CC BY
37
Медицинская Иммунология 2004, Т. 6, № 1-2, стр 97-106 © 2004, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
РЕАКЦИЯ СИСТЕМ КОМПЛЕМЕНТА И ИНТЕРФЕРОНА НА ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С РЕКОМБИНАНТНЫМ ИНТЕРФЕРОНОМ (РЕАФЕРОНОМ)
Латаш В.Г., Кузнецов С.И.*
Городская больница № 32, Санкт-Петербург
* Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования, Россия
Резюме. Исследование посвящено обсуждению влияния интерферонотералии на реакцию системы комплемента н на эндогенную интерфероновую систему у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С. Корреляционный анализ демонстрирует лабильный характер внутренних связей между параметрами этих систем до, после лечения и в отдаленные сроки.
Ключевые аюоа: система комплемента, система интерферона, иптерферонотерапия, хронический вирусный гепатит С, Реаферон.
Latach V.G. Kuznetsov S.I.
THE ENDOGENOUS INTERFERON AND COMPLEMENT SYSTEMS REACTION ON RECOMBINANT INTERFERON PREPARATION (REAFERON) IN TREATMENT OF PATIENTS WITH CHRONIC VIRAL HEPATITIS С
Abstract. The study is devoted to the recombinant interferon-cc (Reaferon) treatment influence on reactions of complement and endogenic IFN systems in patients with chronic viral hepatitis C. Correlative analysis demonstrates the labile character of interconnections between the parameters of these systems before, under and after the treatment. (Med.Immunol., 2004, vol.6, № 1-2, pp 97-106)
гочисленные регуляторные функции, которые оказывают существенное влияние на гуморально-клеточные кооперативные взаимоотношения в организме, что обеспечивает формирование невосприимчивости к чужеродным агрессивным факторам [2,8, 10,38].
Другой универсальной системой, которая принимает участие в создании неспецифической резистентности организма на субклеточном уровне, является система IFN. Главная функция этой системы - выявление и элиминация чужеродной нуклеиновой информации (кислоты). Многообразие биологических эффектов интерферонов - противовирусный, антимикробный, антипролифератив-ный (антитуморогенный), иммуномодулирующий, радиопротективный и др. * указывает на них как на видоспецифичные белки-регуляторы гомеоста-
за, которые реализуют свою активность на разных уровнях функционирования организма [5, 6].
Любое вмешательство во внутреннюю среду организма отразится на изменении функциональной ак-
Введение
Неспецифическую резистентность рассматривают как природную способность организма оставаться невосприимчивым к воздействию патогенных и токсических агентов. Такое состояние обеспечивается рядом гуморальных и клеточных систем организма, среди которых ключевые позиции занимают система комплемента (С’) и система интерферона (1РМ). Главной функцией системы С’ как основной составляющей врожденного иммунитета является осуществление лизиса чужеродных клеток, который реализуется через активацию системы двумя основными путями - классическим и альтернативным [3]. Помимо наличия разнообразных эф-фекторных механизмов системе С’ присущи мио-
Адрес для переписки:
196158, Санкт-Петербург,
ул. Ленсовета, д. 85, кв. 25. Кузнецов С.И.
Тел.: (812)127-78-60 (д.),
275-19-50, 109-60-96 (р.).
тивиости всех его систем, включая систему С’ и систему Стереотипность ответа систем обусловлена генетически детерминированными процессами развития реакций. Это характерно для развития хронической патологии печени вирусной этиологии, а также при нагрузке внутренней среды организма препаратами экзогенного ИТ'}. В плане сохранения гомеостаза систему С’ и систему П-Ы можно рассматривать как явления одного порядка, так как они обеспечивают неспецифическую резистентность и их активация (индукция) является закономерной реакцией организма на действие раздражающих факторов. При постоянном интересе исследователей к системе С' и системе 1РЫ в отдельности их взаимодействию и взаимосвязи при различных патологических состояниях, в том числе и при хроническом вирусном гепатите С (ХВГС) уделяется недостаточно внимания.
Цель данного исследования состояла в изучении влияния интерферонотерапии Реафероиом на системы С’ и НТО, а также в оценке взаимосвязи этих систем до, в процессе и после лечения у больных ХВГС.
Материалы и методы
Группа обследованных состояла из 21 человека (10 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 17 до 57 лет (средний возраст 28,0±2,4 года). Все больные были госпитализированы с диагнозом хронический вирусный гепатит С. Больные получали одинаковый курс интеферонотерапии рекомбинантным препаратом 1РЫ-а}(Реаферон, Россия). Препарат вводили ежедневно в/м в течение 3-х недель. Курсовая доза терапии составила 52,5 млн. МЕ.
Забор крови у больных для регистрации параметров систем делали до начала лечения, через сутки после первой инъекции Реаферона, в течение 1-2х суток после завершения курса ШЫ-терапии и в отдаленные сроки - через 1-3 месяца после окончания курса лечения.
Оценивали следующие параметры систем:
1. Система комплемента:
• общую гемолитическую активность сыворотки по классическому пути [9] и но альтернативному пути [1];
• Концентрацию СЗ, С 4 и СЫпИ (методом ИФА с помощью тест-систем «ИФА-СЗ», «ИФА-С4», «ИФА-С1-тЬ>, производства фирмы «Протеиновый контур», СПб).
2. Система интерферона:
• количественное (МЕ/мл) определение общей сывороточной активности 1РЫ [4];
• количественное определение способности лейкоцитов крови продуцировать 1ПЧ-а/Р и 1РЫ-у на специфическое индуцирующее воздействие т икт [4];
• концентрацию 1Ш-а методом ИФА (набор для ИФА «Протеиновый контур», СПб).
Оценку репликативной активности вируса гепатита С проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР или РСК) набором фирмы «НПФ ДНК, Технология», Москва.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием стандартного пакета прикладных программ.
Результаты
1. Реакция системы комплемента на интерфе-ронотерапию. Фактические результаты исследования влияния ШИ-терапии на комплементарный каскад представлены в табл.1. Функциональные и количественные показатели системы С' в группе до лечения практически не отличались от нормальных показателей и подтверждали данные других исследователей, полученные у больных со схожей патологией [2,3]. Активация системы С’ по классическому пути (КС 50) находилась в пределах нормы, ближе к ее минимальному значению. Аналогичным образом вели себя компоненты СЗ и С4, а также ингибитор сериновых протеаз - С1-тЬ, что свидетельствует о спокойном состоянии комплементарного каскада у больных до начала 1Ш-терапии.
Табл.1. ИЗМЕНЕНИЯ В СИСТЕМЕ КОМПЛЕМЕНТА У БОЛЬНЫХ В ПРОЦЕССЕ ЛЕЧЕНИЯ И ПОСЛЕ КУРСА ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ
№ Этапы исследования КС50 У.е. АС50 У.е. СЗ Мг/мл С4 Мг/мл СІ-іпЬ Мг/мл
1 До лечения 97,3 ±3,9 п=20 87,3 ±2,3 п=20 0,803 ±0,017 п=20 0,214 ±0,017 П=20 0,233 ±0,007 л=20
2 Через сутки после первой инъекции |РМ-а 102,1 ±3,0 п=17 81,8 ±2,2 П=17 0,776 ±0,028 п=17 0,209 ±0,013 П=17 0,21 5 ±0,006 п=17
3 После курса лечения 100,3 ±2,5 п=21 77,9 ±2,6* п=21 0,736 ±0,021 п=21 0,230 ±0,015 П=21 0,225 ±0,008 п=21
4 1-3 месяца после окончания курса 106,3 ±3,2 п=21 88,9 ±2,1** п=21 0,780 ±0,028 п=21 0,211 ±0,014 П=21 0,218 ±0,008 п=12
5 Диапазон нормы 70-200 40-80 0,55-1,2 0,2-0,5 0,15-0,35
Примечание: * - изменения достоверны по сравнению с группой до лечения (р < 0,05), ** - различия достоверны по сравнению с группой «после окончания курса ^-терапии» (р < 0,05).
Единственным показателем, который несколько превышал верхнюю границу нормального диапазона, был показатель активации системы С’ по альтернативному пути (АС 50). При таком показателе АС 50, если и можно говорить о заинтересованности системы С’ по альтернативному варианту у данной категории больных, то о весьма незначительной. Это подтверждает и концентрация СЗ, находящаяся в пределах нормы. В случае более выраженной активации системы С' можно было бы наблюдать значительное снижение СЗ за счет его потребления в процессе этой активации.
После проведения 1РЫ-терапии и в отдаленные сроки после ее окончания все исследуемые показатели претерпевали незначительные изменения, но они были несущественны и оставались в пределах нормальных значений. Единственным показателем, который достоверно отреагировал на 1РЫ-терапию, был тот же показатель АС50. После окончания курса лечения активность системы С’ по альтернативному пути достоверно снизилась и вошла в диапазон нормальной активности здоровых доноров. Однако в отдаленные сроки (через 1-3 месяца после окончания курса 1РЫ-терапии) активность системы по альтернативному пути опять достоверно возросла и остановилась на уровне, характерном для уровня показателя в группе перед началом лечения. Очевидно, 1РЫ-терапия оказала лечебное воздействие на хронический процесс в печени, которое привело к
нормализации вялотекущей активации системы С’ по альтернативному пути. После снятия экзогенной нагрузки интерфероном течение патологического процесса вернулось на прежний уровень, который требовал нахождения системы С’ в слабо активированном состоянии по альтернативному варианту.
1РЫ-терапию проводили у больных с хроническим заболеванием печени, которая является основным местом синтеза многих сывороточных белков, в том числе и компонентов системы комплемента. Основные количества компонентов С2, СЗ и С6 синтезируются в печени. СЗ в количественном отношении преобладает над другими белками комплемента. В связи с этим содержание СЗ может являться показателем белоксинтетической функции печени [3]. Уровень компонента СЗ снижается при циррозе печени, при хроническом гепатите остается в пределах нормы, а при компенсированном билиарном циррозе повышен [13]. Повышенный уровень компонента СЗ характерен также для воспалительных заболеваний. В настоящее время компонент СЗ, наряду с С-реактивным белком, а -макроглобулипом и а1-антитрипсином, относят к белкам острой фазы [11, 26]. Снижение содержания компонента СЗ, наряду с угнетением функции печени, может объясняться повышенным потреблением белков системы С’ вследствие ее активации.
Таким образом, у обследованных больных с хроническим вирусным гепатитом С синтетическая
Табл.2. ИЗМЕНЕНИЯ В СИСТЕМЕ КОМПЛЕМЕНТА И В ^-СТАТУСЕ БОЛЬНЫХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ У НИХ МАРКЕРОВ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА (ГРУППЫ СФОРМИРОВАНЫ, ИСХОДЯ ИЗ ПРИСУТСТВИЯ МАРКЕРОВ ДО НАЧАЛА ЛЕЧЕНИЯ)
№ Этапы иссле- дова- ния РСИ (+) РСН (-)
КС50 у.е. АС50 у.е. СЗ мг/мл С4 мг/мл С1-1пЬ мг/мл сыв МЕ/мл а/р МЕ У МЕ КС50 у.е. АС50 у.е. СЗ мг/мл С4 мг/мл СИпИ мг/мл сыв МЕ/мл а/р МЕ ТО У МЕ
1 До лечения 95,5 +5,8 п=11 90,0 +2,4 п=11 0,791 +0,033 П=11 0,206 ±0,028 л=11 0,238 ±0,010 п=11 27,2 +0,56 П=12 108,4 + 12,5 п=12 45,0 ±3,6 п=12 99,2 ±6,9 п=6 79,3 ±3,4 п=6 0,810 ±0,025 п=6 0,225 ±0,016 п=6 0,219 +0,012 п=6 28,7+0 ,88 п=6 101,0 ±6,9 п=6 50,5 ±4,1 11=6
2 1 -е сутки после первой инъек- ции 96,1 ±2,9 п=9 86,2 ±2,1 п=9 0,738 +0,025 п=9 0,186 +0,010 п=9 0,241 ±0,004 п=9 28,8 ±0,56 п=12 114,9 ±6,8 п=12 52,6 +2,6 П=12 93,2 ±3,5 п=6 77,8 ±2,6 п=6 0,849 ±0,027 п=6 0,243 +0,025 п=6 0,214 ±0,004 п=6 28,3 ±0,53 л*=6 114.2 ±5,8 п=6 52,8 + 1,6 п=6
3 После курса лечения (23-и сутки) 107,3 ±4,2 п=12 84,1 +3,8 п=12 0,800 ±0,030 п=12 0,239 ±0,028 п=12 0,246 ±0,006 П=12 22,0 +0,37 п=12 151,9 +8,3 П=12 66,3 ±2,9 п=12 104,3 ±6,0 п=6 82,3 +6,7 п=6 0,780 +0,055 л=6 0,241 ±0,037 п=6 0,222 +0,013 п=6 23,7 +0,35 п=6 131,7 ±4,4 п=6 68,8' ±2,1 п=6
4 1-3 месяца после оконча- ния курса 104,6 ±3,5 П=12 89,0 ±4,1 п=12 0,741 ±0,031 п=12 0,206 ±0,020 П=12 0,220 ±0,009 п=12 19,5 +0,70 п=11 186,7 ±15,7 п=11 76,6 ±4,9 п=11 110,0 ±3,5 П-6 71,3 ±1,6 п=6 0,780 +0,037 п=6 0,208 +0,014 п=6 0,208 ±0,007 п=6 21,8 +0,35 п=6 157,3 ±7,1 п=6 76,5 ±8,1 П=6
Примечание. * - различия достоверны между соответствующими показателями в группах РСИ(+) и РСЯ(-), р < 0,05 ** - различия достоверны по сравнению со значениями показателей до лечения (р < 0,05).
функция печени не нарушена, о чем можно судить по нормальной концентрации компонентов системы С’, особенно СЗ. Классический путь активации системы С’ не задействован, слабо выражена активация системы по альтернативному пути. Терапия больных экзогенным IFN-a не меняет параметры системы С’, за исключением нормализации активности по альтернативному пути.
Определенный интерес представляет вопрос о заинтересованности системы С’ в репликативной активности вируса. С целью выяснения таких зависимостей все больные были разделены на ряд подгрупп. Две подгруппы были сформированы по наличию (ПЦР «+») или отсутствию (ПЦР «-») в сыворотке крови больных вирусной нуклеиновой кислоты до начала лечения. В этих подгруппах все показатели системы С’ и IFN-статуса рассчитывали на всех последующих этапах обследования больных, исходя из репликативной активности вируса перед IFN-тера-пией (табл. 2.). До начала лечения в подгруппе с позитивной ПЦР все показатели системы С’ регистрировались в пределах нормальных значений, за исключением АС 50. Активация системы С’ по альтернативному пути была выше нормальных показателей и достоверно отличалась от АС 50 в подгруппе с отрицательными ПЦР (90 ± 2,4 и 79,3 ± 3,4 соответственно). Причем у больных с ПЦР (-) АС 50 находился в диапазоне нормы, что напрямую подтверждает предположение о реакции системы С’ через альтернативный путь на чужеродную генетическую информацию вируса. При этом концентрации отдельных компонентов С’ не выходили за пределы нормальных значений. Можно отметить незначительную тенденцию к снижению СЗ в подгруппе с ПЦР(+) по сравнению с больными ПЦР(-), что может свидетельствовать в пользу активации системы С’ по альтернативному пути. Однако данное падение концентрации заинтересованного компонента несущественно.
Анализ IFN-статуса в этих подгруппах больных не выявил достоверных различий ни в общем сывороточном IFN, ни в индуцибельной продуктивности лейкоцитов in vitro.
Введение больным экзогенного IFN-a внесло определенный дисбаланс в сложившиеся взаимоотношения внутри системы С’. Они стали более выражены. Через сутки после первой инъекции Реаферона различия между подгруппами по АС50 сохранялись достоверными, при этом намечалась тенденция к снижению активации в обеих подгруппах. Наряду с этим обозначились достоверные различия между концентрацией компонентов СЗ и С4, причем уровень СЗ и С4 в подгруппе ПЦР(+) снизился, ау ПЦР(-) возрос. Складывается впечатление, что у ПЦР-положитель-ных больных возросло потребление компонентов СЗ и С4, хотя гемолитическая активность системы ни по АС50, ни по КС50 не увеличилась.
Показатели IFN-статуса не отреагировали на инъекции экзогенного IFN-a. Они достоверно не различались как в сравниваемых подгруппах через сутки после первого введения препарата, так и относительно соответствующих показателей в подгруппах до начала лечения.
После проведенного курса IFN-терапии параметры системы С’ в сравниваемых подгруппах не имели существенных различий. Значения АС50 на данном этапе обследования в подгруппе ПЦР(+) было наименьшим и практически соответствовало показателю АС50 в подгруппе больных с ПЦР(-). Создается впечатление, что после проведенной терапии нагрузка нуклеиновой кислотой на организм больных в обеих группах уравнялась, что можно расценить как положительный результат лечения. Об этом же свидетельствуют и показатели IFN-статуса больных. Они достоверно изменились по сравнению с аналогичными показателями в подгруппах до начала лечения. Существенно понизился общий циркулирующий IFN и возросла продукция IFN-a/P и IFN-y па индуцирующие стимулы in vitro.
Через 1-3 месяца после окончания лечения показатели системы С’ практически вернулись к их уровню до начала лечения. Повысилась активность системы С’ по альтернативному пути в подгруппе ПЦР(+) и стала достоверно превышать этот показатель в подгруппе ПЦР(-). Остальные показатели остались в пределах нормальных значений и существенно между собой не различались.
В отличие от системы С’, система IFN сохранила лучшие параметры функционирования по сравнению с IFN-статусом до начала лечения. Общий сывороточный IFN еще больше снизился, при этом возросла индуцибельная активность клеток in vitro.
Таким образом, реактивность системы С’ по альтернативному пути зависит от репликативной активности вируса. Другие параметры системы практически не меняются. Проведенная IFN-терапия оказывает положительное воздействие на патологический процесс как в плане нормализации альтернативного пути активации системы С’, так и с точки зрения улучшения функционирования системы IFN. Эффект воздействия экзогенного IFN на систему С’ оказался кратковременным, в то время как показатели IFN-статуса продолжали стабилизироваться в отдаленные сроки после окончания лечения.
Если функциональная активность системы С’ зависит от репликативной активности вируса, то очевидно, что формирование подгрупп из больных с ПЦР(+) и ПЦР(-) на каждом этапе обследования должно выявить сходные результаты активности системы С’. Фактические данные такого анализа представлены в табл. 3. До лечения параметры системы С’ в подгруппах ПЦР(+) и ПЦР(-) соответствуют таковым в табл. 2. Достоверно выше показатель АС50 в подгруппе больных с ПЦР(+). IFN-терапия внесла
определенные коррективы в функционирование системы С’. Прежде всего изменилось число ПЦР(+) больных. Сразу после окончания лечения их осталось 7 из 11, в то время как количество ПЦР-отри-цательных соответственно возросло. На этом этапе обследования ни один показатель, характеризующий систему С’, в сравниваемых подгруппах достоверно не отличался, что, очевидно, связано со стабилизирующим влиянием экзогенного 1РЫ на систему С’. В отдаленные сроки после лечения концентрация трех исследованных компонентов системы (СЗ, С4, СНпЬ) в подгруппе больных с положительной ПЦР была достоверно снижена, хотя активация системы С’ ни по классическому, ни по альтернативному пути достоверно не различалась. Следует отметить, что в подгруппе больных с ПЦР(+) АС50 на всех этапах обследования был несколько выше нормальных значений и оставался на одном уровне. Это подтверждает предположение о заинтересованности альтернативного пути активации при вирусной инфекции. Несколько непонятно функционирование альтернативного пути системы С’ у ПЦР(-) больных. Хотя полученные различия оказались недостоверными, наметилась тенденция к увеличению АС50 в процессе ГРЫ-терапии и после нее, что, очевидно, может быть связано с межсистемными взаимодействиями.
Таким образом, больные с активной репликацией вируса сохраняют повышенную активность системы С’ по альтернативному пути на фоне ШЫ-те-рапии и после нее. В результате воздействия Реафе-роном у больных с ПЦР(-) намечается тенденция к активации альтернативного пути системы С’, приводящая на отдаленных сроках к выходу данного показателя за пределы нормы.
2. Изменение корреляционной зависимости между параметрами систем комплемента и интерферона в процессе и после интерферонотерапии. Реактивность системы С' больных хроническим вирусным гепатитом С изменена незначительно. Так же слабо комплементарный каскад больных отреа-
гировал на введение экзогенного 1РЫ-а. Более выраженные изменения наблюдали у больных в системе 1РМ как до лечения, так и после курса 1РМ-тера-пии. Интересно проанализировать корреляционные связи между различными параметрами систем С’ и IFN и их изменения в процессе и после курса 1РЫ-терапии. Коэффициенты корреляции до, в процессе и после лечения больных представлены в таблице 4.
Взаимосвязи параметров системы С’ по обоим путям активации, а также с ее отдельными компонентами представляют пеструю мозаику от полного отсутствия до сильно выраженной, причем как с положительным, так и с отрицательным знаком. Общий сывороточный 1РЫ и гемолитическая активность системы С’ у больных хроническим гепатитом до начала лечения находились в отрицательной взаимосвязи. В случае альтернативного пути активации связь была слабая (г = - 0,13; ш - ± 0,234), при классическом пути степень связи имела средние значения (г = -0,35; т •= 0,221). В обоих случаях корреляционная связь недостоверна (р > 0,05). Необходимо отметить, что из 60 рассчитанных коэффициентов корреляции на различных этапах обследования больных, только 7 имели достоверные значения. Поэтому, очевидно, нет необходимости подробно описывать корреляционную связь между всеми параметрами, а остановиться лишь на общих тенденциях изменения зависимостей на каждом этапе обследования. И, естественно, обратить внимание на достоверные корреляционные связи между параметрами систем С’ и 1РК
Итак, до начала лечения больных из 15 коэффициентов корреляции, полученных при анализе взаимодействия систем С’ и 1РЫ, 6 имели положительные значения и 9 - отрицательные, причем преобладали в основном слабые недостоверные связи. Только в 2-х случаях обнаружены средняя и сильная достоверная обратная корреляция между концентрацией в плазме компонента С4 и индуктивной активностью лейкоцитов в отношении продукции 1РЫ ти-
Табл. 3. ИЗМЕНЕНИЯ В СИСТЕМЕ КОМПЛЕМЕНТА В РЕЗУЛЬТАТЕ ^-ТЕРАПИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ МАРКЕРОВ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА (ГРУППЫ СФОРМИРОВАНЫ ПО НАЛИЧИЮ МАРКЕРОВ В КРОВИ НА МОМЕНТ ОПРЕДЕЛЕНИЯ)
N8 Этапы исследования РСІЧ (+) РСН (-)
КС50 У.е. АС50 У.е. СЗ Мг/мл С4 Мг/мл С І-ІпЬ Мг/мл КС50 У.е. АС50 У.е. СЗ Мг/мл С4 Мг/мл СІ-іпІі. Мг/мл
1 До лечения 95,5 ±5,8 п=11 90,0* ±2,4 п=11 0,791 ±0,033 п=11 0,206 ±0,028 п=11 0,238 ±0,010 п=11 99,2 ±6,9 п=6 79,3* ±3,4 п=6 0,810 ±0,025 п=6± 0,225 ±0,016 п=6 0,219 ±0,012 п=6
2 После лечения 109,4 ±5,1 п=7 89,3 ±3,0 л=7 0,764 ±0,040 п=7 0,208 ±0,042 л=7 0,241 ±0,013 п=7 100,4 ±3,2 П=12 81,4 ±4,1 п=12 0,771 ±0,030 п=12 0,241 ±0,013 п=12 0,221 ±0,012 п=12
3 1-3 месяца после лечения 104,9 ±2,1 п=10 88,6 ±5,0 п=10 0,695* ±0,025 п=10 0,167* ±0,012 п=10 0,198* ±0,008 п=10 103,9 ±4,0 п=10 89,2 ±3,6 п=10 0,852* ±0,045 п=10 0,264* ±0,016 п=10 0,238* ±0,010 п=10
Примечание; *- различия достоверны при сравнении соответствующих показателей в группах РСЯ (+) и РСЯ (-), (р < 0,05).
пов a/fJ и 7 in vitro (г - - 0,56; m - ± 0,195; р < 0,05 и г ” - 0,64; in- ±0,181; р<0,001).'
Спустя сутки после первой инъекции экзогенного IFN-a корреляционная «мозаика» в группе больных претерпела значительные изменения. Из 15 коэффициентов корреляции положительные значения имели 11, и только 4 взаимосвязи сохранили слабую обратную зависимость. Очевидно, поступление в организм первой дозы экзогенного IFN внесло возмущение в сложившиеся в процессе развития хронической патологии кооперативные взаимоотношения гомеостатических систем С’ и IFN, что и привело к изменению привычных связей и появлению новых. Что касается компонента С4, то обратная корреляционная связь между его концентрацией и индукцией IFN in vitro сохранилась, однако стала слабой и недостоверной. При этом возникла сильная прямая достоверная корреляция между концентрацией С4 и активностью общего сывороточного IFN.
Следующий этап обследования больных с проведением корреляционного анализа параметров систем С’ и IFN был выполнен через двое суток после окончания курса IFN-терапии. Очевидно, поступление IFN-a извне стало для организма привычным. Это привело к появлению иной картины взаимодействия систем.
Количество корреляционных связей со знаком плюс снизилось до 7, в результате чего количество отрицательных связей после предыдущего исследования удвоилось и возросло до 8. Полученные корреляционные зависимости были также в основном слабые и недостоверные. Средняя положительная достоверная корреляция была выявлена между Cl-ингибитором и продуктивной активностью IFNa/p in vitro.
Спустя 1-3 месяца после завершения IFN-терапии взаимоотношения между гомеостатическими системами, очевидно, стабилизировались, но на ином функциональном уровне. Положительная корреляция обнаружена в 5 случаях, отрицательная - в 10. Характерно, что все значения коэффициента корреляции общего сывороточного IFN с параметрами системы С’ имели прямую связь, а индуцибельные и продуктивные свойства клеток in vitro - обратную. Также обращает на себя внимание тот факт, что в этой группе обследованных численные значения коэффициентов корреляции несколько возросли и большая их часть (8 значений) попала в диапазон средней и сильной связи. Также выявлены достоверные связи между параметрами систем С’ и IFN. Сильная обратная корреляция получена между продукцией IFN-y in vitro и гемолитической активностью системы С', активированной по классическому пути (г - - 0,77; *= ± 0,150, р < 0,001). Аналогичная дос-
товерная отрицательная связь только средней степени получена между продукцией IFN-a/P in vitro и концентрацией С4 компонента комплемента
(г ” - 0,55; m - ± 0,197, р < 0,05). Компонент С 4 заинтересован также в активности общего сывороточного IFN. Между ними обнаружена прямая сильная достоверная корреляция (г ” + 0,68; m = ± 0,173, р< 0,001).
Таким образом, IFN-терапия больных хроническим вирусным гепатитом С экзогенным препаратом IFN-a вносит определенные коррективы во взаимоотношения систем С и IFN. В процессе и после лечения меняются связи между различными параметрами систем и степень их выраженности. Наиболее существенные связи обнаружены между компонентом С4 системы С и параметрами системы IFN. Из 7 достоверных корреляций, выявленных при анализе взаимодействия систем, 5 приходятся на С4 компонент С. Причем активность общего сывороточного IFN напрямую зависит от концентрации С4 в сыворотке крови, а индуктивная активность лейкоцитов in vitro имеет обратную корреляционную связь с этим компонентом.
Обсуждение
В ответ на любое воздействие система С принципиально может отреагировать двумя путями - активацией или ингибированием, хотя конкретных механизмов, приводящих к усилению или ослаблению функционирования комплементарного каскада, можно выделить значительно больше. В системе in vivo одним из механизмов, влияющих на потенциальную возможность активации С, может быть подавление или усиление синтеза его компонентов под воздействием различных агентов, в том числе и патогенных. Белки системы С - одни из наиболее лабильных белков плазмы, которые синтезируются и катаболизиру-ются чрезвычайно быстро. Поэтому уровни определяемых компонентов С отражают баланс между степенью их синтеза и деградации. Большая часть белков системы С синтезируется в печени. Однако показано, что многие компоненты С способны продуцировать и другие клетки [2, 3]. Наиболее физиологически активными фрагментами компонентов С при активации системы являются СЗа, С4а, С5а, которые вызывают и поддерживают анафилактическое состояние, частично опосредуемое биогенными аминами. Показано в экспериментах in vitro, что один из них -гистамин - достаточно эффективно ингибирует синтез С2 моноцитами крови [40]. Это может свидетельствовать о причастности процессов синтеза и деградации компонентов С к уровню его потенциальной готовности к функционированию.
Работа комплементарного каскада может модулироваться путем синтеза и накопления ингибиторных белков, что должно приводить к падению общей гемолитической активности плазмы. В этом свете заслуживает внимания еще один механизм антиком-плементарной активности экзогенных препаратов
1ПМ при ШИ-терапии. Показано, что ШИу способен повышать количество С1-ингибитора в культуре клеток фибробластов человека [22,30].
Таким образом, система С’ является сложной, по-лифункциональной системой организма, которая эффективно участвует во многих физиологических процессах прямо или опосредованно через другие системы (в частности, через систему 1РЫ). Установлено взаимодействие компонентов системы С’ с белками других каскадных систем и специфическими рецепторными образованиями, которые локализованы на многих клетках организма и прежде всего на клетках иммунной системы,что обеспечивает иммунокорригирующий эффект. Система С’, несомненно, вовлечена в процесс формирования неспецифической резистентности организма при вирусной инфекции и, в частности, при хроническом вирусном гепатите С. Об этом свидетельствуют результаты наших исследований. Аналогичные свидетельства можно найти в научной литературе. По представлениям некоторых авторов, хронический гепатит С может быть ассоциирован с криоглобулинемией, периферической нейропатией и мембранопролиферативным гломерулонефритом [27,37]. При этом больные
хроническим вирусным гепатитом С с криоглобулинемией имели сниженный уровень гемолитической активности системы С’ (СН50) и повышенный уровень ЦИК, чего не наблюдалось у больных без кри-оглобулинемии [41]. У наших больных уровень кри-оглобулинемии не определяли, но об ее отсутствии можно судить по уровню ЦИК, который не превышал нормальных значений (данные в таблицах не представлены), и по уровню активации системы С’ (нормальные значения для классического пути и несколько повышенные - для альтернативного). О связи системы С’ с хроническим вирусным гепатитом С можно судить по Холодовой активации С’, которая ассоциируется с присутствием в крови маркера гепатита С (НСУ) [25,39]. Потеря гемолитической активности сыворотки при ее хранении в условиях низкой температуры (холодовая активация С') была зарегистрирована у 74 % больных хроническим вирусным гепатитом С, что позволило авторам расценивать данную холодовую реакцию как маркер виремии [14]. Лечение таких больных рекомбинантными препаратами 1РЫ-а в течение 2-12 месяцев приводило к снижению репликативной активности вируса гепатита С и значительному улучшению со-
Табл. 4. КОРРЕЛЯЦИОННЫЕ СВЯЗИ МЕЖДУ РАЗЛИЧНЫМИ ПАРАМЕТРАМИ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА И СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОНА
Показатели КС50 АС50 СЗ С4 С1- іпЬ КС50 АС50 СЗ С4 С1- іпЬ
До лечения Через сутки после 1 -ой инъекции
общий сы ворот. ІЖ гт Р -0,35 ±0221 >0,05 -0,13 ±0234 >0,05 + 0,20 ±0231 >0,05 + 0,03 ±0,236 >0,05 -0,01 +0233 >0,05 +0,01 ±0,258 >0,05 + 0,20 ±0253 >0,05 +021 ±0,252 >0,05 + 0,87 10,127 <0,001 + 022 ±0,252 >0,05
1РЫос/р ГГТ> Р + 0,33 ±0,222 >0,05 + 0,14 ±0233 >0,05 -025 ±0,228 >0,05 -0,56 ±0,195 <0,05 •025 +0288 >0,05 + 027 ±0249 >0,05 +0,06 ±0257 >0,05 •02В ±0249 >0,05 -0,11 ±0,257 >0,05 + 0,10 ±0,257 >0,05
ГГП р + 0,28 ±0,226 >0,05 -0,08 ±0234 >0,06 ■0,06 ±0235 >0,05 -0,64 ±0,181 <0,01 + 0,03 ±0,236 >0,05 +021 ±0,252 >0,05 + 0,15 ±0255 >0,05 -03 ±0251 >0,06 •0,15 ±0225 >0,06 + 0,13 ±0,256 >0,05
После лечения Через 1-3 месяца после лечения
Общий сыворот. ІЖ гп> р +0,12 ±0,234 >0,05 -0,003 ±0236 >0,06 -0,12 ±0234 >0,06 + 0,04 ±0236 >0,05 •0,12 ±0234 >0,05 +0,19 ±0231 >0,05 + 029 ±0226 >0,05 + 0,37 ±0,219 >0,05 + 0,68 ±0,173 <0,001 + 0,37 ±0,219 >0,05
1РЫа/р гщ р -0,40 ±0,216 >0,05 -0,05 ±0235 >0,05 +0,11 ±0,234 >0,05 •0,02 ±0236 >0,05 + 0,52 ±0,201 <0,05 -023 ±0229 >0,05 -028±0226 >005 -020 ±0225 >0,06 -0,55 10,197 <0,05 -025±0228 >0,05
1РЫу ггт\ Р -0,06 ±0235 >аоб -0,18 ±0232 >0,05 + 0,03 ±0,236 >0,05 + 0,05 ±0,236 >0,05 + 022 ±0,230 >0,05 -0,77 ±0,150 <0,001 •0,04 ±0236 >005 -0,41 ±0215 >0,05 -0,36 +0220>0,05 -0,15 ±0233 >0,05
стояния почек и печени [27]. Эти данные полностью соответствуют полученным нами результатам, так как у наших больных мы также наблюдали снижение процента больных с положительной реакцией на HCV после кратковременного курса IFN-терапии Ре-афероном. Таким образом, по данным ряда авторов, при лечении больных хроническим гепатитом С препаратами IFN исчезает холодовая активация системы С’ [16], что может отражать эффективность IFN-терапии [15].
Влияние системы IFN на комплементарный каскад может реализовываться через различные механизмы. Значительный интерес представляет механизм усиления активности системы С’ под влиянием IFN путем стимуляции в клетках различных тканей экспрессии мРНК и белка некоторых компонентов С’. В большей степени регуляторными функциями обладает IFN-у, однако и IFN типа а и Р могут оказывать существенное влияние на систему С’. Показано, что IFN-a/p, также как и IFN-у, стимулирует синтез мРНК Clq в культуре макрофагов [32,33]. Причем некоторые авторы полагают, что эффект IFN-y реализуется через эндогенный IFN-a/p [32]. Наряду со стимуляцией синтеза одного их субкомпонентов С1 установлено влияние IFN-a/P на индукцию других компонентов системы С как классического, так и альтернативного пути. IFN-a усиливает продукцию С2 в культуре человеческих моноцитов, не влияя при этом на общий синтез белка в клетках [43]. Аналогичные результаты получены для другого компонента классического пути - С4 [34], а также для фактора В, необходимого для задействования альтернативного пути активации [35]. Регуляция общего компонента для обоих путей - СЗ - слабо подвержена влиянию IFN-a/p и в большей степени IFN-V [18]. Помимо усиления потенциальной активности системы С’ за счет увеличения синтеза комплементарных белков, IFN-a/P и -у могут существенно влиять на негативную регуляцию комплементарного каскада путем усиления синтеза ингибиторных протеинов. Так, IFN-a/P отдельно и в синергизме с IFN-y стимулирует синтез Cl-inh in vitro [35], что приводит к ограничению развития активационных процессов в системе С’ и в других гуморальных каскадных системах плазмы, так как Ct-inh является ингибитором протеолитической активности калликре-ина, фактора XI 1а и фактора Х1а [25]. Кроме влияния на индукцию синтеза различных компонентов С’ и его ингибиторов взаимосвязь систем С’ и IFN может реализовываться через общие точки приложения компонентов систем на клеточных мембранах. Для клеточных рецепторов CR2(CD21), экспрессируемых на В-лимфоцитах, фолликулярных дендритных клетках, эпителиальных клетках носоглотки, шейки матки и других, активными лигандами могут служить субкомпоненты СЗ -iC3b, C3dg, а также вирус Эпштейна-Барр и IFN-a [19, 20]. Антивирус-
ная активность IFN-a на ранних этапах развития инфекционного процесса может быть обеспечена за счет блокады этим пептидом рецептора CR2(CD2l), что не дает вирусу Эпштейна-Барр взаимодействовать с данной рецепторной структурой и внедряться в клетку [20]. Очевидно, аналогичным образом в роли блокирующих агентов для предотвращения развития вирусной инфекции могут выступать и субкомпоненты комплементарного каскада при условии его активации. Зашита организма от вирусной инфекции совместно с системами С’ и IFN может осуществляться еще одним путем, через CD46 (мембранный кофакторный белок), который прииимает участие в регуляции активации комплементарного каскада и в то же время является клеточным рецептором для вируса кори [8].
Экспрессия CD46 на мембранах макрофагов в ответ па инфекцию вируса кори приводит к значительному увеличению продукции IFN-a/p. Данные пептиды синергидно с IFN-y индуцируют NO-сиитазу, которая нарабатывает большое количество оксида азота (N0*), что ограничивает синтез вирусного белка и репликацию вирусов [29]. Вполне вероятно, что аналогичный механизм, который реализуется через генерацию и биоцидное действие активных форм кислорода (в частности через N0) возможен и в случае поражения вирусом гепатита С, так как хорошо известно, что IFN, а особенно IFN-y, являются мощными индукторами ферментных систем клеток, принимающих участие в генерации активных форм кислорода [7, 12, 21]. В снижении активной репликации вируса при IFN-терапии у наших больных наряду с традиционным механизмом, очевидно, принимают участие и свободно-радикальные процессы.
В нашей работе достоверные корреляционные связи обнаружены, в основном, между параметрами системы IFN и компонентом системы комплемента С4. Подавляющее большинство исследований по проблеме влияния IFN на сиитез и продукцию С4 в условиях in vitro и in vivo свидетельствуют, что данные пептиды, а особенно IFN-y, способствуют возрастанию продукции С4 в различных клетках. Усиление экспрессии мРНК С4, а также синтеза этого белка под влиянием IFN-y обнаружено в культуре астроцитов [23,45], фибробластов [24], моноцитов [44], клеток линии U937 [42]. Некоторые авторы полагают, что подобные процессы могут протекать и in vivo [23]. Цитокины и другие регуляторные и биоактивные молекулы, как правило, усиливают действие IFN в отношении продукции С4 [42], причем влияние этих агентов является дозозависимым [17]. Пестрая мозаика полученных нами корреляционных связей, разных по силе и направленности, свидетельствует о сложном характере взаимоотношений между параметрами систем С’ и IFN в каждый конкретный период развития патологического процесса, когда воздействие
того или иного стимула (агента) может менять корреляционную зависимость на противоположную. Например, у наших больных корреляционная зависимость между общим сывороточным IFN и КС50 до начала лечения была средней силы и отрицательная. После первой инъекции Реаферона эта связь исчезла. По окончании курса она появилась, была слабо выражена и имела противоположный знак. Через 1-3 месяца положительная корреляция между данными параметрами сохранилась и несколько возросла численно. Такая изменчивость зависимостей свидетельствует о лабильности взаимоотношений систем. Совершенно очевидно, что влияние IFN полипотентно, в том числе и на систему С’. Так, IFN-у усиливает синтез не только С4, но и других компонентов как с активирующим (Clr, Cls, СЗ, В), так и с ингибирующим потенциалом (CI-inh, C4bp, Н, I) [28,31,35]. При этом необходимо отметить, что если уровень С4 в культуре клеток НЕр2 возрастал в 15 раз, то синтез Cl-inh увеличивался в 44 раза [31]. Естественно, результатом такой «активации» интерфероном in vivo должно стать ингибирование активационных процессов в системе С’, и изменение корреляционных связей.
Таким образом, проведенное нами исследование свидетельствует о взаимосвязи систем С’ и IFN в формировании неспецифической резистентности организма. Это отчетливо прослеживается при лечении больных с хроническим гепатитом С рекомбинантным препаратом IFN. Характер взаимосвязи между системами определяется состоянием гомеостатических систем конкретного больного на определенном этапе лечения. Поэтому, внося возмущение в сложившееся при конкретной патологии постоянство внутренней среды организма посредством IFN-терапии рекомбинантными препаратами, мы получаем корригирующие эффекты, которые являются интегральным показателем взаимодействия всех гомеостатических систем, отреагировавших на раздражающий фактор.
Список литературы
1. Барановский П.В., Рудник Б.И., Смищук Ю.М. Методика определения активности комплемента по альтернативному пути // Иммунология, 1987, № б.
- С.75-77.
2. Вавилова Л.М., Голосова Т.В. Система комплемента. Механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине. Итоги науки и техники. Серия иммунология. Т.24. - М., 1990. -160 с.
3. Галебская Л.В. Система комплемента в норме и при патологии. В кн.: Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. СПб, 1998.-Т.1.-С. 41-48.
4. Григорян С.С., Ершов Ф.И. Методические принципы определения интерферонового статуса.
В кн.: Система интерферона в норме и при патологии. - М.: Медицина, 1996.-240с.
5. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии. -М.: Медицина, 1996.-240 с.
6. Ершов Ф.И. Интерфероны (к 40-летию открытия) // Вопросы вирусологии, 1998.-Т.43, №3.-С. 247-252.
7. Карпюк В.Б., Шубин М.Г. Перспективы иммунореабилитации при постгеморрагическом церебральном вазоспазме // Аллергология и иммунология. - 2001.-Т.2,- С.131.
8. Кашкин К.П., Дмитриева Л.Н. Белки системы комплемента: свойства и биологическая активность (лекция) // Клин. Лаб. Диагностика. - 2000. - № 7,-С.25-32.
9. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия. - М.: Мир, 1968.-684с.
10 .Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейт-рофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, 1989.- 344 с.
11. Назаров П.Г. Реактанты острой фазы воспаления. - СПб: Наука, 2001.-423 с.
12. Сепиашвили Р.И., Шубич М.Г., Карпюк
В.Б.Оксид азота при астме и различных формах иммунопатологии // Астма.-2001. - Т. 2, №2.-с.5-14.
13. Шелок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. -М.:ГЭОТАР, 1999.-864 с.
14. Aikawa Т., Kimura I., Kojima М., Ueno С., Miyamoto К., Tando Т., Tanaka N. Cold activation of complement in sera from patients with persistent hepatitis С virus infection on interferon therapy // J. Gastroenterol.Hepatol.-1996.-Vol. 11, № 4.-P.341-346
15.Akahane Y., Miyazaki Y.,Naiton S.,Takeda K., Tsuda F., Okamoto H., Itoh K., Miyakawa Y„ Mayumi M. Cold activation of complement for monitoring the response to interferon in patients with chronic hepatitis С // Am. J. Gastroenterol.-1996, № 2,- P.319-327
16. Ando B., Shimohashi N., Sumii Т., Sasaki N., Furudera S., Tanaka E. Serum complement cold activation is vanished by the interferontherapy for chronic active hepatitis С patients //Nippon ShokakibyoGak-kaiZasshi.-1995.-Vol.92, № 10.-P. 1811.
17. Andoh A., Fujiyama Bamba Т., Hosoda S. Differential cytokineregulation of complement СЗ, C4 and factor В synthesis in humanintestinal cell line, Caco-2 //J. Immunol.-1993.- Vol.151, № 8.-P.4239-4247.
18. Collins Т., Winkelstein J.A., Sullivan K.E. Regulation of early complement components C3 and C4 in the synovium //Clin. Diagn.Lab. Immunol.-1996.- Vol.
3, N 1.- P. 5-9.
19. Delcayre A.X., Salas F., Matrhur S., Kovats K., Lotz M, Lernhardt W. Epstein-Barr virus/complement C3d receptor is an interferon-a receptor // EMBO J.-1991.-Vol. 10, N4.-P. 919-926.
20. Delcayre A.X., Lotz М.,Lernhardt W. Inhibition of Epstein-Barr virus-mediated capping of CD21/CR2 by a (IFN-a): immediate antiviral activity of interferon a during the early phase of interferon // J. Virol.-1993,-Vol. 67, N 5.- P. 2918-2921.
21. Eze M.O., Yuan L, Crawford R.M., Paranavitana
C.M., Hadfield T.E., Bhattacharjee A.K., Warren R.E., Hoover D.E. Effects of opsonisation and y interferon on growth of Brucella melitensis 16M in mouse peritoneal macrophages in vitro // Infect. Immun.-2000.-Vol. 68, N l.-P. 257-263.
22. Falus A., Feher K.G. Hormonal regulation of complement biosynthesis in human cell lines. 1 Androgens and y interferon stimulate the biosynthesis and gen expression of Cl inhibitor in human cell lines U927 and HEp.2 // Mol. Immuhoi. - 1990. - Vol. 27, N2.-P.191-195.
23. Haga S., Aizawa T„ Ishii T., Ikeda K. Complement gene expression in mouse microglia and astrocytes in culture: comparison with mouse peritoneal macrophages // Neurosci. Eett. - 1996. - Vol. 216, N 3. - P. 191-194.
24. Harrison S.A., Mondino B.J., Mayer F.J. Scleral fibroblasts. Human leucocyte antigen expression and complement production // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.
- 1990,-Vol. 31, N 1 l.-P. 2412-2419.
25. Heda G.D.,Kehoe K.J., Mahdi F., Schimaier A.H. Phosphatase 2A participate in interferon-y’s induced upregulation of Cl inhibitor mRNA expression // Blood.-1991.- Vol. 87, N 7,- P. 2831-2838.
26. Hostetter M.K. The third component of complement: new functions of an old friend //J. Lab. Clin. Med.
- 1993. - Vol. 122, N 5. - P. 491-496.
27. Johnson R.L., Gretch D.R., Yamabe H„ Hart J., Bacchi C.E., Hartwell P., Couser W.G., Corey L., Wen-er M.H., Alpers C.E. Membranoproliferative glomerulonephritis associated with hepatitis C virus infection // N. Engl. J. Med. - 1993. - Vol. 327, N 7. - P. 465-470.
28. Men N., Dauchel H., Lemercier C., Sim R.B., Fontaine M., Ripoche J. In vitro biosynthesis of complement factor I by human endothelial cells // Eur. J. Immunol. -1992. - Vol. 22, N 1. - P. 213-217.
29. Katayama Y„ Hirano A., WongT.C. Human receptor for measles virus (CD46) enhanses nitric oxid production and resticts virus replication in mouse macrophages by modulating production of a/|3 interferon //J. Virol. - 2000. - Vol. 74, N 3.- P. 1252-1257.
30. Katz Y„ Strunk R. Synthesis and regulation of Cl-inhibitorin human-skin fibroblast//J. Immunol. -1989. - Vol. 142, N 6. -P.2041-2045.
31. Katz Y., Guterman M, Lahat E. Regulation of synthesis of complement proteins in HEp2 cells // Clin. Immunol. Immunopathol. - 1993.-Vol. 67,N2.-P. 117-127.
32. Kolosov M., Kolosova I., Leu R.W, Stimulation of macrophage synthesis of complement Cl by interfer-on-y mediated by endogenous interferon a/p //J. Interferon Cytokine Res.-1996. - Vol.l6,N3.-P. 245-249.
33. Kolosov M., Kolosova I., Zhou A., Leu R.W. Autocrine induction of macrophage synthesis of comple-
ment subcomponent Cl by endogenic interferon a/P //J. Interferon Cytokine Res. - 1996. -Vol. 16, N3.-P. 209-215.
34. Lapidski T.W. Activation of acute phase proteins in patients with chronic hepatitis С treated with inter-feron-a 2a // Pol. Mercuriusz Lek. - 2001. - Vol.10, N 57. - P. 138-142.
35. Lappin D.F., Birnie G.D., Whaley K. Modulation by interferon of the expression of monocyte complement gene // Biochem. J. - 1990. -Vol.268, N2,- P. 387-392
36. Lappin D.F., Guc D., Hill A„McShane Т., Whaley K. Effect of interferon-y on complement gene expression in different cell types // Biochem. J. - 1992. - Vol. 281 (Pt2). - P. 437-442.
37. Lidove 0.,Cacoub P., Maisonobe Т., Servan J., Thibault V„ Piette J.C., Leger J.M. Hepatitis С virus infection with peripheral neuropathy is not always associated with cryoglobulinaemia// Ann. Rheum. Dis. -2001.-Vol. 60, N3,-P. 290-292.
38. Liszewski M.K, Parries T.C., Lublin D.M., Rooney I.A., Atkinson J.P. Control of the complement system // Adv. Immunol. - 1996. -Vol. 61.-P. 201-283.
39. Nomura H., Ogo Т., Rikimaru N., Ueno S., Kakuno Т., Okamoto O., Shiraishi G., Kashiwagi S. Hepatitis С virus-related liver damage is related to cold activation of complement //J. Clin. Gasrtroenterol. -1997,-Vol. 25, N3.-P. 529-534.
40. Packard B.D., Weller J.M. Steroids inhibit activation of alternative-ampification pathway of complement // Infec. Immun.- 1983. - Vol. 40, N3.-P. 1011-1014.
41. Tanaka K„ Aiyama T„ Imai J., Morishita Y„ Fukatsu T„ Kakumu S. Serum cryoglobulin and chronic hepatitis С virus disease among Japanese patiens // Am. J. Gastroenterol.-1995. - Vol. 90, N 10. - P. 1847-185242. Tsukamoto H,, Nagasawa K., Yoshizawa S., Tada A., Ueda Y., Niho Y. Synthesis and regulation of the forth component of complement (C4) in the human monocytic cell line U937: comparison with that third component of complement (C3) //Immunology.- 1992. -Vol. 75, N4. -P. 565-569.
43. Ujhelyi E., Onody K., Minh D.Q., Sarkadi B., Fust G. Enhancing effect of a interferon on the C2 synthesis by cultured human monocytes // Immunol. Lett.-1987,- Vol. 15, N 1,- P. 41-44.
44. Vincent F., de la Salle H„ Bohbot A., Bergerat J.P., Hauptmann G., Oberling F. Synthesis and regulation of complement components by human monocytes/ macrophages and by acute monocytic leukemia // DNA Cell Biol. - 1993. - Vol. 12, N 5. - P. 415-423.
45. Walker D.G.,Kim S.U., McGeer P.L. Expression of complement C4 and C9 genes human astrocytes // Brain Res. - 1998. - Vol. 809, N 1. -P. 31-38.
поступила в редакцию 27.11.2003 принята к печати 10.02.2004
