CC BY
45
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2015 БИОЛОГИЯ Вып. 4
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
УДК 557.175.6
С. А. Заморина, М. Б. Раев
Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН. Пермь, Россия
Пермский государственный национальный исследовательский университет. Пермь, Россия
РОЛЬ ТРОФОБЛАСТИЧЕСКОГО В1-ГЛИКОПРОТЕИНА ЧЕЛОВЕКА В РЕГУЛЯЦИИ ФЕНОТИПИЧЕСКОГО СОЗРЕВАНИЯ NK- И 1ЧКТ-КЛЕТОК
Пэте но влияние физиологических концентраций трофобластического J31-гликопротеина человека (ТБГ) на экспрессию маркеров натуральных киллеров (NK-) и Т-клеток с функциями натуральных ттлеров (NKT-) в системе in vitro ш модели периферических клеток женщин. В работе использовали препарат ТБГ. полученный по авторекой методике, который идентифицировали методом LS/MC. Препарат содержал несколько молекулярных форм белка: ТБГ-1, ТБГ-3, ТБГ-7, ТЪГ-9, а также некоторые иэоформы и прекурсоры, определяемые т vivo.В целом, полученный препарат максимально близок к изоформному составу ТБГ, обнаруживаемому в сыворотке беременных. Установлено, что ТБГ в высокой концентрации, экстраполируемой со II-III триместра беременности (100 мкг/мл) угнетал экспрессию CD 16/56 на NK-клетках асалщированную с тщтштитической активностью пттх клеток. Показано, что ТБГ в низких концешрациях. (1 и 10 mki/mjj. жслраиелировали с I триместра беременных;!и) усиливал экспрессию CD 16/56 на NKT-клстках, связанную с пщокинпродут^ующей активностью, В целом, полученные результаты демонстрируют новые иммуномодулируюгцие эффекты ТБГ,
Ключевые слова: трофобластический рИ-гликоттротеин человека (ТЬГ); NK-клетки. NICT-клетки; периферическая кровь.
S. A. Zamorina, М. В. Rayev
Institute of Ecology and Gcnctics of Microorganisms UB RAS. Perm, Russian Fodcration
Perm State University. Perm, Russian Federation
THE ROLE OF HUMAN PREGNANCY SPECIFIC Bl-GLYCOPROTEIN IN THE PHENOTYPIC MATURATION OF NK-, AND NKT-CELLS
Effect of human pregnancy specific [il-glycoprotein (PSG) in physiological concentrations was analyzed against the expression of natural killer (NKK T-cells with natural killer functions (NKT-) in hi vitro model using female peripheral cells. The study used PSG preparation being obtained wilh the authors' methodology and identified by LS/MC method. This preparation was made of several molccular forms of the protein namely PSG-l, PSG-3. PSG-7. PSG-9. as well as some isoforms and precursors detectable in vivo. In general, this preparation maximally approaches the isoform composition of PSG in the serum of a pregnant woman. It was revealed thai PSG in high concentration (100 pg/ml) suppressed ihe CD16/56 expression by NK-cclls, while inhibiting the cytolytic activity of these cells. Apparently, PSG suppressing effect against MIC cell expression of CD 16/56 may have role in semiallogenic fetus protection from the attack of cytotoxic NK cells. Meanwhile, PSG in low concentrations (I and 10 pg/ml) enhanced the CD16/56 expression by NKT-cells that was related to the cylokine-produeing activity. It is possible lhat PSG effects being revealed relatively to NKT cells arc one of probable mechanisms of PSG involvement in maintaining of cytokine balance and formation of peripheral tolerance in pregnancy. Collectively, results obtained demonstrate new immunomodulating effects of pregnancy-specific pi-glycoprotein.
Key words: pregnancy specific |M-glycoprotein; NK-cells; NKT-lymphocyles; peripheral blood.
Введение
Трофобластический |31-гликопротеин (ТБГ) является онкофетальным белком, который продуцируется во время беременности клетками цито- и
синцитиотрофоб ласта ТБГ играет значимую роль в эмбриональном развитии, инвазии трофобласта и плацентарном ангиогенезе (Посисеева, Назаров, Татаринов, 2004; Терентьев, Молдогазиева, Комаров. 2009]. Известно, что ТБГ обладает выражен-
ие Заморина С. А., Раев М. Б., 2015
ными иммуномодулирутощими эффектами [Замо-рина. Раев, 2015а; Martinez el al.. 2013; Wu el al., 20081, Однако, из>чение эффектов ТБГ затруднено в силу отсутствия в открытом доступе препарата этого белка, Для исследований доступны только рекомбинантные формы ТБГ. которые имеют свои недостатки (структурные отличия, неполный фол-динг, неравноценная посттрансляционная модификация и т.д.). В лаборатории экологической иммунологии (ФГБУН ИЭГМ УРО РАН, г. Пермь) разработана и запатентована авторская технология выделения и очистки ТБГ [Раев, 2008]. Получаемый препарат максимально близок к изоформному составу ТБГ. обнаруживаемого в сыворотке беременных, Известно, что in vivo ТБГ представлен целым белковым подсемейством. состоящим из более чем 30 белков, которое в международных базах данных называется PSG (pregnancy-specific glycoprotein) [Терентъев, Молдогазиева, Комаров. 2009]. У человека доминирующим продуктом экспрессии является PSG1. который и был идентифицирован в 1970 г как ТБГ |Татаринов, Масюке-вич, 1970].
В последнее время большое внимание уделяется исследованию функций клеток врожденного иммунитета. Натуральные киллеры (NK) являются клетками врожденной защиты, которые без предварительной иммунизации или активации могут распознавать и лизировать клетки-мишени. Все NK-клетки периферической крови делятся на две субпопуляции по уровням экспрессии молекул CD56 и CD 16. Около 90% NK-клеток незначительно экспрессируют CD56 (dim) и одновременно являются позитивными для CD 16 (CD56dimCD16+). CD 16 представляет собой низкоаффинный рецептор для Fc-фрагмента IgGl и IgG3 (Fey RIII) и уча-ствует в обеспечении реакции антител ©зависимой клеточной цнтотоксичности. Оставшиеся 10% NK-клеток экспрессируют высокие уровни CD56 (bright) и не экспрессируют CD 16 (CD56bngthCD16") [Trundlcy. Moffct, 2004]. Эти субпопуляции различаются функционально: так. CD56 т NK-клетки обладают выраженной цитотоксичностью, а CD56ь"ё1]|'-клетки являются основными цитокин-продуцир)тощими NK-клетками [Cooper et al.. 2001 J.
Натуральные киллерные Т-клетки (NKT) являются отдельной субпопуляцией Т-лимофцитов. Реализуя функции, свойственные NK-клеткам. они одновременно являются мощными продуцентами цитокинов [Collucci, Caligiuri, Di Santo, 2003]. В силу этого факта NKT-клстки принимают участие в отторжении опухоли, предупреждении аутоиммунных реакций, защите от паразитарных или бактериальных инфекций. NKT-клетки способны распознавать антигены в комплексе с CDld или молекулой главного комплекса гистосовместимости класса G (HLA-G), представленными на клетках плаценты, что может привести к аборту, а при повышении процента CD3*CD16+ клеток в I тримест-
ре беременности увеличивается риск развития гестов [Борзова и др., 20051. Очевидно, именно поэтому в период физиологически протекающей беременности функции как NKT-. так и NK- клеток периферического пула, супрсссированы [Mahmoud et al., 2004; Clark et al.. 2008], Кроме того, во время беременности число NK-клеток существенно снижается [Watanabe. Iwatani, Keneda, 1997],
Учитывая важную роль NK- и NKT-клеток при беременности как эффекторов неспецифической резистентности организма, целью работы являлось изучение иммуномодулирующих эффектов ТБГ на экспрессию CD 16/56 этими клетками в системе in vitro.
Материалы и методы
Получение ТБГ, ТБГ получали методом хроматографии с использованием биоспецифического сорбента с последующим освобождением от имму-ноглобулиновой контаминации на колонке Hi-Trap™ Proten G HP («Amersliain Biosciences», Швеция) [Раев, 2008]. В качестве биоспецифического сорбента использовали сефарозу CL 4В, гранулы которой конъюгировали с моноклональными антителами к ТБГ, продуцируемыми гибридомой ВАРЗ («Genovac», Германия), предварительно от-центрифугированную при 25000 g сыворотку крови беременных женщин со сроками беременности свыше 36 недель смешивали с сорбентом и инкубировали в течение 36-48 ч при +4°С. Сорбент переносили в колонку, отмывали фосфатно-солевым буфером с рН 7.25 до нулевых значений оптической плотности. Элюцию осуществляли 0.1 M глицин-HCl буфером с рН 2,6. Фракции, содержащие белок, объединяли и немедленно подвергали концентрирующей диафильтраиии против физиологического раствора, после чего проводили негативную хроматографию на колонке HiTrap™ Proleii G HP.
Содержание ТБГ в препарате, пол)*чаемом в ходе выделения и очистки, определяли при помощи иммуноферментного анализа наборами ТБГ-ИФА-Бест («Вектор-Бест», Россия).
Данные электрофореза в 10%-ном полиакрила-мидном геле по Лэммли представлены на рис. 1; молекулярная масса положенного препарата определяется в диапазоне от 50 до 75 kD> что соответствует известным данным [Терентьев, Молдога-зиева. Комаров. 2009]. Широкий диапазон молекулярной массы объясняется как гетерогенностью ТБГ, так и его способностью образовывать олиго-мерные формы в результате агрегации Для точной идентификации полученной серии препарата ТБГ оценивали его состав методом LC/MS (комбинация жидкостного хроматографа с масс-спектрометром). Исследование было проведено в Израильском технологическом институте (Smoler Proleomics Center, руководитель профессор А, Эд-мон. «Technion». Хайфа, Израиль) на приборе
LTQ-Orbitrap («Thermo Fishen>, США). На рис. 1 представлены данные LC/MS для трех исследуемых диапазонов, отмеченных на электрофоре-грамме, из которых следует, что препарат содер-
а)
В работе использовали физиологические концентрации ТБГ. соответствующие его уровню в периферической крови матери в период беременности - 1. 10 и 100 мкг/мл. Уровень ТБГ растет с минимальных значений (1-10 мкг/мл) в первые недели беременности, достигая максимума на 33-36 неделе (100-200 мкг/мл) [Посисеева, Назаров. Татаринов, 2004].
Объекты исследования. В работе использовали фракционированные мононуклеары периферической крови (МПК) практически здоровых доноров. которыми являлись небеременные женщины репродуктивного возраста (п=21). МПК получали центрифугированием в градиенте плотности фи-колл-верографина (1.077 г/см3) («Sigma», США. «Спофа». Чехия, соответственно), после чего клетки отмывали и подвергали воздействию ТБГ (1, 10 и 100 мкг/мл).
Иммунологические методы. После суточной инкубации МПК с ТБГ (полная питательная среда. 5% С02. 37°С) оценивали фенотип лим(|юцитов. определяя содержание NK-клеток с фенотипом CD3CD16+CD56+ и NKT-клеток с фенотипом CD3+CD16+CD56+ (CD3-FITC/CD 16.56-РЕ), согласно методике производителя антител («Веск-
жит несколько молекулярных форм белка: ТБГ-1, ТБГ-3, ТБГ-7. ТБГ-9, а также некоторые изофор-мы и прекурсоры, определяемые in vivo.
man Coulter», США). Результаты учитывали на проточном цитофлуориметре FACSCalibur («Becton Dickinson», США).
Статистическая обработка данных проводилась с помощью парного ¿-критерия Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Известно, что CD56/16-позитивные NK-клетки обладают выраженной цитотоксичностью и принимаю! активное участие в деструкции аллотранс-плантантов. именно поэтому их уровень в периферической крови беременных существенно снижен [Seshadri, Sunkara, 2014].
Установлено, что суточная инкубация клеточных культур с ТБГ в низких концентрациях (1 и 10 мкг/мл) не влияет на экспрессию CD16~CD56+ NK-клетками (рис. 2). Однако в высокой концентрации (100 мкг/мл) ТБГ угнетает уровень CD16+CD56~ NK-клеток (рис. 2. 3). Известно, что NK-клетки с фенотипом CD164 являются наиболее зрелыми и обладают высокой цитолитической активностью [Mittag el al., 2005]. Кроме того, повышение процента клеток CD56+ в периферической крови связано с ранним прерыванием кариотипически нормальной беременности [Coulam et al., 19951.
250 150 100
75
50 37
25
15 kD
-
**
б)
LA
J
\
i
Верхний диапазон (upper area):pregnancy specific beta-1 -glycoprotein 3 [Homo sapiens]; pregnancy specific bet a-1-glycoprotein 3, isoform CR.4_a [Homo sapiens]: pregnancy specific beta-1 -glycoprotein I [Homo sapiens]; pregnancy specific beta-1 -glycoprotein 9, isoform CR.4 J [Homo sapiens]; pregnancy specific beta-1 glycoprotein 9, isoform CRA_a [Homo sapiens].
Средний диапазон (middle area): pregnancy specific beta-1-glycoprotein 1 [Homo sapiens]: pregnancy-specific beta-J -glycoprotein 9precursor (PSBG-9); PSG9[Homo sapiens]: pregnancy specific beta-¡-glycoprotein 9 [Homo sapiens]; pregnancy specific beta-¡ -glycoprotein 3 [Homo sapiens]; pregnancy-specific beta-¡-glycoprotein 3, isoform CRA a [Homo sapiens]; pregnancy specific beta-¡ -glycoprotein 7 [Homo sapiens]; PSG 7_HUУ L4N, partial CDS [Homo sapiens]; pregnancy-specific beta-¡-glycoprotein 7 [Homo sapiens]: pregnancy specific beta-¡-glycoprotein 7, isoform CRA a [Homo sapiens]
Нижний диапазон (middle area): pregnancy specific beta-¡-glycoprotein 3 [Homo sapiens]: pregnancy specific bela-¡ -glycoprotein 3, isoform CR4_a [Homo sapiens]; pregnancy? specific beta-J -glycoprotein ¡ [Homo sapiens]; pregnancy specific beta-¡-glycoprotein 9, isoform CRA J [Homo sapiens]: pregnancy specific beta-¡ -glycoprotein 9, isoform CRA a [Homo sapiens].
Рис. 1. Идентификация полученного препарата ТБГ: а) электрофоретическое разделение препарата ТБГ в 10%-ном полиакриламидном геле по Лэммли: 1 -маркеры; 2 - пулированная сыворотка крови беременных женщин; 3 - препарат после сульфат-аммонийного фракционирования и диализующей ультрафильтрации; 4 - препарат после аффинной хроматографии, б) идентифицированные белки семейства PSG в полученном препарате ТБГ по данными LC/MS (название
белка по базе http://www.uniprot.org/)
15 10 5
NK-клетки (CD3'CD16/56+)
t *
ph гЬ Г4!
—i—
Контроль ТБГ( 1 ТБГ(10 ТБГ(100 мкг/мл) мкг/мл) мкг/мл)
NKT-клетки (CD31 CD16/56')
2
1/5 -
1 -
0,5 -0 ■
Контроль ТБГ(1 ТБГ(10 ТБГ(100 мкг/мл) мкг/мл) мкг/мл)
Рис. 2. Влияние ТБГ на экспрессию CD16/56 NK- и NKT-клетками (п=8)
Возможно, депрессивный эффект ТБГ опосредован интерлейкином (IL)-IO, который снижает функциональную активность NK-клеток, а ТБГ стимулирует продукцию этого цитокина [ Wu et al., 2008; Заморина, Раев, 20156].
Таким образом, угнетающее действие ТБГ в отношении экспрессии CD16 CD56+ NK-клетками может иметь значение в протекции полуаллогенно-го плода от атаки цитотоксических NK клеток. Кроме того, известно, что ТБГ оказывает эффекты в тесной функциональной связке с TGF-p, непосредственно активируя продукцию этого цитокина [Ballesteros et al.. 2015]. Известно, что клетки тро-фобласта устойчивы к лизису цитотоксическими Т-лимфошггами и NK-клетками. но не резистентны к лизису активированными NK (LAK-клетки). TGF-(3, в свою очередь, подавляет активацию NK-клеток и их превращение в LAK-клетки. Именно TGF-(3. в свою очередь, способствует трансформации периферических CD16+CD9"NK-k.ictok в де-цидуальные CD16"CD9+uNK-icieTKH [Keskin et al., 2007]. Важно отметить, что CD9 (тетраспонин) рассматривается как потенциальный рецептор для ТБГ [На et al., 2005], он присутствует на Т-лимфоцитах. но слабо экспрессируется на периферических NK-клетках. В то же время именно его экспрессия характеризует трансформацию клетки в dNK. Довольно интересно, что CD9 может в небольшом проценте коэкспрессироваться с CD56 на периферических NK-клетках [Sánchez-Rodríguez et al., 2011]. В целом ТБГ. вероятно, воздействует на эти процессы через вовлечение TGF-p. что в итоге приводит к трансформации NK-клеток в децимальные CDi6"CD9uNK.
ю1 lo2
CD3-FITC
10' 1G3
CD3-FITC
свз+
Рис. 3. Влияние ТБГ на экспрессию СО 16/56 Ж- и ЫКТ-клетками на примере одного эксперимента.
В правом верхнем квадранте указан процент СОЗ+СЭ16/56+ - в гейте лимфоцитов, в левом верхнем - СВЗ-СЕ>16/56+. По оси X - интенсивность флуоресценции по каналу ИЛ (окрашивание Р1ТС); по оси у - интенсивность флуоресценции по каналу ГЪ2 (окрашивание РЕ)
№СГ-клетки являются отдельной субпопуляцией Т-лимфоцитов. Реализуя функции, свойствен-
ные NK-клеткам. они одновременно являются мощными продуцентами цитокинов. Кроме того. NKT-клетки составляют субпопуляцию регулятор-ных Т-лимфоцитов. которые наряду с дендритными клетками играют ведущую роль в Thl/Th2 девиации и формировании периферической толерантности [Boyson et aL 2002]. Известно, что NKT-клетки периферической крови имеют большое значение в период имплантации, индуцируя цитокиновое окружение ТЬ2-типа [Boyson et al. 2002],
Установлено, что ТБГ в низкой концентрации (1 мкг/мл) не влиял на уровень CD16+CD56+NKT-клеток (рис. 2, 3). В то же время, в концентрациях 10 и 100 мкг/мл ТБГ увеличивает процент С016+С056+МСТ-клеток. Важно отметить, что повышение процента CD3 CD 16 клеток в ранние сроки беременности, когда уровень ТБГ еще невысок. может увеличивать риск развития гестоза [Борзова и др.. 2005]. Однако такой зависимости для II-III триместра не обнаружено.
Таким образом, ТБГ в высоких концентрацияхк экстраполированных с II-III триместра беременности. способствует фенотипическому созреванию NKT-клеток, ассоциированному с усилением их цитокин-продуцирующей активности. ВероятШк выявленные эффекты ТБГ в отношении CD16 CD56 NKT-клеток являются одним из возможных механизмов участия ТБГ в поддержании баланса цитокинов и формировании периферической толерантности при беременности.
В целом полученные результаты демонстрируют новые иммуномодулирующие эффекты ТБГ. Известно, что у женщин с такими аутоиммунными заболеваниями, как ревматоидный артрит или рассеянный склероз, отмечается улучшение состояния во время беременности, а повышенные уровни сывороточного ТБГ коррелировали с улучшением состояния [Терентьев, Модцогазиева, Комаровк 2009]. Дальнейшее изучение влияния роли ТБГ в формировании иммунной толерантности откроет возможности его применения в качестве перспективного средства для лечения аутоиммунных заболеваний.
Библиографический список
Борзова НЮ. и др. Способ прогнозирования гестоза легкой степени тяжести с ранних сроков беременности. Патент РФ № 2265221 от 27.11.05.
iaMopuua С.А., Раев \f.R Роль трофобластическо-го р I -гликопротеина человека в регуляции факторов. ассоциированных с иммунологической толерантностью // Доклады Академии наук. 2015а. Т. 6(2). С. 232-235. iaMopuua С.А., Раев А/.Б Изучение иммуномоду-лируюших эффектов трофобластического ß I -
гликопротеина человека // Физиология человека. 20156. Т 41(1) Р. 117-123.
IJoctf сеева Л.В., Назаров С.Б., Татариион Ю.С. Трофобласт-специфический бета-гликопротеин в акушерстве и гинекологии. Иваново: Иваново. 2004. 240 с.
Раев МБ. Способ выделения и очистки трофобластического (5-1 -гликопротеина. Патент РФ № 2367449 от 21.02.2008,
Татарияов Ю.С., Масюкевич В.Н, Иммунохими-ческая идентификация нового Р 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1970. Т. 69. № 6. С. 66-68.
Тереитьев А.А., Молдогазиева Н. Т., Комаров О.С. Изучение трофобластического бета-глобулина человека - некоторые итоги и перспективы // Международный журнал прикладных и фу ндаментальных исследований. 2009. № 6. С. 30-33,
Balfesteros A. et aL Induction and activation of latent transforming growth factor-pl are carried out by two distinct domains of pregnancy-specific glycoprotein 1 (PSG1) // J Biol. Client 2015. Vol. 290, №7, P, 4422-4431.
Boyson J.E. et al. CD Id and invariant NKT cells at the human maternal-fetal interface // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002. Vol. 99. P. 13741-13746.
Clark DA. et al. CD200-dependent and nonCD200-dependant pathways of NK cell suppression by human IVIG И J. Assist. Reprod. Genet. 2008. Vol. 25. P. 67-72.
Colhtcci F.t Calightri M.A., Di Santo J.P. What does it take to make a natural killed // Nature Rev. Immunol. 2003. Vol. 3. P. 413-425.
Cooper A4.A. et al. Human natural killer cells: a unique innate imniuiioregulatory role for the CD56brigth subset // Blood. 2001. Vol. 97. P. 46-51.
Coulam C.B. et al. Systemic CD56+ cells can predict pregnancy outcome // Am. J. Reprod. Immunol. 1995. Vol. 33. P. 40-46.
Ha C.T: et al. Binding of pregnancy-specific glycoprotein 17 to CD9 on macrophages induces secretion of IL-10. IL-6. PGE2. and TGF-pl // J. Loi-koc. Biol. 2005. Vol. 77. № 6. P. 948-957.
Keskin D.B. et al. TGF-bela promotes conversion of CD 16+ peripheral blood NK cells into CD16- NK cells with similarities to decidual NK cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. Vol. 104. № 9. P. 3378-3383.
Mahmoud F. et al. Effect of IgG therapy on lymphocyte subpopulations in the peripheral blood of Kuwaiti women experiencing recurrent pregnancy loss // Gynecol. Obstet. Invest. 2004. Vol. 58(2). P. 77-83.
Martinez F.F. et al. The role of pregnancy-specific
glycoprotein la (PSGla) in regulating the innate and adaptive immune response // Am. J. Reprod. Immunol. 2013. Vol. 69. № 4. P. 383-394.
Alittag A,, Lenz D.V., Gerstner A.O. et al. Polychromatic (eight-color) slide-based cytometry for the phenotyping of leukocyte. NK. and NKT subsets // Cytometry. 2005. Vol. 65r№2. P. 103-115.
Sanchez-Rodriguez E.N. et al. Persistence of decidual NK cells and KIR genotypes in healthy pregnant and preeclamptic women; a case-control study in the third trimester of gestation // Reprod Biol. Endocrinol. 2011. Vol. 9. № 9. doi; 10 1186/1477-7827-9-8.
Seshadri S., Sunkara S.K. Natural killer cells in female infertility and recurrent miscarriage; a systematic review and meta-analysis U Hum. Reprod. 2014. Vol. 20. № 3. P. 429-438.
Watanabe A/., Iwalani Y., Keneda T. Changes in T, B and NK lymphocytes subsets during and after normal pregnancy U Am. J. Reprod. Immunol. 1997. Vol. 37. P. 368-377.
Wu J.A, el al. Murine pregnancy-specific glycoprotein 23 induces the proangiogenic factors Iransform-ing-growlh factor beta 1 and vascular endothelial growth factor a in cell types involved in vascular remodeling in pregnancy H Biol. Reprod. 2008. Vol. 79. №6. P. 1054-1061.
References
Ballesteros A., Mentink-Kane M.. Warren J.. Kaplan G.G.. Dveksler G S Induction and activation of latent transforming growth factor-pl are carried out by two distinct domains of pregnancy-specific glycoprotein I (PSG1). J Biol. Chew. 2015. V. 290. N 7. pp. 4422-4431.
Boyson J E, Rybalov B., Koopman L A. et al. CD Id and invariant NKT cells at the human maternal-fetal interface. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99, pp. 13741-13746.
Clark D A.. Wong K . Banwatt D. et al. CD200-dependent and nonCD200-dependant pathways of NK cell suppression by human IVIG Assist. Reprod. Genet. 2008. V. 25, pp. 67-72.
Collucci F.. Caligiuri M,A, Di Santo J P. What does it take to make a natural killer? Nature Rev. Immunol. 2003. V. 3, pp. 413-425.
Cooper M.A.. Fehinger T.A.. Turner S C. et al. Human natural killer cells; a unique innate immu-noregulatory role for the CD56brigth subset. Blood. 2001. V. 97, pp. 46-51.
Coulam C.B.. Goodman R.G.. Roussev E.J. et al. Systemic CD56+ cells can predict pregnancy outcome. Am. J. Reprod. Immunol. 1995. V. 33, pp. 40-46.
Ha C.T.. Waterhouse R.. Wessells J. et al. Binding of pregnancy-specific glycoprotein 17 to CD9 on macrophages induces secretion of FL-10. IL-6.
PGE2. and TGF-pl. J. Leukoc. Biol. 2005, V. 77. N 6. pp. 948-957.
Keskin D.B.. Allan D.S.. Rybalov B. et al. TGFbeta promotes conversion of CD 16+ peripheral blood NK cells into CD16- NK cells with similarities to decidual NK cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U5L4. 2007. V. 104, N 9. pp. 3378-3383.
Mahmoud F.. Diejomaoh №, Oinu A. et al. Effect of IgG therapy on lymphocyte subpopulations in the peripheral blood of Kuwaiti women experiencing recurrent pregnancy loss. Gynecol. Obstet. Invest. 2004. V. 58 (2). pp. 77-83. "
Martinez F.F., Cervi L, Knubel C P. el al. The role of pregnancy-specific glycoprotein la (PSGla) in regulating the innate and adaptive immune response. Am. J. Reprod. Immunol. 2013, V. 69. N 4, pp. 383-394.
Mittag A., Lenz D V.. Gerstner A O. et al. Polychromatic (eight-color) slide-based cytometry for the phenotyping of leukocyte, NK, and NKT subsets. Cytometry. 2005, V. 65. N 2, pp. 103-115.
Sanchez-Rodriguez E N.. Nava-Salazar S.. Mendoza-Rodriguez C.A. et al. Persistence of decidual NK cells and KIR genotypes in healthy pregnant and preeclamptic women: a case-control study in the third trimester of gestation. Reprod Biol. Endocrinol. 2011, V, 9. N 9. doi; 10.1186/1477-7827-
Seshadri S., Sunkara S.K. Natural killer cells in female infertility and recurrent miscarriage: a systematic review and meta-analysis. Hum. Reprod. 2014, V. 20. N 3, pp. 429-438.
Watanabe M.. Iwalani Y., Keneda T. Changes in T, B and NK lymphocytes subsets during and after normal pregnancy. w. J- Reprod. Immunol. 1997. V. 37. pp. 368-377.
Wu J.A. Johnson B.L., Chen Y. el al. Murine preg-nancy-speciflc glycoprotein 23 induces the proangiogenic factors Lraiisformiiig-growih factor bela 1 and vascular endothelial growth factor a in cell types involved in vascular remodeling in pregnancy. Biol Reprod. 2008. V. 79, N 6. pp. 1054-1061.
Borzova N.Yu.fc Panova I.A.. Skripkina I.Yu. et al. A method of predicting preeclampsia mild early pregnancy. RF patent no. 2265221. 2005. (In Russ.)
Zamorina S.A.? Rayev M,B. [Role of Human Pregnancy-Specific pi-Glycoprotein in the Regulation of Immunological Tolerance^Associated Factors]. Doklady Akademii nauk. 2015? V.6 (2)? pp. 232-235. (In Russ.)
Zamorina S.A., Rayev M.B. [Immunomodulating effects of human pregnancy-specific pi-glycoprotein]. Fiziologija celoveka. 2015. V. 41, N l.pp. 117-123. (In Russ.)
Posiseeva L.V.. Nazarov SB., Tatarinov Yu.S. Tro-foblast-spetsifi ch eski i beta-glikoprotein v
akusherstve i ginekologii [Pregnancy-Specific Beta Glycoprotein in Obstetrics and Gynecology]. Ivanovo: Ivanovo, 2004. 240 p. (In Russ.) Raev M B, [Method for recovering and purify ing trophoblastic beta-1-glycoprotein]. RF patent no. 2367449, 2008. (In Russ.) Tatarinov YuS.. Masyukevich V.N. [Immunological identification of a novel [beta]l-globulin in blood plasma of pregnant women]. Bjulieten $ksperi-
memai noj bioiogii i medicmy.. 1970, V. 69, № 6. pp. 66-68. (In Russ.)
Terent'ev A.A., Moldogazieva N.T., Koinarov O.S. [A study of human pregnancy-specific beta-globulin: results and prospects). Metdvnarodnyj tu mai prik/adnych i fundamemaVnych issledo-vartij. 2009, N 6, pp. 30-33. (In Russ j
Посту пила в редакцию 30.10,2015
Об авторах
Заморина Светлана Анатольевна, доктор биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии
ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН 614081, Пермь, ул. Голева, 13; mantissa7@mail.ru: (342)2807794 доцент кафедры микробиологии и иммунологии ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614990. Пермь, ул. Букирева. 15
Раев Михаил Борисович, доктор биологических
наук, ведущий научный сотрудник лаборатории
экологической имму нологии
ФГБУН Институт экологии и генетики
микроорганизмов УрО РАН
614081, Пермь, ул. Голева, 13; mraev@iegm.ru:
(342)2807794
профессор кафедры микробиологии и иммунологии
ФГБОУВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614990. Пермь, ул. Букирева, 15
About the authors
Zamorina Svetlana AnatoPevna, candidate of biology, senior researcher of laboratory of ecological immunology Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS. 13, Golev str., Perm, Russia, 614081: mantissa7@mai1.ru; (342)2807794
associate professor of the Department of microbiology and immunology Perm State University. 15, Bukirev str,, Perm. Russia, 614990
Rayev Mikhail Borisovich, doctor of biology, leading researcher of the laboratory of ecological immunology
Institute of Ecology and Genetics of Microorganism
UB RAS. 13, Golev str, Perm, Russia, 614081:
mraev@iegm.ru: (342)2807794
professor of the Department of microbiology and
immunology
Perm State University. 15, Bukirev str,, Perm. Russia, 614990
