CC BY
47
РОЛЬ ИММУНОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВАЦИИ В РАЗВИТИИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПАРОДОНТА У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
Д.К. Льянова, С.А. Авдольян, В.М. Слонова,
А.И. Галабуева, Л.А. Дзагурова, М.А. Баллаева
Стоматологический факультет ГОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет» ул. Ватутина, 46, Владикавказ, Республика Северная Осетия Алания, 362025
Ф.Ю. Даурова
Кафедра терапевтической стоматологии РУДН Медицинский факультет ул. Миклухо-Маклая, 8, Москва, Россия, 117198
Интенсивное развитие иммунологических методов исследования в последние годы позволило получить убедительные данные, свидетельствующие о роли недостаточности специфических и неспецифических факторов резистентности организма в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта на фоне сахарного диабета. Наиболее выраженные изменения возникают, как известно, в клеточном звене иммунной системы. В патофизиологии пародонтитов важную роль играет им-муновоспалительная активация, опосредованная провоспалительными цитотоксинами.
Ключевые слова: заболевания пародонта, сахарный диабет, иммуновоспалительная активация.
Как свидетельствуют исследования последнего десятилетия, в патофизиологии пародонтитов важную роль играет иммуновоспалительная активация, опосредованная провоспалительными цитотоксинами. Повышенные уровни циркулирующих провоспалительных цитотоксинов (ФНО-0, ИЛ-6), растворимых рецепторов ФНО-0 являются предикторами активации и хронизации патологического процесса.
Системную воспалительную активацию, проявляющуюся гиперпродукцией цитокинов, рассматривают как важный фактор дестабилизации течения воспаления в тканях пародонта. В связи с этим особый интерес представляет вопрос о соотношении воспалительной активации и тяжести патологии пародонта, а также в какой степени повышение продукции воспалительных медиаторов обусловлено дополнительными эффектами диабетического генеза.
Пародонтит часто протекает на фоне патологии различных органов и систем, что оказывает несомненное влияние на течение и прогноз воспалительнодеструктивных процессов в пародонте. У больных сахарным диабетом распространенность заболеваний пародонта достигает 95%. Интенсивное развитие иммунологических методов исследования в последние годы позволило получить убедительные данные, свидетельствующие о роли недостаточности специфических и неспецифических факторов резистентности организма в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта на фоне сахарного диабета.
Наиболее выраженные изменения возникают, как известно, в клеточном звене иммунной системы. Отсутствие адекватной оценки иммунного статуса не позволяет достаточно аргументированно выработать критерии для применения иммунокорригирующей терапии в комплексном лечении пародонтита. Наибольшую сложность представляет лечение больных пародонтитом средней и тяжелой степени тяжести, когда глубина пародонтального кармана достигает 5— 6 мм и более.
В прошлом при одновременном упоминании этих заболеваний подчеркивалось влияние диабета на возникновение и течение деструктивного процесса в па-родонте. Однако современные наблюдения подтверждают факт, что и пародонтит способен существенно ухудшить прогноз заболевания диабетом. Различные эпидемиологические исследования констатируют, что диабет в 2—3 раза повышает риск возникновения пародонтита, а также в значительной степени влияет на интенсивность и степень деструкции пародонта.
Цель работы — исследование уровней про- и противовоспалительных ци-токинов (фактора некроза опухоли, интерлейкина-1^ интерлейкина-6 и интерлейкина-4) у больных с пародонтитами в зависимости от наличия диабетического статуса.
Материал и методы. Обследование 69 больных с пародонтитами в возрасте 43—75 лет. У всех больных диагностирован пародонтит. Больные были разделены на 2 группы: в 1-ю группу вошли 38 пациентов с пародонтитом, во 2-ю — 31 больной с диабетом и пародонтитом. Контрольную группу составили 17 практически здоровых лиц. Уровень цитокинов (ФНО-, ИЛ-1Ь, ИЛ-6, ИЛ-4) в сыворотке крови исследовали с помощью иммуноферментных тест-систем фирмы «Pro Con» (Россия). Статистический анализ проводили с использованием программы статистической обработки данных Statistika (StatSoft Inc, США).
Результаты и их обсуждение. У больных с пародонтитами по сравнению с лицами контрольной группы наблюдали изменения активности ФНО- в сыворотке крови: достоверное повышение его уровней в 1-й группе (Р < 0,01) и дальнейший существенный прирост этого показателя во 2-й группе (Р < 0,001) (табл.). При этом концентрации ФНО- в сыворотке крови больных 2-й группы значимо превышали таковые не только в контрольной, но и в 1-й группе (Р < 0,05).
Таблица
Величина показателя (М ± m) в группах
Показатель Доноры Пародонтит Пародонтит + сахарн. диабет
ФНО-L, пг/мл 42,62 ± 5,46 68,61 ± 5,20 93,21 ± 7,21
ИЛ-^, пг/мл 27,70 ± 4,28 38,27 ± 4,34 49,84 ± 4,34
ИЛ-6, пг/мл 39,92 ± 5,12 46,82 ± 3,88 42,37 ± 4,62
ИЛ-4, пг/мл 43,11 ± 6,24 60,21 ± 6,22 89,43 ± 6,54
Уровни ИЛ-1Ь у больных обеих групп были выше, чем в группе контроля (Р < 0,005—0,01), у больных 1-й и 2-й групп эти показатели различались недостоверно.
Характер изменений активности ИЛ-6 в сыворотке крови существенно отличался от динамики ФНО- и ИЛ-1Ь. Наиболее высокий уровень ИЛ-6 выявлен в 1-й группе, но различия в его содержании у больных 1-й группы по сравнению с контрольной и со 2-й группой не были достоверными. У больных 2-й группы концентрация ИЛ-6 в сыворотке крови практически не отличалась от таковой в контрольной.
Целью настоящего исследования явилась сравнительная оценка функциональных характеристик нейтрофилов и макрофагов при моделировании пародонтита путем локального многократного введения ЛПС.
Нейтрофилы выделяли из периферической крови кроликов и здоровых доноров на 2-слойном градиенте фиккола-верографина. После этого клетки дважды отмывали фосфатным буфером, рН 7,4 ^BS). Для регистрации апоптоза клетки культивировали в среде RPMI-1640 с 10% эмбриональной телячьей сывороткой («Sigma»), 1% L-глутамина, 1% пенициллина и стрептомицина (культурная среда) при 37 °С в атмосфере, содержащей 5% СО2 (концентрация клеток 1 х 106/мл) в течение 9 часов. Процент апоптозных и живых клеток определяли методом проточной цитометрии (с использованием флуоресцентного зонда Ное^^33258). Реакцию адгезии ставили в 24-луночных плоскодонных планшетах (Nunc). В опытную лунку вносили 1 х 106/мл нейтрофилов и растворы дексаметазона и рокалтрола различной концентрации в физрастворе. Во всех экспериментах использовали планшеты, покрытые фибриногеном (нейтрофилы прилипают к фибриногену CD11/CD18 рецепторами). Клетки культивировали в культуральной среде 60 минут при 37 °С в атмосфере, содержащей 5% СО2. После окончания адгезии планшеты 3 раза тщательно ополаскивали теплым раствором Хенкса (37 °С) с кальцием и магнием. Адгезию нейтрофилов определяли по количеству прилипших нейтрофилов с использованием метода Лоури (метод количественного определения белка; калибровочную зависимость получали, используя в качестве источника белка выделенные нейтрофилы, предварительно лизированнные детергентом — холатом натрия). Генерацию активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами определяли хемилюминесцентным методом. Нейторофилы (в концентрации 0,2 х 106/мл) помещали в эппендорфы в среду Хенкса с ионами Са2+, люминолом (3,5 х 10-4 М), 10 мкМ NaN3 в термо-статируемую ячейку люминометра 1250 L^ (Швеция). В качестве активатора генерации активных форм кислорода нейтрофилами использовали Fmlp.
Степень увеличения активности противовоспалительного цитокина ИЛ-4 в группах больных была аналогична нарастанию уровней ФНО-: концентрация ИЛ-4 в сыворотке крови достоверно повышалась у больных 1-й группы (Р < 0,05, по отношению к контролю); у больных 2-й группы активность ИЛ-4 была достоверно выше по сравнению с таковой и в контрольной (Р < 0,001), и во 2—1 группах (Р < 0,01).
При корреляционном анализе у больных 1-й группы установлена положительная корреляция между уровнями провоспалительного ИЛ-1Ь и противоспа-лительным ИЛ-4 (г = 0,53, Р < 0,01). У больных 2-й группы выявленные взаимосвязи существенно отличались. Во-первых, выявлена положительная корреля-
ционная связь между концентрацией ФНО- и уровнем ИЛ-1Ь (г = 0,51, Р < 0,05). Во-вторых, уровни обоих этих цитокинов положительно коррелировали с уровнем ИЛ-4: соответственно r = 0,61 (Р < 0,05) и r = 0,69 (Р < 0,01). Эти данные могут свидетельствовать о существенной не только количественной, но и качественной перестройке сети цитокинов при развитии воспалительного процесса в тканях пародонта.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Орехова Л.Ю., Оганян Э.С., Левин М.Я. Комплексное лечение воспалительных заболеваний пародонта при диабете // Стоматология нового тысячелетия: Сб. тезисов. — М.: Авиаиздат, 2002. — С. 183—184.
[2] Современные вопросы клинической пародонтологии / Под ред. Л.А. Дмитриевой. — М.: МЕДпресс, 2001. — 128 с.
[3] Тарасенко Л.М., Воскресенский О.М. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе повреждений пародонта при стрессе // Патол. физиология и экспер. терапия. — 1986. — № 6. — С. 12—14.
[4] Calkins C.C., Platt K., Potempa J., Travis J.I. (1998). Inactivation of tumor necrosis factor-alpha by proteinases (gingipains) from the periodontal pathogen, Porphyromonas gingivalis. Implications of immune evasion // J. Biol. Chem. — 273. — P. 6611—6614.
[5] Canete J.D., Martinez S.E., Farres J., Sanmarti R., Blay M., Gomez A. et al. (2000). Differential Th1/Th2 cytokine patterns in chronic arthritis: interferon gamma is highly expressed in synovium of rheumatoid arthritis compared with seronegative spondyloarthropathies // Ann. Rheum. Dis. — 59. — P. 263—268.
IMMUNINFLAMMATORY ACTIVATION IN DEVELOPMENT OF INFLAMMATORY DISEASES PERIODONTIUM AT PATIENTS WITH A DIABETES
D.K. Lianova, V.M. Slonova, A.I. Galabueva,
M.F. Ballaeva, L.A. Dzagyrova
Department of Stomatology North-Osetian state university
Vatutina str., 46, Vladikavkaz, Republic North-Osetia-Alania, 362025
F.Yu. Daurova
Medical faculty Peoples’ Friendship University of Russia
Mikluho-Maklaia str., 8, Moscow, Russia, 117198
Intensive development of immunoligical methods of research last years has allowed to obtain the convincing data testifying to a role of insufficiency of specific and nonspecific factors of resistency of an organism in pathogenesis of inflammatory diseases of periodontium on a background of a diabetes. The most expressed changes arise, as is known, in a cellular part of immune system in pathophysiology of periodontitis the important role is played immunoinflammatory activation with the mediated proin-flammatory cytotoxins.
Keywords: diseases of periodontium, a diabetes, immunoinflammatory activation.
