CC BY
67
медщинск^и^щолошЯ) Оригинальные статьи
© 2003, СПб РОРААКИ
ВЛИЯНИЕ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ НА ИНТЕРФЕРОНОВЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ И ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ КРОВИ
Кузнецов С.И., Смирнов Н.А.*, Латаш В.Г.*,
Ариненко Р.Ю.*, Аникин В.Б.*,
Носикова Е.В.
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования,
* Научно-исследовательский институт гриппа РАМН
Резюме. Лечение больных с инфекционными и соматическими заболеваниями рекомбинантными препаратами IFN (а и у) влияло на продукцию больными эндогенного IFN, а также на функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов и лимфоидных клеток.
Ключевые слова: интерферонотерапия, интерфероновый статус, реактивность нейтрофилов, фенотип лимфоцитов.
Kuznetsov S.I., Smimov N.A., Latash V.G., Arinenko R.Y. Anikin V.B., Nossikova E.V.
INFLUENCE OFINTERFERON TREATMENT ON PATIENTS’ INTERFER ON STATUS AND FUNCTIONAL ACTIVITY OF SOME BLOOD CELL POPULATIONS Abstract. The treatment of patients with some infectious and somatic diseases by recombinant IFNa and IFNy préparations has influenced the production of endogenous IFN, as well as functional activity of neutrophils and lymphocytes. (Med.Immunol., 2003, vol.5, N1-2, pp 73-80)
ВвбДбНИб Цель данного исследования состояла в анализе вли-
п д, /тихтч яния, которое оказывают препараты рекомбинант-
Система интерферона (IFN) является универ- ’ хт / . , г v г
5^ ^ 4 i J u г ного IrN (a и Y) на функциональную активность
сальной системой организма, обеспечивающей его v 17 J
, ... системы эндогенного IrN, неитрофильныхлеикоци-
неспецифическую резистентность, главная функция , V .
„ J г ^ тов и лимфоидных клеток больных с инфекционны-
которои заключается в распознавании и элимина- ^ г ^
v u ” j. ми и соматическими заболеваниями,
ции чужеродной нуклеиновой информации. Эффекты системы IFN реализуются через тесные и многогранные связи как с иммунной системой [11, 8, 4, МЯТРПИЯПЫ М МРТППШ
17], так и с системой нейтрофильных лейкоцитов IVIdlcpMculbl И Мс иДЫ
[16,10, 23,19, 29], которая, как и система IFN, обес- У 45 больных,^находившихся на лечении в спе-
печивает неспецифическую защиту организма. Кли- циализированной клинике НИИ гриппа РАМН,
ническое применение рекомбинантных препаратов было исследовано в динамике состояние IFN-стату-
IFN (и их индукторов) показало перспективность сана фоне получаемой IFN-терапии. Среди больных
данной группы средств, при этом не вызывает со- можно выделить две группы: 1) 22 человека с забо-
мнения, что эффект воздействия IFN во многом оп- леваниями вирусной природы (хронические вирус-
ределяется типом IFN и схемами его введения, ные гепатиты, герпетическая инфекция) и 2) 23 Че-
___________________________________________ ловека с неинфекционной патологией (опухолевый
Адрес для переписки: пРоцесс- хронический колит и др.). В течение 2-3-х
jrTrjrc, ТТ s ТГ 3 ос недель ежедневно больным ВВОДИЛИ внутримышечно v5ô, Санкт-Петербург, ил.Ленсовета, д.85, Тт-\т TT-.iT /Г) ,
__ г Т1 но рекомбинантные препараты IrN: lrN-a (Реафе-
кв. 25. Кузнецову Сергею Ивановичу. рон> Россия)) IFN_a в сочеТании с IFN-Y (Инфла-
Тел. дом.: 127-7860. гец, Литва). Курсовая доза препаратов составляла
Тел.раб.: 275-1950, 109-60-96. от 22.25 до 74.50 млн ME для IFN-a (в среднем
44.4 ± 2.96 млн МЕ) и от 1.05 до 9.20 млн МЕ для ^N-7 (в среднем 4.91 ± 0.94 млн МЕ).
Исследование 1РЫ-статуса включало определение общего сывороточного ТЕ!'!, а также регистрацию способности лейкоцитов крови больных осуществлять продукцию 1РЫ различных типов на индукторы т \ntro. 1РЫ-статус у больных оценивали до начала лечения, через сутки после первой инъекции, в середине курса, через 1-2 суток после окончания введения препарата и через 2-5 месяцев после выписки больных.
Количественное определение сывороточного 1Р1Ч-(Х методом иммуноферментного анализа (ИФА, набор фирмы “Протеиновый контур”, С.-Петербург) произведено 17 больным, которые получали 3-недельный курс ГРЫ-терапии. Исследование повторяли через день в течение всего курса лечения.
Показатели функциональной активности нейт-рофильных лейкоцитов были изучены в динамике у 16 человек: 7 больных получили только 1РМ-а(Ре-аферон; средняя курсовая доза 52.79 млн МЕ), остальным вводили 1РМ-а (43.13 млн МЕ) + 1РЫ-у (Инфлаген; средняя курсовая доза 6.41 млн МЕ). У всех 16 больных исследовали: 1) спонтанную миграцию нейтрофилов; 2) фагоцитарные показатели (фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ) через 30 и 60 минут инкубации и рассчитывали коэффициент деградации (КД); 3) кислородза-висимые биоцидные характеристики лейкоцитов методом люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) цельной крови в спонтанном и индуцированном режимах (оценивали величину максимального пика и суммарное значение пиков, выводили индекс соотношения спонтанной ХЛ к индуцированной); 4) лизосомально-катионный тест. Данные показатели оценивали до и после лечения в отдельных подгруппах, которые были сформированы в зависимости от вида 1РЫ-терапии.
Фенотипированию подвергались лимфоидные клетки тех же 16 больных. Идентификацию СО-мар-керов на лимфоцитах венозной крови проводили с помощью непрямой иммунофлюоресценции общепринятым методом. Определяли следующие маркеры: СБЗ, СВ4, СБ8, С020, СБ25, СБ56/16, рассчитывали соотношение С04/СБ8. Количество лимфоидных клеток оценивали в относительных и абсолютных величинах в общей группе больных до и после лечения, а также в 2-х подгруппах, на которые были разделены больные в зависимости от вида 1РЫ-терапии (1Р>1-а, 1РМ-а + 1Р^у).
Материал обрабатывали статистически с использованием стандартных пакетов прикладных программ.
Результаты
1. Влияние экзогенного ^ (а и у) на активность
системы ^ больных с различной патологией
В таблице 1 суммированы все больные, которым определяли 1РМ-статус в конкретные этапы иссле-
дования независимо от нозологической формы. Обращают на себя внимание резко и однотипно измененные показатели I FN-статуса у обследованных больных до начала лечения. Общий сывороточный IFN колебался в разных подгруппах больных в пределах 23-25 МЕ/мл, в то время как у здоровых доноров этот показатель не должен превышать фоновых значений (0-4 МЕ/мл). С другой стороны, индуцированная продукция лейкоцитами больных различных типов IFN составляла до 30 % от продукции донорских IFN-синтезирующих клеток. IFN-статус контрольной группы здоровых лиц соответствовал для общего сывороточного IFN - 3,1±1,6 МЕ/мл; индуцированного IFN-a/P - 396,4±41,7 МЕ и IFN-y - 206,3±26,0 МЕ. Похожие показатели для циркулирующего IFN и его индуцированной продукции in vitro у здоровых лиц приводит Ф.И.Ер-шов (1996) [3].
Следующий момент, который обращает на себя внимание, - это стабильность показателей общего сывороточного IFN. Активность циркулирующего IFN в сыворотке мало менялась на протяжении всего периода обследования больных и практически на зависела от этиологии заболевания. Сразу после окончания курса IFN-терапии отмечалась тенденция к возрастанию активности циркулирующего IFN, а в подгруппе больных с неинфекционной патологией это повышение было достоверно. Однако через 2-5 месяцев после окончания лечения в общей группе больных и в подгруппе с вирусными заболеваниями активность сывороточного IFN достоверно снижалась.
Противоположные изменения можно отметить в продукции клетками больных индуцированного IFN in vitro. Сразу после окончания курса лечения снижение индуцированной продукции IFN наблюдали для его а/|3- и у-типов при заболеваниях вирусной и невирусной этиологии, причем для инфекционных больных в случае IFN-a/P это угнетение продукции было достоверным. В отдаленные сроки наблюдения продуктивные свойства лейкоцитов в отношении IFN-a/P восстанавливались, даже превысили их уровень, который наблюдали до начала лечения, причем этот показатель так и остался в пределах 30 % от нормального уровня. Продукция IFN-y лимфоцитами in vitro в эти сроки восстановилась только в подгруппе больных неинфекционными заболеваниями, в то время как реактивность клеток у вирусных больных была достоверно ниже аналогичного исходного показателя.
Интересные данные были получены при изучении IFN-статуса у больных в зависимости от типа вводимого IFN: только IFN-a или сочетание IFN-a + IFN-y. Показатели IFN-статуса регистрировали у одних и тех же больных до и после лечения. Полученные данные представлены в таблице 2. При обоих видах IFN-терапии отмечалось достоверное снижение общего сывороточного IFN после курса лечения, причем более выраженное в случае монотерапии (IFN-a). Индуцибельные свойства лейкоцитов in vitro в подгруппах больных с разной патологией были выражены разнонаправленно на введение разных типов IFN. При лечении IFN-a про-
Табл. 1. ИЗМЕНЕНИЕ IFN-СТАТУСА У БОЛЬНЫХ НА ФОНЕ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ
№ Сроки обследования Группа обследованных Общий сывороточный Индуцированная продукция IFN
Продукция IFN-a/ (3 Продукция IFN-y
IFN МЕ/мл % от N МЕ/мл % от N
1 До начала лечения Общие показатели Вирусные болезни Другая патология 23,4+0,25 п=45 23,2+0,34 п=22 24,4±0,44 п=23 121,2±6,2 п=45 130,4+8,1 п=22 112,2±6,1 п=23 28,2+2,5 30,3±1,9 26,2±2,2 62,1 ±5,3 70,2±6,4 54,4±6,1 29,6±2,4 33,4±2,9 27,2±3,7
2 Спустя сутки после 1 -ой инъекции Общие показатели Вирусные болезни Другая патология 24,7±0,61 п=13 25,6+0,43* п=7 23,8+0,40 п=6 117,9+9,7 п=13 125,1 ±8,2 п=7 109±10,9 п=6 27,4±2,3 29,1 ±1,9 25,4±2,6 46,0±4,0* 47,7±3,6* 44,0±3,9 21,9±1,9 22,7±1,7 21,0±1,2
3 В середине цикла Общие показатели Вирусные болезни Другая патология 24,2±0,56 п=12 23,7+0,56 п=10 26,5±0,89 п=2 118,5±5,2 п=12 125,2+6,1 п=10 85,0+65,6 п=2 27,6±1,3 29,1 ±1,6 19,8+15,2 51,2±3,9 55,8±2,8 28,0±3,5* 24,4±1,9 26,6±1,3 13,4±1,7
4 После окончания лечения Общие показатели Вирусные болезни Другая патология 24,5±0,32п=19 23,2±0,32 п=10 25,9+0,24* п=9 94,4+8,9 п=19 118,4+10,6 п=10 68,8+7,0* п=9 22,1 ±1,8 27,5±2,5 16,0±1,8 51,5±4,2 60,2±2,2 41,8±5,0 24,5±2,0 31,9±1,5 17,9±2,2
5 Отдаленные результаты (2-5 мес) Общие показатели Вирусные болезни Другая патология 22,6±0,25* п=15 21,4±0,55* п=7 23,6±0,33 п=8 130,2+ 13,9 п=15 137,4±7,2 п=7 124,6±22,0 п=8 30,4±3,0 32,0+1,7 29,0±5,1 56,7±6,0 51,1 ±2,4* 61,5±10,4 27,0±2,9 24,4±1,0 29,3±4,9
‘-различия достоверны по сравнению с соответствующей группой до лечения (р < 0,05)
Табл. 2. ИЗМЕНЕНИЯ IFN-СТАТУСА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТИПА ВВОДИМОГО IFN
№ Введение препаратовIFN Срок регистрации Общий сывороточный Индуцированная продукция IFN
Продукция IFN-a/ (3 Продукция IFN
IFN (МЕ/мл) МЕ/мл % от нормы МЕ/мл % от нормы
1 а- и y-IFN До лечения После лечения 25,8±1,3 п = 5 19,6±0,4* п = 5 79,2±0,9 п = 5 91,0±12,9 п = 5 18,4+1,1 п = 5 21,2±2,9 п = 5 40,8±2,6 п = 5 45,2±4,7 п = 5 19,4±1,2 п = 5 21,5±2,3 п = 5
2 Только a-IFN До лечения После лечения 24,8+0,4 п = 5 14,8±0,2* п = 5 108,8±14,2п = 5 77,6±0,9 п = 5 25,3±2,7 п = 5 18,0±0,2 п = 5 45,2±3,0 п = 5 42,0±2,6 п = 5 21,5±1,4 п = 5 20,0±1,2 п = 5
*- различия достоверны по сравнению с группой до лечения (р < 0,05)
слеживалась тенденция к снижению продукции клетками in vitro как а-, так и y-IFN. Введение рекомбинантных препаратов а- и у- IFN повышало продуктивную активность клеток в отношении IFN обоих типов.
При оценке IFN-a методом ИФА в общей группе больных (17 человек) средний показатель эндогенного IFN-a составлял 19,7±3,5 пкг/мл. Введение экзогенного IFN обоих типов выявило тенденции в изменении этой концентрации. На протяжении всего курса IFN-терапии отмечалось два пика подъема концентрации эндогенного IFN-a - в начале лечения и при его завершении (табл. 3).
Интересно сравнить динамику показателей эндогенного IFN-a в подгруппах в зависимости от типа вводимого препарата - только IFN-a и IFN-a + IFN-у. В обеих подгруппах исходный уровень эндо-
генного IFN-a был практически одинаковым -20,0±5,3 (для IFN-a + IFN-y) и 19,5±4,5 (для IFN-а). Обращает на себя внимание неодинаковая реакция системы эндогенного IFN больных на разные типы вводимого IFN. Вектор развития реакции эндогенной системы IFN больных на введение препаратов различных типов был направлен в противоположные стороны. Если курс лечения включал только Реаферон (IFN-a), то в первой точке забора крови шло падение концентрации эндогенного IFN-
а, в то время как сочетанный курс (IFN-a + IFN-y) вызывал в этой же точке исследования резкий подъем концентрации эндогенного пептида. Противоположные тенденции развития эндогенной реакции сохранялись практически до конца курса лечения: если в одной подгруппе отмечался подъем уровня эндогенного IFN-a, то в другой - его падение.
Табл. 3. ИЗМЕНЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА а-^ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ В ПРОЦЕССЕ ^-ТЕРАПИИ (а- и а + у) (пкг/мл)
Группы Дни забора крови (точки исследования)
больных До лечения 2-3(1) 4-5(2) 6-7(3) 8-9 (4) 10-12(5) 13-14(6) 15-19(7)
Общая 19,7+3,5 26,3+6,8 35,8+8,3 28,6+8,5 21,3±4,6 15,2±2,8 29,7±5,1 15,0±1,8
группа п = 17 п = 9 п = 12 п = 11 п = 15 п = 12 п = 16 п = 9
1П< 20,0±5,3 53,3±2,1* 32,0±3,2 46,7±4,2* 15,8±2,1 18,7±4,8 32,1 ±9,1 12,5±1,4
а+у п = 6 п = 3 п = 5 п = 3 п = 6 п = 6 п = 6 п = 4
Только 19,5+4,5 12,8±2,6 38,6±11,8 21,9+5,7 24,7±3,0 11,7±2,3 27,8±5,9 17,0±1,1
^-а п = 11 п = 6 п = 7 п = 8 п = 9 п = 6 п = 10 п = 5
* - различия достоверны по сравнению с показателями до лечения (р < 0,05)
Табл. 4. ИЗМЕНЕНИЯ КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА КРОВИ В ПРОЦЕССЕ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ
Этап Группы больных Эритро- циты 1012/л Лейко- циты 109/л Эози-нофи-лы % Нейтрофилы Лимфоциты Моноциты Плазм, клетки %
П/я% С/я% Абс,109/л % Абс, 109/л % Абс,% 0,25±0,07
До лечения Общая группа п = 16 1РМ а+у п = 9 ^-а п = 7 3,78+0,21 3,54±0,35 4,07+0,15 4,94±0,25 5,07±0,23 4,8±0,41 4,0±0,80 4,67±1.31 3,0±0,45 2,8±0,22 3,7±0,36 1,4±0,15 49,1 ±2,0 52,6±2,3 44,6±2,9 2,84±0,17 3,18±0,12 2,40±0,24 38,9±1,7 33,1+3,4 45,1 ±1,2 1,92±0,14 1,74±0,19 2,14±0,20 5,4+0,44 5,6±0,65 5,3±0,45 0,26±0,03 0,29±0,03 0,22±0,04 0,22±0,12 0,29±0,15 0,19±0,07
После лечения Общая группа п = 16 1РМ а+у п = 9 п = 7 3,71+0,10 3,67±0,08 3,77+0,12 3,62*±0,15 3,73*±0,16 3,43*±0,21 3,11 ±0,29 4,1 ±0,48 1,68*±0,15 2,8±0,37 2,0*±0,48 3,4*+0,45 35,8*±1,5 34,1 *±2,5 37,9±2,6 1,62*±0,13 1,68*±0,16 1,54*±0,11 52,1*±1,75 54,1 *±1,90 49,4±1.51 1,79±0,10 1,90+0,12 1,66±0,09 6,13±0,58 5,6+0,71 6,9+1,06 0,23±0,02 0,24±0,03 0,22+0,03 0,11 ±0,12 0,11±0,12 0,29±0,15
* - различия между показателями соответствующих групп до и после лечения достоверны (р < 0,05)
Табл. 5. ИЗМЕНЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПОСЛЕ ИНТЕРФЕРОНОТЕРАПИИ
Что вво- дили Время ана- лиза Спонт. мигра- ция ФЧ ФИ КД ХЛ спонт ХЛ инд Ин- декс сп/ин лкт ЦИК ІРМ млн. ед
30 мин 60 мин 30 мин 60 мин Мах пик X пиков Мах пик 2 пиков а У
Толь- ко ^а п=7 До лечения После лечения 56,4± 7,2 48,4± 7,9 85,0± 1,7 7,0*± 3,0 84,6± 2,1 87,6± 3,0 6,4± 0,44 6,5± 0,23 7,2± 0,44 7,3± 0,48 1,11± 0,02 1,12± 0,03 0,79± 0,07 0,85± 0,01 4,71 ± 0,16 4,67± 0,21 1,83± 0,24 1,51 ± 0,14 8,8± 0,67 7,08± 0,28 0,57± 0,05 0,70± 0,04 7± 0,84 3*± 0,42 20,9± 5.1 37,2± 9.2 52,79
1ГО а+у п=9 До лечения После лечения 68,4± 9,8 42,7± 5,5 88,3± 1,1 82,1± 2,5 94,7± 0,4 85,6*± 1,9 5,6± 0,14 6,6± 0,26 6,2± 0,22 7,4± 0,32 1,17± 0,05 1,19± 0,03 1,09± 0,08 0,79*± 0,01 6,63± 0,41 4,8*± 0,11 2,05± 0,2 1,23*± 0,12 10,6± 0,89 7,01 *± 0,5 0,67± 0,08 0,74± 0,04 7± 0,56 5± 0,42 25,8± 10,0 24,3+ 3,6 43,13 6,41
Диапазон нормы 55,8-59,0 у.е. 60,9-64,1 % 68,1- 70,5% 6,3-7,0 6,1-6,9 0,8-1,1 1,2-1,8 6,2-7,2 2,2-3,5 7,4-8,3 0,7-1,0 2-3 % 20-40 у.е.
‘-различия достоверны по сравнению с группой «до лечения» (р < 0,05)
Только в последних двух точках исследования (6 и 7) тенденции в развитии реакции стали однонаправленными.
2. Интерферонотерапия
и система нейтрофильных лейкоцитов у больных
Следует отметить, что введение экзогенного ¡БЫ сказывалось на клеточном составе периферической крови больных (табл. 4). Препараты 1РЫ не оказывали влияния на количество эритроцитов в крови, что в целом соответствует данным литературы, хотя были сообщения о возникновении легкой анемии в ходе клинического испытания рекомбинантных препаратов [14].
Реакция лейкоцитов выразилась в достоверном снижении их циркулирующего пула в общей группе больных и независимо от вида 1РМ-терапии.
Результатом воздействия экзогенных 1РЫ стало снижение количества гранулоцитов в 1,5 раза, в то время как число мононуклеарных клеток изменилось незначительно (лимфоциты) либо не изменилось совсем (моноциты). Вследствие этого происходил сдвиг формулы крови в сторону клеток мо-нонуклеарного ряда. Наиболее значимые изменения наблюдали у больных, которые получали препараты обоих типов 1РК
Данные о функциональном состоянии нейтрофи-лов представлены в таблице 5. Обращает на себя внимание тот факт, что существенные изменения в их активности после лечения наблюдали в основном в группе больных, курс лечения которых включал 1РЫ-у.
При оценке спонтанной миграции лейкоцитов отмечали тенденцию к ее снижению, более выражен-
ную в подгруппе, получавшей 1Р]М-у. Достоверное снижение ФЧ наблюдали через 30 минут после введения 1РЫ-а и через 60 минут после введения 1Р>1-а+у. ФИ и КД имели незначительную тенденцию к возрастанию в обеих подгруппах. Таким образом, при оценке фагоцитарных функций не выявлено каких-либо существенных изменений, которые бы свидетельствовали о значительном влиянии экзогенных 1РЫ на состояние фагоцитоза. Снижение показателей кислородзависимой биоцидности было больше выражено у больных, которые получали 1Р№у. В обеих подгруппах показатели лизосомаль-но-катионного теста достоверно уменьшались после проведенного лечения, что снижало кислородне-зависимую биоцидную активность клеток. Однако это снижение как бы приближало показатели ЛКТ больных к нормальному уровню ЛКТ здоровых доноров. Уровни ЦИК до и после лечения существенно не менялись и находились в пределах физиологической нормы.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что лечение больных с вирусной и неинфекционной патологией рекомбинантными препаратами а- и у- 1РЫ не изменяет либо незначительно снижает барьер неспецифической резистентности, который обеспечивают клетки экстренного реагирования - нейтрофильные лейкоциты. Более существенно изменения выражены в случае использования обоих типов 1Р1Ч.
3. Изменения фенотипа лимфоидных клеток под влиянием интерферонотерапии
Состояние фенотипа клеток лимфоидной популяции по исследованным СО маркерам отражено в
Табл. 6. ИЗМЕНЕНИЕ ФЕНОТИПА ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК В ПРОЦЕССЕ ^-ТЕРАПИИ
Время анализа СОЗ С04 СР8 С056/16 С020 С025 С04/ СЭ8
группы % абс, 109 % абс, 109 % абс, 109 % абс, 109 % абс, 109 % абс, 109
общая группа 51,4+ 0,97+ 45,2+ 0,80+ 33,5+ 0,70+ 17,2± 0,39± 6,3+ 0,14± 2,1 + 0,05± 1,55±
п=16 3,6 0,07 2,8 0,06 2,3 0,07 1,5 0,06 0,5 0,02 0,4 0,01 0,16
до ^N06 31,6± 0,80± 45,0± 0,94± 32,4± 0,77+ 20,3+ 0,56± 7,6± 0,18± 1,6+ 0,04± 1,63±
лечен. п=7 3,2 0,09 2,1 0,08 2,4 0,11 2,1 0,03 1,1 0,03 0,15 0,008 0,21
^ а+у 61,7+ 1,10± 45,3+ 0,79+ 34,3± 0,64± 14,8± 0,32± 4,3+ 0,10± 2,6+ 0,06± 1,49±
п=9 2,3 0,12 3,3 0,03 2,0 0,12 2,0 0,03 0,2 0,01 0,7 0,015 0,14
общая группа 47,9+ 0,87+ 41,4+ 0,77+ 32,6± 0,61 + 16,3± 0,30± 8,1 ± 0,15+ 2,6± 0,05+ 1,71 +
п=16 3,1 0,08 3,7 0,09 2,3 0,08 1,5 0,03 0,9 0,03 0,4 0,008 0,14
после 1Жа 35,4± 0,60+ 41,6+ 0,69+ 31,0+ 0,57+ 12,7*± 0,23*+ 6,8+ 0,10± 1,4+ 0,02± 2,03+
лечен. п=7 2,1 0,10 2,0 0,08 4,4 0,04 2,0 0,01 1,2 0,015 0,45 0,006 0,22
1РМ а+у 57,6± 1,07+ 41,2± 0,82+ 33,9+ 0,63± 19,0+ 0,40± 9,2*± 0,19+ 3,6± 0,08± 1,46+
п=9 2,3 0,08 5,7 0,14 2,1 0,07 2,1 0,03 1,3 0,04 0,6 0,01 0,22
диапазон нормы 50-70 0,7-1,7 31-39 0,4-1,1 21-27 0,2-0,7 9-17 0,1-0,5 8-16 0,1-0,5 6-13 0,1-0,2 1,0-1,5
*- различия достоверны по сравнению с соответствующей группой до начала лечения (р < 0,05),
таблице 6. До начала лечения процентное содержание CD20 и CD25 несколько снижены, a CD4 и CD8 несколько повышены по сравнению с контрольной группой. При оценке абсолютных значений все клетки попадали в интервал нормы, за исключением активированных лимфоцитов, несущих рецептор к IL-2 (CD25) - их количество было в 2 раза меньше нижней границы нормы. Соотношение CD4/CD8 почти соответствовало норме (1,55±0,16). После проведения IFN-терапии относительные и абсолютные количества лимфоцитов с маркерами CD3, CD4, CD8, CD56 имели тенденцию к снижению, в то время как CD20 и CD25 - тенденцию к повышению. Соотношение CD4/CD8 также повысилось (1,71±0,14). Однако после лечения сохранился фенотипический дисбаланс внутри клеток лимфоидной системы.
При монотерапии только IFN-a все исследованные показатели имели тенденцию к снижению по сравнению с аналогичными показателями до начала лечения. Исключение составило незначительное повышение процента CD3 (при этом абсолютное число СD3-лимфоцитов несколько снизилось) и соотношение CD4/CD8 превысило 2 (2,03±0,22). Следует отметить, что снижение естественных киллеров (CD56) было достоверным. При анализе данных в другой подгруппе (лечение IFN-a + IFN-у) установлено, что все стимулирующие эффекты, которые обнаружены в общей группе больных, можно отнести за счет действия экзогенного IFN-y. В данной подгруппе по сравнению с показателями до лечения обнаружено также снижение CD3, CD8 и процента CD4. Все остальные показатели имели противоположную тенденцию - к повышению. CD20 в процентном выражении повышался достоверно. Индекс соотношения CD4/CD8 практически не изменился.
Обсуждение
Необходимо отметить две особенности, которые обращают на себя внимание при анализе литературы о лечении больных экзогенными препаратами цитокинов. Во-первых, наблюдается тенденция к быстрому выведению цитокинов из системы гемоциркуляции, что заставляет значительно увеличивать их дозы. Во-вторых, нагрузка экзогенными ци-токинами приводит к активации собственной цито-киновой сети организма, что может сопровождаться неожиданными побочными эффектами [3, 24]. При этом характерно, что введение экзогенных IFN оказывает различное влияние на IFN-статус здоровых и больных реципиентов.
У здоровых добровольцев эффект введения Реа-ферона на общий сывороточный IFN зависел от дозы и способа введения препарата. Индуцибельная активность клеток в отношении а- и у- IFN не претерпевала существенных изменений при инъекции IFN в дозе до 6 млн ME. Введение 6-9 млн ME Реа-ферона в сутки внутривенно или внутримышечно приводило к снижению интерфероновой реакции лейкоцитов для IFN-a и заметно угнетало продукцию IFN-y лимфоцитами. Через неделю после отмены препарата намечалась тенденция к повышению
сниженных показателей [15].
Иное воздействие экзогенный IFN оказывал на 1Р^статус больных. Ведение экзогенного IFN (Ре-аферона) вызывало пролонгацию циркуляции IFN в сыворотке, повышение ^^синтезирующей способности лейкоцитов, а также повышение активности ферментов действия IFN (2-5А-синтетазы и про-теинкиназы). Оба фермента активируются после введения 1РН и его индукторов и поэтому могут служить маркерами присутствия и действия 1РН в организме [13, 27, 25].
Таким образом, если у здоровых добровольцев при введении экзогенного 1РН отмечается возрастание уровня общего сывороточного IFN и снижение ин-дуцибельной активности лейкоцитов, то у больных экзогенный IFN способствует возрастанию функциональной активности системы эндогенного 1Р№
Полученные нами данные о влиянии экзогенных IFN на состояние функциональной активности системы IFN больных с различными заболеваниями выявили достоверное снижение активности общего сывороточного IFN после лечения и обозначили тенденции в сторону возрастания продуктивной активности лейкоцитов для ^N-0/(3 и подавления для 1Р^у. Такая невыразительность результатов и тенденций, очевидно, связана с очень неоднородной группой больных. Следует обратить внимание на то, что наши данные не всегда согласуются с данными литературы, в которой представлены результаты, полученные в основном при введении а2-1РН (Реа-ферона). Наши больные получали два типа рекомбинантных препаратов IFN (а и у), причем наиболее существенные сдвиги обнаружены именно в подгруппах больных со смешанной терапией, что можно отнести на счет регуляторного действия 1Р^у.
Наблюдение за концентрацией 1Р^а в сыворотке крови больных в процессе 1Р^терапии методом ИФА свидетельствовало о периодических всплесках, выбросах в кровоток эндогенных пептидов системы 1Р1М. То, что регистрируемый в сыворотке наших больных №N-0 являлся эндогенным, не вызывает сомнения, так как забор крови для исследований производился через 18-20 часов после введения препаратов 1Р№ Согласно данным литературы, при внутримышечном введении 1Р^а (Реаферона) пик его активности в сыворотке крови приходился на 4 часа после введения препарата независимо от дозы. Через 8 часов после инъекции активность IFN в сыворотке составляла 1 /3 от пиковых значений, а к 12 часам после введения уже уменьшалась до минимальных значений [15, 12]. Поэтому мы регистрировали эндогенный 1БЫ, и оценивали влияние экзогенного препарата на систему IFN больных, тем более, что в одной из подгрупп проводили лечение 1Р^у, а он использованным набором для ИФА не выявляется.
Таким образом, лечение больных экзогенными препаратами IFN влияет на изменение концентрации одного из компонентов системы эндогенного 1Р^ а значит, и на функциональную активность системы в целом. Экзогенные препараты IFN увеличивают присутствие в крови компонентов эндо-
генной системы IFN (в частности IFN-a). В большей степени реакция усиления характерна для курса лечения, включающего оба типа IFN, что с определенной долей вероятности можно отнести за счет регуляторных функций IFN-y.
Нейтрофильные лейкоциты представляют собой популяцию клеток “быстрого реагирования”, которые, как и система IFN, формируют неспецифическую резистентность организма. Тенденция в снижении спонтанной миграции лейкоцитов у наших больных обусловлена совокупностью ряда факторов. Помимо изменения под влиянием IFN-терапии активности лимфоидных клеток, которые выделяют различные лимфо- и хемокины, влияющие на хемотаксис лейкоцитов, экзогенные IFN влияют на тактильные и локомоторные функции нейтрофиль-ных гранулоцитов, которые в данной реакции выступают в роли индикаторных клеток. Поэтому конечная результирующая величина их миграционной активности зависит не только от баланса цито- и хемокинов, но и отражает функциональное состояние самих нейтрофилов.
Считается, что препараты IFN усиливают фагоцитарную активность фагоцитирующих клеток. Регистрацию изменения фагоцитарной активности под влиянием IFN проводили как в экспериментах на животных, так и в клинике у больных, но в основном с использованием моноцитов/макрофагов. Нейтрофильным гранулоцитам в этом плане уделено не слишком много внимания. Показано, что IFN усиливали адгезию полиморфноядерных лейкоцитов человека [18]. Препараты IFN восстанавливали фагоцитарные функции фагоцитов при стафилококковой [5, 7] и сальмонеллезной [20, 22] инфекциях. Показано, что in vitro IFN-y продлевает жизнь нейт-рофильных гранулоцитов в 2-3 раза и усиливает их фагоцитарные способности [22].
Однако, активность фагоцитоза напрямую зависит от дозы и типа препаратов IFN как in vitro, так и in vivo [26]. Низкие и средние дозы Реаферона (5,0-5,0-х 102 МЕ/мл) усиливали миграцию и распластывание перитонеальных макрофагов мышей в культуре, в то время как дозы 5,0х104-5,0х105 МЕ/ мл подавляли фагоцитоз [26, 20, 21]. Длительная IFN-терапия высокими дозами IFN-a также резко снижала фагоцитарную функцию клеток [18]. Поэтому нет ничего удивительного, что в нашем исследовании мы получили либо отсутствие какого-либо эффекта IFN-терапии, либо тенденции к снижению фагоцитарных функций, особенно в подгруппе больных, которых лечили двумя типами IFN (а и у).
Биоцидность нейтрофильных лейкоцитов обеспечивается кислородзависимыми механизмами, которые реализуются через целенаправленную генерацию клетками активных форм кислорода (АФК) и кис-лороднезависимыми - в данном исследовании регистрировали катионные белки. В ряде работ был продемонстрирован микробицидный эффект рекомбинантного IFN-y, который реализовался через активацию трансмембранного и цитозольного потока Са+2 и респираторный взрыв [цит. по 3]. Расчет фагосо-мально-активированного кислорода под влиянием
рекомбинантного 1Р^у и природного показал, что после фагоцитоза 1Р^у значительно увеличивал как фагосомную, так и внеклеточную продукцию АФК в дозозависимой степени. Природные 1ЙЧ-а и -(3 слабо воздействовали на фагосомную выработку АФК даже в высоких дозах и умеренно повышали внеклеточную генерацию активного кислорода [14]. Полученные нами результаты не согласуются с приведенными выше данными. Правда, в отличие от них, где исследования проводили на модели свежевыделенных моноцитов крови доноров, наши данные получены в экспериментах с цельной кровью больных, в которой основными клетками-генераторами АФК являются нейтрофильные лейкоциты.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что лечение больных с вирусной и инфекционной патологией рекомбинантными препаратами а- и Y-IFN не изменяют либо незначительно снижают барьер неспецифической резистентности, который обеспечивают клетки быстрого реагирования - нейтрофильные лейкоциты. Более существенные изменения выражены в случае сочетанного использования обоих типов 1Р№
Влияние 1Пч! на популяции и субпопуляции лимфоидных клеток достаточно хорошо изучено и представлено в литературе. Наиболее тесно система 1РТЧ связана с системой натуральных киллеров ^К), которые можно рассматривать как один из факторов, контролирующих инфекционный процесс, как важные иммуномодуляторные клетки, активность которых сопряжена с деятельностью других эффекторных клеток, регулируемых 1РК Модуляция Т- и В-лимфоци-тов зависит от типа вводимого ПТЧ, его дозы и фазы иммунного ответа [2,3,9,21]. Используемые в нашем исследовании методы определения популяций и субпопуляций лимфоидных клеток могут свидетельствовать в основном об их количественных характеристиках и мало отражают изменения функциональной активности лимфоцитов после нагрузки экзогенным 1РК В данной ситуации о функциональном состоянии клеток можно судить косвенно, по изменению их фенотипа. В ответ на введение человеческого рекомбинантного 1РЫ фенотипический состав лимфоидных клеток менялся незначительно. Конкретные изменения зависели от состояния иммунной системы до начала лечения и типа вводимого 1РЫ.
Таким образом, оптимальные схемы 1Р^тера-пии, очевидно, необходимо разрабатывать и применять с учетом и под контролем состояния эндогенной системы 1РН, неспецифической резистентности организма и иммунного статуса больного в каждом индивидуальном случае.
Список литературы
1. Василенко Р.Н., Денисов Л.А., Галактионов
В.Г. Влияние рекомбинантного а-интерферона человека (Реаферона) на функциональную активность макрофагов мышей // ЖМЭИ.-1989.-№ 7.-С.100-104.
2. Василенко Р.Н., Кондаков К.Э., Семенкова Л.Н., Денисов Л.А., Галактионов В.Г. Изучение им-
мунорегуляторных свойств реаферона // ЖМЭИ. -1989. -№12. -С.54-57.
3. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. -М.: Медицина, 1996. -240с.
4. Ершов Ф.И. Интерфероны (к 40-летию открытия) // Вопросы вирусологии, 1998. -Т.43, № 3. -С.247-258.
5. Зуева B.C., Кузнецов В.П., Спивак Н.Я., Авакян Л.М., Трощинский А.И., Дмитренко O.A., Беляев Д.Л., Смирнов В.В., Соловьев В.Д. Подавление интерфероном развития стафилококковой инфекции // Антибиотики и медицинская биотехноло-гия.-1985.-№ 11.-С.863-867.
6. Зуева B.C., Спивак Н.Я., Фильчаков И.В., Кузнецов В.П., Братусь Е.В. Влияние лейкинферона на активность фагоцитирующих клеток при сальмонеллезах у людей // ЖМЭИ.-1991.-№ 9.-С.21-25.
7. Карлов В.А., Белоцкий С.М., Филюкова О.Б., Зуева B.C., Соловьев В.Д., Кузнецов В.П. Повышение активности факторов защиты у больных гнойной хирургической инфекцией при применении препаратов интерферона // Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1985. - № 10. - С.770-773.
8. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные иммуномодуляторы. - СПб.: Гиппократ, 1992,- 255с.
9. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Л.Йегера,- М., 1990.- Т.З.- 528 с.
10. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения.- СПб: Наука, 1999.- 161с.
11. Кузнецов В.П. Интерфероны как средство иммуномодуляции // Иммунология,- 1987,- № 4,-С.30-34.
12. Кулаков В.П., Пименова Г.Н., Матвеева В.А., Кобринский Г.Д., Кузнецов В.П., Фролова И.С. Фармакокинетика рекомбинантного ^-интерферона (Реаферона) // Вопросы вирусологии. - 1989. -Т.34, № 2. - С.183-186.
13. Лаврухина A.A., Соколова Т.М., Суетина И. А., Князева Л.Д., Миронова Л.Л., Крылов В.Ф., Кети-ладзе Е.С., Ершов Ф.И. Интерфероновый статус и активность дсРНК-зависимых ферментов у добровольцев и больных гриппом людей, получавших человеческий рекомбинантный а2-интерферон (Реа-ферон) // Вопросы вирусологии. - 1988. - Т.ЗЗ, № 5.
- С.580-585.
14. Малиновская В.В. Результаты клинических испытаний рекомбинантных интерферонов и перспективы их применения. В кн.: Система интерферона в норме и при патологии,- М.: Медицина, 1996.
- С.171-195.
15. Малиновская В.В., Мурзабаева Р.Т., Монахова Л.С., Миронова Л.Л. Функционирование системы интерферона при различных способах и дозах
введения рекомбинантного а2-интерферона (Реаферона) // Вопросы вирусологии. - 1989. - Т.34, № 2. -
С.180-183.
16. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о ней-трофиле и макрофаге. - Новосибирск: Наука, 1989.
- 344с.
17. Нестерова И.В., Сепиашвили Р.И. Иммуно-тропные препараты и современная иммунотерапия в клинической иммунологии и медицине // Аллергология и иммунология. - 2000. - Т.1., № 3. - С.29-37.
18. Тазулахова Э.Б., Сорокин А.М. Взаимосвязь и взаимоотношения между системами интерферона и иммунитета. В кн.: Система интерферона в норме и при патологии.-М.: Медицина, 1996. - С.88-116.
19. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. Т. 1. Нейтрофилы. - СПб: Наука, 1999. -231с.
20. Фильчаков И.В., Спивак Н.Я., Зуева B.C., Кузнецов В.П. Интерферон повышает бактерицидную активность макрофагов перитонеального экссудата мышей против Salmonella Typhimurium // ЖМЭИ,- 1987,- №8. - С.76-79.
21. Шабалина Н.В., Длин В.В., Малиновская В.В., Малашина О.А., Горчакова Л.Н. Интерфероновая система человека: Биологическая роль и взаимосвязь с иммунной системой // Российский вестник пери-наталогии и педиатрии. -1995. - №5,- С.29-35.
22. ГЦепеткин И.А., Чердынцева Н.В., Васильев Н.В. Регуляция нейтрофилов цитокинами // Иммунология,- 1994.- №1,- С. 4-7.
23. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты). - СПб: Игра, 2000. - 295 с.
24. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии // Иммунология. - 1987. - № 5. - С.7-14.
25. Buffet-Janvresse С., Hovanessian A.G. Enzyme markers for the presence of circulating interferon:2-5A synthetase in blood lymphocytes and protein kinase in platelet-rich plasma // Proc.Soc.Exp.Biol. (N.Y.). -1984.-Vol. 175.-P.169-175.
26. Degre М., Sonnenfeld C., Rollag H., Morland B. Effect of gamma interferon preparations on in vitro phagocytosis and degradation of Esherihia coli by mouse peritoneal macrophages // J.Interferon Res. -1981. - Vol.l. - P.502-512.
27. Hovanessian A.G. Intracellular events in interferon-treated cells. // Differentiation. - 1979. -Vol.15. - P. 139-151.
28. Kim Seo М., Thong Y.H. Augmentation of human polymorphonuclear leucocyte adherence by interferon // Intern.Arch.Allerg. - 1986. - Vol.79. -P.305-311.
поступила в редакцию 14.03.2003 принята к печати 05.04.2003
