования приведены в табл. 2.
У больных HSIL, ассоциированных с ВПЧ рода a9 (16, 33, 52 генотипы, сочетание 16 с 31 или 33 генотипами), независимо от степени CIN, выявлено нарастание численности клеток с экспрессией СК10 от минимальных значений среди базальных до максимальных среди поверхностных клеток МПЭ.
У пациенток с CIN3, ассоциированных с ВПЧ 59 генотипа (род a7), с сочетанием папилломавирусов 31
(род a9) и 51 (род a5) генотипов, 16 и (род a9) и 39,45 (род a7) генотипов, численность базальных клеток с экспрессией СК10 превышала численность клеток поверхностного слоя с положительной реакцией на антитела к СК10.
У женщин с ВПЧ 16 генотипа при нарастании степени тяжести CIN наблюдали снижение численности базальных клеток с экспрессией СК10.
У больных интраэпителиальным раком, ассоциированным с ВПЧ 16 или 33 генотипов, в базальных клетках выявили полное отсутствие цитокератина 10.
ВЫВОДЫ
1. У женщин с ВПЧ 16 генотипа при утяжелении цервикального интраэпителиального повреждения отмечено снижение численности базальных клеток с экспрессией СК10.
2. Отсутствие СК10 в базальных клетках больных интраэпителиальным раком, ассоциированным с ВПЧ рода a9, может свидетельствовать о нарушении процесса их дифференцировки и потенциальной способности к инфильтрации.
ВНИМАНИЮ ЧИТАТЕЛЕЙ!
Сообщаем Вам, что на журнал «Ученые записки» проводится подписка по каталогу «Роспечати». Подписной индекс для организаций и частных лиц - 29579.
Информацию о подписке на журнал «Ученые записки» Вы также можете получить в издательстве СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова.
Адрес: 193089, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8 Телефон: (812) 234-27-78, 953-73-17 Факс: (812) 234-01-25
