CC BY
78
щл
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
УДК 543.422.3:54-145.2:615.281.8
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИАЗАВИРИНА В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ
Кинев М.Ю., Мельникова О.А., Петров А.Ю., Забояркина Д.В.
Уральский государственный медицинский университет, г. Екатеринбург
ООО «Уральский центр биофармацевтических технологий» - резидент фонда «Сколково», г. Екатеринбург
РЕЗЮМЕ
Авторами статьи разработаны методики количественного определения триазавирина в водных растворах с использованием метода спектрофотометрии. Задействованы три варианта метода спектрофотометрии: прямая спектрофотометрия, спектрофотометрия по А.М. Фирордту, спектро-фотометрия с использованием стандартного раствора. Для всех методик проведен расчет метрологических характеристик. Разработанные методики количественного определения оказались применимы для практического использования в фармацевтическом анализе.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: триазавирин, спектрофотометрия, метод Фирордта, количественное определение.
Введение
Метод спектрофотометрии находит широкое применение в фармацевтическом анализе, как для идентификации и определения примесей, так и для количественного определения лекарственных средств. Основными достоинствами данного метода являются: относительная простота эксперимента, специфичность, использование сравнительно небольшого количества вещества [1], достаточная чувствительность и информативность [2]. Помимо стандартного способа определения количественного содержания в водных растворах, к числу наиболее распространенных способов определения концентрации основного вещества в растворе относится метод Фирордта, который позволяет определить концентрацию исследуемого вещества без информации о коэффициентах удельного поглощения компонентов раствора.
Цель исследования - разработать методику количественного определения триазавирина в водных растворах с применением метода обычной спектрофотомет-рии, спектрофотометрии с использованием стандартного раствора и метода Фирордта с предположением о линейном характере поглощения.
Н Кинев Михаил Юрьевич, тел. 8 (343) 214-85-23, 8-963-031-5545; e-mail: mkinev2009@yandex.ru
Материал и методы
В работе использовались фармацевтическая субстанция триазавирина (ФС 000279-141211), вода очищенная (ФС 42-2619-97), спектрофотометр СФ-2000 (диапазон спектра от 190 до 1100 нм) с кюветами, дающими толщину слоя 1 см, аналитические весы, электронные весы. Разработка методики количественного определения триазавирина в водных растворах с использованием метода спектрофотометрии проводилась на базе кафедры фармации Уральского государственного медицинского университета (г. Екатеринбург). Аппроксимацию оптической плотности и подбор аналитических длин волн осуществляли с помощью метода наименьших квадратов.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием программы Microsoft Office Excel 2007 на основании ГФ XI (вып. 1, с. 199). Для каждой методики количественного определения проведен расчет следующих метрологических характеристик: среднее арифметическое, выборочная дисперсия, стандартное отклонение (средняя квадратичная ошибка отдельного определения), стандартное отклонение среднего результата (среднее квадратичная ошибка среднего арифметического), доверительный интервал среднего значения (точность прямого измерения), достоверность (правильность), относительная ошибка опы-
та (относительное стандартное отклонение), интервальное значение определяемой величины (граничные значения доверительного интервала среднего значения).
Методика приготовления исследуемого раствора: навеску фармацевтической субстанции триазавирина массой 0,25 г (точная навеска) помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят очищенной водой до метки и тщательно перемешивают в течение 10 мин (раствор А), 1 мл раствора А помещают в мерную колбу на 250 мл. и доводят водой до метки и перемешивают (испытуемый раствор).
Результаты и обсуждение
На рисунках представлены ультрафиолетовый спектр исследуемого водного раствора триазавирина (рис. 1) и ультрафиолетовый спектр исследуемого и стандартного растворов триазавирина (рис. 2), снятый на спектрофотометре СФ-2000 в диапазоне от 190 до 450 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
А
Рис. 1. УФ-спектр исследуемого раствора
Рис. 2. УФ-спектр исследуемого и стандартного растворов
Первым способом определяем содержание триазавирина методом прямой спектрофотометрии. Для этого измеряем оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре СФ-2000 в максимуме поглощения при длине волны 358 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Приготовление исследуемого раствора описано в разделе статьи «Материал и методы».
Раствор сравнения - вода.
Содержание С5Н^6№О^ (триазавирина) в 1 мл испытуемого раствора в граммах (Х) вычисляют по формуле:
X = АХ ■ 0,01 • 25 • 250/1%1смАаа1 ■ 100, где АХ - оптическая плотность испытуемого раствора; 0,01 - содержание в 1 мл раствора теоретическое, г; 25 - объем мерной колбы 1 для разведения, мл; 250 -объем мерной колбы 2 для разведения, мл; Ар/1см -удельный показатель поглощения триазавирина при 358 нм, равный 404,55; а - навеска образца, г; а1 -объем аликвоты, мл.
Содержание С5Н7N6NаО5S (триазавирина) в 1 мл испытуемого раствора должно быть 0,01 г.
Результаты количественного определения триаза-вирина в водных растворах с использованием метода спектрофотометрии представлены в табл. 1.
Вторым способом определяем содержание триаза-вирина методом прямой спектрофотометрии с использованием стандартного раствора. Для этого измеряем оптическую плотность испытуемого и стандартного раствора на спектрофотометре СФ-2000 в максимуме поглощения при длине волны 358 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Приготовление исследуемого раствора описано в разделе статьи «Материал и методы».
Раствор сравнения - вода.
Приготовление стандартного раствора осуществлялось следующим образом.
Около 0,25 г (точная навеска) фармацевтической субстанции триазавирина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 20 мл воды очищенной, перемешивают, доводят этим же растворителем до метки и перемешивают (раствор А), 1 мл алик-воты (раствор А) помещают в мерную колбу на 250 мл, доводят водой до метки и перемешивают (стандартный раствор).
Содержание С5Н7N6NаО5S в 1 мл исследуемого раствора в граммах (Х) вычисляют по формуле:
X = Аа ■ 0,01/А2аь
где Ах - оптическая плотность исследуемого раствора; А2 - оптическая плотность раствора РСО; а1 - навеска фармацевтической субстанции триазавирина взятая для приготовления исследуемого раствора, г; а2 - на-
веска фармацевтической субстанции триазавирина взятая для приготовления раствора РСО, г; 0,01 - содержание триазавирина в 1 мл препарата теоретическое, г.
Содержание Cs^Nfr^OsS (триазавирина) в 1 мл исследуемого раствора должно быть 0,01 г.
Результаты количественного определения триазавирина в водных растворах (с использованием стандартного раствора) с применением метода спектрофо-тометрии представлены в табл. 2.
Третьим способом исследуем данную систе -му методом Фирордта с использованием стандартного раствора. Для этого выбираем область участка, на которой кривая имеет линейную зависимость.
На рис. 1 и 2 данная область изображена жирной линией.
Среднеквадратичная ошибка отклонения спектра поглощения от линейной зависимости равна 0,0024. Установлено, что в области длин волн от 340 до 400 нм спектр поглощения имеет приближенно линейный вид.
Таким образом, в данной области спектра можно использовать метод Фирордта. Аналитические длины волн (Xj = 353 нм, X2 = 358, = 363 нм) для данного метода в области от 340 до 400 нм можно подбирать так, чтобы расчетные концентрации совпадали с концентрациями, полученными методом прямой спек-трофотометрии.
Таблица 1
Результаты количественного определения триазавирина в водных растворах с использованием метода спектрофотометрии при длине
волны 358 нм в кювете с толщиной слоя 1 см
Навеска триаза- Оптическая плотность Найденное содержа- Среднее содержание, Метрологические
вирина, г исследуемого раствора ние, г/мл г/мл характеристики
1,43316 0,008821
0,25j0 1,42768 0,008787 0,008821
1,43690 0,008844
1,43493 0,008832
1,44260 0,008858 х = 0,0088475 г/мл
0,25j6 1,43775 0,008828 0,008849 S2 = 0,000000000435
1,44110 0,008849 S = 0,000020857
1,44302 0,008861 SX = 0,000010428
1,43690 0,008862 DX = 0,000033162
0,2505 1,44260 0,008897 0,008872 А = 0,0011525
1,43690 0,008862 s = 0,37%
1,43775 0,008867 х ± DX = 0,0088475 ± 0,000033162
1,43493 0,008832
0,25j0 1,44260 0,008879 0,008848
1,43493 0,008832
1,43775 0,008849
Таблица 2
Результаты количественного определения триазавирина в водных растворах (с использованием стандартного раствора) с применением метода спектрофотометрии при длине волны 358 нм в кювете с толщиной слоя 1 см
Навеска триаза-вирина, г Оптическая плотность исследуемого раствора Навеска РСО триазавирина, г Оптическая плотность стандартного раствора Найденное содержание, г/мл Среднее содержание, г/мл
1,43170 1,45129 0,009885
0,25j0 1,43426 1,43316 1,43991 0,2515 1,45277 1,45650 1,45817 0,009892 0,009859 0,009894 0,009883
1,43998 1,46114 0,009879
0,25j2 1,44027 1,43403 1,43204 0,2518 1,46228 1,45726 1,45709 0,009873 0,009864 0,009852 0,009867
1,43291 1,45283 0,009887
0,2505 1,42582 1,43215 1,43510 0,25 J J 1,45228 1,45564 1,45156 0,009842 0,009862 0,009910 0,009875
1,43100 1,46021 0,009812
0,25j0 1,44012 1,42958 1,43652 0,25 J3 1,45786 1,45768 1,45645 0,009890 0,009819 0,009875 0,009849
Метрологические характеристики
х = 0,0098685 г/мл S2 = 0,00000000021167 S = 0,0000145489 Ä = 0,00000727445 DX =0,0000231327 А = 0,0001315 s = 0,14% х ± DX = = 0,0098685 ± 0,0000231327
Таблица 3
Результаты количественного определения триазавирина в водных растворах с использованием метода Фирордта
Масса Оптическая плотность исследуемого раствора Масса навески Оптическая плотность стандартного раствора Найденное содержание, Метрологические характе-
навески,г Xi = 353 нм = 358 нм = 363 нм РСО = 353 нм = 358 нм = 363 нм г/мл ристики
0,2510 1,44523 1,4317 1,38801 0,2515 1,42184 1,45129 1,40851 0,010988 х = 0,010402 г/мл
0,2510 1,42703 1,43426 1,38829 0,2515 1,44727 1,45277 1,41193 0,011503 S2 = 0,000001453735
0,2510 1,42709 1,43316 1,39647 0,2515 1,45120 1,45650 1,41813 0,009811 S = 0,001205709
0,2510 1,43072 1,43991 1,40296 0,2515 1,45455 1,45817 1,42062 0,011229 S? = 0,0003812787
0,2512 1,43695 1,43998 1,40317 0,2518 1,45888 1,46114 1,41899 0,008988 DX = 0,0008624524
0,2512 1,42722 1,44027 1,39614 0,2518 1,45514 1,46228 1,42224 0,012148 А = 0,000402
0,2512 1,43204 1,43403 1,38860 0,2518 1,44962 1,45726 1,41408 0,009353 s = 8,29%
0,2505 1,41719 1,42582 1,37924 0,2511 1,44735 1,45228 1,40849 0,011086 х ± DX =
0,2505 1,42664 1,43291 1,39073 0,2511 1,44733 1,45283 1,41199 0,010480 =0,0098685 ± 0,0008624524
0,2512 1,42597 1,43204 1,39535 0,2518 1,44945 1,45709 1,41391 0,0084341
В табл. 3 представлены результаты измерений содержания триазавирина в водных растворах с использованием метода Фирордта.
Содержание Cs^Ng^OsS в 1 мл исследуемого раствора в граммах (Х) по методу Фирордта вычисляют по формулам:
n =
1 3 - 1 2 1 3 - 11'
где Xi, X2, X3 - длина волны 353, 358, 363 нм соответственно;
1 I mn I max
A = A1 - n г A1 - (1 - n) г A13 ,
где A\ A^2, АХз - оптическая плотность исследуемого раствора при длине волны 353, 358, 363 нм соответственно; n - коэффициент;
1 1 min 1 max
Act = A1 - П Г A1 - (1 - П) Г A^ ,
где AC?, ACt , AlJ - оптическая плотность стандартного раствора при длине волны 358, 353, 363 нм соответственно;
X = Ai • a2 • 0,0i/A2 • ai, где A i - оптическая плотность исследуемого раствора; A2 - оптическая плотность раствора РСО; ai - навеска фармацевтической субстанции триазавирина взятая для приготовления исследуемого раствора, г; a2 - на-
веска фармацевтической субстанции триазавирина взятая для приготовления раствора РСО, г; 0,01 - содержание триазавирина в 1 мл препарата теоретическое, г.
Содержание Cs^N^OsS (триазавирина) в 1 мл исследуемого раствора должно быть 0,01 г.
Заключение
Разработаны методики количественного определения триазавирина в водных растворах с использованием метода спектрофотометрии (прямая спектрофотометрия, спектрофотометрия по А.М. Фирордту, спектрофото-метрия с использованием стандартного раствора). Относительная ошибка количественного определения составила 0,37; 0,14 и 8,29% соответственно для прямой спектрофотометрии, спектрофотометрии с использованием стандартного раствора, спектрофото-метрии по А.М. Фирордту.
Литература
1. Блинникова А.А. Спектрофотометрия и фотоэлектроко-лориметрия в анализе лекарственных средств: учебное пособие. Томск, 2005. 96 с.
2. Дубкова Н.С., Мельникова О.А., Петров А.Ю. Изучение межмолекулярного взаимодействия в системе триазави-рин - лимонная кислота спектрофотометрическим методом // Вестник магистратуры. 2013. № 2 (17). С. 4-6.
Поступила в редакцию 30.01.2014 г. Утверждена к печати 07.05.2014 г.
Кинев Михаил Юрьевич (И) - ст. преподаватель кафедры фармации УГМУ (г. Екатеринбург) Мельникова Ольга Александровна - д-р фарм. наук, доцент кафедры фармации УГМУ (г. Екатеринбург).
Петров Александр Юрьевич - д-р фарм. наук, зав. кафедрой фармации УГМУ, ведущий науч. сотрудник ООО «УЦБТ» (г. Екатеринбург). Забояркина Дарья Владимировна - студентка 5-го курса фармацевтического факультета УГМУ (г. Екатеринбург).
И Кинев Михаил Юрьевич, тел. 8 (343) 214-85-23, 8-963-031-55-45; e-mail: mkinev2009@yandex.ru
DEVELOPMENT OF THE TECHNIQUE OF QUANTITATIVE DEFINITION
OF TRIAZAVIRIN IN WATER SOLUTIONS WITH USE OF THE SPECTROPHOTOMETRY
METHOD
Kinev M.Yu., Melnikova O.A., Petrov A.Yu., Zaboyarkina D.V.
Ural State Medical University, Yekaterinburg, Russian Federation
JSC "Ural's Centrum of biofarmaceutical technology", Yekaterinburg, Russian Federation ABSTRACT
Authors of article developed techniques of quantitative definition Triazavirin in water solutions with use of a method of a spectrophotometry. Three options of a method of a s spectrophotometry are used: direct spectrophotometry, spectrophotometry according to A.M. Firordt, a spectrophotometry with use of standard solution. For all techniques calculation of metrological characteristics is carried out. The developed techniques of quantitative definition were applicable for practical use in the pharmaceutical analysis. The relative error of quantitative definition Triazavirin in water solutions made 0.37%, 0.14% and 8.29% respectively for a direct spectrophotometry, a spectrophotometry with use of standard solution, a spectro-photometry according to A.M. Firordt.
KEY WORDS: Triazavirin, spectrophotometry, Firordt's method, quantitative definition.
Bulletin of Siberian Medicine, 2014, vol. 13, no. 3, pp. 132-136
References
1. Blinnikova A.A. Spektrofotometriya and
photoelectrocolorimetry in the analysis of medicines: Manual. Tomsk, 2005. 96 p. (in Russian).
2. Dubkova N.S., Melnikov O.A., Petrov A.Yu. Studying of intermolecular interaction in system Tpna3aBHpHH - lemon acid spektrofotometrichesky the method. Messenger of a magistracy, 2013, no. 2 (17), pp. 4-6 (in Russian).
Kinev Mikhail Yu. (H), Ural State Medical University, Yekaterinburg, Russian Federation. Melnikova Olga A., Ural State Medical University, Yekaterinburg, Russian Federation.
Petrov Aleksanr Yu., Ural State Medical University; JSC "Ural's Centrum of biofarmaceutical technology", Yekaterinburg, Russian Federation. Zaboyarkina Dar'ya V., Ural State Medical University, Yekaterinburg, Russian Federation.
H Kinev Mikhail Yu., Ph. +7 (343) 214-85-23; +7-963-031-55-45; e-mail: mkinev2009@yandex.ru
