CC BY
69
УДК 504.064.36:579+597-12:579.852.13(262.5+262.54)
РОЛЬ СУЛЬФИТРЕДУЦИРУЮЩИХ КЛОСТРИДИЙ В ПАТОЛОГИИ У РЫБ
© 2015 г. М.А. Морозова, Ю.А. Федоров
Морозова Марина Александровна - научный сотрудник, сектор болезней рыб отдела аквакультуры, Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства, ул. Береговая, 21в, г. Ростов-на-Дону, 344002, e-mail: morozova.q@mail.ru
Федоров Юрий Александрович - доктор географических наук, профессор, заведующий кафедрой физической географии, экологии и охраны природы, Институт наук о Земле Южного федерального университета, ул. Зорге, 40, г. Ростов-на-Дону, 344090, e-mail: fedorov@sfedu.ru
Morozova Marina Aleksandrovna - Researcher, Sector of Fish Diseases of Department of Aquaculture, Azov Scientific Research Institute of Fisheries, Beregovaya St., 21v, Rostov-on-Don, 344002, Russia, e-mail: morozova.q@mail.ru
Fedorov Yurii Aleksandrovich - Doctor of Geographical Science, Professor, Head of the Department of Physical Geography, Ecology and Environment, Institute of Earth Sciences of the Southern Federal University, Zorge St., 40, Rostov-on-Don, 344090, Russia, e-mail: fedorov@sfedu.ru
На основании анализа литературных данных и материалов собственных исследований показано значение сульфитреду-цирующих клостридий (Clostridium perfringens, C. sporogenes) в патологии гидробионтов. При заболеваниях у рыб наблюдаются клинические проявления различной степени выраженности - от кровоизлияний и язв на поверхности тела до острой септицемии. При этом C. perfringens вовлекается именно в раневые процессы и представляет проблему как возбудитель вторичной инфекции. Контаминация спорами сульфитредуцирующих клостридий жабр и кишечника здоровых рыб не имела клинических последствий. С теоретической и прикладной точек зрения важно также доказательство возможности образования сероводорода с участием сульфитредуцирующих клостридий, что позволяет по-новому осмыслить метаболический цикл сероводорода в сульфидных лечебных грязях и донных отложениях морских и пресноводных экосистем, находящихся в зоне антропогенного влияния.
Ключевые слова: сульфитредуцирующие клостридии, санитарно-показательные микроорганизмы, патология, рыба, споры, штамм, сероводород, метан.
According to the analysis of books contains literary and materials of our own research shows the importance of sulphite-reducing clostridia (Clostridium perfringens, C. sporogenes) in the pathology of hydrobionts. Diseases of fish can have various clinical manifestations from bleeding and ulcers on the surface of the body to acute septicemia. C. perfringens involved in the wound process and it represents the problem as a secondary pathogen infection. Healthy fish were contaminated with gills and intestines spores of sulphite-reducing clostridiа and manifestations had no clinical. From the theoretical and applied points of view it is also important proof of the possibility offormation of hydrogen sulfide with sulfite-reducing clostridia, which allows to rethink the metabolic cycle of hydrogen sulfide in the sulfide therapeutic mud and sediments of marine and freshwater ecosystems in the zone of human influence.
Keywords: sulphite-reducing clostridiа, sanitary-indicatory microorganisms, pathology, fish, spores, strain, hydrogen sulfide, methane.
Медико-биологическим термином «патология» обозначается динамически развивающееся нарушение функций организма при повреждении его структур патогенным фактором любой природы как реакция организма на взаимодействие с этим фактором. Патология, генерализуясь, может привести к дисфункции организма - болезни [1].
В литературе, в основном зарубежной, имеются сведения о случаях инфицирования гидробионтов сульфитредуцирующими клостридиями. Показано, что Clostridium perfringens является возбудителем раневых инфекций, вызывая заболевание в тех случаях, когда проникает в раны. Эмфизематозный миозит (газовая гангрена) был диагностирован у дельфинов и
других китообразных [2]. Инфекция может проникать в местах инъекций [3]. В [4] описан случай гибели самки атлантического бутылконосого дельфина вследствие клостридиального миозита, развившегося после укусов самца. У человека С. perfrmgens вызывает три типа поражений - пищевые токсикоинфек-ции (энтеротоксемия), некротический энтерит и газовую гангрену (анаэробный сепсис).
Наличие этого микроорганизма обнаруживают и в некоторых пищевых продуктах, но уже как возможного возбудителя отравлений. Заболевания человека чаще связаны с C. perfringens типа А, который продуцирует а-токсин (газовая гангрена, пищевое отравление), и изредка - с типом С (некротизи-
рующий энтероколит). В целом понятие «токсин» у С. perfringens довольно расплывчато. Оно объединяет не менее 14 факторов с летальной и гистолитиче-ской активностью.
В РФ количественный учет сульфитредуцирую-щих клостридий предусмотрен при исследованиях почвы, лечебных грязей, питьевой воды, источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения и открытых водоемов. Их обнаружение свидетельствует о некогда имевшем место фекальном загрязнении, так как споры позволяют им длительно сохраняться в окружающей среде, в частности, они вегетируют в почве, богатой гумусом [5]. Поскольку сульфитредуцирующие клостридии при благоприятных условиях способны размножаться в окружающей среде (особенно в почве), их ценность как показателя фекального загрязнения не всегда очевидна. Однако высокая устойчивость спор к агрессивным воздействиям внешней среды, в том числе к дезинфицирующим и стерилизующим процедурам, делает споры важным технологическим показателем, позволяющим оценить качество обеззараживания воды [6].
Цель исследования - определение роли сульфит-редуцирующих клостридий в патогенезе заболеваний у рыб с бактериальной и невыясненной этиологией; выявление споровых и вегетативных форм клостри-дий в воде и микрофлоре здоровых рыб; идентификация выделенных штаммов.
Объектами настоящего исследования выбраны промысловые рыбы 3 видов (тарань, бычок-сирман,
Выделение и дифференциация С. рег;/П^ет от других клостридий проведены на модифицированной среде Дункана - Стронга. Принадлежность выделенных клостридий определяли по их морфологии, куль-туральным, биохимическим (энтеритный тест, изучение подвижности, ферментации лактозы, разжижение желатина, редукции нитратов, определение каталазы и липолитической активности) и другим признакам, присущим каждому виду [7]. У всех выделенных штаммов анализировали факторы патогенности: про-теазу, лецитиназу и гемолизин [5]. Гемолитическую активность определяли по наличию зон просветления на 5%-м кровяном агаре, лецитиназу - по зоне опа-лесценции вокруг колоний на желточном агаре, про-теолитическую - по разжижению желатина, а также по образованию продуктов разложения белка: индола, сероводорода, аммиака. При образовании индола бумага, пропитанная насыщенным раствором щавелевой кислоты, приобретала розовый цвет; в присутствии сероводорода бумага, пропитанная ацетатом свинца, чернела; при образовании аммиака красная лакмусовая бумага синела.
черноморская камбала-калкан), у которых зарегистрированы заболевания.
Материал и методы
За период 2009-2014 гг. выявлены случаи заболевания рыб в Таганрогском заливе у бычка-сирмана и тарани, в Черном море - у камбалы-калкан. Для диагностики возбудителей бактериальных инфекций использовали методы, принятые в микробиологии [5].
Для микробиологических посевов взяты 615 экз. рыб (клинически здоровых и с язвенным поражением кожи) и 43 пробы воды. У рыб исследовали печень, участок отдела кишечника с содержимым, жабры, мышечную ткань и кровь; у больных особей дополнительно выполняли посев из кожных язв. Образцы отбирали с соблюдением правил асептики, исключающих микробное загрязнение из окружающей среды.
Метод определения сульфитредуцирующих клост-ридий основан на выращивании посевов в железо-сульфитном агаре и среде Вильсон - Блер. При росте в селективных средах образуются типичные, окрашенные в черный цвет колонии (трансформация сульфита до сульфида) [7]. Этот признак используется для выявления данной группы микроорганизмов. Считается, что способностью редуцировать сульфиты обладают только споровые анаэробы кишечного происхождения. Данное обстоятельство позволило выделить эту группу микроорганизмов как санитарно-показательную (таблица) [6].
Споры сульфитредуцирующих клостридий определяли методом прямого посева нормированного объема воды (по 20 мл). Для количественного учета спор в органах и тканях рыб применяли посев 1 г исследуемого образца (или его разведения). Пробы прогревали на водяной бане при (75±5) °С в течение 15 мин и заливали средой [5, 8]. Для определения клостридий посевы заливали расплавленной и охлажденной средой до 45 (±1) °С. Пробирки опускали в емкости с холодной водой для создания анаэробных условий в толще агара. Посевы инкубировали при температуре 37 и 44 °С в течение 18-24 ч с последующим учетом колоний. Результаты анализа выражали числом КОЕ (колониеобразующие единицы) в 1 г или 20 мл.
Результаты исследования
В восточной части Таганрогского залива регистрировали заболевания, вызванные условно-патогенными бактериями, - вибриоз (2011 г.) у бычка-сирмана ОвЫш' 5угтап (рис. 1а) и бактериальную ге-
Санитарный показатель как группа санитарно-показательных микроорганизмов
Санитарно-показательный микроорганизм Группа (показатель) Другие микроорганизмы, потенциально входящие в группу
Clostridium perfringens Споры сульфитредуцирующих клостридий С. sporogenes, С. ЬагаИ, С. bifermentans и др.
моррагическую септицемию (2014 г.) у тарани Rutilus heckeШ (рис. 1б). Для заболеваний была характерна весенне-летняя сезонность.
Клиническая картина характеризовалась покраснением у основания плавников, жаберных крышек и кровоизлияниями на них. У рыб отмечали язвы и припухлости красного цвета на различных участках кожи, иногда с некротическим распадом. При вскрытии наблюдали патологические изменения печени, геморрагическое воспаление почек и кишечника. В каждом случае из содержимого кожных язв кроме возбудителей заболевания выделяли С perfringens и C. sporogenes. В печени инфицированных бычков клостридии регистрировали незначительным числом изолятов, у клинически здоровых рыб они отсутствовали. Важно отметить, что выделенные штаммы C. perfringens продуцировали лецитиназу, которая вызывает коагуляционный и колликвационный некрозы здоровой ткани. На кровяном агаре колонии были окружены зоной гемолиза. Изоляты С sporogenes обладали ярко выраженными протеолитическими свойствами, вызывая протеолиз молока и разжижение желатина.
б
Рис. 1. Язвенные поражения кожи у рыб: а - бычка-сирмана; б - у тарани
Особое значение имеет выделение спор из жаберной ткани (до 103 КОЕ/г) и кишечника (102-104 КОЕ/г) клинически здоровых рыб. В контаминации жабр азовских рыб отмечено два максимума - весенний и летне-осенний. Весенний подъем численности спор совпадал с паводком. Летне-осенний максимум (ав-
густ-сентябрь) обусловлен повышением температуры воды и обогащением водоема органическим веществом. Такая тенденция выявлена для жабр донских рыб с наиболее высокими значениями их численности (103^104 КОЕ/г) и выделением вегетативных форм при интенсивном антропогенном воздействии, в частности, фекальном загрязнении Нижнего Дона [9]. Учитывая тот факт, что тарань и бычок-сирман отловлены на разных участках Таганрогского залива и в разное время, а контаминация клостридиями не имела клинических последствий, можно судить только о характере бактериального загрязнения воды. Ведь для поддержания жизнедеятельности рыбам необходимо пропускать через жаберный аппарат и кишечный тракт большое количество воды, и микрофлора этих органов и всего организма в целом формируется под воздействием микрофлоры воды [1].
По вопросу обнаружения клостридий в желудочно-кишечном тракте рыб имеются сведения о видах C. sporogenes, C. bifermentas, C. botulinum. В то же время представители индигенной флоры кишечника - это фактор риска для рыб с ослабленным иммунно-физиологическим статусом, и данные микроорганизмы могут стать источником эндогенной инфекции. Способность бактерий интенсивно размножаться в кишечнике ослабленных особей нередко приводит к бактериальной транслокации с развитием системной бактериемии [10]. Исследования показали, что в кишечниках азовских бычков с признаками вздутия и кровянистыми выделениями отмечался высокий уровень вегетативных клеток клостридий с факторами патогенности (106^108 КОЕ/г). Это не исключает на фоне вибриоза клостридиальную патологию кишечника, вызванную повреждением C. perfringens слизистой оболочки.
Особое значение для экологической безопасности прибрежной зоны имеют споры сульфитредуцирую-щих клостридий, которые независимо от сезонов года (весна-осень) являлись постоянным компонентом микрофлоры в пробах воды, отобранных на всех станциях в различных районах Таганрогского залива (рис. 2).
Рис. 2. Схема станций отбора проб воды и рыбы в Таганрогском заливе
а
Споры имеют высокую устойчивость в окружающей среде, поэтому их обнаружение в воде (рис. 3а) может свидетельствовать о давнем фекальном загрязнении. Биохимическими тестами показана способность выделенных штаммов C. perfringens, C.
sporogenes к продукции сероводорода и аммиака. Клостридии, обладая мощной ферментативной активностью и благодаря энергичному газообразованию, разрывают питательные среды (рис. 3б).
а б
Рис. 3. Культуры сульфитредуцирующих клостридий на среде Вильсон - Блер: а - колонии клостридий из пробы воды;
б -слева - 2 пробирки С. perfringens, справа - C. sporogenes
Исследования черноморской камбалы-калкан Scophthalmus maeoticus maeoticus из шельфовой зоны северо-восточной части Черного моря выявили случаи регулярного заболевания неизвестной этиологии на данной акватории. Болезнь характеризовалась кожными патологиями - язвами (рис. 4а) и новообразованиями (рис. 4б).
Обнаружение язвенных и опухолевых поражений кожи у нерестящегося черноморского калкана неоднократно отмечается промысловой статистикой при использовании как активных (тралы), так и пассивных (ставные сети) орудий лова [11].
а
б
Рис. 4. Патологические изменения кожи калкана: а - изъязвление на слепой стороне тела; б - папиллома в области головы
Изменение условий среды существенно влияет на биологические показатели у представителей этого вида и подверженность его заболеваниям [12]. Язвы и опухолевые кожные новообразования часто отмечают у рыб в зоне сброса токсических отходов предприятий, а также при отклонении от нормативов в условиях индустриального выращивания. Вопросы же этиологии и диагностики заболевания у черноморского калкана требуют дальнейшего изучения. Оценке микробного фактора в развитии патологии всегда уделяется большое внимание. Несомненно, вид, количество микроорганизмов, их патогенные свойства играют существенную роль в возникновении осложнений болезни и во многом определяют характер ее течения. У калкана с
язвами и новообразованиями (изъязвлёнными и неизъязвлёнными) из разных станций отбора (рис. 5) были выделены микробные ассоциации условно-патогенных бактерий - Pseudomonas fluorescens, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio &р., которые инфицировали кровь и печень [11]. Показано, что через раневую поверхность в организм могут проникать C. perfringens, приводя к септицемии. У рыб с язвами и изъязвленными новообразованиями инфицированными C. perfringens оказались кровь и печень, в то время как у особей с патологическими изменениями кожи, но с неповрежденными покровами клостридии отсутствовали. Следует отметить, что в случаях присоединения анаэробной инфекции излечение организма невозможно.
1 л г* я 37 л ?э J1 33 я 3i и ЗЕ Id 41 14 41 м +7 ts 43 » я w а я О, и 17 и №
А
.J в
АноПп в
□ни г
L Д
\ Новсн РМСИИСК Е
ч г s Ж
Геленджик г
и
к
ДжуОга л
As i м
н
л- _Туапсе о
N Г1
S с
^ лмл [чвсиая с
■ч 1 т
л 1 Лги V
ф
т S Хочи X
Рис. 5. Схема отбора проб воды и черноморского калкана в районах Большой Утриш - Лоо
Именно донные рыбы наиболее сильно подвержены загрязнению бактериями, которые могут аккумулироваться в тканях. Постоянно присутствуя в сточных водах и различных отложениях почвы, споры смываются дождевыми потоками и талыми водами в водоемы и сохраняются в придонных осадках. Они сохраняются не только в виде спор, но и активно вегетируют при повышении температуры. Усиление органического загрязнения будет способствовать протеолизу и аммонификации клостридий, что в конечном итоге приведет к образованию большого количества сероводорода и аммиака. Вымывание бактерий из грунтов в воду приводит к обсеменению ими жабр. Показано, что численность спор на жабрах калкана была в пределах от 10 до 100 КОЕ/г, но при этом споры часто отсутствовали в воде в районах его промысла.
В работах [13, 14] обнаружено и описано симбат-ное возрастание концентрации сероводорода и метана в донных отложениях зон антропогенного воздействия морских и пресноводных водоемов и водотоков. Этот феномен впервые [13, 14] был объяснен наличием на участках загрязнения сточными водами боль-
шого количества лабильного органического вещества и субстратов для бактерий - метаногенов и сульфат-редукторов, а также тем, что здесь имеет место развитие альтернативных процессов генерации восстановленных газов, которые контролируются не ингиби-рующими друг друга бактериальными консорциумами. Это прежде всего процесс образования сероводорода с участием гнилостных бактерий и гидролиз древесины, затопленной на некоторых участках исследованных акваторий [15]. При анализе роли сульфатной редукции и других альтернативных процессов генерации сероводорода в работе [16, 17] высказано предположение, что в водоемах и водотоках с сульфидным заражением донных отложений определенный вклад может вносить генерация сероводорода и (не только его) сульфитредуцирующими клостридия-ми. Это реально, поскольку большинство водных объектов, в том числе и бальнеологического назначения, находится в зоне прямого или косвенного антропогенного влияния. В настоящем исследовании экспериментальным путем in vitro показана возможность образования этих газов (рис. 3б).
Заключение
Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что сульфитредуцирую-щие клостридии (Clostridium perfringens, C. sporogenes) вовлекаются в раневые процессы и представляют проблему как возбудитель вторичной инфекции у рыб. Наиболее сильно этому подвержены черноморский калкан и бычок-сирман, что обусловлено экологией самих рыб, приуроченных к донному биотопу. Показано, что анаэробная бактериемия нередко развивалась на фоне вибриоза у бычка-сирмана (восточная часть Таганрогского залива) и язвенных поражений кожи у калкана (Черное море). Встречаемость
C. perfringens, C. sporogenes в микробных ассоциациях кожных язв регистрировали у тарани из восточной части Таганрогского залива. Причем споры сульфит-редуцирующих клостридий, независимо от сезонов года (весна-осень), являлись постоянным компонентом водной микрофлоры. Хотя споры и обнаруживали на жабрах, в кишечнике клинически здоровых рыб, но эпизоотического значения они не имели. С теоретической и прикладной точки зрения важно также доказательство возможности образования сероводорода с участием сульфитредуцирующих клостридий, что позволяет по-новому осмыслить метаболический цикл сероводорода в сульфидных лечебных грязях и донных отложениях морских и пресноводных экосистем, находящихся в зоне антропогенного влияния.
11. Бойко Н.Е., Стрижакова Т.В., Рудницкая О.А., Ружин-
ская Л.П., Морозова М.А. Материалы к характеристике функциального состояния черноморского калкана Scophthalmus мaeoticus мaeoticus в нерестовый период 2009-2010 гг. // Вопросы рыболовства. 2013. Т. 14, № 2 (54). С. 272-282.
12. Гирагосов В.Е., Ханайченко А.Н., Ельников Д.Е. Харак-
тер и причины изменчивости основных показателей состояния нерестовой популяции черноморской камбалы-калкан на юго-западном шельфе Крыма // Современные проблемы Азово-Черноморского региона: материалы III Междунар. конф. Керчь, 2007. С. 3-9.
13. Федоров Ю.А., Тамбиева Н.С., Гарькуша Д.Н., Хорошев-
ская В.О., Кизицкий Р.М. Теоретические аспекты связи метаногенеза с загрязнением воды и донных отложений веществами неорганической и органической природы // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки. 2000. № 4. С. 68-73.
14. Гарькуша Д.Н., Федоров Ю.А. Метан в устьевой области
реки Дон. Ростов н/Д.; М., 2010. 181 с.
15. Федоров Ю.А. Стабильные изотопы и эволюция гидро-
сферы. М., 1999. 370 с.
16. Gar'kusha D.N., Fedorov Y.A. Methane in the water and
bottom sediments of the mouth area of the Severnaya Dvina River during the winter time // Oceanology. 2014. Vol. 54, № 2. P. 160-169.
17. Федоров Ю.А., Гарькуша Д.Н., Доценко И.В., Афанасьев К.А.
Метан и сероводород в лечебных сульфидных грязях (на примере озера Большой Тамбукан) // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки. 2014. № 3. C. 102-109.
References
Литература
1.
1. Ларцева Л.В., Пивоваров Ю.П. Экологическая эпиде-
миология. Астрахань, 2007. 187 с. 2.
2. Dunn J.L. Bacterial and mycotic diseases of cetaceans and
pennipeds // Handbook of marine mammals medicine: helth, disease and rehabilitation. Boca Raton, 1990. P. 73-96. 3.
3. GreenwoodA.G., TaylorD.C. Clostridial myositis in marine
mammals // Vet. Rec. 1978. Vol. 103, № 3. P. 54-55. 4.
4. Buck J.D., Shepard L.L., Spott S. Clostridium perfringens as
a cause of death of a captive Atlantic bottlenose dolphin (Tursiops truncatus) // J. Wildl .Dis. 1987. № 23. P. 488.
5. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и 5.
санитарная микробиология / под ред. А.С. Лабинской, Е. Г. Волиной. М., 2008. 1080 с.
6. Тымчук С.Н., Ларин В.Е., Соколов Д.М. Наиболее зна-
чимые санитарно-микробиологические показатели 6. оценки качества питьевой воды // Водоснабжение и санитарная техника. 2013. № 11. С. 8-14.
7. ГОСТ 10444.9-88. Продукты пищевые. Метод определе-
ния Clostridiumperfringenes. М., 2010.
8. ГОСТ 29185-91. Продукты пищевые. Методы выявления
и определения количества сульфитредуцирующих кло- 7. стридий. М., 2010.
9. Морозова М.А., Ларцева Л.В. Микробные сообщества
гидроэкосистемы Нижнего Дона и Таганрогского залива // Фундаментальные и прикладные исследования. 8. Естеств. науки. 2012. № 2. С. 50-56.
10. Симчук Г.В., Зубаченко В.Л., Омельченко С.О. Оценка
микробного загрязнения морской воды и массовых видов рыб прибрежной части Черного и Азовского морей // Вюн. Одес. нац. ун-та. 2005. Т. 10, вып. 7. С. 201-207.
Lartseva L.V., Pivovarov Yu.P. Ekologicheskaya epidemiologiya [Environmental epidemiology]. Astrakhan, 2007, 187 p.
Dunn J.L. Bacterial and mycotic diseases of cetaceans and pennipeds. Handbook of marine mammals medicine: helth, disease and rehabilitation. Boca Raton, 1990, pp. 73-96.
Greenwood A.G., Taylor D.C. Clostridial myositis in marine mammals. Veterinary Record, 1978, vol. 103, no 3, pp. 54-55.
Buck J.D., Shepard L.L., Spotte S. Clostridium perfringens as the cause of death of a captive Atlantic bottlenosed dolphin (Tursiops truncatus). J. Wildl. Dis., 1987, vol. 23, no 3, pp. 488-491.
Rukovodstvo po meditsinskoi mikrobiologii. Obshchaya sanitarnaya mikrobiologiya [Manual of medical microbiology. General sanitary microbiology]. Eds. A.S. Labinskaya, E.G. Volina. Moscow, 2008, 1108 p.
Tymchuk S.N., Larin V.E., Sokolov D.M. Naibolee znachimye sanitarno-mikrobiologicheskie pokazateli otsenki kachestva pit'evoi vody [The most important sanitary-microbiological indicators of drinking water quality]. Vodosnabzhenie i sanitarnaya tekhnika, 2013, no 11, pp. 8-15.
GOST 10444.9-88. Produkty pishchevye. Metod opredeleniya dostridium perfringens [GOST 10444.9-88. Food products. Method for determination of Clostridium perfringens]. Moscow, 2010.
GOST 29185-91. Produkty pishchevye. Metody vyyavleniya i opredeleniyaya kolichestva sul'fitredutsiruyushchikh klostridii [GOST 29185-91. Food products. Methods for detection and quantification of sulfite-reducing clostridia]. Moscow, 2010.
9. Morozova M.A., Lartseva L.V. Mikrobnye soobshchestva
gidroekosistemy Nizhnego Dona i Taganrogskogo zaliva [Hydroecosystems microbial communities of the Lower Don and Taganrog Bay]. Fundamental'nye i prikladnye issledovaniya. Estestvennye nauki. 2012, no 2, pp. 50-56.
10. Simchuk G.V., Zubachenko V.L., Omel'chenko S.O.
Otsenka mikrobnogo zagryazneniya morskoi vody i massovykh vidov ryb pribrezhnoi chasti Chernogo i Azovskogo morei [Evaluation of microbial contamination of sea water and mass fish species of the coastal part of the Black and Azov Seas]. Vestnik Odesskogo natsional'nogo universiteta, 2005, vol. 10, no 7, pp. 201-207.
11. Boiko N.E., Strizhakova T.V., Rudnitskaya O.A.,
Ruzhinskaya L.P., Morozova M.A. Materialy k kharakteristike funktsional'nogo sostoyaniya
chernomorskogo kalkana Scophthalmus maeoticus maeoticus v nerestovyi period 2009-2010 gg. [Materials for the characterization of the functional state of the Black Sea turbot Scophthalmus maeoticus maeoticus during the spawning period of 2009-2010]. Voprosy rybolovstva, 2013, vol. 14, no 2 (54), pp. 272-282.
12. Giragosov V.E., Khanaichenko A.N., El'nikov D.V.
Kharakter i prichiny izmenchivosti osnovnykh pokazatelei sostoyaniya nerestovoi populyatsii chernomorskoi kambaly kalkan na yugo-zapadnom shel'fe Kryma [Nature and causes of variability in the main indicators of the spawning population of the Black Sea turbot flatfish in the South-
Поступила в редакцию
Western shelf of Crimea]. Sovremennye problemy ekologii Azovo-Chernomorskogo regiona: materialy III Mezhdunar. konf. Kerch, 2008, pp. 3-9.
13. Fedorov Yu.A., Tambieva N.S., Gar'kusha D.N.,
Khoroshevskaya V.O., Kizitskii P.M. Teoreticheskie aspekty svyazi metanogeneza s zagryazneniem vody i donnykh otlozhenii veshchestvami neorganicheskoi i organicheskoi prirody [Theoretical aspects of communication methanogenesis water pollution and sediment inorganic and organic nature]. Izv. vuzov. Sev.-Kavk. region. Estestv. nauki, 2000, no 4, pp. 68-73.
14. Gar'kusha D.N., Fedorov Yu.A. Metan v ust'evoi oblasti reki
Don [Methane in the mouth area of the river Don]. Rostov-on-Don; Moscow, 2010, 181 p.
15. Fedorov Yu.A. Stabil'nye izotopy i evolyutsiya gidrosfery
[Stable isotopes and the evolution of the hydrosphere]. Moscow, 1999, 370 p.
16. Garkusha D.N., Fedorov Y.A. Methane in the water and
bottom sediments of the mouth area of the Severnaya Dvina River during the winter time. Oceanology, 2014, vol. 54, no 2, pp. 160-169.
17. Fedorov Yu.A., Gar'kusha D.N., Dotsenko I.V., Afanas'ev K.A.
Metan i serovodorod v lechebnykh sul'fidnykh gryazyakh (na primere ozera Bol'shoi Tambukan) [Methane and hydrogen sulfide in the sulfide mud treatment (for example, Great Lakes Tambukan)]. Izv. vuzov. Sev.-Kavk. region. Estestv. nauki, 2014, no 3, pp. 102-109.
15 января 2015 г.
