CC BY
34
DOI 10.31588/2413-4201-1883-244-4-183-187
УДК 619:616.98:577.2.083:616.24-084
РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИСПЫТАНИЯ ВАКЦИНЫ АССОЦИИРОВАННОЙ ПРОТИВ ПАРАГРИППА-3, ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ, РОТА- И КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Спиридонов Г.Н. - д.б.н., Макаев Х.Н. - д.вет.н., профессор, Гумеров В.Г. - д.вет.н., Евстифеев В.В. - д.б.н., доцент, Махмутов А.Ф. - к.б.н., Каримуллина И.Г. - к.вет.н.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и
биологической безопасности»
Ключевые слова: парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, ротавирусная, коронавирусная инфекция, телята, вакцина, профилактика
Keywords: parainfluenza virus 3, infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, rotavirus, coronavirus infection, calves, vaccine, prevention
Респираторно-кишечные инфекции молодняка крупного рогатого скота широко распространены как в небольших, так и в крупных животноводческих комплексах по производству молока. Они наносят хозяйствам огромный экономический ущерб [2, 3, 5, 7]. Основными возбудителями этих инфекций являются вирусы парагриппа-3 (ПГ-3), вирусной диареи - болезни слизистых оболочек (ВД-БС), герпесвирус типа 1, респираторно-синцитиальный вирус, рота-, коронавирусы, которые преимущественно вызывают смешанную инфекцию, протекающую с клиникой диареи, бронхопневмонии, обезвоживания и интоксикации всего организма [1, 4, 6].
В отделе биобезопасности ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» разработана инактиви-рованная эмульсионная ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота.
Цель настоящих исследования - доклиническое исследование вакцины в лабораторных условиях.
Материал и методы исследований. Работа проведена в условиях лабораторий вирусологии и бактерийных болезней ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Для доклинических испытаний были представлены 3 экспериментальные серии вакцины ассоциированной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной
диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота, изготовленные из концентрированных антигенов вирусов парагриппа-3 (штамм «ПТК-45/86»), инфекционного ринотрахеита (штамм «ТК-А (ВИЭВ)-В2»), вирусной диареи (штамм «ВК-1»), ротавируса крупного рогатого скота (штамм 2-«КЛ-2») и коронавируса крупного рогатого скота (штамм «РМ»), инактивированных формалином (0,2 % к объему), эмульгированных в равном соотношении с масляным адъювантом (15 % ланолина, 85 % ПЭС-3).
По внешнему виду вакцина представляет собой эмульсию розовато-белого цвета. При длительном хранении допускается незначительное расслоение эмульсии, восстанавливающееся при взбалтывании.
Вакцина расфасована по 50,0 и 100,0 см3 в стеклянные флаконы соответствующей вместимости, укупоренные резиновыми пробками, укрепленными алюминиевыми колпачками.
Срок годности вакцины 12 месяцев с даты выпуска, при соблюдении условий хранения и транспортирования.
Виды исследований: физико-химические, микробиологические, серологические, клинические.
В процессе доклинического испытания вакцины использованы подопытные животные: белые мыши, массой 15-16 г -60 голов; кролики, массой 2,5-3,0 кг - 9 голов; телята 30-45 дневного возраста - 15
голов.
Определение антигенной
активности вакцины проводили с использованием следующего
оборудования: термостат электрический суховоздушный ТС-1/80 СПУ;
холодильник фармацевтический
«ПОЗИС», ХФ-250-3; рН-метр - рН-150МИ; спектрофотометр длиной волны 490 нм МиШвсап ОО; дозаторы пипеточные: одноканальный и
многоканальный «Блек», ЗАО «Термо Фишер Сайентифик»; дистиллированная вода ГОСТ 6709-72, рН 7,2-7,4; набор для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинации (ВИЭВ им.
ЯР. Коваленко); набор для диагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота (Курская биофабрика - фирма «БИОК»); перевиваемая культура клеток трахеи эмбриона коровы линия ТЯ; перевиваемая культура клеток эмбриона коровы линия МББК.
Результаты исследований. Для
определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, трещин стекла каждый флакон с вакциной просматривали визуально. Вакцина представляет собой эмульсию розовато-белого цвета. Не содержит посторонних примесей, плесени, не наблюдается трещин флаконов. Все флаконы плотно укупорены, правильно этикетированы.
Определение полноты инактивации и стерильности вакцины проводили согласно ГОСТа 28085-2013.
Оборудование и реактивы: термостаты электрические суховоздушные ТС-1/80 СПУ, обеспечивающие температуру нагрева (37±1) оС и (22,5±2,5) оС; стерилизатор паровой вертикальный автоматический СПВА-75-1-НН; бокс микробиологической безопасности Класс II (Тип В-2) БМБ-П «Ламинар-С» -1,2 (231120); микроскоп биологический Микромед-2 (2-20); рН метр рН-150МИ; питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон) ТУ 9398-021-78095326-2006; питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ТУ 9398-020-78095326-
2006; питательная среда № 2 ГРМ (САБУРО) ТУ 9398-002-78095326-2006.
Для проверки на стерильность из 6 флаконов каждой серии вакцины делали посевы по 0,2 см3 на жидкие питательные среды: МПБ и МППБ (среда Китта-Тароцци) и твердые питательные среды: Сабуро и МПА. На посев использовали по три пробирки и две чашки с питательной средой. На среду Китта-Тароцци делали высевы в две пробирки и два флакона.
Пробирки и флаконы с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро, выдерживали в термостате при температуре (37±1) °С, на среде Сабуро - при температуре (22,5±2,5) °С, в течение 7 суток. По истечении указанного срока делали пересев, за исключением посевов на МПА. Пересевали пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживали 7 суток.
В течение срока наблюдения ни в одной из засеянных пробирок роста бактерий и грибов не наблюдали, т.е. вакцина стерильна. Определение безвредности вакцины проводили по ГОСТ 31926-2013. Сущность метода заключается в определении реакции белых мышей на введение тест-дозы вакцины. Для проверки на безвредность были сформированы опытные и контрольные группы клинически здоровых животных, прошедших карантин.
Животные и материалы: белые мыши массой 15-16 г - 60 голов; шприцы инъекционные однократного применения с иглой по ГОСТ ISO 7886-1-2011; спирт этиловый по ГОСТ 18300-87.
Безвредность каждой из трех серий вакцины определяли на 20 белых мышах, разделенных на 2 группы - контрольную и опытную по 10 голов в каждой. С этой целью вакцину тщательно взбалтывали, прогревали в термостате при температуре 3738 оС и вводили внутрибрюшинно 10 белым мышам в дозе 0,5 см3. 10 мышей оставались в контроле, им вакцину не вводили. Наблюдение за животными проводили в течение 10 суток.
В течение срока наблюдения после введения препарата все белые мыши опытных и контрольных групп оставались
клинически здоровыми, они охотно принимали корм, активно передвигались, что указывает на безвредность вакцины.
Антигенную активность каждой серии вакцины определяли на 3 кроликах массой 2,5-3,0 кг, которым биопрепарат вводили подкожно в области спины в дозе 1,0 см3 двукратно с интервалом 14 дней. На 14 дней после первого и в те же сроки, после второго введения вакцины, у кроли-
ков брали кровь и ее сыворотку исследовали на содержание специфических антител в РТГА с коронавирусным и парагриппоз-ным антигенами, в РВН с вирусами инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи, в ИФА с ротавирусным антигеном, используя соответствующие наборы диа-гностикумов согласно наставлениям по их применению. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Наименование антигена Метод исследования Титры специфических антител к антигенам
14 дней после 1 вакцинации 14 дней после 2 вакцинации
Вирус парагриппа-3 РТГА 213,3±65,3 266,6±65,3
Вирус ИРТ РВН 21,3±6,5 42,6±13,0
Вирус ВД РВН 16,0±0,0 26,6±6,53
Ротавирус ИФА 682,6±209,0 853,3±209,0
Коронавирус РТГА 106,6±26,1 213,3±52,2
Таблица 1 - Титры специфических антител у кроликов, вакцинированных вакциной, ассоциированной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и ко-ронавирусной инфекций крупного рогатого скота
Из данных таблицы видно, что вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота обладает достаточно высокой антигенной активностью. Титры специфических антител через 14 дней после второй вакцинации у кроликов составили к вирусу ПГ-3 266,6±65,3 в РТГА, вирусу ИРТ - 42,6±13,0 в РВН, вирусу ВД - 26,6±6,53 в РВН, ротавирусу -853,3±209,0 в ИФА, коронавирусу -213,3±52,2 в РТГА.
Изучение переносимости здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах, проводили на 15 телятах 30-45-дневного возраста, разделенных на 3 группы по 5 голов в каждой. Телятам 1 опытной группы вакцину вводили внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней в профилактической дозе -1 см3. Животным 2 опытной группы вводили вакцину двукратно с интервалом 14 дней в дозе, превышающей дозу для этого возраста животных в 3 раза - 3 см3. Животным 3 контрольной группы вакцину не вводили. Наблюдение за животными ввели в течение 30 суток. Установили, что все телята опытных и контрольной групп в течение всего срока наблюдения оставались
клинически здоровыми, они охотно принимали корм и воду, активно передвигались.
Результаты исследований указывают, что вакцина безвредна, животные хорошо переносят двукратное введение вакцины в дозе, превышающей профилактическую в 3 раза.
Результаты проведенных исследований позволяют приступить к испытанию вакцины на ограниченном поголовье крупного рогатого скота в производственных условиях.
Заключение. В результате доклинических исследований лекарственного препарата для ветеринарного применения «Вакцина, ассоциированная против пара-гриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инак-тивированная эмульсионная», изучен внешний вид, полнота инактивации, стерильность, безвредность, антигенная активность вакцины, переносимость здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах. Установлено, что вакцина стерильна, безвредна, обладает высокой антигенной активностью, хорошо переносится животными при введении в повышенных дозах.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Гумеров, В.Г. Эпизоотологиче-ский и серологический мониторинг смешанных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота / В.Г. Гуме-ров, В.В. Евстифеев, Х.Н. Макаев [и др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2019. - Т. 237. - № 1. - С. 56-60.
2. Дегтярев, В.П. Неонатология и болезни новорожденных телят / В.П. Дегтярев, С.В. Федотов, Г.М. Удалов. - М.: Издательство «ИНФРА-М», 2016. - 158 с.
3. Закутский, Н.И. Опыт профилактики и борьбы с инфекционным ринотра-хеитом (ИРТ) и парагриппом-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота / Н.И. Закутский,
B.И. Жестерев, Л.Д. Конакова [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотич. и зооантропоноз. болезнями животных. - Покров. - 2000. -
C. 60-62.
4. Мищенко, В.А. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко, А.А. Гусев, Н.А. Яременко [и др.] // Ветеринария. - 2000. - № 9. - С. 5-6.
5. Соколова, Н.Л. Перспективы диагностики и специфической профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных животных / Н.Л. Соколова // Труды ВИЭВ. - Т. 75. - М.: Издательство «ВИЭВ», 2010. - С. 112-114.
6. Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов / Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Мат. науч.-произв. конф. - Воронеж. -2002. - С. 3-8.
7. Яхаев, И.М. Увеличение сохранности новорожденных телят / И.М. Яхаев, В.П. Дегтярев, А.Э. Гансе / Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Т. 16. М.: Издательство «ФГБНУ «Росинформагротех», 2018. - С. 169-179.
РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИСПЫТАНИЯ ВАКЦИНЫ АССОЦИИРОВАННОЙ
ПРОТИВ ПАРАГРИППА-3, ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ, РОТА- И КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Спиридонов Г.Н., Макаев Х.Н., Гумеров В.Г., Евстифеев В.В., Махмутов А.Ф.,
Каримуллина И.Г.
Резюме
Приведены результаты доклинических исследований лекарственного препарата для ветеринарного применения «Вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная». Вакцина изготовлена из концентрированных антигенов вирусов парагриппа-3 (штамм «ПТК-45/86»), инфекционного ринотрахеита (штамм «ТК-А (ВИЭВ-В2), вирусной диареи (штамм «ВК-1»), ротавируса крупного рогатого скота (штамм 2-«КЛ-2») и коронавируса крупного рогатого скота (штамм «РМ»), инактивирован-ных формалином (0,2 % к объему), эмульгированных в равном соотношении с масляным адъювантом (15 % ланолина, 85 % ПЭС-3). Изучены внешний вид, полнота инактивации, стерильность, безвредность, антигенная активность вакцины, переносимость здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах. Установлено, что вакцина стерильна, безвредна для животных. Обладает высокой антигенной активностью. Двукратное подкожное введение вакцины в дозе 1 см3 у кроликов индуцировало образование специфических антител в сыворотке крови в титрах к вирусу ПГ-3 266,6±65,3 в РТГА, вирусу ИРТ -42,6±13,0 в РВН, вирусу ВД - 26,6±6,53 в РВН, ротавирусу - 853,3±209,0 в ИФА, коронави-русу - 213,3±52,2 в РТГА. Животные хорошо переносили введение вакцины в повышенных дозах. После двукратного введения вакцины в дозе, превышающей профилактическую в 3 раза, у животных не отмечали отклонение в физиологических показателях организма. По результатам исследований будут проведены производственные испытания вакцины на ограниченном поголовье крупного рогатого скота.
RESULTS OF THE PRE-CLINICAL TEST OF THE ASSOCIATED VACCINE AGAINST PARAGRIP-3, INFECTIOUS RINOTRAHEITIS, VIRAL DIARRHEA, ROTA-VIRUS AND CORONAVIRUS INFECTIONS OF CATTLE
Spiridonov G.N., Makaev Kh.N., Gumerov V.G., Evstifeev V.V., Makhmutov A.F.,
Karimullina I.G.
Summary
The results of preclinical studies of a medicinal product for veterinary use "Vaccine associated against parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, rotavirus and Coronavirus infections of cattle inactivated emulsion" are presented. The vaccine is made from concentrated parainfluenza-3 virus antigens (strain "PTK-45/86"), infectious rhinotracheitis virus (strain "TK-A (VIEV) -V2"), viral diarrhea (strain "VK-1"), bovine rotavirus livestock (strain 2- "KL-2") and cattle coronavirus (strain "RM"), inactivated by formalin (0.2 % by volume), emulsified in equal proportion with oil adjuvant (15 % lanolin, 85 % PES- 3). We studied the appearance, completeness of inactivation, sterility, safety, antigenic activity of the vaccine, tolerance by healthy animals, double administration of the vaccine in high doses. It is established that the vaccine is sterile, harmless to animals. It has high antigenic activity. Twice subcutaneous administration of a vaccine dose of 1 cm3 in rabbits induced the formation of specific antibodies in blood serum in titers of PG-3 virus 266.6±65.3 in RTGA, IRT virus - 42.6±13.0 in RVN, and VD virus - 26.6±6.53 in RVN, rotavirus - 853.3±209.0 in ELISA, coronavirus - 213.3±52.2 in RTGA. Animals tolerated the introduction of high-dose vaccines. After administering the vaccine twice in a dose 3 times higher than the prophylactic one, the animals did not exhibit a deviation in the physiological parameters of the body. Based on the results of the research, production tests of the vaccine will be conducted on a limited number of cattle.
