CC BY
25
МОЛОДЫЕ УЧЁНЫЕ
#1 В. Шмунк, Е, П\ Конева
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ТРАНСЛОКАЦИИ Т(15;17)
У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ПРОМИЕЛОЦИТАРНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Острые лейкозы — группа клональных заболеваний, первично возникающих в костном мозге в результате мутации стволовой клетки крови. Морфологический субстрат острых лейкозов — бластные клетки. Для большинства клинико-морфологических типов гемобластозов характерны неслучайные изменения кариотипа, в частности хромосомные транслокации, приводящие к формированию химерных генов. Так, транслокация t(15;17)(q22;q21) и соответствующий химерный ген FML-RARA специфичны для острого промиелоцитарного лейкоза (ОПЛ, М3). Лейкоз с транслокацией t(15;17) обладает уникальной чувствительностью к дифференцирующему агенту—АТРА. Применение АТРА, особенно в комбинации с химиотерапией, существенно улучшает результаты лечения ОПЛ: в 70-90 % случаев удается достигнуть многолетней ремиссии, вплоть до полного излечения. То есть обнаружение транслокации t(15;17) на молекулярном уровне имеет решающее значение для выбора терапии. Достижение полной ремиссии при ОПЛ сопровождается исчезновением химерного транскрипта, если же его удается вновь обнаружить, то это обычно предвещает рецидив.
Цель работы. Оценить значение метода QRT-PCR (количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени) в обнаружении транслокаций на молекулярном уровне и установлении молекулярной ремиссии у больных острыми лейкозами.
Материалы и методы. Опытную группу составили больные острым миелобластным лейкозом (9 взрослых, 3 детей). Наличие транслокаций определяли методом RT-PCR (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией). Мониторинг уровня химерного транскрипта в процессе лечения и контроль минимальной остаточной болезни осуществляли методом QRT-PCR (Real-time PCR), обладающим высокой чувствительностью и позволяющим обнаруживать неопластические клетки даже в малом количестве.
Результаты и выводы. У всех больных была обнаружена транслокация t(15; 17) (химерный ген PML-RARA). После проведения лечения среди всех больных химерный транскрипт не обнаруживался, также наблюдалось снижение уровня транскрипции мРНК химерного гена, что говорит о наступлении ремиссии на молекулярном уровне.
Е. Б. Хромова, Д. С. Сташкевич, А. Л, Бурмистрова, А, О. Исаканова
ВКЛАД ГЕНА НЬА~1ЖВ1*04 И ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНА Т№а В ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К РЕВМАТОИДНОМУ АРТРИТУ У РУССКИХ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
На сегодняшний день одним из приоритетных направлений современной медицины является развитие генной диагностики, которая позволяет определить предрасположенность к различным патологиям, в том числе и к ревматоидному артриту (РА). Одним из факторов предрасположенности к РА являются гены, локализованные в пределах главного комплекса гистосовместимости (НЬАЛЖВ! и ТЖх). Достоверно установлена ассоциативная связь РА с геном НЬАЛЖВ1*04 в русской популяции Челябинской области
(Т. А. Суслова, А. Л. Бурмистрова, Е. Б. Хромова, в печати). Однако не все больные несут этот ген, в связи с чем продолжается поиск других генов-кандидатов. Одним из наиболее вероятных является ген фактора некроза опухолей а (Т№а).
Цель работы: оценить совместный вклад гена НЬА-01Ш1*04 и полиморфизмов типа ЭКР в точках -1031, -863, -857, -308, -238 гена Т>Шх в предрасположенность к РА у русских Челябинской области.
Материалы и методы. Больные РА отбирались на базе ревматологического отделения ГКБ Кг 6 (кафедра госпитальной терапии Челябинской государственной медицинской академии). В основную группу вошли 83 больных РА (критерии Американской коллегии ревматологов 1987 г.). Для типирования генов локуса НЬА-ОКШ применяли ПЦР с сиквенс-специфическими праймерами (НЬА-ДНК-Тех, фирма «НПФ ДНК-технология», Россия).
Типирование полиморфизма типа ЭИР гена ЮТа проводилось методом полиморфизма длин рестикционных фрагментов (ПДРФ): амплификация с последующей рестрикцией полученных ампликонов ферментами — эндонуклеазами рестрикции. Детекция результатов — электрофорез в 3 %-м агарозном и 8 %-м полиакриламидном геле. Статистическая обработка—критерий Пирсона (х2).
Результаты исследования. Общая группа больных РА была разделена на две в зависимости от наличия или отсутствия гена НЬА-ВКВ1*04 (НЬА-ОШЗ 1*04+, НЬА4ЖВ1*04-). Результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что:
1. Полиморфизмы гена ТКРа -1031, -863, -857, -238 не связаны с ВЪА-ВКВ1*04 и не влияют на предрасположенность к РА у русских Челябинской области.
2. В группе больных РА, не несущих ген НЬА-В1Ш1*04, достоверно чаще встречается гетерозиготный генотип по аллелю высокой продукции -308О/А ТЫРа (48,5 % против 26 %, х2 = 4,42, р = 0,035) и снижена частота гомозиготного генотипа с аллелем нормальной продукции ЮТа (48,5 % против 74 %, %2 = 5,61, р = 0,018) по сравнению с больными, несущими НЬА-В1Ш1*04.
Можно предположить, что при отсутствии НЬА-ШВ1*04 — гена первичной предрасположенности в развитии РА участвуют другие гены, в частности, вариант БЫР-308А ЮТа — аллель высокой продукции. '
Е. В. Хромова, Т. А, Суслова, А. Ж Бурмистрова, И. Ш Шеремеева, С. Л Степанова ЭФФЕКТИВНЫЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА
Центральное место в лабораторной диагностике ревматоидного артрита (РА) занимают серологические тесты, связанные с обнаружением циркулирующих антител. До сих пор лабораторная диагностика РА ограничивалась в основном определением ревматоидного фактора (РФ). Однако данный метод имеет ограничения: низкая специфичность и нестабильность. В настоящее время установлено, что наиболее специфичным (98 %) и высоко чувствительным (82 %) серологическим тестом является определение аутоантител к цитруллинированным пептидам, в том числе антител к модифицированному цит-руллинированному виментину (анти-MCV).
Появление и накопление анти-MCV антител определяется следующими механизмами: под воздействием фермента PAD (пептидил-аргинин дезиминаза) происходит изменение
структуры виментина, а именно, его конфигурации и суммарного заряда. Такой модифицированный виментин выступает в качестве «артритогенного пептида», который с высокой аффинностью встраивается в антигенсвязываюхций карман молекулы НЬА, преимущественно НЬА 01Ш1*04. В результате происходит активация аутореактивных Т-хелперов, запускающих выработку аутоантител-анти-МСУ к модфицированному цит-руллинированному виментину.
Цель работы. Определить корреляцию между уровнем содержания анти-МСУ антител и носигельством гена НЬА Б1Ш1*04 у больных РА.
Материалы и методы. Обследовано 29 больных РА. У всех больных исследовали сыворотку крови для обнаружения антител к МСУ иммуноферментным методом, НЬА ШВІ*04 определяли с помощью ІЩР.
Результаты. Полученные результаты представлены в таблице.
Средняя концентрация МСУ антител у больных РА в зависимости от наличия в фенотипе гена НЬА-Х)КВ1*04
Группа N = 29 MCV (U/ml) MCV, % положит (n) £
Носители DRB1*04 12 1231,647 100 (12) 3,28
Без DRB1*04 17 648,895 76 (13)
Норма до 20 U/ml.
Аутоантитела против МСV в диагностическом титре обнаружены у всех больных РА, носителей НЬА 01Ш1*04, тогда как у больных РА, не несущих НЬА 01Ш*04, только у 76 % Сх? ~ ЗД8, р>0,05). Средняя концентрация антител у больных РА без НЬА-В11В1*04 почти вдвое меньше, чем у носителей этого гена. Таким образом, выявлена корреляция анти-МСУ антител с носительством НЬА~БКВ1*04.
Заключение. Совместное определение НЬА БКВ1*04 и анти-МСУ антител является эффективным лабораторным тестом для диагностики ревматоидного артрита.
М. Я. Вавилов, И. В. Решетников, М. С Чернова, А. Л,\ Бурмистрова РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ MICB В ПОПУЛЯЦИИ РУССКИХ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
Гены МС, открытые в 1994 г., расположены в пределах области НЬА I класса хромосомы 6. На данный момент известно 7 локусов, из которых только MICA и MICB кодируют полипептиды. Известно более 60 вариантов аллелей MICA и около 25 аллелей MICB. Их организация, экспрессия и продукция значительно отличаются от генов НЬА I. Гены МГСА/М1СВ кодируют белки, которые являются отдаленно схожими с продуктами генов HLAI. Через связывание рецептора NKG2D на ЕК и Т-лимфоцитах белки MICA/MICB обеспечивают мощную костимуляцию ЕК и Т-лимфоцитов и, следовательно, могут определить величину и результат некоторых эффекторных функций.
Поскольку эти гены являются полиморфными, рассматривается их возможная роль в отторжении трансплантата. Также антигены MIC могут быть связаны с аутоиммун-«леваниями, с иммунным ответом на опухоль, с защитой против некоторых
Цель исследования. Определить частоты встречаемости аллелей MICB в популяции русских Челябинской области. Сравнить результаты с литературными данными.
Материалы и методы. Было исследовано 38 человек—русских жителей Челябинской области. Генотипирование проводилось полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с использованием комплекса реагентов и протоколов исследований, предложенных С. Darke (Wales, XJK). Статистическая обработка проходила с использованием стандартных формул для нахождения фенотипической и генотипической частот [Зарецкая, 1982].
Результаты и обсуждение. Самым распространенным аллельным вариантом гена MICB является М1СВ*502 (78,9 %), что согласуется с литературными данными. Распределение остальных аллелей в нашей работе сходно с данными зарубежных авторов: МЮВ*02 (15,8 %), ШСВ*03 (5,3 %), МСВ*04 (44,7 %), ЩСВ*0501 (2,6 %).
Наибольшее расхождение получено по частотам М1СВ*08 (5,3 %) и ШСВ*0503 (10,5 %).
Выводы. Установлены точные частотные характеристики распростронения аллелей MICB в популяции русских Челябинской области. Расхождение в частотах может говорить о специфическом распределении аллельных вариантов МЮВ среди жителей Челябинской области.
Для дальнейшего изучения аллельного полиморфизма MICB необходимо увеличить количество обследуемых лиц.
Е. С. Калиниченко, С. В. Тимофеева, О, Н. Димчева,
М. Н> Вавилов, Т. А. Суслова
ПОПУЛЯЦИОННОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ НЬА-А У НАГАЙБАКОВ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
Нагайбаки — единственная из 40 малых народностей России, проживающая в Челябинской области. Данная этнографическая группа представляет интерес с точки зрения популяционной генетики в силу своей изолированности и сложности формирования.
Цель данной работы. Оценить распределение генов локуса НЬА-А в популяции на-гайбаков в сравнении с русскими, проживающими в Челябинской области.
Материалы и методы. ПЦР с 88Р, электрофорез в 3 %-м агарозном геле. Для статистической обработки полученных результатов использовался критерий Пирсона (х2). Контингент обследуемых лиц — нагайбаки (49 человек), русские (97 человек).
Результаты исследований, С наибольшей частотой в популяции нагайбаков встречаются антигены А*02, А*03} А* 11, А*24 и А*29. При сравнении с русскими выявлены иммуногенетические особенности в распределений гена А*29, который статистически , достоверно повышен у нагайбаков (%2=4,73, р<0,05). Возможно, это связано с изоляцией данной популяции. Также у нагайбаков снижена частота встречаемости гена А*01, который характерен для европейцев и реже встречается у монголоидов, но это снижение не имеет статистической значимости, вероятно, из-за небольшой выборки исследуемой популяции. Гены А* 11 и А*24 повышены на уровне тенденции. Данные гены характерны для монголоидов и свидетельствуют о родстве с ними нагайбаков.
Вывод. Установлены частоты генов НЬА-А среди представителей популяции нагайбаков. Отмечена высокая частота генов, характерных для европеоидов: А*01, А*02, А*03} А*29, повышена частота генов А*11 и А*24} которые отражают влияние монголоидной популяции при формировании данного этноса.
ПРОФИЛЬ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ мРНК ЦИТОКИНОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ ПРИ НОРМАЛЬНОМ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОМ СОСТОЯНИИ ОРГАНИЗМА
Исследования последних лёт показали, что анализ внеклеточных ДШС и РНК, циркулирующих в плазме крови, является многообещающим диагностическим подходом. Оценка качественного и количественного профиля циркулирующих нуклеиновых кислот может стать удобным инструментом для диагностики, мониторинга и прогнозирования самых разных клинических состояний. В настоящее время циркулирующие в плазме нуклеиновые кислоты используют для диагностики рака, в том числе на ранних стадиях заболевания, когда опухоль еще не диагностируется при инструментальных методах исследования, и при мониторинге беременности, когда на основе анализа нуклеиновых кислот плода, циркулирующих в крови матери, устанавливают пол и резус-фактор ребенка, диагностируют осложнения течения беременности и генетические заболевания плода.
В данной работе был проанализирован уровень представленности внеклеточных мРНК ряда цитокинов в плазме крови у группы здоровых людей. Установлено, что представленность во внеклеточной среде транскриптов исследуемых цитокинов характеризуется определенным профилем, отличающимся от профиля экпрессии этих генов, детектируемого в мононуклеарах крови.
Эти результаты позволяют предположить возможность использования данных о цитокиновом профиле внеклеточного пространства для оценки функционального состояния организма, а сравнение значений этого параметра для различных клинических состояний, возможно, откроет новые перспективы в диагностике и мониторинге болезней.
Д. С Сташкееич, Е. В. Шахматова, Т. А. Суслова, И. В. Девальд
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ а И ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К РЕВМАТОИДНОМУ АРТРИТУ У ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ БАШКИРСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
Ревматоидный артрит (РА) — системное аутоиммунное заболевание, развитие которого определяется генетической составляющей и влиянием неблагоприятных факторов внешней среды. Одной из важных черт иммунопатогенеза РА является участие фактора некроза опухолей а (ТЫР а). По литературным данным? уровень экспрессии его белкового продукта зависит от полиморфизмов в промоторной области гена.
Ранее группой авторов (А. Л. Бурмистрова, Т. А. Суслова, Д. С. Сташкевич, 2007) была показана значимость полиморфизма в точке —3080/А ТЪП? <х для клинического течения РА у больных русской этнической группа
Цель исследования: изучить распределение аллельных вариантов и генотипов полиморфизма типа 8ЫР в точках -863, -308, -238 промотора гена Т№а у здоровых лиц и больных ревматоидным артритом башкирской этнической группы Челябинской области.
материалы и методы. Отбор больных (61 человек) проводился вне зависимости от стадии, клинического варианта течения заболевания и возраста начала РА. Контрольная группа (94 представителя башкирской популяции) состояла из кадровых дойоров
стволовой клетки Челябинской областной станции переливания крови. Принадлежность к этнической группе определялась по данным генеалогического анамнеза в третьем поколении (согласно рекомендациям 8-го Международного Уоркшопа в 1980 г., Лос-Анджелес, США). Тилирование SNP в гене TNFa — ПДРФ — анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов: амплификация с последующей обработкой ампликонов эндонуклеазами рестрикции Ncol для положения -308 (G/А), ВатШ для положения -238 (G/A) при 37 °С и Тай для сайта -863 (С/А) при 65 °С. Детекция результатов — электрофорез в 8 %-м ПААГе. Статистическая обработка результатов: критерий Пирсона (х2).
Результаты исследования.
1. При анализе распределения частот аллелей SNPs -863, -308, -238 в выборках больных РА и здоровых лиц не получено статистически значимых различий.
2. Частоты генотипов в исследуемых группах также оказались сходными.
Таким образом, исследуемые полиморфизмы гена TNFa не связаны с предрасположенностью к РА у представителей башкирской популяции Челябинской области.
А. С. Букова, A. JI. Бурмистрова, Д. С. Сташкевич, Н. Е, Самышкина, М. В. Кузина
ПОЛИМОРФИЗМ ТИПА VNTR ГЕНА ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 У ЖЕНЩИН, БОЛЬНЫХ ВУЛЬВОВАГИНАЛЬНЫМ КАНДИДОЗОМ
Вульвовагинальный кандидоз (ВВК)—заболевание, характеризующееся разнообразием тяжести и синдромов: от эпизодической вспышки до многократно повторяющегося инфекционного процесса. Главным возбудителем и наиболее изученным видом является оппортунистический микроорганизм—Candida albicans. Предполагается, что разнообразие форм заболевания и восприимчивость организма могут быть связанны с генетической составляющей. В рамках оценки предрасположенности к ВВК ведется поиск генов кандидатов, в том числе среди генов цитокинов. Ген ИЛ-4 картирован на q плече хромосомы 5, в кластере генов ТЪ2 цитокинов. Для ИЛ-4 описано несколько полиморфизмов, одним из которых является полиморфизм типа VNTR, локализованный, в третьем интроне, который составил вариабельное число тандемных повторов в последовательности, равной 70 парам нуклеотидов. Функциональное значение этого полиморфизма не известно, но существует мнение, что число тандемных повторов VNTR ИЛ-4 может влиять на транскрипционную активность гена.
Цель исследования. Провести сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов гена, кодирующего ИЛ-4, у женщин, больных ВВК, и здоровых лиц.
Материалы и методы. Распределение генов цитокинов было изучено у 48 женщин русской национальности, больных ВВК. Контрольная группа составила 213 здоровых на момент исследования кадровых доноров Челябинской областной станции переливания крови русской национальности. Для определения VNTR ИЛ-4 использовали ПЦР с праймерами, синтезированными в институте химической биологии и фундаментальной медицины (ИХБиФМ СО РАН) и электрофорез в 8 %-м ПААГе.
Результаты исследования. Распределение частот аллелей и генотипов гена ИЛ-4 у женщин, больных ВВК, не отличалось рт распределения аллелей и генотипов этого гена в контрольной группе.
Таким образом, можно предположить, что полиморфизм типа VNTR ИЛ-4 не связан с предрасположенностью к ВВК.
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ СИСТЕМЫ HLA У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЁЗОМ ЛЁГКИХ И ЗДОРОВЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РУССКОЙ ЭТНИЧЕСКОЙ ГРУППЫ
ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
В настоящее время заболеваемость туберкулезом среди населения очень высока. Доказано, что генетические факторы в значительной мере определяют предрасположенность к данному заболеванию. Определенный вклад в восприимчивость к туберкулезу вносят гены системы HLA, которые детерминируют различные иммунологические феномены. Имеются многочисленные работы, в которых обнаружена положительная ассоциация антигенов HLA с туберкулезом: среди жителей Республики Тыва у больных туберкулезом но сравнению со здоровыми значительно чаще встречались специфичности HLA DRB1-13 и HLA DRB1-14, в казахской популяции — DRB1-17. Этот факт можно использовать для формирования по генетическим маркерам групп риска в отношении заболевания туберкулезом.
Цель исследования. Провести сравнительный анализ генов HLA II класса (DRB1) у здоровых лиц и больных туберкулезом легких представителей русской этнической группы Челябинской области.
Материалы и методы. Генотипирование аллельных вариантов HLA-DRB1 проводилось методом PCR-SSP с помощью наборов реагентов С. Darke (Wales, UK). Исследуемую группу составили 33 больных туберкулезом легких и 150 здоровых доноров русской национальности, проживающих в Челябинской области.
Результаты и обсуждение. При анализе локуса HLA DRB1 у больных туберкулезом выявлена повышенная частота встречаемости гена DRB1*07: в исследуемой группе он выявлен в 36 % случаев, а в здоровой популяции — в 23 % (статистической достоверности полученные данные не достигают: %2 = 2,41), По частотам остальных аллелей локуса HLA-DRB1 исследуемая группа и контроль сходны.
Выводы. У больных туберкулезом легких представителей русской национальности на уровне тенденции повышена частота встречаемости гена DRB1*07.
Для более полного анализа необходимо продолжить исследование и изучить распределение генов HLA DQA и DQB, а также генов первого класса HLA (А, В).
