CC BY
17
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^OHaibHoro ymBepcurery BeTepHHapHoi' MegnuUHH Ta 6i0TexH0iroriH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
doi: 10.15421/nvlvet7833
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:615.9
ту • • •• ••• •
Досл1дження ембрютоксично1 дп препарату для зовн1шнього використання «Мазь для ран» на лабораторних тваринах
Р.М. Сачук [email protected]
Дослiдна станцiя етзоотологп 1ВМ НААН, вул. Князя Володимира, 16/18, Ргвне, 33028, Укра'та
Результати експериментгв показали один з аспектгв безпеки застосування нового препарату «Мазь для ран», що при-значений для зовнгшнього застосування великгй рогатгй худобг, коням, вгвцям, козам, свиням, хутровим звгрям, кролям, собакам та котам. До складу препарату входять ефгрнг масла сосни сибгрськоi, евкалтту, чайного дерева, кедра, гвоздики та масляний розчин хлорофытту. Доклгнгчнг випробування препарату «Мазь для ран» проведет на вагтних щурах, шляхом багаторазового дермального нанесення у пергод з 1 по 19 добу вагтностг, не викликали у тварин токсичних явищ. При розтинг щургв на 20 добу вагтностг проводили пгдрахунок жовтих тгл в яечниках, мгсць жплантацш г резорбцп в матцг, оцгнювали кыьюсть живих г мертвих плодгв. Встановлено, що перебгг вагтностг у контрольних г дослгдних тварин гстот-но не вгдргзнявся. У дослгднгй групг щургв, яким дермально застосовували «Мазь для ран», догмплантацшна г загальна ембргональна смертнгсть була нижчою вгд показникгв контрольноi групи вгдповгдно на 16,3% г 10,2%. Постгмплантацгйна смертнгсть перевищувала на 7,0% аналоггчний показник контрольноi групи. Морфометргя ембрютв затримки росту плодгв не виявила. При зовнгшньому оглядг у витягнутих з матки плодгв значних видимих аномалш розвитку (калгцтв) не вгдмгчено. Дослгдження внутргшнгх органгв плодгв дефектгв Их розвитку не виявили, як г не встановлено дефектгв розвитку кiстковоi системи, що свгдчить про те, що даний препарат не викликае порушення процесгв остеогенезу.
При нашкгрному нанесены щурам «Мазг для ран» в дозг 0,5 г/кг у дослгджуваний пергод вагтностг, не встановлено впливу препарату на подальшу кглькгсть народжених щурят чи вгдсоток мертвонароджених плодгв. Роди у пгддослгдних самок наступали, як правило, на 23 добу вагтностг, як г у контрольних тварин. Отже, препарат не викликае ембрготок-сичноi дИ, не впливае на показники догмплантацтноi, посттплантацшноi, загальноi eмбрiональноi смертностг та на пос-тнатальний розвиток потомства. Подальшг дослгдження будуть спрямованг на клШчне випробування препарату при лгкуванш гтеркератозу дгйок вименг коргв.
K.mnoei слова: «Мазь для ран», щур, вагтнгсть, ембргон, роди, постгмплантацгйна смертнгсть, пренатальний пергод.
Исследование эмбриотоксического действия препарата для наружного применения «Мазь для ран» на лабораторных животных
Р.Н. Сачук [email protected]
Исследовательская станция эпизоотологии ИВМ НААН, ул. Князя Володимира, 16/18, Ровно, 33028, Украина
Результаты экспериментов показали один из аспектов безопасности применения нового препарата «Мазь для ран», который предназначен для наружного применения крупному рогатому скоту, лошадям, овцам, козам, свиньям, пушным зверям, кроликам, собакам и котам. В состав препарата входят эфирные масла сосны сибирской, эвкалипта, чайного дерева, кедра, гвоздики и масляный раствор хлорофиллипта. Доклинические испытания препарата «Мазь для ран», проведенные на беременных крысах путем многократного дермального нанесения в период с первых по 19 сутки беременности,
Citation:
Sachuk, R.N. (2017). Research of embryotoxic effect of external preparation «Oinment for wounds» on laboratory animals. Scientific Messenger LNUVMB, 19(78), 162-166.
показали отсутствие токсических явлений у животных. При вскрытии крыс на 20 сутки беременности проводили подсчет желтых тел в яичниках, мест имплантаций и резорбции в матке, оценивали количество живых и мертвых плодов. Установлено, что течение беременности у контрольных и опытных животных существенно не отличалось. В опытной группе крыс, которым дермально применяли «Мазь для ран», предимплантационная и общая эмбриональная смертность была ниже показателей контрольной группы соответственно на 16,3% и 10,2%. Постимплантационная смертность превышала на 7,0% аналогичный показатель контрольной группы. Морфометрия эмбрионов задержки роста плодов не показала. При внешнем осмотре извлеченных из матки плодов значительных видимых аномалий развития (увечий) не отмечено. Исследование внутренних органов плодов дефектов их развития не выявили, как и не установлено дефектов развития костной системы, что свидетельствует о том, что данный препарат не вызывает нарушения процессов остеогенеза.
При наружном нанесении крысам «Мази для ран» в дозе 0,5 г/кг в исследуемый период беременности, не установлено влияния препарата на дальнейшее количество родившихся крысят или процент мертворожденных плодов. Роды у подопытных самок наступали, как правило на 23 сутки беременности, как и у контрольных животных. Итак, препарат не вызывает эмбриотоксического действия, не влияет на показатели предимплантационной, постимплантационной, общей эмбриональной смертности и на постнатальное развитие потомства. Дальнейшие исследования будут направлены на клинические испытания препарата при лечении гиперкератоза сосков вымени коров.
Ключевые слова: «Мазь для ран», крыса, беременность, эмбрион, роды, постимплантационная смертность, прената-льный период.
Research of embryotoxic effect of external preparation «Oinment for wounds»
on laboratory animals
R.N. Sachuk [email protected]
Research Station of Epizootology IVM NAAS, Ukraine Knyaz Vladimir Str., 18, Rivne, 33028, Ukraine
The results of experiments showed one of the aspects of the application safety of the new preparation «Ointment for Wounds», which is intended for external use to bovine cattle, horses, sheep, goats, swine, fur-bearing animals, rabbits, dogs and cats. The preparation formula includes essential oils of Siberian Cedar, Eucalyptus, Tea Tree, Cedar, Clove, and chlorophyllipt oil solution. Pre-clinical trial of the «Ointment for Wounds» were carried out on pregnant rats, through repeated dermal application in the period from the 1st to the 19th day of pregnancy, and it did not cause toxic effects on animals. At the autopsy post-mortem examination of the rats on the 20th day of pregnancy, the quantity of yellow bodies in the ovaries, the implantation and resorption sites in the uterus, the number of live and dead fetuses were estimated. It was defined that the gestation course in control and experimental groups of animals did not differ significantly. The pre-implantation and total embryonic mortality in the experimental group (intervention group) of rats for which «Ointment for Wounds», was used dermally proved to be lower than that of the control group, respectively, by 16.3% and 10.2%. Post-implantation mortality exceeded by 7.0% the similar indicator of the control group. Morphometry of embryos did not reveal the growth retardation of the fetuses. During the external examination, significant visible development anomalies (deformities) of the fetuses extracted from the uterus have not been observed. During the external examination, significant visible development anomalies (deformities) of the fetuses extracted from the uterus have not been observed. Investigation of the fetuses' internal organs did not reveal defects in their development, as well as defects in the development of the bone system have not been established, that suggests that this preparation does not cause a violation in the osteogenesis processes.
The skin application of «Ointment for Wounds» to rats in a dose of 0.5 g/kg in the studied period ofpregnancy effects neither on the number of newborns, nor the percentage of stillborns. Parturation of the experimental does took place, as a rule, at the 23rd day of pregnancy, as well as in control group. Consequently, the drug does not cause embryotoxic effects, does not affect the parameters of preimplantation, post-implantation, general embryonic mortality and postnatal development of offspring. Further research will focus on clinical trials of the preparation in the treatment of hyperkeratosis of the dams of the cow dummy.
Key words: «Ointment for Wounds», rat, pregnancy, embryo, parturation, post-implantation mortality, prenatal period.
Вступ
Пошукам високоефективних i еколопчно безпеч-них лшувально-профшактичних 3a^6iB при дермато-паттях у тварин придметься значна увага як вичиз-няних, так i зaрубiжних дослвднишв. Трендом остан-нього часу е застосування бюлопчно-активних компонента рослинного походження, як альтернативи антибютикотерапп. Вдало пщбраш комбшацп ефiр-них масел часто не менш ефективш шж синтетичш антибютики, а ризик виникнення резистентних шта-мiв мiкрооргaнiзмiв у рази менший. Та i собiвaртiсть л^вальних зaходiв iз застосуванням лшарсько! сиро-вини природного походження бшьш приваблива (Sachuk et al., 2016; Sachuk et al., 2017). ^м того, фитопрепарата можуть включати комбшацш багатьох
сполук, яш максимально ввдповщають заданим тера-певтичним щлям.
Для задоволення потреб ринку ветеринарних фитопрепарата ПП «Бюфарм», спшьно з Дослщною стан-щею етзоотологи 1ВМ НААН, розроблено новий препарат для зовшшнього застосування «Мазь для ран», застосування якого дозволятиме ошгашзувати варпсть i термши виконання л^вальних процедур та спростить терапевтачш машпуляцп. До складу препарату входять ефiрнi масла сосни сибiрськоl, евкалшту, чайного дерева, кедра, гвоздики та масляний розчин хлорофшпту. Рекомендований зовшшньо великш рогатш худобу коням, вiвцям, козам, свиням, хутро-вим звiрям, кролям, собакам та котам. Застосовуеться з л^вальною метою при ураженнях шшрного покри-ву (рани, дерматити, екземи, абсцеси, фурункули,
карбункули, отки, обмороження); молочно! залози (мастити, трщини шшри дшок); статевих оргашв (вапшти, вестибулгта, цервщити); шнщвок (травми шгпв, поверхневий панарицш, гниття копитно! стрш-ки); ротово! порожнини (стоматити, пнпвгга). Мае виражену л1кувальну дш при травматичних мюзитах 1 дерматитах; гострих асептичних запаленнях зв'язок, суглоб1в, тканин пальщв 1 копит тощо; при проявах ектопаразитоз1в (покуси комах, псороптози, отодекто-зи).
Обов'язковою умовою застосування нових л1кар-ських препарапв е попередш доклшчш дослщження - на лабораторних тваринах (Kosenko et а1., 1997; Kotsyumbas et а1., 2006; Gutyj et а1., 2016; Gutyj et а1., 2017; Todoriuk et а1., 2017). Передреестрацшш випро-бування визначають характер та виражешсть можли-во! шидливо! ди л1кувального препарату на оргашзм лабораторних тварин 1 включають вивчення: гостро! токсичносп при одноразовому 1 при повторних вве-деннях (пвдгостро!, субхрошчно! та хрошчно!); спе-циф1чних вид1в токсичности ембрютоксичностц тера-тогенностц гонадотоксичностц 1мунотоксичност1; алергогенностц мутагенностц м1сцевоподразливо! ди та шрогенносп. Таким чином, за результатами кожного окремого етапу доклшчних дослщжень препарату можна значною м1рою гарантувати безпеку його кль шчного випробування та подальшого практичного застосування.
Мета роботи. Дослвдження ембрютоксичних вла-стивостей препарату для зовшшнього використання «Мазь для ран».
Матерiал та методи дослвджень
Вивчення ембрютоксично! ди препарату для зовшшнього використання «Мазь для ран» проводилися на баз1 Дослвдно! станци ешзоотологи 1ВМ НААН. У робот1 з експериментальними тваринами керувалися «£вропейською конвенщею 1з захисту хребетних тварин».
В основу вивчення ембрютоксично! ди препарату та впливу його на постнатальний розвиток лаборатор-
них тварин були покладеш стандартш методики (Kotsyumbas et а1., 2006). Дослщи проводили на 50 бших безпородних щурах-самках масою 185-220 г 1 15 самцях масою 230-240 г, що е загальноприйнятим тестом для такого роду дослвджень. Використано щур1в тшьки з нормальним естральним циклом, що е показником нормального функцюнування репродук-тивно! системи. Препарат наносили нашшрно, щодня в доз1 0,5 г/кг. Для р1зних груп тварин препарат засто-совували з 1 по 19 добу ваптносп. Контрольним тва-ринам з 1 по 19 добу ваптносп нашшрно наносили вазелш. Результата дослщв враховували на 20 добу ваптносп. Плоди зважували, вим1рювали !х кранюка-удальний розм1р, визначали стать. Пот1м плоди досль джували на наявшсть аномалш внутршшх оргашв (Dawson, 1926; Wi1son, 1965).
Статистичну обробку результата дослщження ем-брюнального матер1алу проводили за формулами: а) до1мплантацшну смертшсть, % - [В - (А+Б): В] х 100; б) поспмплантацшну смертшсть, % - Б : (А+Б) х 100, в) загальну ембрюнальну смертшсть, % - (В-А) : В х 100; де: А - кшьшсть живих плод1в; Б - к1льк1сть мертвих 1 резорбованих ембрюшв; В - кшьшсть жов-тих тш ваптносп. Показниками ембрютоксично! ди «Мазь для ран» вважали: а) ембрюнальну (до- та поспмплантацшну) загибель плод1в; б) вщставання у розвитку, що проявляеться у зменшенш маси тша 1 кранюкаудальних розм1р1в плод1в; в) появи патологш розвитку внутршшх оргашв; г) вияву зовшшшх аномалш (тератогенний ефект).
Результати та 1х обговорення
За результатами експериментальних дослвджень встановлено, що багаторазове дермальне нанесення препарату «Мазь для ран» ваптним щурам з 1 по 19 добу вагггносл не викликало у тварин токсичний явищ. Результати дослвджень впливу препарату «Мазь для ран» на ембрюгенез щур1в представлен в табли-Щ 1.
Вплив препарату «Мазь для ран» на ембрюгенез щурiв
Таблиця 1
Показники Група тварин
Досл1дна Контрольна
Юльюсть ваптних самок 11 10
Юльюсть жовтих тш ваптноста 10,1 ± 0,12* 10,3 ± 0,57
Юльюсть м1сць 1мплантаци 9,55 ± 0,41 9,8 ± 0,51
Юльюсть мертвих [ резорбованих ембрюшв 0,19 ± 0,12 0,18 ± 0,13
Юльюсть живих плод1в 9,49 ± 0,54** 9,6 ± 0,49
Маса плода, мг 2588,09 ± 1,12 2597,01 ± 1,03
Довжина плода, мм 32,11 ± 0,56*** 34,33 ± 0,46
Смертшсть до1мплантацшна, % 4,25 ± 2,56* 5,08 ± 1,55
Смертшсть поспмплантацшна, % 1,98 ± 1,73* 1,85 ± 1,07
Смертшсть загальна ембрюнальна, % 6,55 ± 2,66* 7,29 ± 1,67
Стввщношення плод1в, ч/ж 1,19 ± 0,11 1,21 ± 0,21
Юльюсть плод1в з аномал1ями вщсутт вщсутш
Примпха: - Р < 0,05; - Р < 0,01; - Р < 0,001 пор1вняно з контрольною групою.
При розтиш щурiв на 20 добу ваптносп встанови-ли, що самки, як1 отримали «Мазь для ран», по числу жовтих тш в яечнику, числу мiсць iмплантацiй i резо-рбованих ембрiонiв у матщ, а також за кшьшстю жи-вих i мертвих плодiв iстотно не вiдрiзнялися ввд конт-рольних тварин. У групi ваптних щурiв, яким дерма-льно застосовували «Мазь для ран», доiмплантацiйна i загальна ембрiональна смертнiсть була нижчою пока-зникiв контрольно! групи вщповщно на 16,3% i 10,2%. Поспмплантацшна смертнiсть перевищувала на 7,0% аналопчний показник контрольно! групи.
Показники доiмплантацiйно!, постiмплантацiонно! i загально! ембрюнально! смертносп в дослiднiй групi iстотно не вiдрiзнялися ввд показник1в контрольно! групи (Р < 0,05). При вивченш довжини i маси ембрь ошв затримка росту плодiв не виявлено. При зовшш-ньому оглядi у витягнутих з матки плодiв значних видимих аномалiй розвитку (калiцтв) не вiдмiчено (таблицi 2).
Таблиця 2
Частота аномалш розвитку у плодiв на 20 добу ембрiогенезу щурiв пiсля застосування препарату
Показники Групи тварин
Дослщна Контрольна
Кшьюсть самок 11 10
Кшьюсть крововиливiв 0,41 ± 0,09* 0,55±0,75
Кшьюсть гематом 0,49 ± 0,65** 0,53±0,11
Кшьюсть гiдронефрозiв 0,03 ± 0,01 0,03±0,01
Р < 0,05; - Р < 0,01 поршняно з контро-
льною групою
тварин, оброблених «Мазь для ран» в перюд ваптнос-Ti, не встановлено дефекпв розвитку к1стково! систе-ми, що сввдчить про те, що даний препарат не викли-кае порушення процесiв остеогенезу. При порiвняннi шлькосп исток у вах вiддiлах скелета у ембрiонiв дослщно! та контрольно! груп патологiй та достовiр-них вiдмiнностей не встановлено.
На пiдставi отриманого можна зробити висновок про ввдсутшсть у препарату ембрютоксично! терато-генно! дй' при дермальному його застосуваннi.
Далi проведено спостереження за постнатальним розвитком потомства у тварин тдданих впливу препарату тд час вагiтностi. Так, як вади розвитку i фун-кцiональна неповноцiннiсть рiзних органiв i систем часто виявляються пiсля народження. При нашшрно-му нанесеннi щурам «Мазь для ран» в дозi 0,5 г/кг з 1 по 19 добу ваптносп не встановлено впливу препарату на кшьюсть народжених щурят i ввдсоток мертво-народжених плодiв. Встановлено, що роди у шддосль дних самок наступали, як правило, на 23 добу ваптносп, як i у контрольних тварин. Чисельнiсть послiду у самок, оброблених «Мазь для ран», була такою ж, як i в контроле Показники смертносп щурят i динамiка маси !х тша протягом першого мюяця життя, що шд-давалися в пренатальному перiодi розвитку впливу препарату «Мазь для ран», не в1дазнялися ввд ввдпо-вiдних показник1в у контролi (таблиц 3, 4).
Таблиця 3
Показники постнатальноТ CMepTHOCTi щурят, якi зазнавали впливу «Мазь для ран»
Виняток становлять 3,7% крововиливiв i 4,4% гематом у плодiв дослвдно! групи. Вiдповiдно - 5,3% гематом i 5,5% крововиливiв у плодiв у контрольно! групi.
При дослвдженш внутрiшнiх органiв плодiв дефекпв !х розвитку не виявлено. Крiм того, у ембрiонiв
Показники Дослiдна Контрольна
Кiлькiсть народжених щуренят на 1 самку 9,7 ± 1,21 9,8 ± 1,55
Постнатальна смертшсть, % 5,91 ± 1,35* 3,99 ± 2,01
Примiтка: - Р < 0,05 пор1вняно з контрольною групою
Таблиця 4
Показники постнатального розвитку щурят у самок, що пщдавалися з 1 по 19 добу вагггност впливу
Групи тварин При на1 эодженш На 7-му добу життя На 14-ту добу життя На 21-шу добу життя
Маса тша щуреня-ти, г Довжина тша щуре-няти, см Маса тша щуреняти, г Довжина тiла щуре-няти, см Маса тiла щуреняти, г Довжина тша щуре-няти, см Маса тша щуреняти, г Довжина тша щуре-няти, см
Досль дна 6,7 ± 2,11 4,12 ± 1,87 10,99 ± 0,26* 6,41 ± 1,87 20,42 ± 0,45* 6,86 ± 0,39* 25,11 ± 5,14 7,89 ± 2,45
Контрольна 6,23 ± 0,30 4,87 ± 0,29 10,26 ± 0,29 5,87 ± 0,27 20,45 ± 0,42 6,39 ± 0,29 25,14 ± 0,64 7,45 ± 0,35
Примгтка: - Р < 0,05 поршнян) з контрольною групою
Висновки
Багаторазове дермальне нанесення препарату для зовшшнього використання «Мазь для ран» щурам з 1 по 19 добу ваптносп не викликае ембрiотоксично!' дп, не пiдвищуе показники передiмплантацiйно!, поспм-плантацiйно!, загально! ембрiонально!' смертностi i не впливае на постнатальний розвиток щурят.
Перспективи подальших дослгджень. Подальшi дослвдження будуть спрямованi на кттчне випробу-вання препарату, зокрема, на вивчення ефективностi «Мазi для ран» при гiперкератозi дiйок вименi корiв
Ta 3aBepmeHHH nepegpeecrpa^HHHx KnimHHHx BHnpoöy-BaHb.
Eiß^iorpa^inm iIOCII. lamm
Sachuk, R.N., Tverdyy, V.M., Zhyhalyuk, S.V., Dmytriyev, I.M., Stravs'kyy, Ya.S., Katyukha, S.M. (2017). Patent na korysnu model' № 113784. Maz' dlya ran - preparat dlya profilaktyky ta likuvannya zakhvoryuvan' shkiry [Ointment for wounds - a preparation for the prevention and treatment of skin diseases]; zayavnyk i patentovlasnyk Doslidna stantsiya
HayKOBHH BicHHK ^HyBME iMeHi C.3. I^H^Koro, 2017, t 19, № 78
epizootolohiyi IVM NAAN; Byul. № 3 (in Ukrainian).
Sachuk, R.N., Zhyhalyuk, S.V., Luk'yanyk, I.M., Stravs'kyy, Ya.S.,. Katsaraba, O.A, Neizvyesna, I.M. (2016). «Maz' dlya ran» - efektyvnyy fitopreparat dlya profilaktyky ta likuvannya zakhvoryuvan' shkiry u tvaryn [«Ointment for Wounds» is an effective phy-topreparatum for the prevention and treatment of skin diseases in animals]. Materialy naukovo-praktychnoyi konferentsiyi molodykh vchenykh «Aktual'ni prob-lemy veterynarnoyi biotekhnolohiyi ta infektsiynoyi patolohiyi tvaryn». K., TsP «Komprynt» (in Ukrainian).
Kosenko, M.V., Malyk, O.H., Kotsyumbas, I.Ya. (1997). Toksykolohichnyy kontrol' novykh zasobiv zakhystu tvaryn [Toxicological control of new animal protection means: methodical recommendations]: metodychni rekomendatsiyi (in Ukrainian).
Kotsyumbas, I.Ya., Malyk, O.H., Patereha, I.P. (2006). Doklinichni doslidzhennya veterynarnykh likars'kykh zasobiv [Preclinical studies of veterinary medicinal products]; za redaktsiyeyu I. Ya. Kotsyumbasa. -L'viv: Triada plyus (in Ukrainian).
Gutyj, B., Khariv, I., Binkevych, V., Binkevych, O., Lev-kivska, N., Levkivskyj, D., Vavrysevich, Y. (2017). Research on acute and chronic toxity of the experi-
mental drug Amprolinsyl. Regul. Mech. Biosyst. 8(1), 41-45.
Gutyj, B., Paska, M., Levkivska, N., Pelenyo, R., Nazaruk, N., Guta, Z. (2016). Study of acute and chronic toxicity of 'injectable mevesel' investigational drug. Biological Bulletin of Bogdan Chmelnitskiy Melitopol State Pedagogical University. 6(2), 174180.
Todoriuk, V.B., Hunchak, V.M., Hufrii, D.F., Gutyj, B.V., Khariv, I.I., Khomyk, R.I., Vasiv, R.O., Slobodiuk, N.M., Vyniarska, A.V., Zhuravlov, O.Iu., Husar, P.T., Nazaruk, N.V., Nazaruk, N.Ia., Soltys, M.P. (2017). Doslidzhennia hostroi ta khronichnoi toksychnosti eksperymentalnoho preparatu «Ferosel T». Naukovyi visnyk LNUVMBT imeni S.Z. Gzhytskoho. 19(73), 104-111 (in Ukrainian).
Wilson, J.G. (1965). Embryological considerations in teratology. Teratology principles technigens. London, New-York. 6, 251-277.
Dawson, A.B. (1926). Note on the staining of the sce-letion cleared specimes with alizarin reds. Stain Tecnol., 1.
Received 22.09.2017 Received in revised form 18.10.2017 Accepted 23.10.2017
