CC BY
188
ЭЛЕКТРОННЫЙ ЖУРНАЛ
Оп-1 I пе версия жу рнала на сайте
http://www.elmag.uran.ru
ОРЕНБУРГСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА УрО РАН
Ьуеаепа ШегБатоп (ЕБрег, 1784) Червонец блестящий Шовкун Д.Ф.
»
ОРЕНБУРГСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР УрО РАН
© И.В. Гладышева, С.В. Черкасов, 2019 УДК 579.61
И.В. Гладышева, С.В. Черкасов
КОРИНЕБАКТЕРИИ ВАГИНАЛЬНОГО МИКРОБИОМА - ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПАТОГЕНЫ ИЛИ ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ПРОБИОТИКИ?
Оренбургский федеральный исследовательский центр УрО РАН (Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН), Оренбург, Россия
Род Corynebacterium содержит более 100 видов, подавляющее большинство которых было выделено от человека. Обычный подход к рассмотрению данной группы микроорганизмов в качестве возбудителей инфекции у людей в последнее время утратил свою актуальность. Внимание исследователей все больше привлекают недифтерийные или непатогенные коринебактерии - основные представители нормальной флора кожи и слизистых оболочек человека. В этом обзоре мы суммировали литературные данные и результаты наших собственных исследований биологических свойств недифтерийных коринебакте-рий, выделенных из женского репродуктивного тракта. Мы полагаем, что non-diphtheriae corynebacterium, присутствующие в женском репродуктивном тракте, обладают высоким адаптационным потенциалом. Благодаря уникальным биологическим свойствам, эти микроорганизмы взаимодействуют с организмом хозяина и другими представителями микро-биоты влагалища, что позволяет им существовать как у женщин с вагинальным эубиозом, так и у женщин с неспецифическими инфекционными заболеваниями влагалища. Способность non-diphtheriae corynebacterium продуцировать органические кислоты, снижая таким образом pH, способность стимулировать выработку противовоспалительных цитоки-нов, усиливать антагонистическую активность пероксид-продуцирующих лактобацилл в отношении условно-патогенных микроорганизмов, а также способность разрушать биопленки патогенных микроорганизмов указывает на важную роль non-diphtheriae corynebacterium в формировании эубиоза и, вероятно, определяет ключевую роль недифтерийных коринебактерий в защите влагалищного биотопа от инфекции у тех женщин, у которых нет лактобацилл. Полученные данные открывают перспективы для будущих фундаментальных медицинских исследований по изучению отдельных штаммов non-diphtheriae corynebacterium как перспективных пробиотических микроорганизмов.
Ключевые слова: Corynebacterium spp., вагинальный микробиом, адгезия, межмикробные взаимодействия, пробиотики.
I. V. Gladysheva, S. V. Cherkasov
CORINEBACTERIA OF VAGINAL MICROBIOM - POTENTIAL PATHOGENS OR PERSPECTIVE PROBIOTCS?
Orenburg Federal Research Center, UB RAS (Institute of Cellular and Intracellular Symbiosis, UB RAS), Orenburg, Russia
The genus Corynebacterium contains more than 100 species, the vast majority of which have been isolated from human. The usual approach to consider this group of microorganisms alone as the causative agents of infection in humans has recently lost its relevance. The attention of researchers has been shifted to non-diphtheriae or non-pathogenic corynebacteria, whose major components are the normal flora of human skin and mucous membranes. In this review, we summarized the literature data and the results of our own research on the biological properties of the corynebacteria isolated from the female genital tract. We believe, that the non-diphtheriae corynebacterium present in the female genital tract has a high adaptive potential. Due to the
unique biological properties, these microorganisms interact with the host organism and other representatives of the vaginal microbiota, which allow them to exist both in women with vaginal eubiosis and in women with nonspecific infectious diseases of the vagina. The ability of non-diphtheriae corynebacterium to produce organic acids, thereby reducing pH, stimulate the production of antiinflammatory cytokines, enhance the antagonistic activity of lactobacilli producing hydrogen peroxide against opportunistic microorganisms, as well as the ability to destroy biofilms of pathogenic microorganisms points to the important role of these microorganisms in the formation of eubiosis and, probably, determines the key role of non-diphtheriae corynebacte-ria in protecting the vaginal biotope from infection in those women who do not have lactobacilli. The data opens prospects for future fundamental medical research to study individual strains of non-diphtheriae corynebacterium as promising probiotic microorganisms.
Key words: Corynebacterium spp., vaginal microbiome, adhesion, microbial interactions, probiotics.
Введение
Вагинальный микробиоценоз - открытая сложная многокомпонентная система, находящаяся в состоянии динамического равновесия. Основой данной системы служит феномен колонизационной резистентности, который реализуется благодаря эволюционно сложившимся относительно устойчивым симбиотическим взаимодействиям между хозяином (макроорганизмом) и доминантными микроорганизмами - лактобациллами.
Лактобактерии, продуцируют пероксид водорода, лактат, органические кислоты, лизоцим и ряд других антагонистически активных веществ, тем самым подавляют рост и препятствуют размножению облигатных анаэробов, условно-патогенных микроорганизмов [1-3].
В то же время, используя культурально-независимые методы, в нескольких исследованиях продемонстрировано, что у значительной доли (733%) здоровых женщин во влагалище отсутствуют лактобациллы [4, 5]. Вагинальная микробиота представлена другими молочно-кислыми бактериями - Atopobium vaginae, Megasphaera species, Leptotrichia species и Corynebacterium species, за счет которых поддерживается колонизационная резистентность [6]. Хотя структура сообществ микроорганизмов в разных популяциях может различаться, здоровье женщины может поддерживать при условии, что функция этих сообществ, то есть производство молочной кислоты, сохраняется. Следовательно, отсутствие лактобацилл или присутствие некоторых микроорганизмов, таких как G. vaginalis, или различных видов Peptostreptococcus, Prevotella, Pseudomonas, Streptococcus и/или
Corynebacterium, не является патологическим состоянием [5, 7]. В таком случае, вероятно, именно эти микроорганизмы играют роль в защите влагалищного биотопа от патогенных микроорганизмов.
В данном обзоре мы обобщили литературные данные и результаты собственных исследований относительно биологических свойств микроорганизмов рода Corynebacterium, выделенных из репродуктивного тракта женщин, и попытались оценить их функциональную роль в занимаемом биотопе.
1.1. Общая характеристика рода Corynebacterium.
Коринебактерии имеют форму прямых или слегка изогнутых палочек с заостренными иногда булавовидными концами, 0,3-0,8*1,5-8,0 мкм; характерным признаком этих бактерий является полиморфизм - наличие, помимо типичных палочек, длинных, коротких, ветвящихся форм [8]. Как правило, одиночные или в парах, часто V-образной конфигурации, либо в стопках (палисад) из нескольких параллельно лежащих клеток. Грамположительные, хотя некоторые клетки окрашиваются неравномерно (вид «четок»). Внутри клеток, как правило, образуются метахроматиновые гранулы полиметафос-фата. Неподвижные, неспорообразущие, некислотоустойчивые, каталазопо-ложительные. По типу дыхания одни из них - облигатные аэробы, другие -факультативные анаэробы либо строгие анаэробы.
Оптимальная температура для роста большинства видов коринебактерий 35-37°С, для некоторых видов оптимальное значение рН 4,3-4,5, для других рН=7,6-7,8. Для выращивания используют сывороточные среды и среды с тел-луритом калия: кровяно-тeллуритовые, сывороточно-теллуритовые, для некоторых видов необходимо наличие в среде Твин-80.
В зависимости от видовой принадлежности коринебактерии на средах образуют колонии круглые, выпуклые, гладкие (редко шероховатые), матовые или слегка блестящие, сероватые, беловато-кремовые до светло-желтых, желтые; некоторые штаммы образуют черный пигмент [9]. О.Н. Костюковская с соавт. (1992) и З.М. Мартикайнен (1996) классифицировали коринебактерии, выделенные из репродуктивного тракта женщин, независимо от микроэкологического статуса, на «макрокоринеформы» и «микрокоринеформы» [10, 11]. «Макрокоринеформы» образуют чаще средние и крупные колонии диаметром 1 -4 мм, непрозрачные, серые или кремовые (иногда желтоватые), чаще с неровными, нередко «ажурными» краями и выпуклым в виде «шарика» центром, диаметром 0,5 мм, матовые, сухие, ломкие, крошащиеся (R-формы) или
D0I:10.24411/2304-9081-2019-13022 3
серые, гладкие с ровными краями и белым выпуклым центром, блестящие, влажные, немного вязкие (S-форма). «Микрокоринеформы» - мелкие, диаметром 0,5-1,0 мм, белого и серого цвета с серебристым оттенком, выпуклые с ровными краями. «Макрокоринеформы» авторы отнесли к представителям нормальной резидентной микрофлоры влагалища. Типичными представителями, по данным З.М. Мартикайнен, были C. aquaticum и C. minutissimum. «Микрокоринеформами» условно обозначали коринебактерии C. genitalium и C. pseudogenitalium.
Коринебактерии относятся не только к традиционно «трудноизолируе-мой», но и «труднодифференцируемой», сложной в таксономическом отношении, группе микроорганизмов. По данным литературы в вагинальном биотопе выделено около 20 видов непатогенных коринебактерий (табл.).
1.2. Взаимодействие бактерий рода Corynebacterium spp. с организмом человека.
Адгезия бактерий к эпителиальным клеткам - важный фактор колонизации слизистых оболочек. Сегодня мало известно об адгезивной способности влагалищных изолятов коринебактерий и механизмах, через которые эти микроорганизмы взаимодействуют с эпителиальными клетками. В исследованиях, проведенных in vitro, было показано, что коринебактерии обладают различной адгезивной способностью в зависимости от состояния вагинальной микробной экосистемы и физиологического состояния женщины.
О.В. Одинцова, изучая адгезивную активность коринебактерий, выделенных из репродуктивного тракта женщин, на клетках вагинального эпителия, установила, что штаммы, выделенные как у здоровых женщин (С. aquaticum и С. jeikeium var. genitalium), так и у женщин с воспалительными заболеваниями (С. kutscheri и С. jeikeium var. genitalium) обладали небольшой адгезивной активностью. Однако штаммы С. aquaticum, С. jeikeium var. genitalium, В. vitarumen, С. minutissimum и С. xerosis, выделенные у родильниц, обладали высокой адгезивной активностью к клеткам вагинального эпителия. Автор предположила, что в раннем послеродовом периоде на фоне восстановления вагинального микробиоценоза происходит усиление рецепторной активности микроорганизмов рода Corynebacterium, которое необходимо для осуществления полноценной колонизации вагинального биотопа [12].
Таблица. Видовой спектр микроорганизмов рода СогупеЬа^епит spp., выделенных из репродуктивного тракта женщин
Виды Литературный источник
C. amycolatum Абдалкин М.Е. и соавт., 2011; Черкасов С.В. и соавт. 2010; Харсеева Г.Г. и соавт., 2012
С. aquaticum Мартикайнен З.М., 1997; Одинцова О.В., 2002; Константинова О.Д., 2004
C. aurimucosum Trost E. et al., 2010
С. bovis Мартикайнен З.М., 1997; Одинцова О.В., 2002; Черкасов С.В. и соавт. 2010
C. glucuronolyticum Devriese L.A. et al., 2000; Краева Л.А. и соавт. 2007
C. coyleae Funke G. et al., 1997; Черкасов С.В. и соавт. 2010
C. freneyi Funke G. et al., 2008
С. jeikeium var. genitalium Костюковская О.Н. и соавт. 1992; Мартикайнен З.М. 1997; Одинцова О.В. 2002;
С. jeikeium var. pseudogenitalium Furness G. et al., 1979; Костюковская О.Н. и со-авт.1992; Мартикайнен З.М. 1997; Одинцова О.В. 2002;
C. lipophiloflavum Funke G. et al., 1997
C. kutscheri Костюковская О.Н. 1992; Одинцова О.В. 2002;
C. minutissimum Мартикайнен З.М., 1997; Сгибнев А.В., 2000; Одинцова О.В., 2002; Абдалкин М.Е. и соавт., 2011; Черкасов С.В. и соавт. 2010
C. nigricans Shukla S.K. et al., 2003
C. pseudodiphteriticum Одинцова О.В., 2002; Черкасов С.В. и соавт. 2010
C. pseudotuberculosis Одинцова О.В., 2002; Харсеева Г.Г. и соавт., 2012
C. renale Костюковская О.Н. и соавт. 1992; Одинцова О.В. 2002; Черкасов С.В. и соавт. 2010
C. striatum Черкасов С.В. и соавт. 2010; Харсеева Г.Г. и соавт., 2012
C. tuberculostearicum (lipophile) (includes most CDC group G-2 strains) Hinic V. et al., 2012
C. xerosis Костюковская О.Н. и соавт. 1992; Краева Л.А. и соавт. 2007; Одинцова О.В., 2002; Константинова О.Д., 2004; Ивандеева О.И., 2009; Харсеева Г.Г. и соавт., 2012
C. urealyticum Краева Л.А. и соавт. 2007; Черкасов С.В. и соавт. 2010; Абдалкин М.Е. и соавт., 2011
Ранее нами была описана способность влагалищных изолятов корине-бактерий адгезироваться к фибронектину человека [13]. Наиболее выраженной способностью связывать фибронектин человека обладали штаммы С. ттШззтыт и С. атуевШит, выделенные у здоровых женщин. Кроме того, было выявлено, что адгезия коринебактерий к фибронектину зависела от уровня рН и достигала наиболее высоких показателей при низких значениях этого фактора (рис. 1).
P< 0.05 significant; * p <0.01; ** p<0.05 -Wilcoxon test
Рис. 1. Влияние pH на адгезию Corynebacterium spp. к фибронектину.
Обозначения: по оси абсцисс - значение рН среды; по оси ординат: единицы оптической плотности (OD); Н - Corynebacterium spp., выделенные при эубиозе; § - Corynebacterium spp., выделенные при дисбиозе.
С одной стороны, высокую адгезивную способность коринебактерий к белкам межклеточного матрикса можно расценить как фактор патогенности, так как известно, что специфичность такого рода адгезии позволяет штаммам бактерий не только выживать в микробиоценозах, но и проявлять свои патогенные, а нередко и вирулентные свойства. Так, у Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes выявлен фибронектин связывающий белок, играющий ключевую роль в персистенции данных микроорганизмов и развитии инфекций у человека [14, 15]. С другой стороны, увеличение способности связывания фибронектина у вагинальных штаммов коринебактерий при низких значениях рН может играть роль в поддержании колонизационной резистентности вагинального биотопа. Похожие данные были получены при изучении адгезии вагинальных лактобактерий к фибронектину [16, 17]. Важно, что ко-ринебактерии, как и лактобациллы, благодаря продукции органических кис-
лот, сами поддерживают необходимый уровень рН [18].
Таким образом, создавая оптимальные условия для колонизации влагалищного биотопа, коринебактерии конкурируют за места адгезии с патогенные микроорганизмы, что, вероятно, играет важная роль в сохранении и поддержании эубиоза.
Кроме того, нами была дана оценка влияния различных абиотических и биотических факторов на адгезивную способность коринебактерий к фибро-нектину человека и вагинальным эпителиоцитам. В экспериментах было обнаружено, что под влиянием ультрафиолетового облучения, трипсина, ман-нозы и хлорамфеникола адгезивная способность коринебактерий к фиброн-ектину и вагинальным эпителиоцитам достоверно снижалась. Учитывая подавление адгезии у коринебактерий протеазами (в частности трипсином), хлорамфениколом (ингибитором синтеза белка) и углеводами (маннозой), было высказано предположение о том, что у исследуемых штаммов медиаторами адгезии выступают адгезины белковой природы, возможно лектины, что предполагает наличие адгезии коринебактерий к различным структурам на поверхности вагинального эпителия [13]. Фибронектин также может играть роль в адгезии коринебактерий к вагинальным эпителиоцитам.
Таким образом, полученные нами результаты показывают наличие на поверхности бактериальной клетки различных медиаторов адгезии, обеспечивающих адгезивную способность коринебактерий к вагинальным эпителиоцитам (рис. 2 и 3).
Рис. 2. Адгезия С. minutissimum к вагинальным эпителиоцитам.
Рис. 3 Адгезия С. amycolatum к вагинальным эпителиоцитам.
Способность коринебактерий адгезироваться к вагинальным эпителиоцитам и связывать белки межклеточного матрикса, в частности фибронектин, характеризует их как высокоадгезивные микроорганизмы. Данное свойство позволяет коринебактериям конкурировать за сайты адгезии с условно-патогенными микроорганизмами и существовать в вагинальной экосистеме как в условиях нормо-, так и патоценоза.
1.3. Влияние микроорганизмов рода Corynebacterium spp. на клетки иммунной системы человека.
Формируя микробиоценоз репродуктивного тракта женщины, корине-бактерии оказывают влияние на продукцию цитокинов вагинальными эпите-лиоцитами. Изучая эпителиально-бактериальные взаимодействия, Е.А. Крем-лева обнаружила, что изменение экспрессии цитокинов при взаимодействии эпителиоцитов с коринебактериями в эксперименте in vitro было во многом аналогично результатам взаимодействия с лактобациллами: умеренная стимуляция продукции IL-8, IL-6, IL-1b на фоне подавления продукции TNFa. Автор сделала заключение, что однонаправленное влияние лактобактерий и коринебактерий на изменение экспрессии цитокинов вагинальными эпите-лиоцитами позволяет рассматривать коринебактерии в качестве представителя нормофлоры. Кроме того, под влиянием метаболитов вагинальных эпите-лиоцитов происходило повышение антагонистической активности коринебактерий по отношению к S. aureus и E. coli с 9,9±0,5 до 40,9±1,3 и с 8,6±0,5 до 41,1±1,4% соответственно, что было выше по сравнению с влиянием эпи-
телиоцитов на антагонистическую активность лактобацилл [19].
1.4. Взаимодействие микроорганизмов рода Corynebacterium spp. с вагинальной микробиотой.
Колонизируя вагинальный биотоп, коринебактерии взаимодействуют с другими членами микробного сообщества. Их выделяют в ассоциациях с Lactobacillus spp, Staphylococcus epidermidis, S. haemolyticus, Enterococcus faecalis, E. faecium, E. durans, E. coli, а также с S. aureus, Gardnerella vaginalis, Klebsiella pneumoniae, Neisseria spp. и Candida albicans [20-22]. Анализ литературных источников выявил противоречивые данные об антагонистической активности коринебактерий.
З.М. Мартикайнен (1996) в серии опытов in vitro по выявлению возможного антагонизма между штаммами коринебактерий и штаммами S. epidermidis, E. coli, S. aureus, C. albicans, G. vaginalis, K. pneumoniae, выделенными из влагалища, а также референс-штаммами, показала, что ни в одном случае не было отмечено задержки роста тест-микробов. Автор предположила, что коринебактерии in vitro не проявляют антагонистических свойств по отношению к другим представителям вагинального микробиоценоза [11]. Г.Г. Харсеева (2012) при исследовании межбактериальных взаимодействий также установила, что штаммы C. non diphtheriae, выделенные из церви-кального канала, не обладали антагонистическим действием в отношении K. pneumoniae, E. coli, S. aureus и Pseudomonas aeruginosa [23]. Однако данные О.В. Одинцовой (2002) противоречили этому утверждению, поскольку было показано, что независимо от микроэкологического состояния биотопа различные виды коринебактерий проявляли антагонистическую активность по отношению к E. coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa, Proteus mirabilis, Р. vulgaris, S. aureus, E. faecalis, C. albicans, хотя частота и выраженность угнетения прироста тест-культур были вариабельны. У здоровых женщин антагонистически-активные штаммы преобладали среди доминирующих видов. Штаммы С. kutscheri в 50% случаев вызывали угнетение роста K. pneumoniae, а С. jeikeium var. genitatium и С. aquaticum в основном проявляли антагонизм в отношении E. coli, C. xerosis - в отношении S. aureus и E. faecalis. У женщин в раннем послеродовом периоде возрастала численность штаммов коринебактерий-антагонистов к S. aureus, E. faecalis, C. albicans. Антагонистическую активность проявляли С. aquaticum, С. jeikeium var. genitatium, C. minutissimum, C. pseudodiphtheriticum, C. renale. У женщин с воспалительными заболеваниями
D0l:10.24411/2304-9081-2019-13022 9
влагалища неспецифической этиологии наибольшее количество антагонистически активных штаммов коринебактерий зарегистрировано по отношению к E. faecalis, E.coli, S. aureus, C. albicans, P. aeruginosa, Р. mirabilis и Р. vulgaris. Наиболее выраженной антагонистической направленностью обладали виды C. minutissimum, С. kutscheri, С. jeikeium var. genitatium [12].
Ранее нами изучено влияние метаболитов Corynebacterium spp., изолированных из репродуктивного тракт здоровой женщины, на рост, биопленко-образование и на биопленки, сформированные в течение 24 часов, K.
pneumoniae, E. coli, P. aeruginosa и S. aureus [24]. Мы обнаружили, что тест-штаммы бактерий показали более медленный рост в культуральной среде, содержащей метаболиты коринебактерий (рис. 3-6).
с
<=>
»
a
о
0,5 -
0,4 -
0,3 -
0,2 -
0,1 -
0,0 -
control
С. m ïnutïssim ton ICIS 5 С. amycolatum ICIS 9 С. amycolatum ICIS 53 C. xer osis ICIS PP
~r
~r
~1
2 3 4 5 Incubation time (h)
Рис. 3. Рост Kl. pneumoniae в культуральной среде, содержащей метаболиты Corynebacterium strains.
Рис. 4. Рост E. coli в культуральной среде, содержащей метаболиты Corynebacterium strains.
0,6
0,0 -I-,-,-,-,-,-,-
1 2 3 4 5 6 7
Incubation time (h)
Рис. 5. Рост P. aeruginosa в культуральной среде, содержащей метаболиты Corynebacterium strains.
0=4
0,0 А-1-1-1-1-1-1-
12 3 4 5 6 7
Iurubatiou time (b)
Рис. 6. Рост S. aureus в культуральной среде, содержащей метаболиты Corynebacterium strains.
Кроме того, метаболиты всех исследуемых штаммов коринебактерий подавляли биопленкообразование и разрушали сформированные биопленки тест-культур. Более выраженное ингибирование биопленкообразования ко-ринебактерии оказывали на Kl. pneumoniae и S. aureus (рис. 7).
Обработка метаболитами коринебактерий сформированных биопленок Kl. pneumoniae, E. coli, P. aeruginosa и S. aureus, привела к разрушению биопленки. В большей степени этот эффект наблюдался при воздействии метаболитов исследуемых штаммов на предварительно сформированные биопленки S. aureus и P. aeruginosa. В меньшей степени метаболиты коринебак-
D0l:10.24411/2304-9081-2019-13022 11
терий влияли на предварительно сформированные биопленки Kl. pneumoniae and E. coli (рис. 8).
Рис. 7. Влияние метаболитов Corynebacterium Брр. на биопленкообра-зование бактериальных патогенов человека. Данные представляют собой среднее значение и SD трех независимых экспериментов, каждый в трехкратных повторностях.
ос «
tu
и -—
о
о.
а
о
90 80 70 60 50 40
IК.рпешпoniae coli ПР. aurigirtosae ЯS. aureus
а 30
20
10
£
С. amy eolation С. amycolatum С. minutissimum С. xerosis 1С IS 99 ICIS 9 ICIS 53 ICIS 5
Coryne bacterium strains
Рис. 8. Влияние метаболитов Corynebcicterium spp. иа сформированные биопленки (24 часа) бактериальных патогенов человека. Данные представляют собой среднее значение и SD трех независимых экспериментов, каждый в трехкратных повторностях.
Антагонистическая активность вагинальных изолятов коринебактерий к условно-патогенным микроорганизмам может быть связана с продукцией бактериоцинов, бактериоцин-подобных субстанций и биосурфактантов. Полученные результаты не противоречат исследованиям других авторов.
A. Kwaszewska et al. определили наличие бактериоцин-подобной субстанции у 90% исследуемых коринебактерий, выделенных с кожи пациентов. Спектр ее активности охватывал грам-положительные бактерии [25]. D. Dalili еt al. (2015) описали липопептид Coryxin y штамма C. xerosis NS5, изолированного из локтевой ямки здорового человека, который существенно подавлял адгезивную способность и биопленкообразование S. aureus, Streptococcus mutans, E. coli и P. aeruginosa [26]. Известно, что непатогенные коринебакте-рии ингибируют рост и образование биопленки, а отдельные штаммы обладают выраженной бактерицидной активностью в отношении условно-патогенных микроорганизмов, включая MRSA [27-29].
M.M. Ramsey et al. (2016) показали, что взаимодействие S. aureus с Corynebacterium striatum приводит к уменьшению вирулентности S. aureus. Авторы обнаружили широкий сдвиг в транскрипции генома S. aureus при росте in vitro, включая снижение транскрипции генов вирулентности. Одна из них, система регулятора (agr) дополнительного сигнала генного кворума, была сильно ингибирована в ответ на Corynebacterium spp [30]. При воздействии C. striatum на S. aureus последний фенотипически демонстрировал повышенную адгезию к эпителиальным клеткам и пониженную активность гемолизина, отражая комменсальное состояние и ослабление вирулентности стафилококков. В недавнем исследовании B.L. Hardy et al. (2019) обнаружено, что C. pseudodiphtheriticum, представитель резидентной носовой микро-биоты, может индуцировать инактивацию гена agrC у S. aureus, который кодирует сенсорную киназу системы Agr quorum Sensing (Agr QS), регулирующую экспрессию многих факторов вирулентности [31].
Вероятно, вагинальные изоляты коринебактерий секретируют широкий спектр антимикробных веществ, что характеризует их конкурентоспособность и позволяет им адаптироваться в биотопе как в условиях эубиоза, так и дисбиоза.
Помимо собственного антагонистического действия, коринебактерии обладают непрямым антагонизмом по отношению к условно-патогенным микроорганизмам. В данном случае речь идет о способности коринебактерий уси-
D0l:10.24411/2304-9081-2019-13022 13
ливать антимикробное действие доминирующих микроорганизмов - перок-сидпродуцирующих лактобацилл. Коринебактерии способны ингибировать бактериальную каталазу микроорганизмов, тем самым, повышая их чувствительность к бактерицидному действию пероксида водорода лактобацилл [32].
Характеризуя межбактериальные взаимодействия коринебактерий в вагинальном биотопе, следует отметить, что данные микроорганизмы обладают широким набором биологических характеристик, определяющим как их антагонистические взаимоотношения с условно-патогенными микроорганизмами, так и симбиотические взаимодействия с представителями нормофлоры. Вероятно, это не только определяет сохранение коринебактерий в условиях нормо- и патоценозов, но и является одним из ключевых факторов поддержания колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин.
1.5. Микроорганизмы рода Corynebacterium spp. в вагинальном микробиоме - индикатор эубиоза, дисбиоза или воспалительных заболеваний?
В настоящее время существует несколько исследований, посвященных изучению недифтерийных или непатогенных коринебактерий, хотя это так-сономически и биологически разнообразная группа микроорганизмов, составляющая значительную часть микробиома организма человека. Обычные подходы рассматривать данную группу микроорганизмов как возбудителей инфекционных заболеваний не позволяют в полной мере оценить их роль в норме и патологии человека. Благодаря широкому внедрению в научную практику современных методов исследования, в том числе молекулярно-генетических, был обнаружен ряд новых видов коринебактерий и их биологических свойств. Подробно изучается антагонистическая активность кори-небактерий в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Способность непатогенных коринебактерий продуцировать различные бактериоцины, бактериоцино-подобные вещества и биосурфактанты, становится одним из основных аспектов рассмотрения этой группы микроорганизмов в качестве потенциальных пробиотических культур [33, 34]. Примером являются коринебактерии, выделенные с кожи, со слизистых оболочек конъюнктивы, уретры, верхних дыхательных путей, где они обычно считаются не только в качестве представителей резидентной микрофлоры, но и как основные микроорганизмы, участвующие в защите этих биотопов от инфекции [35, 36].
D0l:10.24411/2304-9081-2019-13022 14
По-видимому, результаты исследований относительно недефтерийных коринебактерий, выделенных из других биотопов, могут быть экстраполированы и на репродуктивный тракт женщины. Проведенный нами анализ литературных источников и собственных данных показал, что микроорганизмы рода Corynebacterium в женском репродуктивном тракте имеют высокий адаптационный потенциал. Благодаря уникальным биологическим свойствам, эти микроорганизмы взаимодействуют с организмом хозяина и другими представителями влагалищной микробиоты, что позволяет им существовать как у женщин с вагинальным эубиозом, так и неспецифическими инфекционными заболеваниями влагалища - кольпитами, аднекситами, эндометритами. Мы считаем, что выделение недифтерийных коринебактерий при вагинальном дисбиозе и воспалительных заболеваниях еще не свидетельствует о том, что именно они стали этиологическим фактором этих состояний. Следует отметить, что существуют штаммовые и таксономические различия, и только детальные молекулярно-генетические исследования биологических свойств недефтерийных коринебактерий с определением маркеров патоген-ности поможет решить проблему дифференциации их как представителей резидентной микрофлоры или возбудителей инфекции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Gupta K., Stapleton A.E., Hooton T.M., Roberts P.L., Fennell C.L., Stamm W.E. Inverse association of H2Ü2-producing lactobacilli and vaginal Escherichia coli colonization in women with recurrent urinary tract infections. J Infect Dis. 1998. 178: 446-450.
2. Klebanoff S.J., Hillier S.L., Eschenbach D.A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H2O2-generating lactobacilli. J Infect Dis. 1991. 164: 94-100.
3. Kaewsrichan J., Peeyananjarassri K., Kongprasertkit J. Selection and identification of anaerobic lactobacilli producing inhibitory compounds against vaginal pathogens. FEMS Immunol Med Microbiol. 2006. 48: 75-83.
4. Verhelst R., Verstraelen H., Claeys G., Verschraegen G., Delanghe J., Van Simaey L., De Ganck C., Temmerman M., Vaneechoutte M.. Cloning of 16S rRNA genes amplified from normal and disturbed vaginal microflora suggests a strong association between Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis and bacterial vaginosis. BMC Microbiol. 2004. 4: 16.
5. Hyman R.W., Fukushima M., Diamond L., Kumm J., Giudice L.C., Davis R.W. Microbes on the human vaginal epithelium. Proc Natl Acad Sci USA. 2005. 102(22): 7952-7957.
6. Zhou X., Brown C.J., Abdo Z., Davis C.C., Hansmann M.A., Joyce P., Foster J.A., Forney L.J. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women. ISME J. 2007. 1(2): 121-133.
7. Zhou X., Bent S.J., Schneider M.G., Davis C.C., Islam M.R., Forney L.J. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent. Microbiology. 2004. 150(Pt 8): 2565-73.
8. Goodfellow M., Jones A.L., Order V. Corynebacteriales ord. nov. In: Goodfellow M., Kämpfer P., Busse H.-J., Trujillo M.E., Suzuki K.-I., Ludwig W., Whitman W.B. (ed), Ber-gey's manual of systematic bacteriology, vol 5, 2nd ed. Springer Verlag, New York, 2012:
232-243. Available from:https://link.springer.com/book/10.1007/978-0-387- 68233-4
9. Shukla S.K., Bernard K.A., Harney M. et al. Corynebacterium nigricans sp. nov.: proposed name for a black-pigmented Corynebacterium species recovered from the human female urogenital tract. J Clin Microbiol. 2003, 41(9): 4353-4358.
10. Костюковская О.Н., Гладкая Е.А. Идентификация недифтерийных бактерий рода Corynebacterium и определение их антибиотикочувствительности. Клин. Лаб. Диагн. 1992. 9-10: 29-31.
11. Мартикайнен З.М. Коринебактерии женских гениталий: Автореф. дисс. ...канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 1996.
12. Одинцова О.В. Коринеподобные и нокардиоподобные бактерии как компонент вагинального микробиоценоза: Автореф. дисс. .канд. мед. наук. Пермь, 2002.
13. Гладышева И.В., Черкасов С.В. Роль фибронектина в адгезии коринебактерий к вагинальным эпителиоцитам. Журн. микробиол. 2014. 6: 67-73. https://europepmc.org/abstract/med/25816516
14. Kreikemeyer B., Oehmcke S., Nakata M., Hoffrogge R., Podbielski A. Streptococcus py-ogenes Fibronectin-binding protein F2. Expression profile, binding characteristics, and impact on eukaryotic cell interactions. J Biol Chem. 2004. 279(16): 15850-15859. DOI: 10.1074/jbc.m313613200.
15. Mongodin E., Bajolet O., Cutrona J., Bonnet N., Dupuit F., Puchelle E., de Bentzmann S. Fibronectin-binding proteins of Staphylococcus aureus are involved in adherence to human airway epithelium. Infect Immun. 2002. 70(2): 620-630. DOI: http://iai.asm.org/content/ 70/2/620.full.pdf.
16. McMillan A., Macklaim J.M., Burton J.P., Reid G. Adhesion of Lactobacillus iners AB-1 to Human fibronectin: a key mediator for persistence in the vagina? Reprod Sci. 2013. 20(7): 791-796. DOI: 10.1177%2F1933719112466306
17. Nagy E., Froman G., Mardh P-A. Fibronectin binding of Lactobacillus species isolated from women with and without bacterial vaginosis. J Med Microbiol. 1992. 37(1): 38-42. DOI: 10.1099/00222615-37-1-38
18. Funke G., von Graevenitz A., Clarridge J.E. 3rd, Bernard K.A. Clinical microbiology of coryneform bacteria. Clin Microbiol Rev. 1997. 10(1):.125-159. DOI: 10.1128/cmr.10.1.125
19. Кремлева Е.А. Роль эпителиально-бактериальных взаимодействий в ассоциативном симбиозе репродуктивного тракта женщин: Автореф. дисс. ...докт. мед. наук. Оренбург, 2013.
20. Ma B., Forney L.J., Ravel J. Vaginal microbiome: rethinking health and disease. Annu Rev. Microbiol. 2012. 66(1): 371-389. DOI: 10.1146/annurev-micro-092611-150157
21. Chaban B., Links M.G., Jayaprakash T.P., Wagner E.C., Bourque D.K., Lohn Z., Albert A.Y., van Schalkwyk J., Reid G., Hemmingsen S.M., Hill J.E., Money D.M. Characterization of the vaginal microbiota of healthy Canadian women through the menstrual cycle. Microbiome. 2014. 2(1): 23. DOI: 10.1186/2049-2618-2-23
22. Smith S.B., Ravel J. The vaginal microbiota, host defence and reproductive physiology. J Physiol. 2017. 595(2): 451-463. DOI: 10.1113/JP271694
23. Харсеева Г.Г., Воронина Н.А., Гасретова Т.Д., Мамычева Н.И., Голова-нова Н.А. Пер-систентные свойства Corynebacterium non diphtheriae, циркулирующие в Ростове-на-Дону и Ростовской области. Журн. микробиол. 2012. 3: 13-17.
24. Gladysheva I.V., Cherkasov S.V., Khlopko Y.A. Antibacterial activities of metabolites from Corynebacterium spp. Strains isolated from the reproductive Tract of a healthy woman against human pathogenic bacteria. Int J Pharm Bio Sci. 2017. 8(3): 549-556. DOI: 10.22376/ijpbs.2017.8.3.b549-556
25. Kwaszewska A., Szewczyk E.M. Production of antibacterial substances by resident coryne-bacteria isolated from human skin. Med Dosw Mikrobiol. 2007. 59(3): 251-257.
26. Dalili D., Amini M., Faramarzi M.A., Fazeli M.R., Khoshayand M.R., Samadi N. Isolation and structural characterization of Coryxin, a novel cyclic lipopeptide fro Corynebacterium
xerosisNS5 having emulsifying and anti-biofilm activity. Colloids Surf B Biointerfaces. 2015. 135: 425-432.DOI: 10.1016/j.colsurfb.2015.07.005
27. Nakano H., Tomita F., Yamaguchi K., Nagashima M., Suzuki T. Corynecin (chloramphenicol analogs) fermentation studies: selective production of Corynecin I by Corynebacterium hydrocarboclastus grown on acetate. Biotechnol Bioeng. 1977. 19: 1009-1018. doi: 10.1002/bit.260190705
28. Wysocki P., Kwaszewska A.K., Szewczyk E.M. Influence of substances produced by lipophilic Corynebacterium CDC G1 ZMF 3P13 on the microorganisms inhabiting human skin. Med Dosw Mikrobiol. 2011. 63: 45-52.
29. Yan M., Pamp S.J., Fukuyama J., Hwang P.H., Cho D.Y., Holmes S., Relman D A. Nasal microenvironments and interspecific interactions influence nasal microbiota complexity and S. aureus carriage. Cell Host Microbe. 2013. 14: 631-640. doi: 10.1016/j.chom.2013.11.005
30. Ramsey M.M., Freire M.O., Gabrilska R.A., Rumbaugh K.P., Lemon K.P. Staphylococcus aureus Shifts toward Commensalism in Response to Corynebacterium Species. Front Microbiol. 2016. 7: 1230. doi: 10.3389/fmicb.2016.01230
31. Hardy B.L., Dickey S.W., Plaut R.D., Riggins D.P., Stibitz S., Otto M., Merrell D.S. Corynebacterium pseudodiphtheriticum Exploits Staphylococcus aureus Virulence Components in a Novel Polymicrobial Defense Strategy. mBio. 2019. 10: doi: 10.1128/mBio.02491-18
32. Черкасов С.В., Гладышева И.В., Бухарин О.В. Симбиотические вза-имодействия вагинальных коринебактерий и лактобацилл в реализа-ции окислительных механизмов антагонизма. Журн. микробиол. 2012. (6): 13-16. URL: https://europepmc.org/abstract/ med/23297625
33. Bomar L., Brugger S.D., Yost B.H., Davies S.S., Lemon K.P. Corynebacterium accolens releases antipneumococcal free fatty acids from human nostril and skin surface triacylglycer-ols. MBio. 2016. 7(1): e01725-15. DOI: 10.1128/mbio.01725-15
34. Kiryukhina N.V., Melnikov V.G., Suvorov A.V., Morozova Y.A., Ilyin V.K. Use of Corynebacterium pseudodiphtheriticum for elimination of Staphylococcus aureus from the nasal cavity in volunteers exposed to abnormal microclimate and altered gaseous environment. Probiotics Antimicrob Proteins. 2013. 5(4): 233-238. DOI: 10.1007/s12602-013-9147-x
35. Thiel H.J., Schumacher U. Normal flora of the human conjunctiva: examination of 135 persons of various ages. Klin Monbl Augenheilkd. 1994. 205(6): 348-357. DOI: 10.1055/s-2008-1045542
36. Montagnini Spaine D., Mamizuka E.M., Pereira Cedenho A., Srougi M. Microbiologic aerobic studies on normal male urethra. Urology. 2000. 56(2): 207-210. DOI: 10.1016/s0090-4295(00)00615-4
Поступила 12 сентября 2019 г.
(Контактная информация: Гладышева Ирина Вячеславовна - к.м.н., старший
научный сотрудник лаборатории биомедицинских технологий Института клеточного и
внутриклеточного симбиоза УрО РАН; адрес: 460000, г. Оренбург, ул. Пионерская, 11;
тел. 8 (3532) 77-54-17; e-mail: gladishevaiv@yandex.ru)
LITERATURA
1. Gupta K, Stapleton AE, Hooton TM, Roberts PL, Fennell CL, Stamm WE. Inverse association of H2O2-producing lactobacilli and vaginal Escherichia coli colonization in women with recurrent urinary tract infections. J Infect Dis. 1998; 178: 446-450.
2. Klebanoff SJ, Hillier SL, Eschenbach DA, Waltersdorph AM. Control of the microbial flora of the vagina by H2O2-generating lactobacilli. J Infect Dis. 1991; 164: 94-100.
3. Kaewsrichan J, Peeyananjarassri K, Kongprasertkit J. Selection and identification of anaero-
bic lactobacilli producing inhibitory compounds against vaginal pathogens. FEMS Immunol Med Microbiol. 2006; 48: 75-83.
4. Verhelst R, Verstraelen H, Claeys G, Verschraegen G, Delanghe J, Van Simaey L, De Ganck C, Temmerman M, Vaneechoutte M. Cloning of 16S rRNA genes amplified from normal and disturbed vaginal microflora suggests a strong association between Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis and bacterial vaginosis. BMC Microbiol. 2004; 4:16.
5. Hyman RW, Fukushima M, Diamond L, Kumm J, Giudice LC, Davis RW. Microbes on the human vaginal epithelium. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102(22): 7952-7957.
6. Zhou X, Brown CJ, Abdo Z, Davis CC, Hansmann MA, Joyce P, Foster JA, Forney LJ. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women. ISME J. 2007; 1(2): 121-133.
7. Zhou X, Bent SJ, Schneider MG, Davis CC, Islam MR, Forney LJ. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent. Microbiology. 2004 Aug; 150(Pt 8): 2565-73.
8. Goodfellow M, Jones AL. Order V. Corynebacteriales ord. nov. In Goodfellow M, Kämpfer P, Busse H-J, Trujillo ME, Suzuki K-I, Ludwig W, Whitman WB (ed), Bergey's manual of systematic bacteriology, vol 5, 2nd ed. Springer Verlag, New York, NY; 2012. p. 232-243.Available from:https://link.springer.com/book/10.1007/978-0-387- 68233-49.
9. Shukla S.K., Bernard K.A., Harney M. et al. Corynebacterium nigricans sp. nov.: proposed name for a black-pigmented Corynebacterium species recovered from the human female urogenital tract. J Clin Microbiol. 2003, 41(9): 4353-4358.
10. Kostyukovskiy O.N., Smooth E.A. Identification of diphtheria bacteria of the genus Corynebacterium and determination of their antibiotic susceptibility. Klin. Lab. Diagnostic tools. 1992, (9-10): 29-31.
11. Martikainen Z.M. CORINE-female genitalia: author. Diss. Cand. honey. sciences'. St. Petersburg, 1996.
12. Odintsova O.V. Cornertone and necardiogenny bacteria as a component of vaginal microbi-ocenosis: author. Diss. Cand. honey. sciences'. Perm, 2002.13.
13. Gladysheva IV, Cherkasov SV. The role of fibronectin in adhesion of corynebacteria to vaginal epitheliocytes. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2014 Nov-Dec;(6):67-73. https://europepmc.org/abstract/med/25816516
14. Kreikemeyer B, Oehmcke S, Nakata M, Hoffrogge R, Podbielski A. Streptococcus pyogenes Fibronectin-binding protein F2. Expression profile, binding characteristics, and impact on eukaryotic cell interactions. J Biol Chem. 2004 Apr 16;279(16):15850-9 DOI: 10.1074/jbc.m313613200
15. Mongodin E, Bajolet O, Cutrona J, Bonnet N, Dupuit F, Puchelle E, de Bentzmann S. Fi-bronectin-binding proteins of Staphylococcus aureus are involved in adherence to human airway epithelium. Infect Immun. 2002 Feb;70(2):620-30. DOI: http://iai.asm.org/content/70/2/620.full.pdf
16. McMillan A1, Macklaim JM, Burton JP, Reid G. Adhesion of Lactobacillus iners AB-1 to Human fibronectin: a key mediator for persistence in the vagina? Reprod Sci. 2013 Jul;20(7):791-6. DOI: 10.1177%2F1933719112466306
17. Nagy E, Froman G, Mardh P-A. Fibronectin binding of Lactobacillus species isolated from women with and without bacterial vaginosis. J Med Microbiol. 1992 Jul;37(1):38-42. DOI: 10.1099/00222615-37-1-38
18. Funke G, von Graevenitz A, Clarridge JE 3rd, Bernard KA. Clinical microbiology of coryneform bacteria. Clin Microbiol Rev. 1997 Jan;10(1):125-59. DOI: 10.1128/cmr.10.1.125
19. Kremleva EA, Cherkasov SV, Bukharin OV. Influence of microbial-epithelial interactions on biological characteristics of vaginal microflora. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2011 Mar-Apr;(2):53-7. Available from: https://europepmc.org/abstract/med/2159861620.
20. Ma B, Forney LJ, Ravel J. Vaginal microbiome: rethinking health and disease. Annu Rev
Microbiol. 2012. 66(1): 371-89. DOI: 10.1146/annurev-micro-092611-150157
21. Chaban B, Links MG, Jayaprakash TP, Wagner EC, Bourque DK, Lohn Z, Albert AY, van Schalkwyk J, Reid G, Hemmingsen SM, Hill JE, Money DM. Characterization of the vaginal microbiota of healthy Canadian women through the menstrual cycle. Microbiome. 2014 Jul 4;2(1):23. DOI: 10.1186/2049-2618-2-23
22. Smith SB, Ravel J. The vaginal microbiota, host defence and reproductive physiology. J Physiol. 2017 Jan 15;595(2):451-463. DOI: 10.1113/JP271694
23. Harseeva G. G., Voronina N. A., Gasretova T. D., Mamicheva N. I., Golovanova N. A. Persistent properties of Corynebacterium non diphtheriae, which are dominant in Rostov-on-don and Rostov region. Sib. Microbiology. 2012, 3: 13-17.
24. Gladysheva IV, Cherkasov SV, Khlopko YA. Antibacterial activities of metabolites from Corynebacterium spp. Strains isolated from the reproductive Tract of a healthy woman against human pathogenic bacteria. Int J Pharm Bio Sci. 2017;8(3):549-556. DOI: 10.22376/ijpbs.2017.8.3.b549-556
25. Kwaszewska A, Szewczyk EM. Production of antibacterial substances by resident coryne-bacteria isolated from human skin. Med Dosw Mikrobiol. 2007. 59(3): 251-257.
26. Dalili D., Amini M., Faramarzi M.A., Fazeli M.R., Khoshayand M.R., Samadi N. Isolation and structural characterization of Coryxin, a novel cyclic lipopeptide fro Corynebacterium xerosisNS5 having emulsifying and anti-biofilm activity.Colloids Surf B Biointerfaces. 2015 Nov1;135:425-32.DOI: 10.1016/j.colsurfb.2015.07.005
27. Nakano H, Tomita F, Yamaguchi K, Nagashima M, Suzuki T. (1977) Corynecin (chloramphenicol analogs) fermentation studies: selective production of Corynecin I by Corynebacterium hydrocarboclastus grown on acetate. Biotechnol Bioeng 19:1009-18. doi: 10.1002/bit.260190705
28. Wysocki P, Kwaszewska AK, Szewczyk EM (2011) Influence of substances produced by lipophilic Corynebacterium CDC G1 ZMF 3P13 on the microorganisms inhabiting human skin. Med Dosw Mikrobiol 63:45-52
29. Yan M, Pamp SJ, Fukuyama J, Hwang PH, Cho DY, Holmes S, Relman DA (2013) Nasal microenvironments and interspecific interactions influence nasal microbiota complexity and S. aureus carriage. Cell Host Microbe 14:631-40. doi: 10.1016/j.chom.2013.11.005
30. Ramsey MM, Freire MO, Gabrilska RA, Rumbaugh KP, Lemon KP (2016) Staphylococcus aureus Shifts toward Commensalism in Response to Corynebacterium Species. Front Microbiol 7:1230. doi: 10.3389/fmicb.2016.01230
31. Hardy BL, Dickey SW, Plaut RD, Riggins DP, Stibitz S, Otto M, Merrell DS (2019) Corynebacterium pseudodiphtheriticum Exploits Staphylococcus aureus Virulence Components in a Novel Polymicrobial Defense Strategy. mBio 10:. doi: 10.1128/mBio.02491-18
32. Cherkasov SV, Gladysheva IV, Bukharin OV. Symbiotic interactions of corynebacteria and lactobacilli in realization of oxidative mechanisms of antagonism. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. 2012 Nov-Dec;(6):13-6. Available from: https://europepmc.org/abstract/med/23297625
33. Bomar L, Brugger SD, Yost BH, Davies SS, Lemon KP. Corynebacterium accolens releases antipneumococcal free fatty acids from human nostril and skin surface triacylglycerols. MBio. 2016 Jan 5;7(1):e01725-15. DOI: 10.1128/mbio.01725-15
34. Kiryukhina NV, Melnikov VG, Suvorov AV, Morozova YA, Ilyin VK. Use of Corynebacterium pseudodiphtheriticum for elimination of Staphylococcus aureus from the nasal cavity in volunteers exposed to abnormal microclimate and altered gaseous environment. Probiot-ics Antimicrob Proteins. 2013. 5(4): 233-8. (DOI: 10.1007/s12602-013-9147-x)
35. Thiel HJ, Schumacher U. Normal flora of the human conjunctiva: examination of 135 persons of various ages. Klin Monbl Augenheilkd. 1994 Dec;205(6):348-57. DOI: 10.1055/s-2008-1045542
36. Montagnini Spaine D, Mamizuka EM, Pereira Cedenho A, Srougi M. Microbiologic aerobic studies on normal male urethra. Urology. 2000 Aug 1;56(2):207-10. DOI: 10.1016/s0090-
4295(00)00615-4 Образец ссылки на статью:
Гладышева И.В., Черкасов С.В. Коринебактерии вагинального микробиома - потенциальные патогены или перспективные пробиотики? Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. 2019. 3. 17с. [Электр. ресурс] (URL: http://elmag.uran.ru:9673/magazine/Numbers/2019-3/Articles/GIV-2019-3.pdf). DOI: 10.24411/2304-9081-2019-13022
