Аттестация новой серии отраслевого стандартного образца вакцины желтой лихорадки для контроля специфической активности Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ПРЕПАРАТЫ

s

£ Аттестация новой серии отраслевого

стандартного образца вакцины желтой ф лихорадки для контроля специфической

активности

•Q

^ Бархалёва О.А.,* Синюгина А.А.,** Саркисян К.А.,* Ладыженская И.П.,* Воробьёва М.С.,*

Фадейкина О.В.,* Волкова Р.А.,* Киктенко А.В,** Шведов Д.Б.*

С *ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства

здравоохранения Российской Федерации, Москва О **ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института

полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН», Москва

New batch of yellow fever vaccine reference standard qualification for the control of specific activity

Barhaleva O.A.*,Sinyugina A.A.**,Sarkisyan K.A.*, Ladyzhenskaya I.P.*, Vorobieva M.S.*, Fadeikina O.V.*, Volkova R.A.*, Kiktenko A.V.**, Shvedov D.B.*

*Federal State Budgetary Institution "Scientific Center on Expertise of Medicinal Application Products" of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

**Federal State Unitary Enterprise on Manufacture of Bacterial and Viral Preparations of Chumakov Institute of Poliomyelitis & Viral Encephalitides, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow

В статье представлены материалы по аттестации новой серии отраслевого стандартного образца (ОСО) вакцины желтой лихорадки, необходимого для оценки качества серий вакцины по показателю «Специфическая активность» при контроле на производстве и при сертификации в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России. Основными аттестуемыми характеристиками ОСО являются специфическая активность, однородность, стабильность, выявляемые при тестировании. Образцы вакцины желтой лихорадки - кандидата в ОСО были аттестованы по показателям качества, указанным в Спецификации действующей ФСП: ЛС 000592-28-0909 на препарат Вакцина желтой лихорадки живая сухая: «Специфическая активность», «Подлинность», «Термостабильность», по визуальным и физико-химическим показателям и точности розлива. Показатель «Специфическая активность» кандидата в ОСО оценивали в сравнении с действующим отраслевым стандартным образцом ОСО 42-28-312-11П ВЖЛ и первым Международным стандартом вакцины желтой лихорадки NIBSC-99/616. Новая серия ОСО вакцины желтой лихорадки аттестована со значением показателя «Специфическая активность» (титр аттенуированного вируса желтой лихорадки штамм 17Д в культуре клеток PS), равным (4,34±0,34) lg БОЕ/0,5 мл. ОСО ВЖЛ - специфичен, термостабилен.

Ключевые слова: желтая лихорадка, вакцина желтой лихорадки, отраслевой стандартный образец (ОСО), первый Международный стандарт ВЖЛ, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ), специфическая активность, термостабильность, подлинность, культура клеток PS. Библиографическая ссылка: Бархалёва О.А., Синюгина А.А., Саркисян К.А., Ладыженская И.П., Воробьёва М.С., Фадейкина О.В., Волкова Р.А., Киктенко А.В, Шведов Д.Б. Аттестация новой серии отраслевого стандартного образца вакцины желтой лихорадки для контроля специфической активности //Биопрепараты. 2013. № 4. С. 41-47.

The article demonstrates materials on qualification of new batch of yellow fever vaccine branch reference standard, intended to be used for specific activity evaluation of vaccine batches during their manufacture and consequent certification at the FSBI «SCEMAP». Main characteristics of the branch reference standards, assessed during qualification, are specific

activity, homogeneity and stability. Quality parameters of the candidates for branch reference standard (samples of the yellow fever vaccine) were tested according to the current manufacturer's monograph 000592-28-0909 «Yellow fever vaccine, live, dried»: «Specific activity». «Identification», «Thermostability», visual and physico-chemical criteria along with fill accuracy. Specific activity of the candidate vaccine was assessed in comparison with current branch reference standard 42-28-312-11P for yellow fever vaccine and First International Standard for Yellow Fever Vaccine (NIBSC 99/616). New batch of the yellow fever vaccine branch reference standard has been qualified with a specific activity (a titer of an attenuated yellow fever virus, strain 17D, in PS cell culture) of (4,34±0,34) lg BFU/0,5 ml. It was determined, that the branch reference standard of the yellow fever vaccine is specific and thermostable. Key words: yellow fever, yellow fever vaccine, branch reference preparation, first international standard for yellow fever vaccine, World Health Organization, specific activity, thermostability, identification, PS cell culture.

Bibliographic description: Barhaleva O.A., Sinyugina A.A., Sarkisyan K.A., Ladyzhenskaya I.P., Vorobieva M.S., Fadeikina O.V., Volkova R.A., Kiktenko A.V., Shvedov D.B. New batch of yellow fever vaccine reference standard qualification for the control of specific activity // Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 4. P. 41-47.

Для корреспонденции:

Бархалева О.А. - ведущий эксперт лаборатории вирусных вакцин Испытательного Центра экспертизы качества

МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России

Адрес: ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России,

119002, Москва, пер. Сивцев Вражек, 41

e-mail: [email protected]

Статья поступила 01.01.2013 г, принята к печати 05.11.2013 г

Желтая лихорадка - зооантропонозная, особо опасная, карантинная вирусная инфекция. Вирус желтой лихорадки эндемичен для тропических районов Африки и южной Америки. В зоне риска инфицирования находятся 33 государства Африки с населением более 500 млн. человек, а также 9 государств Южной Америки и Карибских островов [1].

Для вакцинации во всем мире используется живая вакцина желтой лихорадки (ВЖЛ), приготовленная на основе аттенуированного штамма 17Д и являющаяся единственным средством специфической профилактики жёлтой лихорадки [3]. Штамм 17Д вируса желтой лихорадки (ЖЛ) был получен из дикого вируса ЖЛ (штамм Азиби), изолированного в Гане в 1927 г, после аттенуации серией пассажей, главным образом, в тканях куриных эмбрионов.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) предоставляет эталонный материал и прототипные первичные посевные серии вируса желтой лихорадки штамма 17Д для последующего использования национальными производственными предприятиями. Первичная посевная серия вируса ЖЛ, полученная из ВОЗ, используется для приготовления вторичной посевной серии вируса ЖЛ, первый пассаж от которой является вакциной желтой лихорадки. В качестве субстрата для пассирования вируса ЖЛ штамма 17Д и получения вакцинного препарата применяются эмбрионированные куриные яйца категории SPF [6, 7].

В настоящее время ВЖЛ производится в 7 странах мира: Франция, Швейцария, США, Бразилия, Россия, Китай, Сенегал [6, 9]. В России ВЖЛ выпускается ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН» [2]. В 2011 г. были

аттестованы две новые серии вторичного посевного вируса: ЖЛ штамма 17Д - №26/10 и № 32/10, полученные на основе первичной посевной серии ВОЗ -№ 213/77 [5].

Наиболее важным критерием качества ВЖЛ является показатель «Специфическая активность». В каждой стране - производителе вакцины ЖЛ, согласно рекомендациям ВОЗ, при определении активности вакцинного вируса ЖЛ в опыте титрования вакцины необходимо использовать аттестованный и утвержденный отраслевой стандартный образец препарата - ОСО ВЖЛ [7]. Несмотря на наличие международных и национальных требований к показателю «Специфическая активность», для гармонизации результатов оценки активности серий вакцины в разных странах, ВОЗ принято решение о необходимости разработки международного стандарта активности - общего для производств ВЖЛ в разных странах. Для этой цели на базе Национального института биологической стандартизации и контроля NIBSC (Великобритания) проводились исследования по созданию и мониторингу качества Международного стандарта вакцины ЖЛ [8, 9].

Впервые о приготовлении образцов Международного стандарта вакцины ЖЛ сообщалось в 1983 г.. Совместные исследования, проведенные производственными лабораториями и лабораториями отделов контроля качества разных стран, показали пригодность изучаемого кандидата для получения международного стандарта ВЖЛ. Была подтверждена необходимость калибрования этого стандарта в международных единицах (МЕ) с целью улучшения интерпретации и сходимости результатов оценки активности вакцины между

ПРЕПАРАТЫ

лабораториями всего мира. Первый Международный стандарт вакцины ЖЛ с установленным значением титра вакцинного вируса в международных единицах -104,2 (4,2 1д МЕ) в дозе 0,5 мл - был официально введен в действие в 2003 г в NIBSC (Великобритания); тогда же был разработан и утвержден Сертификат Международного стандарта ВЖЛ, присвоен код - 99/616 [8-10].

В 2008 г Комитет экспертов по биологической стандартизации (ECBS) ВОЗ утвердил изменения к Требованиям по производству вакциныЖЛ, даны рекомендации по оценке активности вакцины ЖЛ методом титрования в культуре клеток по феномену бляшкообразования под агаром в международных единицах (МЕ).

В результате коллаборативных исследований был установлен нижний уровень показателя активности вакцины ЖЛ - не менее чем 3,0 1д МЕ в дозе 0,5 мл [9]. Для каждого производителя вакцины ЖЛ и соответствующей контрольной лаборатории регулярно, по запросу, рассылаются образцы Международного стандарта для калибрования в МЕ активности национального стандарта отраслевого стандартного образца (ОСО) вакцины ЖЛ, применяемого при проведении контроля качества коммерческих серий препарата.

В России с 2000 г при контроле и сертификации каждой выпускаемой серии ВЖЛ использовался отраслевой стандартный образец ВЖЛ - ОСО 42-28-312-00. В связи с удовлетворительной активностью и стабильностью, срок действия ОСО-42-28-312-00 после проведения испытаний и сертификации в Национальном органе контроля (ГИСК им. Л.А. Тарасевича Минздрава России), продлевался каждые три года до 2012 г В 2012 г потребовалось изготовление и аттестация новой серии ОСО ВЖЛ.

На предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П.Чумакова РАМН» была изготовлена вакцины желтой лихорадки живая сухая, серия № 145 (дата выпуска: октябрь 2011 г.), Вакцина представляет собой тонкоизмельченную ткань куриных эмбрионов, свободных от специфической патогенной микрофлоры (SPF), зараженных атте-нуированным вирусом желтой лихорадки штамм 17Д, очищенную центрифугированием и лиофилизиро-ванную в объеме 0,5 мл. Образцы данной серии были представлены в августе 2012 г. для испытания и аттестации в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России в качестве кандидата новой серии отраслевого стандартного образца - ОСО ВЖЛ.

Цель исследования - Аттестация новой серии ОСО ВЖЛ для контроля специфической активности.

Задачи исследования:

1. Испытание образцов серии № 145 вакцины ЖЛ по требованиям действующей ФСП ЛС-000592-28-0909 на ВЖЛ для аттестации в качестве новой серии ОСО:

- определение визуальных показателей: «Описание», «Время растворения», «Описание восстановленного препарата»;

- определение точности розлива;

- определение физико-химических показателей: «Белковый азот»; «Потеря в массе при высушивании»; «Прозрачность восстановленного препарата»;

- определение показателй: «Специфическая активность»; «Подлинность»; Термостабильность»».

2. Анализ результатов испытания образцов серии № 145 ВЖЛ в сравнении с результатами параллельного испытания образцов предыдущего ОСО42-28-312-11П и образцов первого Международного стандарта ВЖЛ код 99/616.

3. Оформление Паспорта на ОСО ВЖЛ и присвоение регистрационного номера ОСО.

Материалы и методы

Материалы:

- образцы вакцины ЖЛ, серия. № 145, для аттестации в качестве кандидата новой серии ОСО ВЖЛ в количестве необходимом для испытания;

- образцы ОСО 42-28-312-11П - ранее выпущенный отраслевой стандартный образец ВЖЛ,.который до 2012 г. использовался при производстве и контроле ВЖЛ на предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН» и в лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России для сертификации серий ВЖЛ;

- образцы первого Международного стандарта вакцины ЖЛ, код 99/616 (поступили в лабораторию вирусных вакцин Испытательного центра ЦЭК МИБП ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России в октябре 2012 г.);

- культура клеток перевиваемой линии PS (почка эмбриона свиньи, клетки в ФГУП получены из Института Роберта Коха, Германия); культура клеток 30-го пассажа, поступила из ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН» одновременно с образцами вакцины;

- иммунная сыворотка к штамму Дакар вируса желтой лихорадки сер 505, срок годн. до 08.2013 г., получена из ФГУП ПИПВЭ им. М.П.Чумакова РАМН.

Методы:

Испытания образцов ВЖЛ серии № 145 - кандидата новой серии ОСО проводили в соответствии с методами, утвержденными и действующими на территории РФ, изложенными в Государственном стандарте качества - ФСП-ЛС000592-28-0909 на Вакцину желтой лихорадки живую сухую [2].

1. Испытание по визуальным показателям: «Описание», «Время растворения», «Описание восстановленного препарата».

2. Определение точности розлива в лиофилизиро-ванном препаратае ВЖЛ проведено весовым методом. Принцип метода заключается в определении массы вещества в каждой исследуемой ёмкости (ампуле) и расчете коэффициента вариации. Для испытания было использовано 30 ампул препарата. Данное испытание имеет ключевое значение, так как при значительном отклонении результатов оценки точности розлива образцов кандидата в ОСО - проведение дальнейших испытаний и их интерпретация не имеет смысла. Отклонение массы содержимого одной ампулы от средней массы исследуемых образцов не должно превышать 3% [11].

£

3. Испытание по физико-химическим показателям: «Белковый азот», «Потеря в массе при высушивании», «Прозрачность восстановленного препарата» проведено по общепринятым методикам ГФ XI и ГФ XII [11, 12]. После получения положительных результатов физико-химического и аналитического контроля приступили к аттестации ВЖЛ серии № 145 по основным показателям:

4. Испытание по показателям: «Подлинность», «Специфическая активность», «Термостабильность» проводили в соответствии с требованиями и методами, изложенными в ФСП-ЛС000592-28-0909 [2].

Согласно международным требованиям, испытание вакцины ЖЛ по показателю «Специфическая активность» (определение титра вируса ЖЛ штамма 17Д в одной прививочной дозе 0,5 мл) проводят методом титрования в одной из трех культур клеток, указанных в нормативной документации на вакцину ЖЛ: а) первич-но-трипсинизированные фибробласты эмбрионов кур (ФЭК); б) перевиваемая культура клеток почек зеленой мартышки(VERO); в) перевиваемая культура клеток почек эмбрионов свиньи (PS). Все три культуры разрешены к применению.

Российский производитель использует при производственном контроле серий ВЖЛ для титрования вирусной биомассы и конечного продукта культуру клеток PS. В связи с этим, для определения специфической активности, подлинности, термостабильности серии ВЖЛ № 145 - кандидата в ОСО было выбрано исследование вышеуказанных показателей методом титрования препарата на перевиваемой культуре клеток почек эмбрионов свиньи (PS). Основным требованием по данному показателю является утвержденный ВОЗ нижний уровень активности ВЖЛ. Вакцина (кандидат в ОСО) должна содержать в одной дозе (0,5 мл) не менее 1600 БОЕ вируса. Для наиболее достоверной интерпретации результатов при аттестации, каждое исследование специфической активности проводили четырехкратно, используя в каждом испытании по 3 образца (3 ампулы) ВЖЛ сер. № 145,( за исключением испытания № 1, когда были использованы 2 образца). Титрование каждой из 3 (или 2) ампул вакцины проводили отдельно. Для разведения вакцины использовали растворитель - вода для инъекций, который входит в комплект препарата, добавляя по 0,5 мл растворителя на одну прививочную дозу. Восстановленную вакцину выдерживали при температуре от 18 до 25оС в течение 15-20 мин. Титрование проводили путем последовательных десятикратных разведений образцов вакцины, которые в объеме 0,1 мл вносили в лунки планшетов с монослоем культуры клеток PS. Через 5 сут визуально наблюдали появление очагов поражения клеток (бляшек) и проводили подсчет титра вируса в бляшкообра-зующих единицах (БОЕ) [2].

При каждом испытании специфической активности вакцины ВЖЛ - кандидата в ОСО, параллельно проводили титрование одного образца предыдущей серии ОСО № 42-28-312-11П и одного образца первого Международного стандарта ВЖЛ ^^С 99/616).

5. Испытание термостабильности и подлинности препарата проводили одновременно с оценкой пока-

зателя «Специфическая активность». Требованием к показателю «Термостабильность» является отсутствие значительного снижения титра вируса вакцины, выраженного в 1д БОЕ/0,5 мл, который, после прогревания препарата при температуре от 36 до 38оС в течение 2 недель, не должен снижаться более, чем на 1,0 1д и должен быть не менее 1600 БОЕ в одной дозе - 0,5 мл.

6. Испытание по показателю «Подлинность» ВЖЛ серии № 145 подтверждали в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток PS по подавлению бляшкоо-бразования вируса вакцины ЖЛ кроличьей иммунной диагностической антисывороткой к вирусу желтой лихорадки, штамм Дакар. Иммунная кроличья сыворотка к штамму Дакар вируса желтой лихорадки в рабочем разведении должна нейтрализовать 100-300 БОЕ в 0,1 мл вакцинного вируса желтой лихорадки, штамм 17Д. Индекс нейтрализации должен быть не менее 1,0 1д.

Статистические исследования: Определение среднего титра активности вируса в 1д БОЕ/0,5мл проводили общепринятыми статистическими методами [13]. Вычисляли среднее значение титров вируса (Хср.) по результатам титрований 11 образцов кандидата в ОСО и стандартное отклонение - о. Результаты представлены в виде (Хср ± 2о) Параллельно определяли титр для 4 образцов ОСО42-28-312-11П и 2 образцов первого Международного стандарта ВЖЛ. Пересчёт показателей титра вируса вакцины ЖЛ, выраженного в 1д БОЕ/0,5 мл, в показатели титров активности в 1д МЕ/0,5мл, проводили согласно рекомендациям ВОЗ [9, 10].

Результаты и обсуждение

В Испытательном центре ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России были проведены испытания ВЖЛ серии № 145 - кандидата новой серии ОСО по ряду показателей качества препарата в соответствии с требованиями, предъявляемыми к ВЖЛ в ФСП ЛС 000592280909. По визуальным показателям: «Описание», «Время растворения», «Описание восстановленного препарата», а также физико-химическим показателям «Белковый азот», «Потеря в массе при высушивании». «Прозрачность восстановленного препарата» серия № 145 ВЖЛ соответствовала требованиям ФСП-ЛС000592-28-0909. По результатам точности розлива лиофилизированного препарата серия № 145 ВЖЛ соответствовала требованиям и при массе вещества в ампуле (среднее значение), равном 0,05216 г, коэффициент вариации составил 0,935%. Этот показатель свидетельствует о том, что в пределах допустимого колебания (коэффициент вариации 3%) каждая ампула испытуемых образцов кандидата в ОСО представляет собой однородную и точно разлитую продукцию.

Согласно требованиям к аттестации стандартных образцов, было проведено испытание физико-химических показателей серии № 145 ВЖЛ - кандидата в ОСО: «Белковый азот», «Потеря в массе при высушивании», «Прозрачность восстановленного препарата». По указанным показателям серия № 145 соответствует требованиям, предъявляемым к ОСО и нормативной документации на вакцину ЖЛ.

ПРЕПАРАТЫ

Таблица 1. Визуальные и физико-химические показатели испытания образцов ВЖЛ - кандидата в ОСО

Наименование показателя Метод Требования НД ФСП ЛС000592-28-0909, изм. № 1 Результаты испытания

Визуальные показатели

Описание Визуальный Пористая масса светлорозового цвета, гигроскопична Пористая масса светлорозового цвета, гигроскопична

Время растворения Визуальный Не более 5 мин при добавлении 0,5 мл растворителя на одну дозу Менее 5 мин при добавлении 0,5 мл растворителя на одну дозу

Описание восстановленного препарата Визуальный Опалесцирующая жидкость желтовато-розового цвета Опалесцирующая жидкость желтовато-розового цвета

Физико-химические показатели

Белковый азот Колориметрический Не более 0,25 мг/доза 0,123 мг/доза

Потеря в массе при высушивании Весовой Не более 2,5% 1,5%

Прозрачность восстановленного препарата Колориметрический Не более 0,6 ед. ОП 0,4 ед. ОП

Точность розлива в лиофилизиро-ванных препаратах Весовой Не более 3% Масса вещества в ампуле (среднее значение) 0,05216 г. Коэффициент вариации - 0,935%

Результаты исследования по визуальным, физико-химическим показателям и точности розлива представлены в таблице 1.

Одним из основных показателей, характеризующих серию ВЖЛ, является показатель «Специфическая активность» т.е. содержание в одной прививочной дозе строго регламентированного количества живого атте-нуированного вируса желтой лихорадки.

В таблице 2 представлены результаты испытания специфической активности образцов ВЖЛ серии № 145 -кандидата в ОСО. Испытания проводили в 4 опытах при параллельном исследовании 11 образцов вакцины, 4 образцов предыдущего ОСО 42-28-312-11П и 2 образцов первого Международного стандарта N^0 код 99/616 при титровании в культуре клеток PS по БОЕ. Различия в показателях титров активности испытуемой

Таблица 2. Результаты сравнительных испытаний по показателю «Специфическая активность» образцов ВЖЛ серия № 145 (кандидата в ОСО), ОСО ВЖЛ 42-28-312-11П и первого Международного стандарта ВЖЛ, код 99/616 (титры вакцинного вируса ЖЛ, выражены в 1д БОЕ/0,5 мл)

Испытание № Специфическая активность ВЖЛ,* сер. № 145, титр в 1д Б0Е/0,5 мл Специфическая активность ОСО 42-28-312-11 П, титр в 1д Б0Е/0,5 мл Специфическая активность первого Международного стандарта ВЖЛ 99/616, титр в 1д Б0Е/0,5 мл

Ампула № Титр в 1д Б0Е/0,5 мл Средний показатель

1 1 2 4,23 3,99 4,11±0,17 4,10 н/п

2 1 2 3 4,33 4,43 4,52 4,42 ±0,09 4,54 4,14

3 1 2 3 4,48 4,43 4,58 4,49±0,08 4,54 4,14

4 1 2 3 4,34 4,36 4,24 4,32 ±0,06 4,30 н/п

Среднее значение (п ОСО ВЖЛ) 11 4,34±0,34 Значение аттестованной характеристики ОСО ВЖЛ представлено в виде Хср±2ст 4,37 4,14

Примечание. н/п - не проводилось.

*В соответствии с требованиями ФСП - ЛС000592-28-0909 вакцина ЖЛ должна быть специфически активна, содержать в одной дозе (0,5 мл) не менее 1000 ЛД50 вируса или 1600 БОЕ (3,2 1д БОЕ).

С45

Таблица 3. Результаты испытания по показателю «Термостабильность» образцов серии № 145 ВЖЛ - кандидата в ОСО

Испытание № Специфическая активность ВЖЛ сер. 145, титр в ^ БОЕ/0,5 мл Специфическая активность ВЖЛ, сер. №145 после прогревания, титр в ^ БОЕ/0,5 мл Показатель снижения титра вируса ЖЛ после прогревания (^ БОЕ/0,5мл)

1 4,11 3,60 0,51

2 4,42 4,09 0,33

3 4,49 4,09 0,40

4 4,32 3,90 0,42

Среднее значение (П = 4) 4,34 3,92 0,42

Примечание. В соответствии с требованиями ФСП - ЛС000592-28-0909 титр вируса вакцины после прогревания при температуре от 36 до 38 0С в течение двух недель не должен снижаться более, чем на 1,0 1д и должен быть не менее 1000 ЛД50 вируса или 1600 БОЕ (3,2 1д БОЕ) в одной дозе (0,5 мл).

серии № 145 ВЖЛ, ОСО42-28-312-11П и первого Международного стандарта ВЖЛ по каждому измерению и по средним показателям были незначительными: 4,34 1д БОЕ; 4,37 1д БОЕ; 4,14 1д БОЕ соответственно.

Специфическая активность исследованных образцов ВЖЛ серии № 145 по результатам статистической обработки 4 испытаний (п = 4) составила: (4,34+0,34) 1д БОЕ/0,5 мл. Вышеуказанное значение аттестованной характеристики представлено в виде: Х ср ± 2о.

При пересчёте в МЕ средний показатель титра специфической активности серии № 145 ВЖЛ, составил 4,11 1д МЕ/0,5 мл.

Испытание термостабильности (37оС в течение 14 сут), проводили параллельно с оценкой специфической активности этой серии ВЖЛ, хранившейся при регламентированной температуре от 2 до 8оС.

В исследовании по аттестации кандидата в ОСО показатель «Термостабильность» играет важную роль, так как устойчивость активной субстанции при ускоренной термодеградации свидетельствует о стабильности показателей препарата в условиях длительного хранения, что является одним из ключевых качеств отраслевых стандартных образцов.

Результаты испытания представлены в таблице 3. Снижение активности образцов серии № 145 ВЖЛ при прогревании в течение 14 сут при температуре 37оС происходило в пределах от 0,33 1д до 0,51 1д, среднее значение при п = 4 составило 0,42 1д, что соответствовало требованиям ФСП на вакцину ЖЛ.

Результаты аттестации образцов вакцины ВЖЛ серии № 145 по показателю «Подлинность» представлены в таблице 4. В реакции нейтрализации (РН) на

культуре клеток PS аттенуированный вирус ЖЛ, содержащийся в ВЖЛ, нейтрализуется специфической иммунной сывороткой к штамму Дакар вируса ЖЛ с ИН (индекс нейтрализации) от 2,93 до 3,54, среднее значение ИН при п = 3 составляет 3,29, что соответствует требованиям ФСП на вакцину ЖЛ.

Таким образом, на основании анализа полученных результатов по всем показателям аттестации кандидата новой серии ОСО ВЖЛ получены результаты, позволяющие дать положительную оценку испытуемой серии № 145 ВЖЛ и зарегистрировать ее в качестве новой серии ОСО.

Срок годности новой серии ОСО 42-28-312-2012 в соответствии с требованиями ФСП ЛС000592-28-0909 на вакцину ЖЛ составляет 2 года.

Выводы

1. Аттестована в качестве новой серии отраслевого стандартного образца (ОСО) ВЖЛ вакцина желтой лихорадки живая сухая серия № 145 (выпуск октябрь 2011 г.) производитель: «ФГУП ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН».

2. Показано, что новая серия ОСО ВЖЛ соответствует требованиям Государственного стандарта на вакцину желтой лихорадки живую сухую - ФСП ЛС-000592-280909, а также требованиям ВОЗ к аттестации стандартных образцов по показателям «Специфическая активность», «Подлинность», «Термостабильность», визуальным и физико-химическим показателям, точности розлива.

3. Установлено значение показателя «Специфическая активность» для новой серии ОСО ВЖЛ в

Таблица 4. Результаты испытания по показателю «Подлинность» образцов серии ВЖЛ № 145 - кандидата в ОСО

Испытание № Титр вируса ЖЛ в ^ БОЕ/0,5 мл с неиммунной кроличьей сывороткой Титр вируса ЖЛ в ^ БОЕ/0,5 мл с иммунной кроличьей сывороткой к штамму Дакар вируса ЖЛ Индекс нейтрализации (ИН) вируса ЖЛ в образцах ВЖЛ

1 4,40 <1,0 ИН: >3,40

2 4,54 <1,0 ИН: >3,54

3 3,93 <1,0 ИН: >2,93

Примечание. В соответствии с требованиями ФСП - ЛС000592-28-0909 индекс нейтрализации (ИН) представляет собой разницу 1д титров вируса с неимунной и иммунной сывороткой и должен быть не менее 1,0 1д.

ПРЕПАРАТЫ

регламентированных единицах 1д БОЕ/0,5мл и международных единицах 1д МЕ/0,5 мл. Аттестованная характеристика по показателю «Специфическая активность» составила: (4,34 ± 0,34) 1д БОЕ/0,5 мл и 4,11 1д МЕ/0,5 мл.

4. На основании результатов аттестации новой серии ОСО ВЖЛ оформлен «Паспорт на научно-техническую продукцию ОСО вакцины желтой лихорадки», присвоен номер ОСО 42-28-312-2012 (взамен ОСО 42-28312-11П), дата аттестации: 05.12.2012 г; срок годности: 05.12.2014 г Назначение: для контроля специфической активности вакцины желтой лихорадки.

Литература

1. Медуницын Н.В. Вакцинология. М.: Триада-Х, 2010. Гл. 27. С. 258-259.

2. ФСП - ЛС000592-28-0909 «Вакцина желтой лихорадки живая сухая».

3. Инструкция по медицинскому применению препарата: «Вакцина желтой лихорадки, живая сухая».

4. Грачев В.П., Ральф Н., Авдеева Л.И др. Иммунологическая эффективность вакцины желтой лихорадки в зависимости от прививочной дозы // Матер. Симпозиума по полевым испытаниям вакцин. Загреб, Югославия. 1973. С. 185-190.

5. Ладыженская И.П., Воробьёва М.С., Бархалё-ва О.А. и др. Аттестация новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки,

штамм 17Д // Эпидемиология и вакцинопрофилак-тика. 2012. № 3 (64). С. 54-61.

6. Производство и испытания первичной посевной серии ВОЗ 213/77 вируса желтой лихорадки и эталонной серии 168/73//Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Сер. техн. докл. № 745. Женева: ВОЗ, 1988 (Приложение 6. С. 103-129).

7. WHO. Requirements for yellow fever vaccine // WHO Expert Committee on Biological Standardization. Forty seven report. Geneva:WHO, 1998. Annex 2 (Who Technical Report, Series № 872; на русском языке: ВОЗ, Доклад № 46: Требования к вакцине против желтой лихорадки, 1998. С. 40-92).

8. Ferguson M., Heath A. Collaborative study to assess the suitability of candidate International Standard for yellow fever vaccine // Biologicals. 2004. V. 32 (4). P. 195-205.

9. WHO Working Group on Technical Specifications for Manifacture and Evaluation of Yellow Fever Vaccines (Meeting Report). Geneva, Switzerland. 2009. 31 р. (http://www. who.int/immunization/documents).

10. WHO International Standard: First International Standard for Yellow Fever Vaccine, NIBSC code:99/616. Instructions for use. (Version 5.0, Dated 14/10/2010).

11. ГФ РФ XI. М. 1998.

12. ГФ РФXII. ч. 1. М. 2007.

13. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М. 1999. С. 32-36.