CC BY
12городе уменьшились до 76,2 %000, в 2001 - до 48,4 %000, а в 2002 году - до 20,1 %000 (т.е. почти в 9,6 раза по сравнению с 1999 г.).
Выбранная тактика вакцинопрофилактики оказалась эффективной в условиях эпидемического распространения ГВ, полностью себя оправдала и позволила за три года значительно повлиять на активность эпидемического процесса НВ-вирусной инфекции не только среди прививаемых контингентов, но и среди всего населения крупного города. Н.М.Башкоеа, В.В.Романенко, А.Ж.Юровских, И.О.Кузнецова, И.В.Шахгильдян, М.И.Михайлов, ФГУ Центр госсанэпиднадзора в г. Екатеринбурге, ФГУ Центр госсанэпиднадзора в Свердловской области, НИИ вирусологии им. ДЖИваиовского РАМН, НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.
РЕФЕРЕНС-ПАНЕЛЬ СЫВОРОТОК КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, СОДЕРЖАЩИХ и не СОДЕРЖАЩИХ ПОВЕРХНОСТНЫЙ АНТИГЕН ВИРУСА ГЕПАТИТА В (HBsAg) СУБТИПОВ ay ad (ПРИНЦИПЫ их КОНСТРУИРОВАНИЯ и ПРИМЕНЕНИЯ).
Контроль качества лабораторных исследований выявления HBsAg представляет собой чрезвычайно важную проблему диагностики гепатита В.
Основные требования, предъявляемые к диагностическим системам, - максимальная чувствительность и специфичность. Приказ Министерства Здравоохранения Российской Федерации № 322 от 21.10.2002 регламентирует чувствительность диагностических препаратов, которые могут применяться на территории России для обнаружения HBsAg. С 1 января 2004 года не разрешается применение диагностических наборов для выявления HBsAg в ИФА с чувствительностью менее 0,1 нг/мл (мМЕ/мл). В этом же приказе представлен перечень диагностических тест-систем, которые были использованы в сравнительных испытаниях и удовлетворяют всем предъявляемым требованиям.
Проверка чувствительности и специфичности диагностических наборов начинается на производстве. Каждая серия изготовленного диагностикума контролируется отделом биотехнологического контроля (ОБТК) предприятия. В дальнейшем образцы диагностических наборов вместе с паспортом и протоколами их испытаний, проведенных в ОБТК, направляются в ГИСК им. Л.И. Тарасевича МЗ РФ. В этом институте осуществляется проведение предреализационного контроля, в том числе оценка чувствительности и специфичности тест-систем. При этом применяют контрольные панели сывороток крови с наличием HBsAg в известной концентрации и сывороток крови, в которых он отсутствует. Кроме того, для оценки применяется отраслевой стандартный образец высокоочищенного HBsAg. Проведение этих контрольных исследований должно обеспечить потребителя, т.е. диагностические лаборатории, наборами для обнаружения HBsAg, которые отвечают всем предъявляемым требованиям.
Однако в некоторых случаях, например, при нарушении режима транспортировки или хранения, качество диагностических систем может быть снижено. Вполне понятно желание лаборатории применять в своей работе диагностикумы, обладающие максимальной чувствительностью и специфичностью, а также удобные в работе. В дополнение часто приходится решать проблему соотношения цены и качества. Исходя из этого, некоторые "крупные" лаборатории (часто референс-лаборатории) осуществляют "входной контроль качества" диагностических препаратов, предшествующий закупке крупной партии диагностических наборов.
Важное звено в системе контроля качества выявления HBsAg - внутрилабораторный контроль. Помимо "Федеральной системы внешнего контроля качества", в которой обязаны принимать участие все лаборатории, осуществляющие обнаружение HBsAg, "внутрилабораторный контроль качества исследований" позволяет выявить возможные ошибки при непосредственном проведении исследований.
Проведение всего комплекса работ по оценке качества выявления HBsAg невозможно без применения контрольных панелей сывороток крови человека с наличием этого антигена в известной концентрации, что позволяет оценить чувствительность диагностического набора. Наличие в составе контрольной панели сывороток крови человека без HBsAg
позволяет оценить возможность появления ложнопозитивных результатов. При конструировании таких панелей особую важность имеет точное определение концентрации HBsAg в контрольных образцах.
В настоящее время можно утверждать, что разработка и изготовление контрольных панелей для оценки чувствительности и специфичности выявления антигенов и антител является отдельным разделом лабораторной диагностики вирусных гепатитов. Эту работу осуществляют такие организации, как National Institute Biological fore Standards and Control (NDBSC), Великобритания; Контрольная лаборатория Стандартов Красного Креста, Голландия; Boston Biomedical Inc, США; BioClinical Partners, США и другие.
При конструировании панели, которой посвящена данная статья, в качестве основополагающей задачи являлась необходимость обеспечения отечественных диагностических лабораторий контрольными материалами, строго отвечающими общемировым требованиям. Для этого в качестве рабочего партнера была избрана фирма BBI Diagnostics, США. Эта компания обладает значительным опытом проведения таких работ и осуществляет промышленный выпуск панелей для выявления HBsAg, которые используются во многих странах мира.
Ранее проведенные исследования по субтипированию HBsAg, выявленного в различных регионах России, установили преобладающую принадлежность антигена к субтипу "ау" (Т.Е.Ворожбиева, М.И.Михайлов, 1980; И.Г.Нетесова, 2000). Однако наличие на территории лиц с HBsAg субтипа "ad" и необходимость его выявления в низких концентрациях, определяет необходимость наличия при конструировании контрольной панели образцов антигена, различающихся по субтиповому спектру. Применение диагностических препаратов для выявления HBsAg, приготовленных на основе антител (поликлональных или моноклональных), направленных на общую детерминанту "а" и изолированно на детерминанту "у", не позволяет выявлять HBsAg субтипа "ad" с необходимой чувствительностью. При этом известно, что дальнейший учет субтиповой принадлежности антигенных детерминант: "w", "r", "q" , "f', "t", "g" и др. нецелесообразен, так как не определяет возможность получения ложнонегативного обнаружения HBsAg. Учитывая более широкую циркуляцию на территории России HBsAg субтипа "ау", в панель сывороток крови включены 6 образцов с наличием HBsAg субтипа "ау" и 3 образца субтипа "ad".
Важнейшей характеристикой образцов, составляющих панель, является концентрация HBsAg, выраженная в массовых количествах (нг/мл). Панель сывороток состоит из 16 образцов сывороток крови человека, содержащих антиген в концентрациях от 2-3 до ОД нг/мл. Причем 13 из них содержат антиген в концентрациях менее 1 нг/мл. Преобладание образцов с низким уровнем содержания HBsAg связано с требованием максимально полного выявления таких сывороток крови. Высокий уровень заболеваемости острым гепатитом В, регистрируемый в России, определяет значительное число лиц, находящихся в инкубационном периоде, т.е имеющих низкий уровень HBsAg, но обладающих высокой инфекционностыо.
Традиционно референс-панели, содержащие HBsAg в низких концентрациях, готовят методом разведения положительно аттестованных стандартов HBsAg в сыворотке крови человека, не содержащей маркеров инфицирования вирусами гепатитов В, Си ВИЧ (А.Н.Канев, 2000). При этом теоретически существует опасность возникновения неспецифического взаимодействия внесенного антигена с сывороточными белками или другими компонентами реакционной смеси. Для устранения этого явления фирмой BBI Diagnostics разработаны методики предварительной обработки образцов, полностью устраняющие возможность неспецифических взаимодействий HBsAg. В представленной референс-панели сывороток крови человека, содержащих и не содержащих HBsAg, часть контрольных образцов также изготовлена путем разведения. Это связано с необходимостью предоставления информации по их субтиповой характеристике и невозможностью типирования антигена в концентрациях от 1 до 0,1 нг/мл. В отличие от ранее выпускаемых референс-панелей, содержщих образцы HBsAg в низких концентациях, в настоящую панель включены 8 образцов неразведенных сывороток крови с HBsAg в концентрациях от 2,0 -3,0 до 0,1-0,25 нг/мл.
Изготовленная референс-панель сывороток крови прошла тщательные испытания в BBI Diagnostics и отечественных институтах. Все образцы оттипированы по стандартам "NEBSC" и "BBI". Референс-панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) субтипов "ау" и "ad", утверждена в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и внесена в Реестр стандартных образцов, допущенных к применению в системе МЗ РФ и на предприятиях других ведомств, выпускающих медицинские иммунобиологические препараты (ОСО 42-28-364-02).
При подготовке Приказа Министерства Здравоохранения Российской Федерации №322 от 21.10.2002 "О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) и антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в сыворотке крови" в процессе сравнительных испытаний была использована представленная панель. Полученные результаты (см. www.hepatit.ru) позволили оценить качество (чувствительность и специфичность) применяемых в России диагностических препаратов.
Важными характеристиками референс-панели являются: срок годности (пять лет) и объем каждого контрольного образца (1 мл.). Эти характеристики позволят использовать данный препарат в течение длительного срока (при соблюдении необходимых условий хранения). Для российского потребителя цена данной панели значительно меньше (более чем в 5 раз) общемировых цен на аналогичную продукцию. Промышленный выпуск и распространение панели совместно осуществляют фирмы Медицинский центр "Авиценна" (Россия) и BBI Diagnostics (США).
Внедрение в отечественное здравоохранение референс-панели сывороток крови человека, содержащих и не содержащих поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) субтипов "ау" и "ad", несомненно станет важным этапом в повышении качества лабораторных исследований в стране.
М.И.Михайлов, Н.В.Шалунова, А.ХА.сади Мобархан, Е.Е.Мусина, В.Т.Петухов, О.К.Попова, Н.Г.Бочарова. Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН, Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича МЗ РФ, Медицинский центр "Авиценна", Москва.
ВНИМАНИЕ!!!
С 1 января 2000 года в Интернете по адресу www.hepatitinfo.ru открыта страница нашего некоммерческого партнерства
«ГЕПАТИТИНФО».
Только на этой странице Вы найдете: Полнотекстовые варианты бюллетеня «Мир вирусных гепатитов» и бюллетеня «Вирусные гепатиты: достижения и перспективы», издаваемых при содействии Московского представительства фирмы «ШерингПлау»
(до выпуска их печатных аналогов).
Информацию о различных конференциях с опубликованием наиболее интересных тезисов.
Электронную обновляемую версию «Энциклопедический словарь - Вирусные гепатиты»
(М.С. Балаян и М.И. Михайлов).
Специальный раздел, посвященный препарату «Зеффикс» («Ламивудин») фирмы «ГлаксоВэллком». Вы найдёте тезисы, слайды и ещё" много разнообразной информации.
ЗАХОДИТЕ, НЕ ПОЖАЛЕЕТЕ.
