CC BY
7
возможно, изменяется у пациентов с лейкозом. Целью работы было изучить изменения в иммунофенотипе МСК и экспрессии ими генов-маркеров активации и диффе-ренцировки при воздействии ИФНу.
Исследование относительных уровней экспрессии генов (REL) показало значимое повышение REL маркеров активации HLA-DR и IDO-1 после инкубирования с ИфНу МСК всех исследованных групп: больных в дебюте заболевания (N=26), больных в ремиссии (N=17) и здоровых доноров (N=19). При парном сравнении образцов больных в дебюте и в ремиссии заболевания был выявлен значимо более низкий уровень экспрессии HLA-DR после активации в ремиссии. Также во всех группах после активации повышался REL PPARj, маркера адипогенной дифференцировки, однако в МСК больных в ремиссии он был значимо ниже, чем в дебюте. Уровень экспрессии SOX9, маркера хондро-генной дифференцировки, до активации был выше у доноров по сравнению с обеими группами больных. После активации различие между донорами и больными в ремиссии сохранилось, а у больных в дебюте его экспрессия повышалась. Хотя активация значимо не повлияла на REL маркеров остеогенной дифференцировки, BGLAP и SPP-1, наблюдалась тенденция к повышению экспрессии SPP-1 при активации МСК больных в ремиссии, она становилась значимо выше, чем в МСК здоровых доноров. REL BGLAP доноров был значимо выше, чем у больных обеих групп, до инкубации с ИФНу. После активации сохранялась разница между МСК доноров и больных в ремиссии. Различия между МСК доноров и пациентов в дебюте острого лейкоза после активации перестали быть достоверными.
Иммунофенотипирование показало повышение после активации средней интенсивности флуоресценции (MFI) ряда маркеров: HLA-ABC, HLA-DR, CD90, CD274, CD54, а также процента CD54+ МСК. Все эти белки играют роль в воспалении. При этом разницы между группами не было обнаружено. MFI CD105 (эндоглин) на клетках больных в ремиссии был значимо ниже, чем у доноров, вне зависимости от активации. Это может быть связано с повышенным запросом на пролиферацию стволовых клеток при восстановлении кроветворения после терапии. Выявлены изменения физиологической реакции МСК на активацию ИФНу у пациентов с острыми лейкозами. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-15-00018.
НЕКОТОРЫЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ
ПРОЛИФЕРАЦИИ КЛЕТОК ПРИ СТАРЕНИИ
ОРГАНИЗМА И ПРИ РАЗВИТИИ ПАТОЛОГИИ
С.В. Сазонов
1 Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия
2 Уральский государственный медицинский университет, Екатеринбург, Россия
e-mail: Prof-SSazonov@yandex.ru
Ключевые слова: клеточная регенерация, пролиферация,
клеточный цикл, внутриклеточные сигнальные пути.
Показано, что активность процессов физиологической и репаративной регенерации тканей изменяется при старении организма [1]. Установлены основные закономерности состояния пролиферативных процессов в тканях с разной скоростью клеточного обновления.
При старении организма во всех без исключения тканях уровень пролиферативных процессов снижается. Использование проточной ДНК-цитометрии позволило
установить, что в основе изменения состояния пролиферативных процессов в тканях лежит торможение процессов вступления клеток в митотический цикл и последующего прохождения ими премитотического (G2) периода клеточного цикла, без изменения скорости прохождения синтетического (S) периода, что проявляется в ткани увеличением числа полиплоидных клеток [2].
Обнаруженные закономерности прослежены не только в организме экспериментальных животных, но и при индукции регенераторных процессов в печени больных хроническим гепатитом из разных возрастных групп [3], в коже у больных атопическим дерматитом [2], при развитии карциномы молочной железы [4]. При индукции регенераторных процессов во всех изученных моделях одним из основных механизмов появления полиплоидных клеток является торможение прохождения клетками G2 периода. При развитии опухоли в клетках активируются внутриклеточные механизмы, используемые ранее в эмбриогенезе, но заблокированные в более поздние стадии развития. Появление коэкспрессии Е- и Р-кадгеринов, запуск каскада внутриклеточных сигнальных путей, высвобождение внутриклеточных р и р120-катенинов из кадгерин-катени-новых комплексов, запуск сигнального пути Wnt приводит к стимуляции пролиферации и инвазии клеток опухоли [5].
Литература:
1. Сазонов С.В. Сб. науч. трудов. Екатеринбург, Изд.: СВ-96, 1999. С.352.
2. Сазонов С.В. Актовая речь на итоговой научной конференции УГМУ, Екатеринбург, УГМУ, 2022. 40 с.
3. Блинкова Н.Б., Сазонов С.В., Леонтьев С.Л. Екатеринбург: Юника, 2017. 106 с.
4. Сазонов С.В., Бриллиант А.А. Германия, Lambert Academic Publishing, 2013, 140 с.
5. Сазонов С.В., Засадкевич Ю.М., Леонтьев С.Л. Екатеринбург: ИМКТ, 2016, 110 с.
РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВОСТИ МЕТАЛЛОПРОТЕ-ИНАЗЫ МЕПРИНА КАК СПОСОБ ВЛИЯНИЯ НА РЕГЕНЕРАТИВНЫЕ ПРОЦЕССЫ
Е.В. Самойлова, Д.А. Чепурнова, А.Г. Фесенко, А.А. Коротаева
ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: erihter@mail.ru
Ключевые слова: меприн, внеклеточный матрикс, коллагены, фибронектин, актинонин, эндотоксемия, острое повреждение легких.
Участие металлопротеиназ в процессах повреждения и репарации тканей хорошо известно, однако роль специфических протеиназ в различных фазах регенерации недостаточно изучена. Меприны являются единственными астациновыми протеиназами, проявляющими функции как в интерстиции, так и на клеточной мембране, поскольку существуют в двух формах, растворимой и мем-бранно-связанной [1]. Это значительно расширяет ареал их действия. Кроме того, меприны участвуют не только в деградации белков внеклеточного матрикса, но и в образовании зрелых форм фибриллярных белков, что способствует как повреждению, так и регенерации ткани. Являясь проколлагеназами, меприны расщепляют прокол-лагены I и III типа, превращая их в зрелые белки, способные собираться в коллагеновые фибриллы [2]. В то же время меприны расщепляют белки базальных мембран
внеклеточного матрикса, такие как коллаген IV, нидоген и фибронектин [3]. Меприны также косвенно регулируют ремоделирование внеклеточного матрикса, активируя ме-таллопротеиназу АДАМ 10 и способствуя расщеплению прометаллопротеиназы 9 [4]. Следовательно, регулируя активность мепринов можно влиять на их функции.
Эффекты ингибирования мепринов изучали на моделях эндотоксемии и острого повреждения легких у крыс линии Sprague-Dawley. Эндотоксемия привела к увеличению экспрессии меприна альфа в почках и сердце. Повышение экспрессии коллагенов I, III, IV типов и фибронектина наблюдалось в почечной ткани, а в ткани сердца — коллагенов III и IV типов. Ингибитор мепринов актинонин уменьшил экспрессию как мепринов, так и генов исследуемых белков внеклеточного матрикса, однако степень выраженности действия актинонина в сердце и в почках была разной. Введение актинонина крысам с острым повреждением легких ослабило ЛПС-индуцированное нарушение проницаемости легочной ткани и уменьшило отек легких. Таким образом, ингибирование мепринов может препятствовать прогрессированию патологического процесса в тканях и органах и способствовать их регенерации.
Литература:
1. Sterchi EE, Stocker W, Bond JS. Mol Aspects Med. 2008. V. 29. № 5. P. 309.
2. Broder C, Arnold P, Vadon-Le Goff S, et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2013. V. 110. № 35. P. 14219.
3. Kruse MN, Becker C, Lottaz D, et al. Biochem J. 2004. V. 378. P. 383.
4. Jefferson T, Keller UA, Bellac C, et al. Cell Mol Life Sci. 2013. V. 70. P. 309.
КОКТЕЙЛЬНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ
РАЦИОНАЛЬНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ
А.С. Светозаров1, Р.А. Абрамович2,
О.Г. Потанина2, И.В. Шарутин2, А.Н. Воробьев2,
О.В. Меньшова2, Е.В. Елизарова2
1 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
2 Научно-производственный участок Института регенеративной медицины МНОЦ МГУ
им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: andrejsvetozarov@gmail.com
Ключевые слова: тест-система, фармакотерапия, цитохром
P450, фенотипирование, фармацевтическая технология.
«Коктейльные» тест-системы используются для определения индивидуальной активности изоферментов цитохрома группы Р450 у пациента. Система состоит из нескольких зондовых препаратов, каждый из которых метаболизируется отдельным ферментом. Через некоторое время после их приёма проводится анализ крови и выявляется остаточное количество введённых веществ и их метаболитов. Показана перспективность диагностических тест-систем для определения фенотипических особенностей метаболизма лекарственных веществ и назначения наиболее эффективной лекарственной терапии. Важной характеристикой «коктейльной» тест-системы является одновременность введения и скорость резорбции активных компонентов, поскольку контрольное время эксперимента отсчитывается с момента введения. Также, заслуживает внимания предотвращение взаимодействия между несколькими действующими веществами внутри лекарственной формы.
В рамках данного исследования была разработана универсальная система единовременного введения тестового «коктейля» из четырёх активных фармацевтических субстанций в нетерапевтических дозировках: кофеина, эфави-ренза, флурбипрофена, метопролола тартрата, используемых в качестве зондовых препаратов для изоферментов СУР1А2, СУР2В6, СУР2С9, СУР206, соответственно. Выбранная лекарственная форма — твёрдая желатиновая капсула, содержащая микротаблетки препаратов. В качестве наполнителя таблеток был использован свободно сыпучий двухосновный безводный фосфат кальция.
Разработан единый универсальный технологический процесс для производства микротаблеток различных АФС. Однородность дозирования полученных микротаблеток составила 4,0 ± 0,3 %, технологические характеристики соответствовали требованиям ГФ РФ XIV. Установлена возможность одновременного количественного определения всех АФС методом спектроскопии ЯМР и ВЭЖХ. Разработаны и валидированы аналитические методики.
Использование микротаблеток позволило достигнуть быстрого однородного растворения препаратов в течение 20 минут при распадаемости 1,25 ± 0,01 мин. Небольшая, относительно смешанных порошков, площадь поверхности микротаблеток обеспечила механическое разделение активных веществ, предотвращающая их химическое взаимодействие. Исследована стабильность микротаблеток.
ВЛИЯНИЕ ГИПОКСИИ НА ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ ФАГОЦИТОВ В КО-КУЛЬТУРЕ С МУЛЬТИПОТЕНТНЫМИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫМИ СТРОМАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ
А.В. Свирская, М.А. Яковлева, Б.А. Музыченко, Д.Б. Нижегородова
Учреждение образования Международный государственный экологический институт им. АД. Сахарова Белорусского государственного университета, Минск, Республика Беларусь
e-mail: alesjswirskay@mail.ru
Ключевые слова: гипоксия, мультипотентные мезенхи-мальные стромальные клетки, нейтрофилы, макрофаги, хемилюминесценция.
Гипоксия представляет собой патологический процесс, являющийся ключевым механизмом многих заболеваний, при которых нарушаются окислительные реакции. Наряду с этим условия гипоксии могут использоваться при терапевтических подходах, в частности, при пробоподготовке мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) для клеточной терапии. Недостаточность исследований эффектов гипоксии на иммуномодулирующие свойства ММСК, в частности на активность фагоцитов, определяет актуальность данного исследования [1].
ММСК человека выделяли из подкожной жировой ткани (n=5) путем ферментативной обработки и культивировали в полной культуральной среде DMEM (Gibco™, United Kingdom) в течение 24 часов в условиях газовой гипоксии (1-2% O2) с использованием набора Anaerocult A® mini (Millipore, Германия) при 37°C или в условиях нормоксии в С02-инкубаторе. Нейтрофилы и макрофаги получали из гепаринизированной венозной крови доноров (n=5) на градиенте плотности. Сокультивирование гипоксических и нормоксических ММСК с нейтрофилами и макрофагами проводили в полной культуральной среде RPMI-1640
