CC BY
28
УДК 616.36.00:615.32
РЕГЕНЕРАТИВНЫЕ ПРОЯВЛЕНИЯ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПОСЛЕ РЕЗЕКЦИИ ЛЕВОЙ ДОЛИ В УСЛОВИЯХ ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ВЕЩЕСТВ «ТРЕПЕЛ» И «СУВАР»
REGENERATIVE MANIFESTATIONS IN THE LIVER OF RATS AFTER RESECTION OF LEFT LOBE WHEN USING BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES «TREPEL» AND «SUVAR»
О. Ю. Гурьева
O. Y. Guryeva
ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени И. Н. Ульянова»,
г. Чебоксары
Аннотация. В работе показано стимулирующее влияние биологически активных веществ «Сувар» и «Трепел» на заживление механической травмы печени после резекции левой доли у крыс. Установлено, что биологически активные вещества стимулируют пролиферацию и активируют белок-синтетическую функцию гепатоцитов, что проявляется в увеличении числа двуядер-ных и двуядрышковых гепатоцитов.
Abstract. The given research shows the stimulating effect of biologically active substances «Tre-pel» and «Suvar» on healing of mechanical injury of the liver after resection of left lobe in rats. It is established that biologically active substances stimulate proliferation and activate protein-synthetic function of hepatocytes which results in increase of the amount of binuclear and binucleolar hepatocytes.
Ключевые слова: крысы, печень, резекция левой доли печени, биологически активные вещества, регенерация.
Keywords: rats, hepatocytes, resection of hepatic left lobe, biologically active substances, regeneration.
Актуальность исследуемой проблемы. Печень обладает большими компенсаторно-восстановительными возможностями. Даже глубокие изменения ее структуры и функций могут быть в определенной степени обратимы, что показано в исследованиях Д. С. Саркисова (1975), Л. С. Рубецкого (1960), Б. П. Солопаева (1980) и др. Однако спонтанная регенерация часто оказывается недостаточной для полного восстановления структуры и функций измененного органа. В связи с этим проблема стимуляции регенерации поврежденной печени является в настоящее время чрезвычайно важной и актуальной.
Целью настоящей работы явилось изучение влияния биологически активных веществ «Сувар» и «Трепел» на восстановление структуры печени после резекции левой ее доли у крыс в ранние сроки после операции.
Материал и методика исследований. Экспериментальными животными явились 20 белых беспородных крыс массой 250-290 г, которым под глубоким эфирным масочным наркозом была проведена резекция левой доли печени. Крысы были разбиты на две группы. Первой группе животных начиная с первых дней и до конца эксперимента ежедневно к основному рациону одновременно добавляли биологически активные вещества «Трепел» в дозе 1,25 мг/кг и «Сувар» в дозе 40 мг/кг массы тела; питание животных осуществляли в режиме свободного доступа к пище и воде. Контрольной группе из 10 крыс массой 256-292 г аналогичным образом проводилась резекция левой доли печени; биологически активные вещества в рацион питания не включались.
Животных забивали эфиром на 3-, 5-, 10-, 14- и 30-й день после резекции.
Печень животных извлекали, кусочки органа из области резекции и в удалении от нее размером 1^1 см после фиксации в 10 %-м нейтральном формалине заключали в парафин. С парафиновых блоков изготавливали срезы толщиной 4-5 мкм, которые окрашивали гематоксилин-эозином. В полученных гистологических препаратах подсчитывали число двуядерных и двуядрышковых гепатоцитов (на 7000 гепатоцитов при увеличении *900). Статистическую обработку производили по правилам вариационной статистики.
Результаты исследований и их обсуждение. На 3 сутки после резекции у животных опытной группы ткань печени в области операционной раны была представлена гомогенным структурным детритом розового цвета, в котором определяются единичные бледные ядра погибших гепатоцитов, а также эритроциты. В краевой зоне повреждения наблюдаются гепатоциты с резко выраженными дистрофическими изменениями по типу белковой и жировой дистрофии. Встречаются гепатоциты, имеющие признаки некробиоза, цитоплазма которых неоднородна, зерниста, границы клеток расплывчаты. Ядра таких клеток утрачивают четкие границы, становятся бледными, а в ряде клеток определяются лишь «тени» ядер. Балочное строение печени было нарушено. По краю резекции отмечается умеренное количество клеток, преимущественно лимфоцитов, гистиоцитов и макрофагов. Межуточная ткань несколько отечна, сосуды полнокровны, имеются мелкие очаговые скопления эритроцитов.
На 5 сутки после резекции: в области резекции лежат гепатоциты со слабовыра-женными дистрофическими изменениями: нечеткостью клеточной границы, зернистостью, неоднородностью цитоплазмы; ядра бледные, границы нечеткие. В удалении от зоны резекции подавляющее число гепатоцитов имеет морфологически нормальное строение. В месте повреждения наблюдается умеренное количество разнообразных клеток (нейтрофилов, лейкоцитов, лимфоидных клеток, макрофагов). Отмечается гипертрофия гепатоцитов, которая в наибольшей степени выражена по месту резекции. На периферии клеточного инфильтрата определяются вытянутые клетки фибробластического характера и нежные тонкие волокна.
На 10 сутки сохраняется полнокровие органа, фрагментация балок в дольках, нек-ротизированные гепатоциты. Регистрируются участки компенсаторной гипертрофии печени. В гепатоцитах дистрофические изменения отсутствуют. Балочное строение печени восстанавливается на 50-55 % на всем протяжении. В клеточном инфильтрате преобладают фибробласты, по периферии прослеживаются нежные волокна.
На 14-й день в зоне резекции наблюдаются небольшие участки зрелой волокнистой соединительной ткани, богатой волокнами и клетками типа фибробластов и фиброцитов, с небольшим количеством элементов лимфоидного типа. Гепатоциты имеют нормальное строение.
Зона резекции печени на 30 сутки была представлена зрелой волокнистой соединительной тканью, богатой волокнами и содержащей клетки типа фибробластов и фиброцитов.
В удалении от зоны резекции печеночная ткань имеет нормальную структуру. В ткани печени, особенно по краю резекции, визуально имеет место гипертрофия гепа-тоцитов и их ядер.
У контрольных оперированных животных на 3 сутки на фоне выраженного полнокровия в системе воротной вены балочная структура долек печени нарушена. Дефект печеночной ткани заполнен эритроцитами и некротизированными клетками. Вокруг участка резекции отмечаются белковая дистрофия гепатоцитов и большое количество лимфоидных клеток.
На 5 сутки очаг повреждения освобождается от эритроцитов и погибшей ткани, формируются молодые мезенхимальные клеточные элементы.
На 10 сутки зона резекции представлена волокнистой соединительной тканью, богатой клетками и волокнами. Из клеток преобладают вытянутые элементы типа фиб-робластов и фиброцитов. В удалении от участка резекции ткань печени имеет хорошо выраженное балочное строение, гепатоциты определены четкими границами; вблизи от места повреждения сохраняется гипертрофия гепатоцитов.
На 14-й день балочное строение печени восстанавливается у 50 % контрольных крыс. Местами определяется стаз капилляров, белковая дистрофия, полиморфизм гепатоцитов и фрагментация долек. Фокусы компенсаторной гипертрофии наблюдаются по всей поверхности среза печени. Участок резекции полностью замещается зрелой волокнистой соединительной тканью.
На 30 сутки балочное строение печени восстанавливается у 100 % контрольных животных. В гепатоцитах признаки дистрофии отсутствуют, но сохраняется их гипертрофия, в наибольшей степени выраженная вблизи от места резекции. Участок резекции представлен массивным очагом соединительной ткани.
Подсчет двуядерных гепатоцитов установил (табл. 1) значительное увеличение их количества на 5 сутки после резекции в контрольной группе до 31 %о, в опытной -до 62 %о. На 30 сутки после резекции количество двуядерных гепатоцитов снижается (в контрольной группе - до 12,85 %о, в опытной - до 25 %о).
Таблица 1
Количество двуядерных гепатоцитов после резекции левой доли печени
Сутки после операции Двуядерные гепатоциты, %о
опыт контроль
М±т М±т
3 22±2,5* 13±2,3
5 62±2,7* 31±2,2
10 58±5,8* 15±2,8
14 64±3,2* 17±3,1
30 25±1,1* 12,85±1,2
Примечание: * - р<0,001
Образование двуядерных гепатоцитов из одноядерных при репаративной регенерации, как в настоящее время полагает большинство исследователей, представляет собой резерв полиплоидизации.
Подсчет двуядрышковых гепатоцитов показал, что их количество в обеих группах отличается (табл. 2); у опытных крыс число двуядрышковых гепатоцитов было больше по сравнению с контролем.
Таблица 2
Количество двуядрышковых гепатоцитов после резекции левой доли печени
Сутки после операции Двуядрышковые гепатоциты, %о
опыт контроль
М±т М±т
3 16±2,1 13±1,2
5 15±2,3** 9±1,7
10 12±2,6 10±1,1
14 15±2,1 13±2,1
30 17±1,9* 12±1,3
Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,001
Увеличение числа двуядрышковых гепатоцитов, согласно литературным данным (В. В. Садовникова и соавт., 2001), свидетельствует об активации белок-синтетической функции клетки.
Резюме. Проведенное исследование показало, что биологически активные вещества «Сувар» и «Трепел» стимулируют регенераторные процессы в печени крыс после резекции левой доли. Это проявляется гипертрофией гепатоцитов, особенно вблизи от места резекции, активацией пролиферации гепатоцитов и увеличением количества двуядрышковых печеночных клеток. Также биологически активные вещества замедляют появление фибробластов в клеточном инфильтрате, возникающем по краю резекции, в связи с чем развитие соединительной ткани в месте резекции у опытных крыс происходит позднее.
