CC BY
9
ПРЕПАРАТЫ
5 Испытания сибиреязвенных
£ флуоресцирующих иммуноглобулинов,
£ предназначенных для выявления
| возбудителя сибирской язвы
•а
^ Лобач Р.Н.,1 Абдрашитова А.С.,2 Саяпина Л.В.3
(в
I 1ФГКУ «294 Центр спасательных операций особого риска» МЧС РФ (ФГКУ «294 ЦСООР»), Москва
5 2 ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»
Роспотребнадзора, Саратов
ф 3 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств
медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Testing anthrax fluorescent immunoglobulins for the detection of Bacillus anthracis
Lobach R.N.1, Abdrashitova A.S.2, Sayapina L.V.3
1 State-owned Federal State Institution «294 Center of rescue operations with special risks» of the Ministry of the Russian Federation for Civil Defense, Emergency Management and Natural Disasters Response, Moscow
2 Federal State-owned Healthcare Institution Russian Research Anti-Plague Institute «Microbe»
of the Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-being Surveillance, Saratov
3 Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expertise of Medical Application Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow
✓ s
В работе были изучены чувствительность, специфическая активность и специфичность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации, составила 5,0*105 спор/ мл. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки реакция иммунофлуоресценции при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%. В исследованиях доказано преимущество проведения реакции иммунофлуоресценции с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов - 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения. Ключевые слова: иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные, испытания препаратов, Bacillus anthracis, Bacillus spp.
Библиографическая ссылка: Лобач Р.Н., Абдрашитова А.С., Саяпина Л.В. Испытания сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы // Биопрепараты. 2013. № 4. С. 29-34.
The present article describes the evaluation of sensitivity, specific activity and specificity of anthrax vegetative and spore diagnostic fluorescent adsorbed immunoglobulins. High specific activity of the test anthrax immunoglobulins in experimental dilution 1:64, which is confirmed by a bright greenish-yellow bacterial cell membrane luminescence with intensity of 3-4 cross in 93.8% of the swabs.
The sensitivity of preparations in which Bacillus anthracis can be found in the lowest concentration is 5,0*10 spores/ml. The experimental data confirms that the preparations possess relatively high specificity with respect to the closely related microorganisms, which was observed in 75% (vegetative) and 96.9% (spore) test samples. The repeatability of performing immunofluorescence reaction with positive and negative samples in all cases was 100%. The present study shows the advantage of performing immunofluorescence reaction using fluorescent immunoglobulins at the time of result recording of 2.5-3 hours when assessing the samples of the environment and biological material against 40 hours hemolysis test method. Based on the results of medical research the preparations were registered in the Russian Federation as a medicinal products. Keywords: anthrax fluorescent immunoglobulins, evaluation of preparations, Bacillus anthracis, Bacillus spp. Bibliographic description: Lobach R.N., Abdrashitova A.S., Sayapina L.V. Testing anthrax fluorescent immunoglobulins for the detection of Bacillus anthracis // Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 4. P. 29-34.
Для корреспонденции:
Саяпина Л.В. - главный эксперт Управления экспертизы противобактериальных МИБП
Центра экспертизы и контроля МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России.
Адрес: ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России
119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41,
e-mail: Sayapina@expmed.ru
Статья поступила 29.05.2013 г, принята к печати 22.08.2013 г
За последние 5 лет заболеваемость сибирской язвой на территории России несколько стабилизировалась, однако все еще остается на высоком уровне, что дает основание прогнозировать на ближайшие годы неблагоприятную эпидемическую ситуацию [2, 8]. Одной из главных причин имеющегося эпидемиологического неблагополучия по сибирской язве является способность возбудителя образовывать во внешней среде устойчивые споры, что обуславливает не только дальнейшее сохранение возбудителя в анабиотическом состоянии, но и возможность размножаться и накапливаться в почве. При определенных условиях это способствует созданию долговременных активных почвенных очагов и потенциально опасных территорий и может приводить к постоянной угрозе заражения, развития эпизоотий и эпидемий. Кроме этого, существует возможность завоза инфицированных животных, сырья и продуктов животного происхождения, контаминированных спорами возбудителя, из неблагополучных по сибирской язве стран [3].
Учитывая спорообразующую способность возбудителя сибирской язвы и длительное пребывание в таком состоянии во внешней среде, вопрос своевременного выявления В. anthracis является весьма актуальным [6, 7]. При этом возникает острая необходимость в проведении лабораторной диагностики стандартными препаратами с целью индикации возбудителя сибирской язвы в чистых культурах, а также в различных объектах окружающей среды: почва, подстилка, вода, продовольственное сырье, фураж, продукты животного происхождения [5]. Недостаточное обеспечение лабораторных служб зарегистрированными препаратами ставит эту проблему в число приоритетных для практического здравоохранения [1, 10]. В России до 2010 г для индикации возбудителя сибирской язвы применялись только 2 препарата, которые были зарегистрированы в установленном порядке, тест-система ГенСИБ (Рос-
сия) и набор реагентов «АмплиСенс® B. anthracis-FRT» (Россия). Из современных методов серологической диагностики наиболее доступной, быстрой и надежной является реакция иммунофлуоресценции (РИФ) [4, 9].
Таким образом, актуальность нашей работы обусловлена существованием на территории России более 35 тыс. стационарно неблагополучных пунктов по сибирской язве, создающих потенциальную возможность ухудшения эпидемической обстановки, а также отсутствием диагностических препаратов, предназначенных для индикации возбудителя сибирской язвы, прошедших регистрацию в Российской Федерации.
В Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте (СтавНИПЧИ) для обнаружения вегетативной и споровой форм Bacillus anthracis в мазках из чистых культур, а также в различных объектах окружающей среды и биологическом материале с помощью РИФ разработаны иммуноглобулины флуоресцирующие сибиреязвенные вегетативные и споровые адсорбированные. Испытуемые препараты представляли собой меченную флуоресцеином-изотиоцианатом (ФИТЦ) иммуноглобу-линовую фракцию к водорастворимому антигену споровой или вегетативной форм Bacillus anthracis, выделенные из гипериммунных кроличьих сывороток и адсорбированные на основе магноиммуносорбентов водорастворимыми антигенами штаммов Bacillus cereus 8, Bacillus cereus 104, Bacillus cereus 111, Bacillus megaterium 6.
Целью работы явилось изучение диагностической ценности (специфическая активность, чувствительность, специфичность, воспроизводимость) сибиреязвенных флуоресцирующих иммуноглобулинов в РИФ.
Материалы и методы
В работе были изучены экспериментальные серии иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих
ПРЕПАРАТЫ
сибиреязвенных вегетативных и споровых адсорбированных. Учитывая,что в практическом здравоохранении отсутствуют аналоги зарегистрированных препаратов, в качестве метода сравнения применили широко используемый бактериологический тест на гемолиз [5], позволяющий идентифицировать возбудителя сибирской язвы от других видов рода Bacillus. Каждый опыт проводили с соблюдением принципов строго контролируемого эксперимента в соответствии с протоколами медицинских исследований препаратов.
Материалом для исследования служили штаммы чистых культур микроорганизмов, которые были подобраны в Государственной коллекции микроорганизмов ГИСК им. Л.А. Тарасевича и ГосКПБ ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», в том числе: B. anthracis - 16 штаммов; B. cereus - 8 штаммов; B. subtilis - 8 штаммов; B. megaterium - 6 штаммов; B. thuringiensis - 5 штаммов; B. anthracoides - 5 штаммов. Все штаммы были типичными по культурально-морфоло-гическим, биохимическим и генетическим свойствам.
Испытуемые препараты оценивали по физико-химическим свойствам, чувствительности (минимальное количество сибиреязвенного микроба, выявляемое в исследуемых пробах чистых культур), специфической активности (процент правильно идентифицированных штаммов B. anthracis и выявленных положительных проб объектов окружающей среды и биологического материала к числу контаминированных), специфичность (процент отрицательных результатов при исследовании проб, контаминированных близкородственными микроорганизмами), воспроизводимость (процент совпадений результатов исследования положительных и отрицательных проб), продолжительность анализа в часах.
Учитывая, что сибиреязвенные иммуноглобулины, будут использовать для выявления споровой формы возбудителя сибирской язвы в различных объектах окружающей среды и биологическом материале, особое внимание уделялось подготовке проб из почвы, фуража и мяса крупного рогатого скота. Всего было исследовано 450 проб объектов внешней среды (вода, почва, смывы с объектов внешней среды, корма) и биологического материала (мясо), искусственно контаминированных B. anthracis в концентрациях 1 *106, 1 х107, 1 *108 м.к./мл и близкородственными микроорганизмами (B. subtilis, B. megaterium, B. cereus, B. thuringiensis, B. anthracoides) в концентрации 1*108 м.к./мл.
Микроскопию мазков осуществляли с помощью люминесцентного микроскопа «CarlZeissPrimoStar» под иммерсионным объективом, применяя иммерсионное не флуоресцирующее масло. Оценку результатов при микроскопии приготовленных мазков проводили по 4-крестовой системе. При просмотре 30 и более полей зрения специфическим считали свечение с яркостью на 4 креста (сверкающая флуоресценция зеленовато-желтого цвета оболочки микробной клетки) или 3 креста (яркая флуоресценция зеленовато-желтого цвета оболочки микробной клетки. Свечение с яркостью на 2 или 1 крест (слабое свечение всей клетки) считали неспецифическим и не учитывали.
Результаты и обсуждение
Проведены испытания иммуноглобулинов сибиреязвенных, предназначенных для обнаружения вегетативной и споровой форм B. anthracis в РИФ. При оценке внешнего вида иммуноглобулины в ампуле представляли собой аморфную пористую массу желто-оранжевого цвета. После добавления 0,5 мл очищенной воды содержимое ампул растворялось в течение 1 мин при встряхивании, и имело вид прозрачной опалесцирую-щей жидкости желто-оранжевого цвета. По физико-химическим свойствам препараты соответствовали требованиям нормативной документации.
В результате испытаний сибиреязвенных вегетативных иммуноглобулинов установлено, что их специфическая активность составила 93,8%. При этом из 16 исследуемых штаммов B. anthracis в концентрации 1,0* 108 спор/мл, препарат в рабочем разведении 1:64, выявлял 15, а в разведении 1:128 - только 10 штаммов (62,5%).
Одновременно было показано, что препарат в разведении 1:64 окрашивал 8 штаммов (25%) других видов Bacillus из 32 исследованных. Невысокую специфичность препарата (75%) можно объяснить генетическим родством сибиреязвенного микроорганизма с другими видами рода Bacillus [10].
Определение чувствительности препарата по способности выявлять в рабочем разведении минимальные концентрации сибиреязвенного микроба в мазках из штаммов B. anthracis в концентрациях от 1*104 до 1*108 м.к./мл, позволило установить его высокую чувствительность. При просмотре 30 полей зрения в мазках наблюдали специфическое свечение с интенсивностью на 3-4 креста 1-2 и более микробных клеток B. anthracis в концентрации 5,0*105 м.к./мл.
Анализ результатов, полученных при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала, подтвердил высокую диагностическую эффективность препарата, который в разведении 1:32 выявлял B. anthracis в вегетативной форме в концентрации 1,0*108 м.к./мл в 100% случаев. Результаты исследований представлены в таблице 1.
По данным технических испытаний сибиреязвенных споровых иммуноглобулинов установлена их высокая чувствительность. Испытуемые иммуноглобулины при просмотре мазков окрашивали с интенсивностью на 3-4 креста от 10 до 20 спор в поле зрения все штаммы в концентрации 1,0* 105спор/мл. При изучении специфической активности иммуноглобулинов на 16 штаммах B. anthracis в концентрации 1,0* 108спор/мл в разведении 1:64 были выявлены 15 штаммов (93,8%), а в разведении 1:128 - 13 штаммов (81,2%). Специфичность сибиреязвенных иммуноглобулинов изучали на 32 штаммах близкородственных микроорганизмов. Полученные данные свидетельствовали о том, что препарат обладает достаточно высокой специфичностью (96,9%). Установлено, что в рабочем разведении 1:64 зарегистрировано свечение на 3 креста только с одним штаммом B. cereus 688В.
Проведение медицинских испытаний препарата показало, что в пробах объектов внешней среды и биологического материала с помощью испытуемого пре-
Таблица 1. Результаты испытаний иммуноглобулинов флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных сухих
Показатель Количество проб Результаты исследований при использовании
РИФ (иммуноглобулины флуоресцирующие в разведении 1:64) теста на гемолиз
Чувствительность (минимальное количество микробных клеток, м.к./мл, B. anthraa's, выявляемое в РИФ) 5 5,0Х105
Специфическая активность (выявляемые штаммы B. anthraa's), % 16 93,8 100
Специфичность (отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами), % 32 75 100
Выявляемые штаммы B. anthraa's в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 -
Отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 -
Установленные виды микроорганизмов при проведении теста на гемолиз, % 48 100
Воспроизводимость (совпадение результатов исследования положительных и отрицательных проб), % 20 100 -
Время учета результатов, в том числе с учетом подготовки всех материалов - Через 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала Через 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала
Примечание. (-) - данные отсутствуют. Таблица 2. Результаты испытаний иммуноглобулинов флуоресцирующих сибиреязвенных споровых адсорбированных
Показатель Количество проб Результаты исследований при использовании
РИФ (иммуноглобулины флуоресцирующие в разведении 1:64) теста на гемолиз
Чувствительность (минимальное количество спор, спор/мл, B. anthraa's, выявляемое в РИФ) 5 5,0 х105
Специфическая активность (процент правильно идентифицированных штаммов B. anthraa's), % 16 93,8 100
Специфичность (процент отрицательных результатов с близкородственными микроорганизмами), % 32 96,9 100
Выявляемые штаммы B. anthraa's в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 -
Отрицательные результаты с близкородственными микроорганизмами в пробах объектов окружающей среды, % 225 100 -
Процент правильно установленных видов микроорганизмов при проведении теста на гемолиз 48 - 100
Воспроизводимость (процент совпадений результатов исследования положительных и отрицательных проб), % 20 100 -
Время учета результатов, в том числе с учетом подготовки всех материалов, ч - 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала
Примечание. (-) - данные отсутствуют.
ПРЕПАРАТЫ
парата в разведении 1:64 возбудитель сибирской язвы выявлялся в 100% случаев. Кроме этого, в ходе испытаний уточнена методика обеззараживания мазков на этапе их приготовления для исследований.
Результаты исследования иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных споровых адсорбированных сухих представлены в таблице 2.
Воспроизводимость результатов с помощью испытуемых иммуноглобулинов изучали при постановке РИФ в разные дни и разными исполнителями. Для этого мазки, приготовленные из штамма В. anthracis (положительные пробы) и из штамма В. cereus (отрицательные пробы), окрашивали испытуемыми иммуноглобулинами в разведении 1:64. Воспроизводимость совпадения результатов при исследовании положительных и отрицательных проб при 10-кратном повторении во всех случаях составила 100%.
Проведенные сравнительные исследования выявили преимущество постановки РИФ с помощью флуоресцирующих вегетативных и споровых иммуноглобулинов перед методом сравнения (тест на гемолиз). Продолжительность проведения исследований с помощью испытуемых иммуноглобулинов составила 20 ч при исследовании проб чистых культур и 2,5-3 ч при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала; при исследовании проб с помощью теста на гемолиз - 20 ч при исследовании проб чистых культур и 40 ч - при исследовании проб объектов окружающей среды и биологического материала. Приведенные временные затраты в РИФ значительно ниже, чем при проведении исследований бактериологическим методом, что особенно важно при обнаружении возбудителя сибирской язвы из объектов окружающей среды и биологического материала.
На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения.
Выводы
1. В ходе изучения установлена высокая специфическая активность исследуемых сибиреязвенных иммуноглобулинов в рабочем разведении 1:64, что подтверждается ярким зеленовато-желтым свечением оболочки микробной клетки интенсивностью на 3-4 креста в 93,8% мазков.
2. Чувствительность препаратов, при которой возбудитель сибирской язвы может обнаруживаться в минимальной концентрации,составила 5,0*105спор/мл.
3. Полученные данные свидетельствовали о том, что препараты обладают достаточно высокой специфичностью по отношению к близкородственным микроорганизмам, которая была отмечена в 75% (вегетативные) и 96,9% (споровые) исследуемых проб. Воспроизводимость постановки РИФ при исследовании положительных и отрицательных проб во всех случаях составила 100%.
4. В исследованиях доказано преимущество проведения РИФ с помощью флуоресцирующих иммуноглобулинов по времени учета результатов - 2,5-3 ч при исследова-
нии проб объектов окружающей среды и биологического материала против 40 ч методом теста на гемолиз.
5. На основании данных, полученных в медицинских исследованиях, препараты зарегистрированы в Российской Федерации в качестве изделия медицинского назначения. Литература
1. Горобец Е.А. Разработка и получение иммунобиологических препаратов для лабораторной диагностики сибирской язвы // Вестник СГУ: Научный журнал (Ставрополь). 2006. Вып. 47(2). С. 290-292.
2. Еременко Е.И., Рязанова А.Г., Буравцева Н.П. и др. Сибирская язва в Российской Федерации в 2009 году: анализ и прогноз//Здоровье населения и среда обитания. 2010. Вып. 5(206). С. 38-39.
3. Куличенко А.Н., Еременко Е.И., Цыганкова О.И. Современные проблемы сибирской язвы в Российской Федерации // Вестник Российской военно-медицинской академии. 2008. № 2 (22). Ч. II. Приложение. С. 619-620.
4. Куличенко А.Н., Еременко Е.И., Буравцева Н.П., Рязанова А.Г. Диагностика сибирской язвы в Российской Федерации //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2010. № 5. С. 62-66.
5. Лабораторная диагностика для обнаружения сибирской язвы: Методические указания. Ставрополь. 2008. 65 с.
6. Сибирская язва: актуальные проблемы разработки и внедрения медицинских средств защиты / Под ред. Онищенко Г.Г., Кожухова В.В. М.: Медицина, 2010.423 с.
7. Онищенко Г.Г., Кузькин Б.П., Кутырев В.В., Щербакова С.А., Пакскина Н.Д., Топорков А.В. Актуальные направления совершенствования лабораторной диагностики особо опасных инфекционных болезней // Пробл. особо опасных инф. 2010. № 1(99). С. 5-10.
8. Рязанова А.Г., Еременко Е.И., Буравцева Н.П., Цыганкова О.И., Цыганкова Е.А., Аксенова Л.Ю. и др. Эпидемиологическая ситуация по сибирской язве в Российской Федерации: анализ заболеваемости в 2010 г., прогноз на 2011 г. // Пробл. особо опасных инф. 2011. № 1(107). С. 42-45.
9. Саяпина Л.В., Абдрашитова А.С., Лобач Р.Н., Ком-ратов А.В., Малахаева А.Н., Ляшова О.Ю. и др. Диагностическая эффективность иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих сибиреязвенных вегетативных адсорбированных по данным медицинских испытаний // Пробл. особо опасных инф. 2012. № 4 (114). С. 92-96.
10. Хлынцева А.Е., Белова Е.В., Жарникова И.В., Тю-менцева И.С., Куличенко А.Н., Дятлов И.А., Шемякин И.Г. Конструирование тест-системы для селективного концентрирования спор Bacillus anthracis на основе магнитных частиц с иммобилизованными моноклональными антителами // Биотехнология. 2010. № 4. С. 81-83.
11. Цыганкова О.И., Еременко Е.И., Цыганкова Е.А., Буравцева Н.П., Рязанова А.Г. Фенотипические и генетические особенности культурально-морфологических вариантов Bacillus anthracis//Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2008. № 4. С. 6-8.
!а Результаты переаттестации Отраслевого
{2 стандартного образца активности,
ф специфичности и некротической
| активности оспенной вакцины
-о
^ Мухачева А.В., Перекрест В.В., Мовсесянц А.А., Саркисян К.А., Волкова Р.А., Фадейкина О.В.,
^ Шведов Д.В.
С ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»
Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Results of re-certification of reference preparation for determination of activity, specificity and necrotic activity of smallpox vaccine
Muhacheva A.V., Perekrest V.V., Movsesyants A.A.,Sarkisyan K.A., Volkova R.A., Fadeikina O.V.,ShvedovD.V.
Federal State Budgetary Institution «Scientific Center on Expertise of Medicinal Application Products»
of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow f->
В статье приведены сведения, полученные в результате переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины ОСО 42-28-113-07 (ОСО). Переаттестация проводилась в 2012 году в связи с окончанием его срока действия. Описаны методы исследований, представлены полученные результаты. Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины переаттестован со значением показателя «Специфическая активность» равным (4,9*108±1,89)*108 ООЕ/мл. Также были подтверждены характеристики, аттестованные ранее: специфичность (подлинность) и некротическая активность. Показатели «Специфическая активность» и «Подлинность» на хорионаллан-тоисной оболочке 12-дневных куриных эмбрионов оценивались в сравнении с первым Международным стандартным образцом оспенной вакцины. Проведенная переаттестация ОСО подтвердила возможность его дальнейшего использования. Срок годности до следующей переаттестации составил 3 года.
Ключевые слова: Отраслевой стандартный образец активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины; ОСО 42-28-113-07; специфическая активность, некротическая активность; специфичность (подлинность), первый Международный стандартный образец; аттестация Библиографическая ссылка: Мухачева А.В., Перекрест В.В., Мовсесянц А.А., Саркисян К.А., Волкова Р.А., Фадейкина О.В., Шведов Д.В. Результаты переаттестации Отраслевого стандартного образца активности, специфичности и некротической активности оспенной вакцины//Биопрепараты. 2013. № 4. С.34-40.
The article describes data, which was acquired during the re-certification of branch reference preparation for the determination of the smallpox vaccine activity. The re-certification was carried out in 2012 due to expiration of reference preparation. The test methods and the acquired results are presented. Branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine was re-certified with the "specific activity" assigned value of (4,9*108±1,89)*108 pfu/ml. Other certified characteristics were also confirmed. The criteria "Specific activity" and "Identification" were determined using chorioallantoic membrane of 12-days-old chicken embryos and compared against the First International reference preparation of the smallpox vaccine. The re-certification of the branch reference preparation for the determination of activity, specificity and necrotic activity of the smallpox vaccine confirmed the possibility of its further use. The shelf-life before the next recertification is 3 years.
