CC BY
2014. Samanovic M.I., Ding C., Thiele D.J., Darwin K.H. Copper in microbial pathogenesis: medding with the metal. Cell. Host. Microbe. 2012, 11: 106-115.
15. Siberil S., Menez R., Jorieux S. Effect of zinc on human IgG1 and its FcyR interactions. Immunol. Letters. 2012, 143: 60-69.
Поступила 17.10.13
Контактная информация: Чекнев Сергей Борисович , д.м.н., 123098, Москва, ул. Гамалеи, 18, р.т. (499)190-43-88
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
О.В.Бухарин, А.В.Сгибнев, С.В.Черкасов
РОЛЬ ПРО- И АНТИОКСИДАНТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ В РЕГУЛЯЦИИ МЕХАНИЗМОВ ГОМЕОСТАЗА СИМБИОЗА (НА МОДЕЛИ ВАГИНАЛЬНОГО БИОТОПА)
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, Оренбург
Цель. Изучение продукции бактериальных про- и антиоксидантов в вагинальном биотопе и анализ их роли в регуляции механизмов гомеостаза симбиоза. Материалы и методы. Исследовали продукцию пероксида водорода, ингибиторов каталазы и антиоксидантов у бактерий, выделенных от 63 женщин с эубиозом влагалища и у 53 — с дисбиозом. Продукцию про- и антиоксидантов регулировали лактатом, летучими жирными кислотами, полиаминами и экзополисахаридами Lactobacillus plantarum и Corynebacterium minutissimum, бактерицид-ность метаболитов пероксидпродуцирующих лактобацилл усиливали добавлением ионов железа (II). Результаты. Для состояния эубиоза отмечен высокий уровень продукции проок-сидантов и антиоксидантов, а их соотношение близко к единице, для биотопов с дисбиозом характерно многократное преобладание уровня микробных антиоксидантов над прооксидан-тами. Пероксидпродуцирующие симбионты являются важным компонентом системы генерации гидроксильных радикалов, которые являются высокоэффективным дезинфектантом широкого спектра действия. Заключение. Поддержание баланса продукции про- и антиоксидантов симбионтами определяет гомеостаз симбиоза вагинального биотопа. Выявленная высокая биоцидная активность гидроксильных радикалов, образующихся из пероксида водорода нормофлоры за счет создания оптимальных условий для их генерации путем подбора соответствующих концентраций ионов железа (II) и Н2О2, открывает перспективы разработки новых способов дезинфекции.
Журн. микробиол., 2014, № 3, С. 9—15
Ключевые слова: антиоксиданты, активные формы кислорода, бактерии, вагинальный биотоп, гидроксильный радикал, дезинфекция, лактобациллы, пероксид водорода, прооксиданты, симбиоз
O.V.Bukharin, A.V.Sgibnev, S.V.Cherkasov
THE ROLE OF PRO- AND ANTIOXIDANTS OF MICROORGANISMS IN REGULATION OF SYMBIOSIS HOMEOSTASIS MECHANISMS (ON THE MODEL OF HUMAN VAGINAL BIOTOPE)
Research Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, Orenburg, Russia
Aim. Study the production ofbacterial pro- and antioxidants in vaginal biotope and analysis of their role in regulation of symbiosis homeostasis mechanisms. Materials and methods. Hydrogen peroxide, catalase inhibitors and antioxidant production in bacteria isolated from 63 women with vaginal eubio-sis and 53 — with dysbiosis were studied. Production of pro- and antioxidants was regulated by lactate, volatile fatty acids, polyamines and Lactobacillus plantarum and Corynebacterium minutissimum polysaccharides, metabolite bactericidity of peroxide producing lactobacilli was enhanced by addition of iron (II) ions. Results. A high level of pro- and antioxidant production was noted for eubiosis state, and their ratio was close to 1, for biotopes with dysbiosis a multiple predominance of microbial antioxidant levels over pro-oxidants was characteristic. Peroxide producing symbionts are an important component
of system ofgeneration ofhydroxyl radicals that are highly effective wide specter disinfectants. Conclusion. Maintenance of balance of pro- and antioxidant production by symbionts determined vaginal biotope symbiosis homeostasis. The detected high biocidic activity of hydroxyl radicals that are formed from hydrogen peroxide of normoflora through the creation of optimal conditions for their generation by selection of the respective concentrations of iron (II) ions and H2O2 opens perspective of development of novel disinfection methods.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 3, P. 9—15
Key words: antioxidants, active oxygen forms, bacteria, vaginal biotope, hydroxyl radical, disinfection, lactobacilli, hydrogen peroxide, pro-oxidants, symbiosis.
ВВЕДЕНИЕ
Симбиозы в биотопах тела человека (ассоциации между бактериями, грибами и многоклеточным организмом) являются уникальными системами для изучения взаимоотношений между различными видами, обусловленными выработкой разнообразных химических соединений [3]. Одними из таких химических соединений являются активные формы кислорода, в частности пероксид водорода, продуцируемый представителями нормальной микрофлоры вагинального биотопа — лактобациллами [2, 13].
Активные формы кислорода способны разнонаправленно модулировать характеристики бактерий, что влечет за собой изменение характера их взаимодействия друг с другом, в том числе и с организмом хозяина.
Известно, что продукция иммунными клетками хозяина активных форм кислорода блокирует передачу сигнала пептидного аутоиндуктора у Staphylococcus aureus [14], ускоряя элиминацию патогена. Также установлено, что продуцируемый лактобациллами пероксид водорода стимулирует синтез клетками хозяина антимикробных веществ и потенцирует их эффективность, усиливает рост и антагонистическую активность нормальной микрофлоры [1, 2].
Тем не менее, неясной остается роль продуцируемых микросимбионтами про-оксидантов и их функциональных антагонистов — антиоксидантов в регуляции механизмов гомеостаза симбиоза на примере вагинального биотопа, что и определило цель настоящего исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследовано 116 образцов отделяемого из заднего свода влагалища 63 женщин с эубиозом влагалища, 53 — с дисбиозом, взятых универсальным зондом и высеянных на селективные питательные среды не позднее 2 часов с момента взятия материала. Исследуемый материал засевали на плотные питательные среды: 5% кровяной агар, 20% сывороточный агар, среду Эндо, MRS-агар (Sifin, Германия) в соответствии с рекомендациями [11] и инкубировали в микроаэрофильных условиях при 37°C в течение 24 — 48 часов. Выделенные штаммы идентифицировали общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств [9]. Оценку микроэкологического состояния биотопа проводили согласно [3].
В качестве тест-штаммов использовали клинические изоляты S.aureus и Escherichia coli из коллекции ИКВС УрО РАН.
Наличие метаболитов с прооксидантными (пероксид водорода и ингибиторы каталазы) и антиоксидантными свойствами (общая антиоксидантная активность и способность снижать бактерицидность гидроксильных радикалов) определяли в фильтратах культуральных жидкостей исследуемых микроорганизмов (0,22 ^м, Millipore).
Способность лактобацилл продуцировать Н2О2 определяли ранее описанным способом [1], продукцию ингибиторов каталазы — по снижению уровня каталазной активности тест-штамма S.aureus ATCC 6538P [5].
Общую антиоксидантную активность бактериальных метаболитов определяли с использованием 2,2-дифенил-1-пикрилгидрозила, в качестве положительного контроля использовали Тролокс™ [12] и выражали в условных единицах (у.е.). Способность к снижению бактерицидной активности гидроксильных радикалов определяли, как описано ранее [10]. Внеклеточные полисахариды лактобацилл и коринебактерий осаждали согласно [8].
Продукцию про- и антиоксидантов у микроорганизмов регулировали добавлением лактата, ацетата, пропионата, бутирата, аскорбата, триметиламина, этилендиами-на, спермина, пероксида водорода в среду культивирования до конечной концентрации 1мкМ/мл и выделенных из культуральных жидкостей экзополисахаридов в концентрациях с антиоксидантной активностью, эквивалентной 1 мкМ аскорбата.
Бактерицидную активность гидроксильных радикалов, образующихся из пероксида водорода, продуцируемого лактобациллами, оценивали с использованием ранее описанного метода [4].
Информативность присутствия про- и антиоксидантов для оценки микроэкологического состояния биотопа определяли с использованием методики неоднородной последовательной процедуры [7], включающей в себя: подготовку перечня признаков; накопление наблюдений с достоверной верификацией диагноза осложнения; распределение частот признаков для дифференцируемых групп; определение отношения вычисленных из частот вероятностей, с которыми признак наблюдался у разделяемых групп; вычисление диагностических коэффициентов; вычисление информативности признаков; распределение признаков в порядке убывания их информативности; выбор пороговых значений суммы диагностических коэффициентов; проверку слепым методом полученной диагностической таблицы на случайной выборке и вынесение решения о принадлежности или непринадлежности биотопа к группе эубиоза или дисбиоза. Сумму диагностических коэффициентов (ДК), выраженную в условных единицах, использовали для оценки уровня продукции про- и антиоксидантов в биотопе.
Для оценки достоверности различий между опытными и контрольными группами использовался критерий Манна-Уитни, для сравнения частот встречаемости использовали критерий согласия Пирсона (%2) [6]. В качестве минимально допустимого использовали уровень значимости р<0,05.
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
В результате исследования установлено, что уровень продукции пероксида водорода лактобациллами, выделенными от женщин с эубиозом влагалища, находился в диапазоне 1,5+0,3 — 6,4±0,7 мМ и был существенно выше, чем при дисбиозе — 0,4±0,1
- 2,1+0,4 мМ (р<0,01).
Способность ингибировать каталазу у микроорганизмов, выделенных при эубио-зе, встречалась в 36 — 94% случаев, тогда как при дисбиозе — в 8 — 43% (р<0,01).
Снижение бактерицидного действия гидроксильных радикалов внеклеточными метаболитами у микроорганизмов, выделенных при эубиозе, встречалось в 59 — 96% случаев, при дисбиозе — в 14 — 46% (р<0,01).
Уровень общей антиоксидантной активности (ОАА) у микроорганизмов, выделенных при эубиозе, составил 4,8+0,5 — 9,7+0,4 у.е., тогда как при дисбиозе — 1,8+0,2
— 3,9+0,8 у.е. (р<0,01).
Таким образом, можно отметить, что микроорганизмы, выделенные от женщин с эубиозом влагалища, в большей мере обладали способностью продуцировать про- и антиоксиданты в сравнении с дисбиотическими изолятами.
В итоге применения неоднородной последовательной процедуры распознавания образцов было выяснено, что исследуемые биотопы, дифференцированные на 2 группы по наличию или отсутствию в них микроэкологических нарушений (эубиоз — группа I и дисбиоз — группа II), можно также подразделять и по наличию или отсут-
Наличие признака Диапазон Частота ДК Информативность
I II
Продукция Н2О2 >1,8 мМ + 58 9 7,34 6,58
— 5 44 -10,2
Сумма 63 53
Ингибирование каталазы + 61 18 4,55 5,57
на 20% и более — 2 35 -13,2
Сумма 63 53
ОАА>5,2 у.е. + 52 7 7,96 5,17
— 11 46 -6,96
Сумма 63 53
Более 1 изолята, продуци- + 48 22 2,64 1,13
рующего прооксиданты — 15 31 -3,90
Сумма 63 53
Более 1 изолята, продуци- + 39 28 0,69 1,07
рующего антиоксиданты — 24 25 -0,93
Сумма 63 53
Примечание. + Присутствие маркера в биотопе, — отсутствие.
ствию в них представителей Информативность по мере убывания маркеров — признаков продукции норМалъной микрофлоры про- и антиоксидантов бактериями для оценки микроэкологического
статуса биотопа
способных продуцировать про- и антиоксиданты в определенном диапазоне концентрации.
Наиболее значимыми признаками, определяющими состояние биотопа в порядке убывания, оказались: продукция лактоба-циллами пероксида водорода в концентрации более 1,8 мМ, синтез ингибиторов каталазы, образование веществ, снижающих бактерицидный эффект гидро-ксильных радикалов, одновременное присутствие в вагинальном биотопе двух и более штаммов, продуцирующих прооксиданты или антиоксиданты (табл.).
Анализ полученных данных позволяет утверждать, что одновременное присутствие в биотопе микроорганизмов с высоким уровнем продукции про- и антиоксидантов является признаком эубиоза, а дисбиотические состояния сопровождаются смещением баланса про- и антиоксидантов (рис.1). Выяснено, что состоянию эубиоза и дисбиоза присущи свои соотношения уровня продукции про- и антиоксидантов. Так, для биотопов с эубиозом была характерна продукция антиоксидантов в диапазоне 3,65 — 9,8 у.е. при среднем значении 7,8+0,18 у.е., а для биотопов с дисбиозом диапазон был шире — 0,1 — 9,5 у.е., и средний уровень составил 2,2+0,31 у.е. (р<0,05). Среднее значение уровня продукции прооксидантов в биотопах с эубиозом было выше, чем при дисбиозе: 7,7+0,17 против 1,8+0,2 у.е. (р<0,01), а диапазон соответственно составлял 4,9 — 9,9 и 0,16 — 6,5 у.е.
В целом следует отметить, что соотношение уровня продукции антиоксидантов к прооксидантам при эубиозе составляло в среднем 1,03+0,2 у.е., тогда как при дисбиозе — 4,2+0,9 у.е. (р<0,01).
Следует отметить, что для биотопов с эубиозом характерно наличие микроорганизмов с высоким уровнем продукции и прооксидантов, и антиоксидантов, а их соотношение близко к единице, тогда как для дисбиоза характерно многократное превышение количества антиоксидантов над прооксидантами. Все это свидетельствует о том, что баланс про- и антиоксидантов обеспечивает регуляцию и поддержание стабильности биоценоза.
Ряд веществ оказывал стимулирующее влияние на продукцию пероксида водорода лактобациллами. Продукция перок-сида в контроле составила 3,4+0,8 мМ, а после добавления лактата увеличивалась до 5,4+0,3 мМ (р<0,05), аскорбата —
Рис. 1. Связь между продукцией про- и антиоксидантов микроорганизмами и состоянием микробиоценоза.
4,1±0,7 мМ (p<0,05), экзополисахаридов L. plantarum и C. minutissimum — 4,8±0,4 (p<0,05) и 4,2±0,6 мМ (p<0,05), соответственно. Напротив, добавление к культуре-продуценту ацетата приводило к угнетению пероксидпродукции до 1,9±0,13 мМ (p<0,05), пропионата — до 1,62±0,11 мМ (p<0,01), этилендиамина — до 1,17±0,08 мМ (p<0,01), триметиламина — до 1,16±0,08 мМ (p<0,01), бутирата — до 1,13±0,08 мМ (p<0,01), пероксида водорода — до 0,98±0,07 (p<0,01) мМ и спермина — до 0,72±0,05 мМ (p<0,001).
Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что продукция пероксида водорода лактобациллами стимулируется лактатом и антиоксиданта-ми — аскорбатом и экзополисахаридами представителей нормальной микрофлоры L. plantarum и C. minutissimum. Напротив, вещества, присутствующие в биотопе при дисбиотических нарушениях — амины (триметиламин, этилендиамин, спермин) и летучие жирные кислоты (уксусная, пропионовая и масляная), значительно угнетали продукцию пероксида.
При изучении влияния этих же соединений на общую антиоксидантную активность лактобацилл было установлено, что по сравнению с контролем (12,8±0,9 у.е) пероксид водорода стимулировал ОАА до 22,4±1,5 у.е. (p<0,05), лактат — до 18,9±1,1 у.е. (p<0,05). Существенное снижение общей антиоксидантной активности отмечено после добавления к продуценту спермина — 6,4±0,7 у.е. (p<0,05), пропионата — 6,3±0,7 (p<0,05), этилендиамина — 6,0±0,8 (p<0,05), триметиламина — 5,9±0,6 (p<0,05), бутирата — 5,4±0,5 (p<0,05), аскорбата — 4,1±0,3 у.е. (p<0,05).
Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что продукция антиоксидантов стимулируется факторами среды, наличие которых ассоциировано с состоянием эубиоза в женском репродуктивном тракте, такими как пероксид водорода и лактат, и угнетается летучими жирными кислотами и аминами, наличие которых характерно для дисбиоза.
Для доказательства важной роли про- и антиоксидантов в поддержании нормального экологического состояния вагинального биотопа оценивали бактерицидность гидроксильных радикалов, образующихся из пероксида водорода лактобацилл. Установлено, что при добавлении ионов железа (II) к метаболитам пероксидпроду-цирующих лактобацилл, согласно определенным нами ранее принципам создания оптимальных условий для генерации гидроксильных радикалов [4], выживаемость клеток тест-штаммов S.aureus (Гр+) и E.coli (Гр-) значительно снижалась (рис. 2). Метаболиты лактобацилл, содержащие пероксид водорода в диапазоне концентрации 0 — 5,4 мМ сами по себе не оказывали бактерицидного эффекта на S. aureus и E.coli. Однако добавление к метаболитам лактобацилл 5 мкМ раствора сульфата железа (II) приводило к снижению выживаемости бактерий. Так, при совместном действии метаболитов лактобацилл и сульфата железа (II) численность выживших клеток E.coli уменьшалась с 4,4±0,15 до 1,6±0,1 lg КОЕ/мл при содержании пероксида водорода в диапазоне 1 — 5,4 мМ, тогда как в контроле этот показатель составил 5,5±0,21 lg КОЕ/ мл. Аналогичные результаты были получены и для S. aureus: численность клеток в контроле составила 5,2±0,2 lg КОЕ/мл, а при совместном влиянии сульфата железа (II) и метаболитов лактобацилл уменьшалась с 4,6±0,3 до 2,2±0,07 lg КОЕ/мл по мере возрастания концентрации пероксида водорода с 1 по 5,4 мМ.
Рис. 2. Выживаемость S. aureus и E.coli в системе генерации гидроксильных радикалов в зависимости от содержания пероксида водорода, продуцируемого лактобациллами.
Таким образом, несмотря на низкую бактерицидность продуцируемого лакто-бациллами пероксида водорода, показанная нами высокая биоцидная активность гидроксильных радикалов позволяет рассматривать пероксидпродуцирующие микроорганизмы как компонент системы, генерирующей высокоэффективный дезин-фектант широкого спектра действия [4].
ОБСУЖДЕНИЕ
Проведенные исследования позволили установить, что изучаемые биотопы, дифференцированные с использованием критериев оценки микроэкологических нарушений на 2 группы — эубиоз и дисбиоз, различаются и по наличию или отсутствию в них представителей нормофлоры, способных продуцировать про- и антиоксиданты в высоких концентрациях. Однако если для состояния эубиоза отмечен высокий уровень продукции и прооксидантов, и антиоксидантов, а их соотношение близко к единице, то для биотопов с микроэкологическими нарушениями характерно многократное преобладание уровня антиоксидантов над прооксидантами, что, по-видимому, имеет диагностическое значение в клинике.
Учитывая, что пероксид водорода стимулирует выработку клетками хозяина антимикробных веществ и потенцирует их эффективность, усиливает рост и антагонистическую активность нормальной микрофлоры [1, 2], становится очевидной универсальная роль прооксидантов в гомеостазе симбиозов. Подтверждением тому служит выявленное нами существенное усиление биоцидного эффекта пероксида водорода, продуцируемого лактобациллами, ионами железа (II) — явление, которое, по-видимому, характерно и для других симбиозов, где присутствуют пероксидпродуци-рующие симбионты.
С другой стороны, нами было показано, что вещества, ассоциированные с состоянием дисбиоза, угнетали продукцию пероксида водорода лактобациллами, обеспечивающими защиту биотопа [3, 13]. Это явление угнетения пероксидпродукции, по-видимому, определяет возникновение дисбиотических нарушений, однако остается открытым вопрос о первопричинах усиленного синтеза антиоксидантов симбионтами.
Выявленная значительная стимуляция продукции пероксида водорода экзополи-сахаридами представителей нормофлоры L. р1аи1агаш и С. ттиЙ88тит служит доказательством того, что наличие про- и антиоксидантов в микробном сообществе в немалой степени определяется окружением.
В целом, следует отметить, что полученные в настоящем исследовании результаты, расширяя понимание роли про- и антиоксидантов в регуляции механизмов го-меостаза симбиозов, открывают перспективы их практического использования для решения проблем антимикробной стратегии, в частности, при разработке технологий нормализации симбиотического сообщества путем искусственного изменения соотношения про- и антиоксидантов.
Таким образом, следует заключить, что стабильное существование симбиотиче-ских систем может быть обеспечено за счет поддержания баланса продукции про- и антиоксидантов участниками симбиоза, а выявленные закономерности ответных реакций симбионтов на изменения баланса про- и антиоксидантов расширяют представления о механизмах формирования и причинах многообразия типов симбиозов.
Вместе с тем, оценивая полученные результаты, следует отметить, что выявленная в условиях симбиотических взаимоотношений при инфекции высокая биоцидная активность гидроксильных радикалов, образующихся из пероксида водорода нор-мофлоры за счет создания оптимальных условий для их генерации путем подбора соответствующих концентраций ионов железа (II) и Н2О2 [4], открывает перспективы разработки новых способов дезинфекции.
Работа выполнена при поддержке гранта программы Президиума РАН № 5 «Фундаментальные науки — медицине», проект № 12-П-4-1015.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бухарин О.В., Кремлева Е.А., Сгибнев А.В. Роль ассоциативных микросимбионтов в функционировании ассоциативного симбиоза. Журн. микробиол. 2012, 6: 89-95.
2. Бухарин О.В., Кремлева Е.А., Сгибнев А.В., Черкасов С.В. Участие доминантной микрофлоры в механизмах защиты вагинального биотопа женщин. Журн. микробиол. 2013, 6: 100-104.
3. Бухарин О.В., Лобакова Е.С., Немцева Н.В., Черкасов С.В. Ассоциативный симбиоз. Екатеринбург, УрО РАН, 2007.
4. Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В. Сравнительная характеристика антимикробных эффектов гидроксильных радикалов и пероксида водорода. Дезинфекционное дело. 2013, 3: 38-42.
5. Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Иванов Ю.Б. Изменение активности каталазы Staphylococcus aureus ATCC 6538Р под влиянием метаболитов микроорганизмов, выделенных из различных экотопов. Микробиология. 2002, 71 (2): 183-186.
6. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., Практика, 1998.
7. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., Медицина, 1978.
8. Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И., Чижов О.С., Шибаев В.Н. Химия углеводов. М., Химия, 1967.
9. Определитель бактерий Берджи. Под ред. Хулта Дж., Крига Н., Снита П. и др. М., Мир, 2001.
10. Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Бухарин О.В. Механизмы протективного действия внеклеточных метаболитов бактерий в снижении бактерицидного эффекта гидроксильных радикалов. Журн. микробиол. 2009. 4: 26-28.
11. Фельдман Ю.М., Маханева Л.Г., Шапиро А.В., Кузьменко В.Д. Количественное определение бактерий в клинических материалах. Лабораторное дело. 1984, 10: 616-619.
12. Brand-Williams W, Cuvelier M.E., Berset C. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity. Food. Sci. Technol. 1995, 28: 25-30.
13. Klebanoff S.J., Hillier S.L., Eschenbach D.A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H2O2-generating lactobacilli. J. Infect. Dis. 1990, 164: 94-100.
14. Rothfork J.M., Timmins G.S., Harris M.N. et al. Inactivation of a bacterial virulence pheromone by phagocyte-derived oxidants: New role for the NADPH oxidase in host defense. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2004, 101 (38): 13867-13872.
Поступила 20.01.14
Контактная информация: Сгибнев А.В.,
460000, Оренбург, ул. Пионерская, д. 11, р.т. (3532)77-54-17
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Н.В.Гора1, Л.В.Козлов1, О.В.Логунов1, О.А.Башкина2, О.В.Рубальский2, В.А.Алешкин1
АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ B И D АЛЬТЕРНАТИВНОГО ПУТИ КОМПЛЕМЕНТА У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ
Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского, 2Астраханская государственная медицинская академия
Цель. Разработать иммуноферментные методы определения функциональной активности факторов B и D альтернативного пути комплемента для решения диагностических и прогностических задач при лечении больных. Исследовать активность этих факторов в сыворотках крови детей, больных атопическим дерматитом, до и после лечения для выяснения роли альтернативного пути комплемента в патогенезе этого заболевания. Материалы и методы. Дети в возрасте от 6 месяцев до 18 лет, больные атопическим дерматитом, обследованы на функциональную активность факторов B и D в сыворотке крови до и после лечения разработанными методами. Результаты. Разработанные методы иммуноферментного анализа для определения функциональной активности факторов B и D альтернативного пути комплемента показали высокую чувствительность и надежность. У детей с атопическим дерматитом активность факторов B и D была до лечения существенно ниже нормы. После лечения активность достоверно возрастала ф<0,004), причем в случае фактора D — до нормы. Заключение. Полученные в ра-
