CC BY
51. Ахмедов, А.М. Сальмонеллезы молодняка / А.М. Ахмедов. 2-е изд., испр. и доп. М.: Колос, 1983. 256 с.
2. Матвиенко, Б.А. Сальмонеллезы животных - биологическая и ветеринарная проблема / Б.А. Матвиенко // Эпизоотол., эпидемиол., средства диагностики, терапии и специфич. профилактики инфекц. болезней, общих для человека и животных: матер. Всесоюз. конф. Львов, 1988. С. 293-294.
3. Anderson, M. The clinical syndromes caused by Sal-
тура
monella infections / M. Anderson, P. Blanchard // Vet. Med. 1989. Vol.4, №8. Р 816-819
4. Collins, E M. Infection - immunity in experimental Salmonellosis / E Collins, G.B. Mackaness // J. Exp. Med.- 1966.- №124.-Р. 601-619.
5. Osawa, N. Experimental salmonellosis. Postinfective immunity and its significance for conferring cellular immunity / N. Osawa / / J. Bacteriol. 1967. Vol.93. Р. 1534-1540.
6. Walton, J. R. Salmonellosis / J. R. Walton // Brit. Vet. J. 1983. Vol. 139, №3. Р. 185-191.
УДК 619:616.98:579.843.96.
А.А. Фроловцева, В.С. Русалеев, А.В. Потехин
СЕРОТИПИРОВАНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ
Введение
Актинобациллезная плевропневмония свиней - инфекционное контагиозное заболевание свиней, характеризующееся септикотоксемией, геморрагической и гнойно-некротизирующей пневмонией, а также серозно-фибринозным плевритом, перикардитом и артритами. Заболевание вызывают бактерии A. pleuropneumoniae семейства Pastemettaceae.
Штаммы A. pleuropneumoniae разделяют на 15 серовариантов по капсуль-ному антигену (1, 8). Известно, что се-роспецифические антигены бактерий А. р1еигорпеитошае локализованы в кап-сульных полисахаридах и О-полисахарид-ных компонентах (О-цепях) липополиса-харидов (8).
Для определения серовариантной принадлежности бактерий A. pleuropneumoniae используют ряд серологических реакций -реакция агглютинации, реакция иммуно-электрофореза, реакция непрямой гемаг-глютинации, реакция преципитации и им-муноферментный анализ с моноклональ-ными антителами [2, 3, 4, 5].
Изучение серовариантного разнообразия изолятов возбудителя актинобацил-лезной плевропневмонии свиней, циркулирующих на территории Российской Федерации, позволит более объективно оценивать эпизоотологию данного заболевания и отбирать наиболее перспективные штаммы для совершенствования и разработки препаратов для специфической профилактики.
Целью данной работы было изучение
серовариантной принадлежности изоля-тов Actinobacillus pleuropneumoniae, выделенных из патологического материала от свиней в различных регионах Российской Федерации.
Материалы и методы
В работе использовали изоляты A. pleuropneumoniae «Ш-1», «К-2» и «К-1», выделенные из патологического материала в лаборатории микробиологии ФГУ «ВНИИЗЖ», и референтные штаммы A. pleuropneumoniae №№ 27088 (1 серотип), 27089 (2 серотип), 27090 (3 серотип), 33377 (5 серотип), 33590 (6 серотип), полученные из Американской коллекции типовых культур.
Получение антигенов. Для получения антигенов использовали 12-15-часовые агаровые культуры изолятов и штаммов A. pleuropneumoniae.
Капсульный антиген для реакции преципитации (РП), реакции непрямой гемаг-глютинации (РНГА) получали по методикам, описанным R. Nielsen, P. J. O'Connor [6] и R. Nielsen et al. [7].
Соматический антиген для реакции агглютинации (РА) получали по методике A. Gunnarsson et al. [2].
Получение гипериммунных сывороток. Гипериммунные сыворотки крови кроликов готовили по методике R. Nielsen et al. [7].
Реакцию преципитации (РП) в агаровом геле, реакцию агглютинации (РА) и реакцию непрямой гемагглюти-нации (РНГА) для определения серова-риантной принадлежности изолятов A. pleuropneumoniae проводили по традици-
Таблица
Серотипирование изолятов А. р1еиторпеитоп1ае «Ш-1», «К-2» и «К-1»
№ п/п Антигены (серовариант) Тест Сыворотки
27088 (1) 27089 (2) 27090 (3) 33377 (5) 33590 (6) Ш-1 К-2 К-1
1 27088 (1) РП1 + - - - - - - -
РКП2 1:10 - - - - - - -
РА3 ++++ - - - - - - -
РНГА4 1:80 - - - - - - -
2 27089 (2) РП - + - - - + - -
РКП - 1:20 - - - 1:10 - -
РА - ++++ - - - ++++ - -
РНГА - 1:40 - - - 1:20 - -
3 27090 (3) РП - - + - - - - -
РКП - - 1:10 - - - - -
РА - - ++++ - - - ++ -
РНГА - - 1:40 - - - - -
4 33377 (5) РП - - - + - - - -
РКП - - - 1:10 - - - -
РА - - - ++++ - - - -
РНГА - - - 1:80 - - - -
5 33590 (6) РП - - - - + - + -
РКП - - - - 1:10 - 1:5 -
РА - - - - ++++ ++++
РНГА - - - - 1:80 - 1:20 -
6 Ш-1 РП - + - - - + - -
РКП - 1:10 - - - 1:5 - -
РА - ++++ - - - ++++ - -
РНГА - 1:20 - - - 1:40 - -
7 К-2 РП - - - - + - + -
РКП - - - - 1:4 - 1:5 -
РА - - ++ - ++++ - ++++ -
РНГА - - - - 1:20 - 1:20 -
8 К-1 РП - - - - - - - +
РКП - - - - - - - 1:5
РА - - - - - - - ++++
РНГА - - - - - - - 1:40
РП1 - реакция преципитации;
РКП2 - реакция количественной преципитации;
РА3 - реакция агглютинации;
РНГА4 - реакция непрямой гемагглютинации
онным методикам [2, 4] .
Результаты и обсуждение
На первом этапе исследования были получены антигены штаммов и изолятов
А. рЬеиторпеишотае и гипериммунные сыворотки крови кроликов. Полученные диагностикумы использовали для определения серовариантной принадлежности изолятов А. рЬеиторпеишотае «Ш-1», «К-2»
и «К-1» в РП в агаровом геле, РА и РНГА.
Результаты исследований показали, что в реакции преципитации с гомологичными антигенами и сыворотками было отмечено образование линий преципитации, в то время как с гетерологичными дигности-кумами реакция отсутствовала. При этом было установлено, что линия преципитации образовалась между лунками с сыво-
роткой на штамм № 27089 и антигеном на изолят «Ш-1», а также между лунками с сывороткой на штамм № 33590 и антигеном на изолят «К-2» (рис. 1 и 2).
Капсульный антиген изолята «К-1» не прореагировал ни с одной из испытуемых гипериммунных сывороток.
Реакцию количественной преципитации в агаровом геле ставили со следующими разведениями сывороток: 1:2, 1:4, 1:5, 1:10, 1:40 и 1:80. В результате исследований было установлено, что капсульный антиген изолята «Ш-1» реагировал с сывороткой на штамм 27089 в разведении 1:10, а капсуль-ный антиген изолята «К-2» - с сывороткой на штамм 33590 в разведении 1:4. Результаты изучения представлены в таблице.
По результатам РА нами также было установлено, что изолят «Ш-1» принадлежит ко второму, изолят «К-2» - к шестому серотипу. Необходимо отметить, что в данной реакции наблюдались перекрестные реакции между изолятом «К-2» и штаммом № 27090.
При тестировании референтных штаммов в РНГА с гомологичными диа-гностикумами были отмечены титры антител от 1:40 до 1:80. При испытании полевых изолятов «Ш-1» был идентифицирован как второй серотип, так как реакция наблюдалась только с сывороткой на штамм 27089, и титр был равен 1:20. Изо-лят «К-2» был отнесен к шестому сероти-пу, так как прореагировал с сывороткой на штамм 33590.
Результаты исследований, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что серологические реакции можно использовать для определения серовариан-
тной принадлежности возбудителя акти-нобациллезной плевропневмонии свиней. Однако некоторые из них имели определенные недостатки, связанные с перекрестными реакциями.
Наиболее специфичными оказались реакция преципитации и реакция непрямой гемагглютинации, которые позволяют избежать явления перекрестных реакций между штаммами. Данные серологические реакции можно использовать для серотипирования изолятов A. pleuropneumoniae, что согласуется с сообщениями большинства зарубежных авторов [4, 6, 7].
В то же время в некоторых странах для определения серовариантной принадлежности изолятов актинобацилл применяют реакцию агглютинации с соматическим антигеном [2].
Бесспорно, точная идентификация се-ротипов A. pleuropneumoniae чрезвычайно важна, так как позволяет определить серовариантный пейзаж актинобацилл, циркулирующих в различных регионах страны и в этом плане определенную позитивную роль может сыграть использование комбинации из двух и более серологических реакций.
Выводы
1. Для определения серовариантной принадлежности изолятов A. pleuropneumoniae возможно использование РП и РНГА как наиболее специфичных реакций.
2. Из трех тестируемых изолятов: «Ш-1» типирован как серовариант 2, «К-2» -как серовариант 6, а изолят «К-1» не принадлежал ни к одному из имеющихся в наличии референтных штаммов.
РЕЗЮМЕ
В статье представлены результаты определения серовариантной принадлежности изолятов Actinobacillus pleuropneumoniae «Ш-1», «К-2» и «К-1» в реакции преципитации, реакции агглютинации и реакции непрямой гемагглютинации. В данных серологических реакциях установлено, что изолят «Ш-1» принадлежит ко второму, а изолят «К-2» - к шестому серотипу.
SUMMARY
Results of determination of serovariant belonging of Actinobacillus pleuropneumoniae «SH-1», «K-2» and «K-1» isolates by precipitation, agglutination and indirect hemagglutination tests are given in the paper. The serologic tests showed that the isolate «Sh-1» belonged to the second serotype and the isolate «K-2» belonged to the sixth serotype.
Литература
1. Blackall, P.J. Proposal of a new serovar of Actinoba- R. Higgins, S. Lariviere // J. Clin. Microbiol. 1982. cillus pleuropneumoniae: serovar 15 / PJ. Blackall, Vol. 15. P. 1019-1023.
H.L.B.M. Klaasen, H. Van Den Bosch // Vet. Micro- 4. Mittal, K.R. Determination of antigenic specificity
biol. 2002. Vol. 84. P. 47-52.
2. Gunnarsson, A. Serological studies on porcine strains of Haemophilus parahaemolyticus-pleuropneu-moniae: agglutination reactions / A. Gunnarsson, E.L. Biberstein, B. Hurvell // Am. J. Vet. Res. 1977. Vol. 38, №8. P. 1111-1114.
3. Mittal, K.R. Evaluation of slide agglutination and ring precipitation tests for capsular serotyping of Haemophilus pleuropneumoniae / K.R. Mittal,
and relationship among Haemophilus pleuropneumoniae serotypes by an indirect haemagglutination test / K.R. Mittal, R. Higgins, S. Lariviere // J. Clin. Microbiol. 1983. Vol. 17. P. 787-790.
5. Mittal, K.R. Evaluation of counterimmunoelectro-phoresis for serotyping Actinobacillus pleuropneu-moniae isolates and detection of type-specific antigens in lungs of infected pigs / K.R. Mittal, S. Bourdon, M. Berrouard // J. Clin. Microbiol. 1993. Vol. 31.
P. 2339-2342.
6. Nielsen, R. Serological characterization of 8 Haemophilus pleuropneumoniae strains and proposal of new serotype 8 / R. Nielsen, P.J. O/ Connor // Acta. Vet. Scand. 1984. Vol.25. P. 96-106.
7. Serological characterization of Actinobacillus pleuropneumoniae biotype 2 strains isolated from pigs in two Danish herds / R. Nielsen, L.O. Andersen,
T. Plambeck [et al.] // Vet. Microbiol. 1997. Vol. 54. P. 35-46.
8. Structural characterization of the antigenic capsular polysaccharides and lipopolysaccharides involved in the serological classification of Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae strains / M.B. Perry, E. Altman, J.R. Brisson [et al.] // Serodiag. Immunother. Infect. Dis. 1990. Vol. 4. P. 299-308.
УДК 619:578.27:616-036.22:616-078
А.С. Оганесян, О.П. Бъядовская, С.А. Дудников, Л.Б. Прохватилова
СЕРОПРЕВАЛЕНТНОСТЬ К ЦИРКОВИРУСУ 2 ТИПА И ПАРВОВИРУСУ СВИНЕЙ В ЦЕНТРАЛЬНОМ ФЕДЕРАЛЬНОМ ОКРУГЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Введение
Цирковирус свиней второго типа (ЦВС-2) является этиологическим агентом синдрома послеотъёмного мультисистемного истощения свиней (СПМИ) [1, 6, 7, 16, 17, 20]. Кроме СПМИ сообщается об участии ЦВС-2 в этиологии таких синдромов свиней, как дерматита и синдрома нефропатии свиней [1, 9, 17], респираторного симптомо-комплекса свиней [5, 13, 17] и энтеритов, ассоциированных с ЦВС-2 [11, 17]. Кроме того, ЦВС-2 обнаруживается у взрослых свиней при репродуктивной патологии [17].
Вирус активно размножается в клетках иммунной системы свиней, вызывая их гибель, в связи с чем развивается иммуноде-фицитное состояние организма, и животное становится восприимчивым к другим слабовирулентным возбудителям. СПМИ распространён среди поросят-отъёмышей 6-12-недельного возраста и характеризуется сочетанием клинических признаков с прогрессирующим снижением массы тела больного животного, желтухой и смертностью на уровне 10-40%. Основные проявления СПМИ, такие, как генерализованный лимфаденит, гепатит, нефрит и пневмония, протекают у поросят в острой форме. При этом у одной части животных поражённой группы могут наблюдаться все клинические признаки, у другой - только некоторые из них, а у некоторых клинические проявления синдрома вовсе отсутствуют [1, 10, 15, 16]. Клинические признаки заболевания значительно варьируют внутри эндемических зон. Большинство животных, серопозитивных к ЦВС-2, может не иметь клинического проявления СПМИ, и в некоторых странах, где основное пого-
ловье позитивно по ЦВС-2, случаи СПМИ никогда не были зафиксированы [1, 12, 15].
Сообщается о воспроизведении СПМИ в опытных условиях [14, 16], а также о патогенах, которые могут усилить влияние ЦВС-2 на поросят в полевых условиях [9, 14, 16, 17, 18, 20]. При этом показано усиление клинических признаков СПМИ при одновременном заражении животных ЦВС-2 и парвовирусом свиней (ПВС) [14, 20]. Смешанная инфекция ПВС и ЦВС-2 была обнаружена в значительном числе полевых случаев СПМИ [1, 10, 18].
Таким образом, актуальным представляется вопрос о распространении ЦВС-2 в популяции свиней Центрального федерального округа, а также об одновременной циркуляции ЦВС-2 и ПВС как факторов, создающих предпосылки для клинического проявления СПМИ в стадах.
Материалы и методы
Некоторые группы поголовья были рассмотрены нами, как имеющие более высокую вероятность инфицирования, т.е. как группы риска [2, 4]. При инфекции ЦВС-2 в группу риска входят поросята старше 6 недель [1, 6, 7], поэтому для обследования нами была выбрана группа доращивания, в которую входили поросята от 2,5- до 4,5-месячного возраста. Обязательным условием отбора проб было исключение из тестирования поросят, полученных от свиноматок, вакцинированных против ПВС [3].
Объём выборки определяли исходя из 95% уровня вероятности и минимального уровня превалентности болезни в стаде (10%). При этом для бесконечно большой популяции было получено значение в
