Научная статья на тему 'Разработка методики количественного определения тауфона (таурина)'

Разработка методики количественного определения тауфона (таурина) Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
1404
350
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ТАУРИН / ТАУФОН / СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ / НИНГИДРИН / ОЦЕНКА КАЧЕСТВА / ВАЛИДАЦИЯ / TAURIN / TAUFONUM / SPECTROPHOTOMETRY / NINHYDRIN / QUALITY EVELUATION / VALIDATION

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Ярыгина Татьяна Ивановна

Разработана и валидирована методика количественного определения 4% раствора тауфона (таурина) спектрофотометрическим методом в видимой области спектра на основе реакции с нингидрином.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Ярыгина Татьяна Ивановна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

The development of the technology of quantitative identification of taufonum (taurin)

There was developed and validated the technology of quantitative identification of 4% solution of taufonum (taurin) with the use of spectrophotometric method of visible region based on reaction with ninhydrin.

Текст научной работы на тему «Разработка методики количественного определения тауфона (таурина)»

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТАУФОНА (ТАУРИНА)

Т.И. Ярыгина

Кафедра фармацевтической химии Факультет очного обучения Пермская государственная фармацевтическая академия ул. Полевая, 2, Пермь, Россия, 614990

Разработана и валидирована методика количественного определения 4% раствора тауфона (таурина) спектрофотометрическим методом в видимой области спектра на основе реакции с нин-гидрином.

Ключевые слова: таурин, тауфон, спектрофотометрия, нингидрин, оценка качества, валидация.

Таурин является серосодержащей аминокислотой, образующейся в организме в процессе превращения цистеина. Характерной особенностью таурина является способность стимулировать репаративные процессы при дистрофических нарушениях сетчатки и травматических поражениях тканей глаза. Для медицинского применения таурин выпускается в виде 4% водного раствора тауфона. Для количественного определения субстанции и раствора тауфона Г осударственной Фармакопеей принят метод формолового титрования (метод Серенсена) [1]. Недостаток методики — невысокая точность, использование токсичного реагента — формальдегида.

Для количественного определения аминокислот используется спектрофото-метрия в видимой области спектра. Оптимальным реагентом для получения окрашенных растворов является нингидрин, так как он общедоступен, не токсичен, устойчив при хранении [2, 3].

Целью нашего исследования является разработка точной, высокочувствительной, простой методики количественного определения 4% раствора тауфона (таурина) на основе реакции с нингидрином.

Сняты спектры поглощения продукта реакции тауфон — нингидрин, полученного при различных значениях pH, в интервале длин волн от 350 до 700 нм на спектрофотометре КФК-3-01. Реакция среды создавалась с помощью фосфатных буферных растворов (в интервале pH 6,0—7,8). Спектры характеризуются двумя четко выраженными максимумами поглощения при длине волны 400 ± 2 нм и 568 ± 2 нм и одним минимумом, лежащем в области 455—465 нм. Положение максимумов поглощения практически не зависит от рН буферного раствора и концентрации тауфона. Реакция среды существенно влияет на интенсивность поглощения, максимальная оптическая плотность достигается при pH 7,2.

Исследовано влияние восстановителя на интенсивность поглощения продукта реакции тауфон-нингидрин. В качестве восстановителя использовали аскорбиновую кислоту, которая является наиболее доступным и нетоксичным реагентом. В присутствии аскорбиновой кислоты интенсивность поглощения продукта реакции тауфона с нингидрином увеличилась на 30%.

Проведена валидация разработанной методики по показателям линейность, повторяемость (сходимость) и правильность. График зависимости оптической плотности от концентрации имеет линейный характер в пределах концентраций тауфона от 1,0 до 8,0 мкг/мл. При проведении реакции в присутствии кислоты аскорбиновой зависимость приобретает прямолинейный характер (коэффициент корреляции 0,999). Предел обнаружения составляет 0,191 мкг/мл.

Повторяемость (сходимость) устанавливали по результатам 6 параллельных определений. Оценка повторяемости (сходимости) показала, что относительная ошибка результата среднего результата не превышает ±0,958%.

Оценка правильности результатов осуществлялась путем статистической обработки выборок, полученных в ходе количественного анализа исследуемого вещества в модельных пробах на трех уровнях концентрации в пределах рекомендуемой аналитической области методики (80, 100, 120% от количества, принятого за 100% — 0,05 г). Концентрация тауфона в спектрофотометрируемом растворе составляла соответственно 2,4, 3,0 и 3,6 мкг/мл. По полученным данным построен график зависимости оптической плотности от концентрации тауфона (рис.). Линия тренда пересекает ось «Оптическая плотность» в точке 0, что свидетельствует о правильности разработанной методики.

А

С, мкг/мл

Рис. Зависимость оптической плотности от концентрации тауфона

На основании проведенных исследований разработана методика спектрофотометрического определения тауфона.

Методика. 1 мл 4% раствора тауфона помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем колбы водой до метки и перемешивают (раствор А). 1,5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 4 мл фосфатного буферного раствора с рН 7,2, 2 мл 1% раствора нингидрина в спирте этиловом 95% и 2 мл 0,05% водного раствора кислоты аскорбиновой. Содержимое колбы нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин.; быстро охлаждают, доводят объем раствора в колбе водой до метки и перемешивают. У полученного раствора измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 568 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора срав-

нения используют контрольный опыт: в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,5 мл воды и все реагенты, указанные в основной методике; далее поступают, как указано в методике.

Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО) тауфона. Около 0,05 г (точная навеска) тауфона, отвечающего требованиям НД, помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 50 мл воды, доводят объем колбы водой до метки и перемешивают (раствор Б). 1,5 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и далее поступают, как указано в методике. Содержание тауфона (Х) г в 1 мл раствора вычисляют по формуле:

X _ A ■ a0 ■ 200 100 1,5 _ A ■ a0 ■ 0,8 A0 ■ a-1,5 ■ 250 ■ 100 A0 ■ a ’

где А — оптическая плотность исследуемого раствора; А0 — оптическая плотность раствора РСО; а — навеска лекарственного препарата, мл; — навеска РСО, г.

Разработанная методика апробирована на модельном 4% растворе тауфона. Результаты анализа приведены в таблице.

Таблица

Содержание тауфона в 4% модельном растворе

Навеска А Навеска А0 Определено Метрологические

(объем) РСО, г тауфона, г/мл данные

модельного

раствора, мл

1,00 0,407 0,410 0,412 0,412 0,414 0,0500 0,410 0,0397 0,0400 0,0402 0,0402 0,0404 Х = 0,0401 средн в = 0,000265 Бх = 0,000120 средн ДХ = 0,000737 ДХсредн = 0,000329 е = ±1,84% е = ±0,82% средн

Методика дает точные результаты, проста в исполнении, не требует дорогостоящих, токсичных реагентов, обладает высокой чувствительностью, может быть использована для стандартизации лекарственного препарата (4% раствор тауфона).

ЛИТЕРАТУРА

[1] ФС 42-2852-97. Раствор тауфона 4%.

[2] Ярыгина Т.И., Захаров А.В., Дубовик В.А. Способ количественного определения алифатических аминокислот // Патент № 2167410, Россия, заявл. 03.08.1999. — Перм. Гос. Фармац. акад. — № 99116880; опубл. 20.05.01; приор. 03.08.1999. — 3 с.

[3] Ярыгина Т.И., Простолупова А.В., Вдовина Г.П. Спектрофотометрическое определение калия аспарагината // Фармация. — 2009. — № 6. — С. 16—18.

THE DEVELOPMENT OF THE TECHNOLOGY OF QUANTITATIVE IDENTIFICATION OF TAUFONUM (TAURIN)

T.I. Yarygina

Chair of pharmaceutical chemistry of full-time department Perm state pharmaceutical academy Polevaya str., 2, Perm, Russia, 614990

There was developed and validated the technology of quantitative identification of 4% solution of taufonum (taurin) with the use of spectrophotometric method of visible region based on reaction with ninhydrin.

Key words: taurin, taufonum, spectrophotometry, ninhydrin, quality eveluation, validation.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.