CC BY
23
!о Результаты переаттестации Отраслевого
{2 стандартного образца активности,
ф специфичности и некротической
| активности оспенной вакцины
-о
^ Мухачева А.В., Перекрест В.В., Мовсесянц А.А., Саркисян К.А., Волкова Р.А., Фадейкина О.В.,
^ Шведов Д.В.
5
С ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»
Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Results of re-certification of reference preparation for determination of activity, specificity and necrotic activity of smallpox vaccine
Muhacheva A.V., Perekrest V.V., Movsesyants A.A.,Sarkisyan K.A., Volkova R.A., Fadeikina O.V.,ShvedovD.V.
Federal State Budgetary Institution «Scientific Center on Expertise of Medicinal Application Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow
f-------------------------------------------------------------------------------------N
В статье приведены сведения, полученные в результате переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины ОСО 42-28-113-07 (ОСО). Переаттестация проводилась в 2012 году в связи с окончанием его срока действия. Описаны методы исследований, представлены полученные результаты. Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины переаттестован со значением показателя «Специфическая активность» равным (4,9*108±1,89)*108 ООЕ/мл. Также были подтверждены характеристики, аттестованные ранее: специфичность (подлинность) и некротическая активность. Показатели «Специфическая активность» и «Подлинность» на хорионаллан-тоисной оболочке 12-дневных куриных эмбрионов оценивались в сравнении с первым Международным стандартным образцом оспенной вакцины. Проведенная переаттестация ОСО подтвердила возможность его дальнейшего использования. Срок годности до следующей переаттестации составил 3 года.
Ключевые слова: Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины; ОСО 42-28-113-07; специфическая активность, некротическая активность; специфичность (подлинность), первый Международный стандартный образец; аттестация Библиографическая ссылка: Мухачева А.В., Перекрест В.В., Мовсесянц А.А., Саркисян К.А., Волкова Р.А., Фадейкина О.В., Шведов Д.В. Результаты переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины//Биопрепараты. 2013. № 4. С.34-40.
The article describes data, which was acquired during the re-certification of branch reference preparation for the determination of the smallpox vaccine activity. The re-certification was carried out in 2012 due to expiration of reference preparation. The test methods and the acquired results are presented. Branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine was re-certified with the “specific activity” assigned value of (4,9*108±1,89)*108 pfu/ml. Other certified characteristics were also confirmed. The criteria “Specific activity” and “Identification” were determined using chorioallantoic membrane of 12-days-old chicken embryos and compared against the First International reference preparation of the smallpox vaccine. The re-certification of the branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine confirmed the possibility of its further use. The shelf-life before the next recertification is 3 years.
ПРЕПАРАТЫ
✓ s
Keywords: branch reference preparation for determination of activity, specificity and necrotic activity of smallpox vaccine; specific activity, necrotic activity; specificity (identification), international reference preparation; certification.
Bibliographic description: Muhacheva A.V., Perekrest V.V., Movsesyants A.A., Sarkisyan K.A., Volkova R.A., Fadeikina O.V., Shvedov D.V. Results of re-certification of reference preparation for determination of activity, specificity and necrotic activity of smallpox vaccine// Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 4. P. 34-40.
Для корреспонденции:
Мухачева А.В.- эксперт 1 категории лаборатории вирусных вакцин ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России Адрес: ФГБУ «НЦ ЭСМП» Минздрава России 127051, Москва, Петровский бульвар, 8 [email protected]
Статья поступила 10.09.2013 г, принята к печати 05.11.2013 г
Отраслевые стандартные образцы (ОСО) играют важную роль не только при производстве и экспертизе качества иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП), они являются неотъемлемой частью всей системы обеспечения стандартизации производства лекарственных препаратов (GMP) [1].
В области производства ИЛП на современном уровне нельзя полностью охарактеризовать препарат только физическими, химическими или физико-химическими методами. Для характеристики основных свойств иммунобиологических препаратов, таких как специфическая активность, специфическая безопасность, специфичность (подлинность), необходимо сравнение данных свойств с себе подобным аттестованным Отраслевым стандартным образцом.
Целью применения ОСО при экспертизе качества ИЛП является стандартизация методов количественного и качественного определения показателей их качества [2].
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) придает большое значение разработке, утверждению и применению Международных стандартных образцов (International Standard), которые в настоящее время называют первичными стандартными образцами, что является центральной функцией Всемирной организации здравоохранения[3].
Имеет важное значение при проведении доклинических исследований ИЛП по основным показателям качества их сравнение с аналогичными показателями отраслевого стандартного образца [4].
Проблемы, связанные с совершенствованием методов стандартизации и контроля ИЛП, в том числе и для профилактики натуральной оспы и других патогенных для человека ортопоксвирусов, являются актуальными. В этой связи необходимы разработка, аттестация и применение при производстве и контроле иммунобиологических лекарственных препаратов ОСО специфической активности, которые должны соответствовать первому Международному стандарту оспенной вакцины. Первый Международный стандарт оспенной вакцины (The international reference preparation for smallpox
vaccine) (КОД NIBSC: SMV) был утвержден в 1962 г. и представляет собой очищенную концентрированную овечью вакцину, изготовленную из штамма Lister вируса осповакцины, который используется в Великобритании при производстве вакцины более 60 лет. Каждая ампула первого Международного стандарта содержит около 14 мг лиофилизированной оспенной вакцины. Специфическая активность первого Международного стандартного образца (определяемая по количеству оспин на хорионаллантоисной оболочке (ХАО) куриных эмбрионов) должна составлять около 108,4 ООЕ (оспообразующие единицы) в 1 мл [5].
В настоящее время в Российской Федерации зарегистрированы следующие препараты для профилактики натуральной оспы: Вакцина оспенная живая, Вакцина оспенная инактивированная (ОспаВир), используемая при проведении двухэтапной вакцинации, ТЭОВак вакцина оспенная эмбриональная живая), таблетки покрытые оболочкой делимые.
В качестве кандидата в Отраслевой стандартный образец была предложена серия № 130406 препарата Вакцина оспенная живая. После прохождения исследований во ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора, данная серия была аттестована в качестве Отраслевого стандартного образца активности, специфичности (подлинности) и некротической активности оспенной вакцины в 2007 году (ОСО 42-28-113-07) в соответствии с рекомендациями ВОЗ по следующим основным показателям [6]:
1. Специфическая активность и специфичность (подлинность) на ХАО куриных эмбрионов;
2. Специфичность (подлинность) при нанесении разведений ОСО на скарифицированную кожу кроликов в дозе, равной 104 ООЕ/0,1 мл;
3. Некротическая активность: отсутствие некрозов при внутрикожном введении кроликам дозы, равной 104 ООЕ/0,1 мл.
Были установлены следующие дополнительные показатели качества: «Описание», «Герметизация», «Потеря в массе при высушивании», «Масса сухого вещества» и «Коэффициент вариации».
О5
Отраслевой стандартный образец (ОСО 42-28-11307) используют для стандартизации производства и оценки достоверности полученных данных при экспертизе качества оспенных вакцин по следующим показателям: «Специфическая активность», «Специфичность (подлинность)» [7, 8], «Некротическая активность» [7], а при исследовании качества вакцины оспенной инактивированной для определения «Антигенной активности» и «Специфической безопасности» [9].
Метод определения специфической активности и подлинности основан на способности живого вируса вакцины (осповакцины) вызывать образование типичных оспин на ХАО куриных эмбрионов, количество которых учитывается при определении специфической активности исследуемого препарата. Опыт проводится с использованием ОСО. Если величина специфической активности ОСО отличается от приведенной в свидетельстве, ее оценку проводят с использованием поправочного коэффициента. Для подтверждения специфичности (подлинности) испытуемого препарата визуально оценивают образование типичных оспин на ХАО куриных эмбрионов (по сравнению с ОСО), которые должны представлять собой белые плотные оспины диаметром от 0,5 до 3 мм.
Исследование по показателю «Специфичность» («Подлинность») вакцины оспенной живой проводят также по образованию типичных оспин на скарифицированной коже белокожих кроликов породы Шиншилла при нанесении изучаемого препарата в разведениях 10-3; 10-4; 10-5. Для оценки типичности оспин, на другой бок животного наносят аналогичные разведения (10-3; 10-4; 10-5) ОСО. По окончании исследования визуально оценивают размер оспин, внешний вид и количество в сравнении с ОСО, учитывая наличие типичных оспин в разведении 10-3, что соответствует концентрации 104 оспообразующих единиц (ООЕ)/0,1 мл. Использование ОСО позволяет оценить и, при необходимости, сделать поправку на чувствительность животных к вирусу осповакцины (при отсутствии типичных оспин при нанесении разведений ОСО требуется проведение повторного исследования), что позволяет предотвратить неверную интерпретацию результатов.
Важнейшей характеристикой безопасности живой оспенной вакцины является определение ее некротической активности. Метод основан на способности живого вируса вакцины вызывать некрозы при внутрикожном введении препарата кроликам. При нанесении дозы 104 ООЕ/0,1 мл некрозы должны отсутствовать. Оценку полученных результатов, а также проверку чувствительности животных проводят по сравнению с ОСО.
Вакцина оспенная инактивированная (ОспаВир) должна соответствовать требованиям нормативной документации по показателям «Антигенная активность», «Подлинность» и «Специфическая безопасность». При оценке специфической безопасности, испытуемая вакцина не должна вызывать специфических поражений (оспин) на ХАО куриных эмбрионов. В опыте должна быть подтверждена специфическая активность ОСО для оценки чувствительности используемой партии ку-риныхэмбрионов.
Исследования по показателям «Антигенная активность» и «Специфичность» («подлинность») вакцины оспенной инактивированной ОспаВир проводят в реакции нейтрализации на ХАО куриных эмбрионов. Отраслевой стандартный образец используют в качестве антигена для определения рабочего разведения вируса при данном исследовании.
На протяжении срока действия ОСО сохранял значения аттестованных характеристик активности, специфичности и некротической активности. В соответствии с практикой ВОЗ, по окончании срока действия необходима оценка количественных и качественных характеристик ОСО с целью определения его стабильности при хранении и возможности его дальнейшего использования [3].
Целью настоящего исследования является количественная и качественная оценка основных и дополнительных характеристик ОСО 42-28-113-07 и сравнение его основного показателя «Специфическая активность» с первым Международным стандартным образцом для переаттестации.
Материалы и методы
В качестве материалов и объектов для исследований использовали:
- первый Международный стандарт оспенной вакцины (The international reference preparation for smallpox vaccine (SMV));
- отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности ОСО 4228-113-07;
- натрия хлорид раствор для инфузий 0,9%;
- 70%-ный раствор спирта этилового;
- фосфатно-цитратный буферный раствор Мак-Ильвейна 0,004 М
Животные и куриные эмбрионы:
- 12-дневные куриные эмбрионы пород Леггорн белый из питомника ФГУП Загорское ЭПХ НИТИП МО г. Сергиев Посад и Шейвер Уайт из питомника ФГУП ППЗ «Птичное» Россельхозакадемии;
- белокожие кролики породы «Шиншилла» массой от 2,5 до 3,5 кг.
Методы:
1. Определение специфической активности проводили в девяти повторностях методом нанесения на ХАО 12-дневных куриных эмбрионов разведений исследуемого ОСО согласно методике, изложенной в инструкции по применению [10]. При этом варьировались условия выполнения опыта:
- при использовании куриных эмбрионов от разных пород кур, регламентированных нормативной документацией, и от разных поставщиков.
- при проведении исследования различными исполнителями (человеческий фактор);
- проведение исследований в сравнении с первым Международным стандартным образцом оспенной вакцины.
ПРЕПАРАТЫ
Таблица 1. Значения показателей «Специфическая активность» и «Подлинность (специфичность)» ОСО активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины
Наименование показателей Требования НД Результат исследования
Опыт № 1 (проводился одним исполнителем) Опыт № 2 (проводился 2 разными исполнителями)
Специфическая активность Не менее 1х108 ООЕ/мл и не более 2Х109 ООЕ/мл 3,1*108 ООЕ/мл 1 исполнитель: 4,3х108 ООЕ/мл 2 исполнитель: 5,7Х108 ООЕ/мл в одном опыте
5,9*108 ООЕ/мл 4,8*108 ООЕ/мл в одном опыте 1 исполнитель: 4,8Х108 ООЕ/мл 2 исполнитель: 5,7Х108 ООЕ/мл в одном опыте
5,8*108 ООЕ/мл -
4,3*108 ООЕ/мл -
Специфичность (подлинность) ОСО должен вызывать на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных оспин диаметром от 0,5 до 3 мм ОСО вызывает на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных оспин диаметром от 0,5 до 3 мм.
Среднее значение показателя «Специфическая активность» - (4,9+1,89) *108 ООЕ/мл
Примечания.
1. Количество опытов (п) - 9.
2. Среднеквадратическое отклонение (ст) - 0,945; 2ст - 1,89, вероятность (Р) - 0,95.
2. Определение специфичности (подлинности) ОСО изучали с использованием двух тестов. При введении разведений препарата на ХАО 12-дневных куриных эмбрионов должны образовываться белые плотные оспины диаметром от 0,5 до 3 мм. Исследование проводили в сравнении с первым Международным стандартным образцом. Другой метод определения подлинности проводили на кроликах. Разведения препарата вводили на скарифицированную кожу кроликов. В дозе 104 ООЕ/0,1 мл должны формироваться типичные оспины на 5-7 сутки наблюдения [7].
3. Определение некротической активности ОСО проводили методом внутрикожного введения кроликам разведений 10-3; 10-4; 10-5 ОСО [10]. Сравнение с первым Международным стандартным образцом в данном опыте не проводили ввиду отсутствия Международного стандартного образца некротической активности оспенных вакцин в коллекции NIBSC.
4. Изучение термостабильности ОСО проводили при температуре (37±1)°С в течение 28 сут [7];
5. Изучение стабильности отраслевого стандартного образца и изучения влияния высоких температур на показатель «Специфическая активность» ОСО. Образцы ОСО выдерживались в течение 6, 11 и 17 ч при температуре (56±1)°С. По окончании экспозиции проводили определение показателя «Специфическая активность» данных образцов. Каждый опыт проводили трехкратно.
6. Определение микробиологической чистоты проводи-
ли согласно требованиям нормативной документации [7];
7. Определение биохимических свойств ОСО осуществляли по следующим показателям с использованием следующих методов: рН - потенциометрическим методом; потеря в массе при высушивании - весовой метод; точность розлива - весовой метод [7, 10];
8. Определение герметичности ампул с ОСО осуществляли в соответствии с МУК 4.1/4.2.588 - 96 [7].
Результаты и обсуждение
Определение специфической активности и специфичности (подлинности) ОСО проводили на ХАО куриных эмбрионов по методу, описанному в нормативной документации (НД) [7, 10]. В каждый опыт брали не менее 2 ампул исследуемого ОСО. Всего было проведено 9 опытов в различные временные интервалы. Каждое разведение ОСО (10-5; 10-6; 10-7) в количестве 0,1 мл наносилось на ХАО не менее 10 куриных эмбрионов.
Результаты исследования ОСО по показателю «Специфическая активность» и «Специфичность» («Подлинность») на ХАО представлены в таблице 1.
Как видно из полученных результатов во всех исследованиях ОСО соответствовал требованиям НД по показателям «Специфическая активность» и «Специфичность» («Подлинность»). При статистической обработке значений показателя «Специфическая активность» среднее значение (п = 9) составило: 4,9*108 ООЕ/мл (первый Международный стандарт около 108,4 ООЕ в 1 мл). Среднеквадратическое отклонение (ст):
(7
Таблица 2. Значения показателя «Специфическая активность» и «Подлинность (специфичность)» ОСО в сравнении с первым Международным стандартным образцом Smallpox Vaccine (SMV)
Порода куриных эмбрионов Значение показателя «Специфическая активность» первого Международного стандарта SMV Значение показателя «Специфическая активность» ОСО Подлинность (специфичность) на ХАО куриных эмбрионов.
Шейвер Уайт 2,7Х108 ООЕ/мл 6,4х108 ООЕ/мл ОСО и первый Международный стандартный образец вызывают на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных оспин диаметром от 1 до 3 мм
Леггорн белый 1,3Х108 ООЕ/мл 6,7х108 ООЕ/мл ОСО и первый Международный стандартный образец вызывают на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных оспин диаметром от 1 до 3 мм
0,945. 2а составило 1,89 при вероятности 95%. При оценке специфичности (подлинности) на ХАО куриных эмбрионов наблюдали образование белых плотных оспин диаметром от 0,5 до 3 мм, что соответствует требованиям НД и свидетельствует о сохранении свойств штамма Л-ИВП вируса вакцины.
Значительной разницы между показателями специфической активности при постановке опыта разными исполнителями выявлено не было, что подтвердило воспроизводимость методики.
Для оценки вариабельности результатов специфической активности при использовании куриных эмбрионов от кур разных пород, оценки воспроизводимости результатов анализа, сравнения значений показателя специфической активности ОСО с показателем специфической активности первого Международного стандарта, был проведен опыт, результаты которого представлены в таблице 2. Как видно из представленных в таблице данных, при сравнительной оценке специфической активности и специфичности (подлинности) с использованием куриных эмбрионов разных пород, при сравнении значений показателя специфической активности ОСО и первого Международного стандарта, было установлено соответствие результатов исследования ОСО требованиям НД [5, 7, 10]. Кроме того, эти данные были сопоставимы и имели один порядок (специфическая активность составила 108 ООЕ/мл), что свидетельствует о стабильности специфической активности ОСО.
Определение специфичности (подлинности) проводили также на кроликах породы Шиншилла по методике, описанной в документации [7, 10]. На основании данныхтребований введение разведений исследуемого препарата (ОСО) должно вызывать образование типичных вакцинальных поражений - оспин при накожной аппликации кроликам. Опыт проводили с четырехкратным повтором в сравнении с первым Международным стан-
дартным образцом. На 5-7 сутки наблюдали появление типичных оспин в дозе 104 ООЕ/0,1 мл. Во всех случаях стандартный образец соответствовал первому Международному стандартному образцу и требованиям НД.
Определение некротической активности проводилось с использованием кроликов. Испытуемый препарат в дозе 104 ООЕ/0,1 мл не должен вызывать некрозов при внутрикожном введении кроликам. Разведения ОСО готовили в соответствии с требованиями нормативной документации. Каждому из двух кроликов по два укола внутрикожно вводили по 0,1 мл раствора ОСО в следующих разведениях:
- 10-2 (что соответствует активности 4,8х105 ООЕ/в 0,1мл);
- 10-3 (что соответствует активности 4,8х104 ООЕ/в
0,1мл);
- 10-4 (что соответствует активности 4,8х103 ООЕ/в
0,1мл).
На 5-е сутки на инфицированных участках кожи кроликов наблюдали отсутствие некрозов в разведении 10-3, что соответствует активности 4,8х 104 ООЕ/в 0,1мл и удовлетворяет требованиям нормативной документации.
Исследования по показателю «Некротическая активность» проводили с четырехкратным повтором. Некрозы у кроликов отсутствовали при внутрикожном введении разведения ОСО в дозе 4,8х104 ООЕ/0,1 мл.
Термостабильность ОСО изучали по методике, представленной в ФСП РN001141/01-260508 [7]. Испытуемые образцы выдерживали при температуре (37±1)°С в течение 28 суток. По окончании данного срока определяли специфическую активность испытуемых образцов. Среднее значение показателя «Специфическая активность» у ОСО после прогревания (п = 3) составило: (3,73±1,05)х108 ООЕ/мл. Среднеквадратическое отклонение (а): 1,05. Полученные данные позволили сделать вывод о том, что испытуемый стандартный образец
Таблица 3. Результаты исследования по показателю «Специфическая активность» ОСО после воздействия температуры (56±1)°С
Время прогревания при температуре (56±1)°С, ч Значения показателя «Специфическая активность» ОСО, ООЕ/мл Среднее значение показателя «Специфическая активность», ООЕ/мл
б 3,7х108; 3,9х108; 3,7Ч108 3,8 Х108
11 3,6Х108; 3,7Х108; 3,7х108 3,7 Х108
17 3,5Х108; 3,5Х108; 3,7х108 3,6 Х108
ПРЕПАРАТЫ
Таблица 4. Сравнительный анализ полученных результатов по показателям, полученным при переаттестации ОСО 42-28-113-07 в 2012 г.
№ п/п Показатель Требования НД Результаты исследования в 2007 г. Результаты исследования в 2012 г.
1. Специфическая активность Не менее 1Х108 ООЕ/мл и не более 2Х109 ООЕ/мл 4,8Х108± 0,21Х108 ООЕ/мл 4,9Х108±1,89Х108 ООЕ/мл
2. Некротическая активность В дозе 104 ООЕ/0,1 мл не должен вызывать некрозов при внутрикожном введении кроликам ОСО в дозе 104 ООЕ/0,1 мл не вызывает некрозов при внутрикожном введении кроликам ОСО в дозе 104 ООЕ/0,1 мл не вызывает некрозов при внутрикожном введении кроликам
3. Подлинность на ХАО куриных эмбрионов Должен вызывать на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных поражений диаметром от 0,5 до 3 мм ОСО вызывает на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных поражений диаметром от 0,5 до 3 мм ОСО вызывает на ХАО куриных эмбрионов образование белых плотных поражений диаметром от 0,5 до 3 мм
4. Подлинность на кроликах Должен вызывать типичные вакцинальные поражения при накожной прививке кроликам При нанесении на скарифицированную кожу кроликов дозы 104 ООЕ/0,1 мл образует типичные вакцинальные поражения При нанесении на скарифицированную кожу кроликов дозы 104 ООЕ/0,1 мл образует типичные вакцинальные поражения
5. Герметизация Ампулы должны быть герметичны. Содержание остаточного кислорода в ампулах должно быть не более 2% Ампулы герметичны. Содержание остаточного кислорода -0,2% Ампулы герметичны*
б. Потеря в массе при высушивании Не более 3% 0,5% 0,9%
7. рН От 6,5 до 7,5 6,95 7,2
8. Точность розлива (масса сухого вещества) - Масса сухого вещества - 10,8 мг, коэффициент вариации - 2,1% Масса сухого вещества - 10,8 мг, коэффициент вариации - 2,5%
9. Микробиологическая чистота В 1 мл вакцины должно содержаться не более 50 посторонних микроорганизмов, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов суммарно, должны отсутствовать патогенные анаэробные бактерии, бактерии семейства Enterobacteriaceae и виды P. aeruginosa и S. aureus В 1 мл вакцины содержится менее 10 КОЕ/мл посторонних микроорганизмов, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов суммарно. Бактерии семейства Enterobacteriaceae и виды P. aeruginosa и S. aureus отсутствуют В 1 мл вакцины содержится менее 10 КОЕ/мл посторонних микроорганизмов, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов суммарно. Бактерии семейства Enterobacteriaceae и виды P. aeruginosa и S. aureus отсутствуют
10. Термо-стабильность После прогревания вакцины при температуре (37±1) °С в течение 28 сут. Специфическая активность должна быть не менее 1 х108 ООЕ/мл После прогревания вакцины при температуре (37±1) °С в течение 28 сут. Специфическая активность составляет 3,5Х108 ООЕ/мл После прогревания вакцины при температуре (37±1) °С в течение 28 сут. Специфическая активность составляет 3,73 Х108 ООЕ/мл
*Определение содержания остаточного кислорода не проводилось.
активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины термостабилен.
Исследование на микробиологическую чистоту ОСО проводили в соответствии с требованиями НД [7]. Результаты исследования на микробиологическую чистоту подтвердили соответствие образцов ОСО требованиям нормативной документации: в 1 мл ОСО содержится менее 10 КОЕ/мл посторонних микроорганизмов, в том числе аэробных и факультативных анаэробных бактерий и грибов суммарно. Бактерии
семейства Enterobacteriaceae и виды Pseudomonas Aeruginosa и Staphylococcus Aureus отсутствуют.
Исследование по показателю «Герметизация» проводили по методу, описанному в МУК 4.1/4.2.588-96. Ампулы с отраслевым стандартным образцом активности, специфичности и некротической активности были герметичны.
Определение биохимических показателей проводились на основании требований нормативной документации [7, 10] в лаборатории биохимии ИЦЭК МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России.
С39
При анализе биохимических показателей было установлено, что все дополнительные характеристики соответствуют требованиям НД:
^- рН раствора - 7,2;
- потеря в массе при высушивании - 0,9%;
- масса сухого вещества - 10,8 мг, коэффициент вариации - 2,5%.
Для определения стабильности и изучения влияния высоких температур на специфическую активность ОСО, были проведены исследования образцов после воздействия на него температуры (56±1)°С в течение различных временных интервалов. Каждое исследование проводили по показателю «Специфическая активность» трехкратно. Средние значения этих определений по показателю «Специфическая активность» представлены в таблице 3.
Полученные данные показали, что при воздействии температуры (56±1)°С в течение 6, 11 и 17 ч ОСО сохранил нормированные показатели «Специфической активности» (значение показателя специфической активности вакцины оспенной живой по НД: не менее 1х108 ООЕ/мл и не более 2х109 ООЕ/мл). Это свидетельствует о термостабильности ОСО.
Был проведен сравнительный анализ результатов, полученным при переаттестации ОСО 42-28-113-07 в 2012 г. и исходных показателей при аттестации. Данные представлены в таблице 4. Как видно из данных таблицы, все аттестуемые и дополнительные характеристики ОСО при проведении переаттестации находились в пределах норм, указанных в нормативной документации. Значение показателя специфической активности практически не изменилось. Была подтверждена стабильность ОСО при хранении. Проведенные исследования позволили продлить срок годности ОСО на 3 года до очередной переаттестации. По результатам аттестации оформлен паспорт на научно - техническую продукцию и составлена инструкция по применению.
Выводы
1. Проведенные исследования количественных и качественных характеристик аттестуемого образца подтвердили возможность его дальнейшего использования в качестве Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины в течение 3 лет до очередной переаттестации.
2. ОСО был аттестован по показателю специфическая активность равным (4,9 ± 1,89)* 108 ООЕ/мл (среднеквадратическое отклонение - 2а).
3. Количественные и качественные характеристики показателей «Специфическая активность» и «Специфичность (подлинность)» ОСО и первого Международного стандартного образца были сопоставимы.
4. Результаты исследования подтвердили, что ОСО в дозе 104 ООЕ/0,1 мл соответствует требованиям нормативной документации по показателю «Некротическая активность».
5. Экспериментально подтверждена стабильность и термостабильность ОСО при регламентированной тем-
пературе хранения и после экспозиции при различных температурных режимах.
6. Дополнительные характеристики ОСО (биохимические показатели, микробиологическая чистота, герметизация), способные оказать влияние на значение показателей аттестованных характеристик в процессе хранения, были в пределах нормы.
Литература
1. ГОСТ Р 52249 - 2009. Национальный стандарт РФ. Правила производства и контроля качества лекарственных средств (GMP).
2. Борисевич И.В., Петухов В.Г., Мовсесянц А.А., Волкова Р.А., Фадейкина О.В. Устинникова О.Б., Никитина Т.Н., Евреинова Е.Э., Строганова М.К. Стандартные образцы для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней». М. 2010. С. 27-28.
3. WHO Expert Committee on biological standardization. Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other bioilogical reference standards. Geneva, 2004; WHO Technical Report Series 932, annex 2. - P. 73-131, 137.
4. Перекрест В.В., Мовсесянц А.А., Подкуйко В.Н., Кор-
нилова О.Г., Логинова С.Я., Борисевич С.В., Шней-берг С.В., Яковлев А.К., Сергеев А.А. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (иммунобиологические лекарственные препараты). Часть вторая / Под ред. Миронова А.Н. М.: Гриф и К. 2012. Гл. 26: Доклинические исследования оспенной вакцины С. 475495.
5. WHO International Standard The 1st International Standard
for Smallpox Vaccine NIBSC code: SMV Instructions for use (Version 4.0, Dated 18/03/2008).
6. Свидетельство на отраслевой стандартный образец
активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины (ОСО 42 - 28 - 113 - 07).
7. ФСП Р N 001141/01- 260508 на препарат «Вакцина
оспенная живая (Вакцина оспенная), лиофилизат для приготовления раствора для внутрикожного введения и накожного скарификационного нанесения в комплекте с растворителем».
8. ФСП Р N 001038/01 - 020810 на препарат «ТЭОВак
(вакцина оспенная эмбриональная живая)», таблетки покрытые оболочкой делимые.
9. ЛСР - 005198/08 - 030708 на препарат «ОспаВир.
Вакцина оспенная инактивированная, лиофилизат для приготовления раствора для подкожного введения».
10. Инструкция по применению. «Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины (ОСО 42 - 28113- 07). М. 2007. ФГУН ГИСКим. Л.А. Тарасевича.
