CC BY
10
шинстве случаев отсутствуют достоверно выраженные симптомы тревоги и депрессии (по шкале госпитальной шкалы тревоги и депрессии HADS — 70,6%; и по шкале Бека — 52,9%). У части пациентов отмечались субклинически и клинически выраженные тревога и депрессия — 17,7% и 11,8% соответственно (по шкале HADS). По шкале Бека менее половины пациентов имели небольшой и умеренный уровень тревоги — 17,7% и 29,4% соответственно. Психологический статус пациентов, страдающих ССЗ и перенесших COVID-19, требует дальнейшего изучения.
Источник финансирования: Исследование проведено в рамках проекта перспективных научных исследований ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им В. И. Разумовского Минздрава России совместно с Самаркандским государственным медицинским институтом Министерства здравоохранения Республики Узбекистан.
8. ВОЗМОЖНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
ФИБРИНА В КАЧЕСТВЕ ФИДЕРНОГО СЛОЯ ДЛЯ СОЗДАНИЯ КЛЕТОЧНОЗАСЕЛЕННОГО СОСУДИСТОГО ПРОТЕЗА В УСЛОВИЯХ ПУЛЬСИРУЮЩЕГО БИОРЕАКТОРА
Ханова М. Ю., Великанова Е. А., Матвеева В. Г., Антонова Л. В.
НИИ КПССЗ, Кемерово, Россия
По-прежнему актуальным является поиск аутологичных белков для поверхностного модифицирования сосудистого протеза с целью их дальнейшего клеточного заселения. Применение фибрина в качестве фидерного слоя оптимально благодаря своей доступности, исключает необходимость использования чужеродных белков и обеспечивает достаточные адгезионные свойства при культивировании в биореакторе. Использование аутологичного материала нивелирует риск переноса инфекций.
Цель. Исследование фибрина в качестве фидерного слоя для создания клеточнозаселенного сосудистого протеза в условиях пульсирующего биореактора.
Материал и методы. Основа сосудистого протеза изготовлена методом электроспиннинга из смеси биодеградируемых полимеров: поли(3-гидроксибутирата-ко-3-гидроксивалера-та) и поли(е-капролактона) в соотношении 1:2. Модификацию поверхности фибрином проводили с помощью бычьего тромбина. Для заселения использовали культуру колоние-формирующих эндотелиальных клеток (КФЭК). Прекон-диционирование напряжением сдвига интенсивностью 2,85 дин/см2 проводили в течение 5 суток. Метаболическую активность оценивали с помощью MTT-теста. Жизнеспособность эндотелиоцитов исследовали флуоресцентным окрашиванием DAPI/EtBr. С помощью иммунофлуоресцентной микроскопии детектировали F-actin, Talin. Тромборезистент-ность белкового покрытия оценивали согласно международным стандартам ISO 10993-4.
Результаты. Метаболическая активность КФЭК достоверно выше на фибриновых матрицах, в сравнении с коллагеном, фибронектином и культуральным пластиком (р<0,01). Фибрин обладал прекрасными матриксными свойствами, обеспечив как в статике, так и в динамике качественную адгезию клеток к своей поверхности. КФЭК сохраняли полную жизнеспособность. В ответ на механическое воздействие наблюдали увеличение экспрессии белка Talin 1,5 раза (р<0,05). Средняя интенсивность флуоресценции F-actin статистически значимо увеличилась при культивировании в динамических условиях 59,7 [52,2; 64,8] у.ед., по сравнению со статикой — 66,5 [62,7; 71,6] у.ед. (р<0,01). Модификация сосудистых протезов фибрином статистически значимо не увеличила уровень агрегации тромбоцитов (р>0,05). По индексу деформации и количеству адгезированных тромбоцитов на 1 мм2 достоверных различий между графтами без модификации и графтами с фибрином не выявлено (р>0,05).
Заключение. Фидерный слой из фибрина обеспечивал достаточные адгезионные свойства для формирования эндоте-лиальной выстилки в условиях прекондиционирования напряжением сдвига, а также не оказал тромбогенного эффекта.
Финансирование. Работа выполнена при поддержке комплексной программы фундаментальных научных исследований СО РАН в рамках фундаментальной темы НИИ КПССЗ № 0419-2022-0001 "Молекулярные, клеточные и биомеханические механизмы патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний".
9. РИСК РАЗВИТИЯ
ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ OFF-PUMP ИЛИ ON-PUMP ИНТРАОПЕРАЦИОННОМ КРОВООБРАЩЕНИИ ЗАВИСИТ ОТ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ ГЕНОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА
Хуторная М. В., Понасенко А. В., Григорьев Е. В.
ФГБУ Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний, Кемерово, Россия
Операция коронарного шунтирования (КШ) является одним из наиболее эффективных способов хирургической коррекции коронарного атеросклероза. Предполагается, что после операции КШ с применением искусственного кровообращения (ИК) увеличивается риск возникновения критических послеоперационных осложнений. В ходе любого кардиохирургиче-ского вмешательства, не зависимо от наличия ИК, активируются все звенья иммунного ответа, в том числе и компоненты врожденного иммунитета. Ключевыми эффекторами врожденного иммунитета являются Toll-подобные рецепторы (TLRs) и триггерный рецептор, экспрессируемый на миелоидных клетках (TREM-1). Гены, кодирующие белковые эффекторы данных рецепторов высококонсервативны, поэтому изменение в их структуре может сопровождаться изменением скорости и эффективности координации каскада воспалительного ответа.
Цель. Оценить вклад генов врожденного иммунного ответа в развитие критических осложнений у пациентов с ишеми-ческой болезнью сердца (ИБС) после операции КШ с применением ИК и независимо от него.
Материал и методы. В исследование включено 680 пациентов (539 мужчин и 141 женщина в возрасте от 33 до 78 лет) с диагнозом ИБС (сужение просвета коронарных артерий более 70%), подвергшихся операции КШ. Ранний послеоперационный период в 30 (4,4%) случаях осложнился полиорганной недостаточностью. 592 (87%) пациентам операция была выполнена в условиях ИК, 88 (13%) пациентам на работающем сердце. Материалом для исследования послужили образцы геномной ДНК. Типирование осуществляли методом RT-ПЦР с использованием Taq-man зондов по 8 полиморфным локусам TLR1, TLR2, TLR4, TLR6 и TREM-1. Статистический анализ проводили при помощи "SNPStats".
Результаты. Обнаружено, что у пациентов, которым операция была проведена в условиях ИК, c повышенным риском развития критических осложнений в раннем послеоперационном периоде ассоциированы аллель G rs1817537 (ОШ=2,75 (95%ДИ 1,03-7,34); р=0,027), аллель Т rs2234246 (ОШ=3,43 (95%ДИ 1,1710,01); р=0,011) и аллель Т rs3804277 (ОШ=2,75 (95%ДИ 1,037,34; р=0,027) TREM-1. Аллель С rs3775073 TLR6 (ОШ=0,39 (95%Ди 0,18-0,83); р=0,017) ассоциирован со сниженным риском развития послеоперационных осложнений. В общей выборке пациентов, не зависимо от наличия ИК, c повышенным риском развития критических осложнений ассоциированы аллель G rs1817537 (ОШ=2,88 (95%ДИ (1,08-7,68); р=0,02), аллель Т rs2234246 (ОШ=3,58 (95%ДИ 1,23-10,46); р=0,0076), аллель Т rs3804277 (ОШ=2,88 (95%ДИ (1,08-7,68); р=0,02) TREM-1, а аллель С rs3775073 TLR6 (ОШ=0,34 (95% ДИ 0,16-0,72); р=0,0051) со сниженным риском развития данных осложнений.
Заключение. Носительство редких аллелей в отдельных полиморфных сайтах генов врожденного иммунитета демонстрирует свою значимость в развитии критических осложнений после операции коронарного шунтирования не зависимо от применения ИК.
Финансирование. Исследование выполнено при поддержке комплексной программы фундаментальных научных ис-
следований СО РАН в рамках фундаментальной темы НИИ КПССЗ № 0419-2022-0001.
10. ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ
ОСОБЕННОСТИ НОВЫХ ОРАЛЬНЫХ АНТИКОАГУЛЯНТОВ У ПАЦИЕНТОВ С НЕКЛАПАННОЙ ФИБРИЛЛЯЦИЕЙ ПРЕДСЕРДИЙ
Черняева М. С.1, Батюкина С. В.2, Мирзаев К. Б.2, Бочков П. А.2, Шевченко Р. В.2, Остроумова О. Д.2, Сычев Д. А.2
1ФГБУ ДПО Центральная государственная медицинская академия Управления делами Президента Российской Федерации, ГБУЗ Госпиталь для ветеранов войн №2 ДЗМ, Москва; 2ФГБОУ ДПО Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования Минздрава России, Москва, Россия
Новые оральные антикоагулянты (НОАК) широко используют для профилактики инсульта при неклапанной фибрилляции предсердий (ФП). Ривароксабан один из НОАК, который часто используется в пожилой когорте пациентов, в связи с однократным приемом в сутки. Около 2/3 дозы ривароксабана метаболизируется печенью через ферменты цитохрома P450 (CYP3A4/5 и CYP2J2), другая треть — элиминируется P-гли-копротеином (P-gp) и Breast Cancer Resistance Protein (BCRP). Совместное применение лекарственных препаратов, которые ингибируют эти метаболические пути, может привести к увеличению концентрации ривароксабана и увеличить риск нежелательных лекарственных явлений (НЛЯ), в том числе кровотечений. Блокатор кальциевых каналов (БКК), такой как амлодипин, является субстратом CYP3A4, а верапамил является ингибитором P-gp и умеренным ингибитором CYP3A4, что и побудило нас к исследованию.
Цель. Выявить фармакокинетические особенности НОАК (на примере ривароксабана) при совместном применении с БКК (на примере верапамила и амлодипина) у пациентов 80 лет и старше с неклапанной ФП в реальной клинической практике.
Материал и методы. Нами обследовано 128 пациентов старше 80 лет (медиана возраста 87,5лет [83-90лет]) с неклапанной ФП. Первую исследуемую группу составили пациенты, принимающие ривароксабан + верапамил — 30 пациентов (медиана возраста 88,5 лет [82-91 лет]), вторую исследуемую группу — пациенты, принимающие ривароксабан + амлодипин — 51 пациент (медиана возраста 87 лет [83-89 лет]). Контрольную группу составили пациенты, принимающие ривароксабан без БКК — 47 пациентов (медиана возраста 88 лет [83-89 лет]). Каждому пациенту были проведены исследования на определение минимальной равновесной концентрации ривароксабана (Cmin,ss), ПВ в плазме крови и анализ медицинской документации на наличие минимальных клинически значимых кровотечений (clinically relevant nonmajor (CRNM) bleeding).
Результаты. У пациентов 1 группы Cmin,ss ривароксабана была статистически значимо выше, чем в контрольной группе (Ме 73,8 [50,6-108,8] нг/мл против 40,5 [25,6-74,3] нг/ мл соответственно, р=0,003). ПВ в группе 1 было статистически значимо больше в сравнении как с контрольной группой (Ме 14,8 [13,4-17,3] сек против 13,8 [12,6-14,4] сек соответственно, р=0,008), так и в сравнении с группой 2 (Ме 13,3 [12,4-14,6] сек, р=0,007). Осложнения в виде CRNM bleeding встречались значимо чаще у пациентов в группе 1 в сравнении с контрольной группой (34% (6/30) против 13% (6/47) соответственно, р=0,03) и чаще в сравнении с группой 2 (14% (7/51) соответственно, р=0,04). При сравнении группы 2 с контрольной группой Cmin,ss ривароксабана, показатель ПВ и частота осложнений практически не отличались (р=0,12, р=0,97 и р=0,90 соответственно).
Заключение. Полученные результаты показывают, что у пациентов старше 80 лет с неклапанной ФП совместное применение ривароксабана и верапамила ассоциировано с более высокой концентрацией ривароксабана в сыворотке крови, которое сопровождается повышением ПВ и, как следствие, более частыми побочными эффектами в виде CRNM bleeding.
Финансирование. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда в рамках проекта № 16-15-00227.
11. ПОЛОЖИТЕЛЬНОЕ ПАРАКРИННОЕ
ВЛИЯНИЕ ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК КОРОНАРНОЙ АРТЕРИИ ЧЕЛОВЕКА НА ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ ВНУТРЕННЕЙ ГРУДНОЙ АРТЕРИИ ЧЕЛОВЕКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO
Шишкова Д. К., Маркова В. Е, Синицкая А. В., Синицкий М. Ю, Фролов А. В., Кутихин А. Г.
ФГБНУ НИИ КПССЗ, Кемерово, Россия
При коронарном шунтировании в качестве кондуитов (шунтов) чаще применяются аутологичные вены (большая подкожная вена, БПВ) чем артериальные кондуиты (внутренняя грудная артерия, ВГА), хотя последние обладают большей проходимостью в среднесрочном и отдаленном периоде, обеспечивая реваскуляризацию миокарда. Известно о различии в физиологии венозного и артериального эндотелия поэтому предлагается к проверке гипотеза о положительном влиянии эндотелиальных клеток (ЭК) коронарной (КА) и ВГА в сравнении с ЭК КА и ЭК БПВ.
Материал и методы. Проведено сокультивирование первичных ЭК КА (HCAEC, Cell Applications, 300K-05a) с первичными ЭК ВГА (HITAEC, Cell Applications, 308K-05a) либо БПВ (HSaVEC, PromoCell, C-12231) человека в соответствующих камерах для культивирования (Sigma-Aldrich). Сокультивирование HCAEC и HITAEC моделировало систему "кондуит-артерия", а HCAEC и HSaVEC — "кондуит-вена". После 6, 24 или 48 часов культивирования была забрана культуральная среда для измерения уровня интерлейкина-6 и интерлейкина-8 при помощи иммуноферментного анализа (ab178013, ab46032). C клеток были собраны РНК и белок посредством тризо-ла (Applied Biosystems, 15596018) либо RIPA-буфера (Thermo Scientific, 89901) с коктейлем ингибиторов протеаз и фосфа-таз Halt (Thermo Scientific, 78444). Экспрессию генов (CDH5, CDH2, SNAI1, SNAI2, TWIST1, ZEB1, IL6, CXCL8, NOS3, VEGFA) оценивали методом количественной полимераз-ной цепной реакции. Для иммуноблоттинга использовались антитела к VE-кадгерину (Invitrogen, 361900), N-кадгерину (Invitrogen, MA515633), Snail и Slug (Abcam, ab180714), эндо-телиальной нитрооксидсинтазе (Invitrogen, PA3031A) и бета-тубулину (Abcam, ab21057). Полуколичественный анализ результатов иммуноблоттинга выполнялся в программе ImageJ (National Institutes of Health). Статистический анализ проводился в программе GraphPad Prism 7 (GraphPad Software).
Результаты. Выявлено снижение экспрессии провоспа-лительных молекул (IL6, CXCL8, VCAM1, ICAM1 и SELE) и факторов эндотелиально-мезенхимального перехода (SNAI1 и SNAI2) и его маркера (CDH2) на генном уровне в системе "кондуит-артерия" на различных временных точках в сравнении с системой "кондуит-вена". При помощи иммуноблоттинга выявлено повышение уровня eNOS и VCAM1 и высокое соотношение VE-кадгерина к N-кадгерину в системе "кондуит-артерия", в сравнении с системой "кондуит-вена". Уровень транскрипционных факторов эндотелиально-мезенхималь-ного перехода Snail, Slug и TWIST1 был существенно снижен в системе "кондуит-артерия" на фоне повышенного уровня транскрипционного фактора артериальной дифференцировки HES1, который повышался и в системе "кондуит-вена", вызывая артериализацию HSaVEC в процессе сокультивирования. Содержание про-ангиогенных молекул в системе "кондуит-артерия" было выше, чем в системе "кондуит-вена".
Заключение. HCAEC и HITAEC (система "кондуит-артерия"") взаимно благоприятно влияют на профиль экспрессии друг друга.
Финансирование. Работа выполнена при поддержке комплексной программы фундаментальных научных исследований СО РАН в рамках фундаментальной темы НИИ КПССЗ № 0419-2021-001 "Разработка новых фармакологических подходов к экспериментальной терапии атеросклероза".
