CC BY
38
-декабрь 2009 г.
РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ
ИСПЫТАНИЙ ВАКЦИНЫ
ПРОТИВ ГЕПАТИТОВ А И В «ГЕПОЛ А+В»
'Медуницын Н.В., Торбунов М.А.,1Елыиина ГЛ., 'Соловьева М.В., 'Игнатьев Г.М., гШалунова Н.В., 1Карпович Л.Г., 1Бочарова Н.Г., 1Ермолаева Т.Н, 1Мусина EêE„ 2Куслий А.Г., 2Мунтянова М.А., 2Андреев Ю.Л.
Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича, Москва,
2ЗА0 «Вектор БиАльгам», Новосибирск
Обобщены результаты клинических испытаний по оценке реактогенности, безвредности и иммуногенности комбинированной вакцины против гепатитов АиВс полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В». Доклинические исследования позволили избрать для проведения клинических испытаний композицию дивакцины с полиоксидонием, содержащую половинную дозу антигенов гепатитов А и В по сравнению с таковой в монопрепаратах, с добавлением 200 мкг/мл полиоксидония. Курс вакцинации состоял из трех прививок, проводившихся по схеме: 0-1-6 мес. Результаты наблюдения за привитыми двумя композициями вакцины «ГЕПОЛ А+В», содержащими в своем составе наряду с антигеном гепатита А, антигены гепатита В вакцины «Комбиотех Лтд.» в одном варианте и вакцины «Шанвак В» в другом варианте, свидетельствовали о слабой реактогенности этих препаратов.
Результаты серологических исследований крови привитых показали, что при введении вакцины «ГЕПОЛ А+В» по схеме 0-1-6 месяцев частота выявления защитных титров антител к ВГА и к ВГВ через 6 мес. после окончания полного курса вакцинации составляет 100% и 86,7%, соответственно, что характеризует ди-А+В-вакцину с полиоксидонием как высокоиммуногенный препарат в отношении ВГА и ВГВ.
Ключевые слова: гепатитная ди-А+В-вакцина с полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В», гепатит А, гепатит В, реактогенность, анти-ВГА, анти-HBs
двух инфекций, сократив количество инъекций и вводимых в организм алюминия гидроксида и формальдегида. С целью снижения антигенной нагрузки в дивакцине были проведены исследования, направленные на уменьшение в препарате количества антигенов за счет введения в ее состав иммуномодулятора полиоксидония.
Проведенные исследования показали, что оптимальной по показателям иммуногенности и перспективной для проведения клинических испытаний является композиция комбинированной гепатитной ди-А+В-вакцины с полиоксидонием, содержащая половинную дозу антигенов гепатитов А и В, по сравнению с таковой в монопрепаратах, с добавлением 200 мкг/мл полиоксидония [1,2].
Результаты доклинических испытаний позволили разработать нормативную документацию (НД) на новую гепатитную ди-(А+В)-вакцину с полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В», изготовить три экспериментально-производственные серии вакцины «ГЕПОЛ А+В» и провести их контроль на производстве и в ГИСК им. Л.А. Тарасевича по параметрам, заложенным в НД. После получения разрешения в Федеральной службе по надзору
z
Во многих регионах страны, эндемичных по заболеваемости гепатитом А (ГА), отмечается высокий уровень носительства и заболеваемости гепатитом В (ГВ), что приводит довольно часто к возникновению сочетанных форм гепатитов, сопровождающихся более интенсивным поражением печени и последующими тяжелыми осложнениями [3].
По данным зарубежных авторов даже в высокоразвитых странах отмечается ежегодно более 1% сочетанных форм случаев заболевания гепатитом А и В [4]. Учитывая широкое распространение вирусных гепатитов различной этиологии, достаточно перспективной является разработка дивакцины на основе существующих моновакцин против гепатитов А и В, позволяющая проводить одновременно сочетанную вакцинацию против этих инфекций.
Одномоментное введение существующих коммерческих моновалентных вакцин против ГА и ГВ регламентировано приказом МЗ РФ № 229 от 27.06.01. Однако разработка и применение комбинированной дивакцины против ГА и ГВ позволяет создать защиту против
ПРЕПАРАТЫ
в сфере здравоохранения и социального развития были начаты клинические испытания комбинированной гепатитной ди-А+В-вакцины с полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В». В задачи клинических испытаний вакцины «ГЕПОЛ А+В» входили оценка реактогенности, безвредности и иммуногенной активности вакцины при трехкратном ее применении. В данном сообщении обобщены результаты изучения реактогенности, безвредности и иммуногенности двух вариантов вакцины «ГЕПОЛ А+В», в состав одного из которых входили антигены гепатита В вакцины «Комбиотех Лтд.», другого - вакцины «Шанвак В».
Материалы и методы
Вакцинные препараты. Дивакцина «ГЕПОЛ А+В» -
изготовлена на основе полуфабриката вакцины ГА, производства ЗАО «Вектор БиАльгам», содержащая не менее 40 ИФА ед. антигена ГА, и полуфабриката вакцины ГВ с содержанием 10 мкг/мл НВэАд и 200 мкг поли-оксидония. В состав одного варианта вакцины входил антиген ГВ вакцины «Комбиотех Лтд.», в состав другого -«Шанвак В».
Контрольная группа была привита коммерческой серией моновакцины против ГВ производства НПК «Комбиотех Лтд.» (Москва). Вводимая доза вакцины составила 20 мкг НВзАд-антигена. Все вакцинные препараты, применяемые в исследовании, прошли контроль в специализированных лабораториях ГИСК им. Л.А. Тарасе-вича и были зашифрованы сотрудниками, не принимающими непосредственного участия в клинических испытаниях.
Контингент привитых. Исследования проводили в условиях рандомизированного, двойного слепого контролируемого клинического испытания среди организованных контингентов. Иммунизировали здоровых лиц старше 18 лет, не болевших вирусными гепатитами, не получавших препараты иммуноглобулина человека в течение 6 мес. до вакцинации и не имевших противопоказаний, предусмотренных инструкцией по применению изучаемых препаратов.
Перед формированием двух основных и контрольной групп с целью определения наличия или отсутствия маркеров гепатитов А и В у 400 добровольцев был проведен скрининг сывороток крови. Из числа обследованных было отобрано 72 чел., не имеющих антител к ВГА и ВГВ, и 36 чел. серонегативных в отношении маркеров ГВ.
Из числа серонегативных лиц были сформированы две основные группы привитых двумя композициями испытуемой вакцины «ГЕПОЛ А+В». В состав одной серии входил антиген ГВ вакцины «Комбиотех Лтд.», другой - «Шанвак В». Контрольная группа была сформирована из числа лиц, в сыворотках крови которых отсутствовали маркеры ГВ. Эти добровольцы были привиты коммерческой серией моновакцины против ГВ.
От каждого участника было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании и также заведены амбулаторная карта и индивидуальная карта привитого. Таким образом, в ходе клинического исследования под наблюдением находились 3 группы по 36 чел. При формировании групп привитых использовали метод случайно-выборочного распределения
(единица выборки - человек). Всего было вакцинировано 108 здоровых добровольцев в возрасте 18-55 лет. Вакцины вводили с помощью шприцев одноразового использования внутримышечно в область дельтовидной мышцы. Иммунизацию дивакциной и введение моновакцины против ГВ проводили по схеме 0-1-6 мес., в 3 этапа. На каждом этапе после введения вакцинных препаратов проводили наблюдение за привитыми в течение 1 недели с регистрацией местных и общих реакций.
Учет реакций проводился врачом на основании данных температуры тела, осмотра и опроса каждого привитого в соответствии с параметрами, включенными в индивидуальную карту привитого. В день прививки эти процедуры осуществлялись до нее, через 1 ч. и 6 ч. после вакцинации, а в последующем - 2 раза в день в течение 5 дней после введения препаратов. Местные реакции учитывали по следующим показателям: болезненность на месте инъекции, гиперемия, инфильтрат (припухлость), мышечное подергивание.
К общим реакциям организма относили: повышение температуры тела, недомогание, головную боль, тошноту, болезненность в правом подреберье и т.д. В случаях проявления сильных общих реакций у привитых было предусмотрено проведение расширенных лаборатор-но-инструментальных методов исследования: обследование сердечно-сосудистой системы (кардиограмма, артериальное давление) и желудочно-кишечного тракта, общий анализ крови и мочи, печеночные пробы на биохимическую активность и антигеноносительство в отношении ГА и ГВ в образцах крови.
С целью выявления возможного побочного действия вакцины проводили регистрацию и анализ соматической, инфекционной и аллергической заболеваемости среди привитых на протяжении 6 мес. после полного курса вакцинации.
С целью оценки иммунологической эффективности вакцинации забор крови у привитых проводили через 5 мес. после второго введения вакцины, через 1 и 6 мес. после третьей вакцинации. После забора всех проб крови, перед проведением серологического исследования сыворотки крови были зашифрованы и сблокированы для того, чтобы в одно исследование попали парные сыворотки в равном количестве от сравниваемых групп наблюдения.
Сыворотки крови тестировали на наличие анти-ВГА в ИФА с диагностикумом - «Тест-система Вектор А-антитела» производства ЗАО «Вектор-БиАльгам» и
на анти-НВз в ИФА с тест-системой «Вектогеп НВзАд-антитела» производства ЗАО «Вектор-Бест».
Иммуногенность вакцины оценивали по следующим показателям: процент сероконверсий и уровень титров специфических антител к ВГА и ВГВ, выраженный в мМЕ/мл; за минимальный защитный титр принимали значение анти-ВГА, равное 10-20 мМЕ/мл, и анти-НВэ, равное 10 мМЕ/мл.
Полученные результаты исследований статистически обработаны с использованием ^критерия Стьюден-та. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Вариационный анализ полученных результатов проводили с применением пакета прикладных программ 6,0. В таблицах указан процент и его ошибка (% ± т).
Я
^Сентябрь-декабрь
2009 г.
Частота местных реакций в 3 группах привитых после 1, 2 и 3 введения препаратов
Вакцина «ГЕПОЛ А+В >
Кратность введения вакцины
с антигеном вакцины «Комбиотех Лтд.» Ii = 35
с антигеном вакцины «Шанвак В» п = 36
Таблица 1
Моновакцина против гепатита В п = 36
абс. % абс. % абс. %
После 1-ой вакцинации 3 8,6±4,7 2 5,5±3,8 2 5,5+3,8
После 2-ой вакцинации 1 2,9±2,8 2 5,5+3,8 3 8,3±4,6
После 3-ей вакцинации 2 5,7±3,9 2 5,5±3,8 4 11,1±5,2
Результаты и обсуждение
В связи с тем, что у одного добровольца в первые 5 дней после вакцинации развилась интеркуррентная инфекция Herpes simplex (labialis), он выбыл из испытания. Таким образом, под наблюдением для оценки реактогенности сравниваемых препаратов находилось 107 добровольцев, из них привитых испытуемой вакциной «ГЕПОЛ А+В», содержащей компонент гепатита В производства «Комбиотех Лтд.» и - «Шанвак В», а также коммерческой моновакциной против ГВ, соответственно, 35, 36 и 36 чел. Итоги наблюдения за характером общих реакций в первые 5 дней после первого, второго и третьего введения препаратов показали, что во всех группах вакцинальный процесс протекал при нормальной температуре (до 37,0 °С).
Жалобы на нарушение общего состояния были зарегистрированы у добровольцев лишь в единичных случаях (по одному случаю) после второго введения вакцины «ГЕПОЛ А+В» с антигеном вакцины «Комбиотех Лтд.» и моновакцины ГВ, а также после третьего введения моновакцины против ГВ. Из симптомов нарушения общего состояния отмечали жалобы на недомогание, головную боль и головокружение. Все отмеченные симптомы регистрировали на первый и второй дни наблюдения, причем их длительность не превышала
одного дня. Все добровольцы с вышеуказанными жалобами не применяли никаких лекарств, все симптомы купировались самостоятельно.
Местные реакции выражались в болезненных ощущениях в месте инъекции и кожных реакциях. Симптомы болезненности в месте инъекции и подергивание мышц регистрировали во всех группах наблюдения у 1-3 чел. на 1-2 сутки наблюдения, при этом длительность их проявления не превышала одного дня. Различия между частотой выявления местных реакций во всех группах привитых статистически незначимы (р>0,05).
Кожные реакции в виде гиперемии (до 1 см) и зуда на введение всех препаратов регистрировали в первые два дня после вакцинации только в единичных случаях, длительность их не превышала одних суток. Никаких лечебных мероприятий кожные реакции не требовали (табл. 1). Таким образом, частота развития общих и местных вакцинальных реакций после первой, второй и третьей вакцинации свидетельствует о слабой реактогенности всех трех препаратов: двух серий вакцины «ГЕПОЛ А+В», содержащих антиген гепатита В вакцины «Комбиотех Лтд.» и вакцины «Шанвак В», а также коммерческой моновакцины против ГВ «Комбиотех Лтд.».
После завершения иммунизации вакциной «ГЕПОЛ А+В» у привитых в течение 6 мес. осуществляли сбор и
Таблица 2
Результаты определения антител к вирусу гепатита А (анти-ВГА) у привитых вакциной «ГЕПОЛ А+В» по схеме 0-1-6
Количество
Величина титров анти-ВГА (мМЕ/мл)
Сроки обследования и™°пв™ных
п/п
1 Через 5 мес. после второй вакцинации
2 Через 1 мес. после третьей вакцинации
3.
э
Через 6 мес. после третьей вакцинации
сывороток
Показатель сероконверсий
(аос.) отсутствие 10-20 21-100 101-1000 >1000
% % % % % абс. %
71 54,9±5,9 12,7±3,9 5,6±2,7 26,8+5,3 - 32 45,1+5,9
71 5,6±2,7 8,4±3,3 43,7±5,9 42,3±5,9 - 67 94,4±2,7
30 — 60,0±7,3 6,7±4,6 63,3±8,8 10,0±5,5 30 100,0
ПРЕПАРАТЫ
Таблица 3
Результаты определения антител к НВэАд (анти-НВэАд) у привитых вакциной «ГЕПОЛ А+В» по схеме 0-1-6 мес.
х
s а л /
оа
§
CJ
Величина титров анти-ВГА (мМЕ/мл)
№ Сроки
п/п обследования я
ю ed
£
i О
Через 5 мес. после второй вакцинации
Через 1 мес. после третьей вакцинации
Через 6 мес. после третьей вакцинации
§
71
71
30
я 03 H CJ о ID i о в f4 о о 1Г> l о о о
ь CJ H о 1-H 1 in О 1 о m
о
% % % % %
63,4 21,2 8,4 4,2 1,4
±5,7 ±4,8 ±3,3 ±2,4 ±1,4
21,1 5,6 7,0 11,3 7,0
±4,8 ±2,7 ±3,0 ±3,8 ±3,0
13,3 26,7 10,0
±6,2 ±8,1 ±5,5
о о о
%
28,3 ±2,7
20,0 ±7,3
о о о
о о »л
%
5,6 ±2,7
10,0 ±5,5
о о
о о
о
%
1,4 ±1,4
14,1 ±4,1
о о о о
г*
А
%
Показатель сероконверсий
20,0 ±7,3
абс.
26
56 26
%
36,6 ±5,7
78,9 ±4,8
86,7 ±6,2
анализ данных соматической, инфекционной и аллергической заболеваемости. Полученные материалы свидетельствовали об отсутствии побочного действия на введение испытуемой вакцины.
В табл. 2 обобщены данные определения антител к ВГА (анти-ВГА) у привитых вакциной «ГЕПОЛ А+В». Как видно из представленных в табл. данных, через 5 мес. после второй вакцинации процент привитых с защитными титрами антител к ВГА составил 45,1%, через 1 мес. после третьей вакцинации он стал выше и составил 94,4%. Разница между показателями статистически достоверна (р<0,05).
Результаты исследования сывороток крови привитых вакциной «ГЕПОЛ А+В» на анти-ВГА в отдаленные сроки после полного курса иммунизации показали, что процент лиц с защитными титрами антител составил через 6 мес. после трехкратной вакцинации 100%. Полученные данные характеризуют вакцину «ГЕПОЛ А+В» как высокоиммуногенный препарат в отношении ВГА.
В табл. 3 представлены результаты определения антител к ВГВ (анти-НВвАд) у привитых вакциной «ГЕПОЛ А+В». Из данных табл. видно, что процент лиц с защитными титрами антител через 5 мес. после второй вакцинации у привитых составил 36,6%. Через 1 мес. после третьей вакцинации он стал достоверно выше (р<0,05) и составил 78,9%. Через 6 мес. после третьей вакцинации этот показатель имел тенденцию к росту и составил 86,7%. Результаты определения уровней тит-
ров антител к ВГВ показали, что через 1 мес. после третьей вакцинации процент лиц с титрами антител выше 1000 мМЕ/мл был статистически достоверно (р<0,05) выше по сравнению с результатом, полученным после второй вакцинации.
В более отдаленный срок (через 6 мес.) после окончания схемы иммунизации процент лиц с высокими титрами антител к HBsAg составил 50% (табл. 3). Результаты испытаний показали, что добавление в дивакцину «ГЕПОЛ А+В» компонента ГВ из разных моновакцин против ГВ не оказывает влияния на частоту выявления лиц с защитными титрами антител к вирусу ГВ у привитых разными вариантами вакцины «ГЕПОЛ А+В». Таким образом, клинические испытания дивакцины с полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В» свидетельствуют, что вакцина обладает слабой реактогенностью и высокой иммунологической эффективностью, способной обеспечить защиту привитых от вирусных гепатитов А и В.
Литература
1. Бектимиров ТА. с соавт. «Аллергия, астма и клиническая
иммунология». - 2003. - № 9 - С. 103 - 106.
2. Бектимиров Т.А. с соавт. «Физиология и патология иммунной системы». - 2005. - № 7 - С. 55 - 59.
3. Соринсон С.Н. «Вирусные гепатиты в клинической практике». - 1996.
4. Ghendon YZ. // In Control of virus disease. Ed.E.Kurstak
2d. Marsel Dekker Inc. - 1993. - P. 141 - 164.
