CC BY
115
PH ARM AC OTHER APE UTTC EFFECTIVENESS OF THE COMPLEX VEGETABLE PHTTOMEANS
"ALCOPHOB" TN ETHANOL-TNJURED LTVER
Zh.B. Dashinamzhilov, A.A. Oil, S.M. Nikolaev
(Institute of General and Experimental Biology, Siberian Division, Russian Academy of Sciences, Ulan-Ude)
The hepatoproteetive and antioxidant action of the complex vegetable phitomeans "aleophob" is experimentally shown in hepatitis, caused by ethanol. It is revealed, that the course introduction of decoction of "aleophob" inhibites processes of lipid peroxidation, stimulates ehologenie and eholagogie functions of liver, contributes to activation of intracellular regenerative processes and normalizes morphofunetional status of the liver.
Литература
1.Варабой В.А. Биологичсскос дсйсчвис расчичсль-ных фенольных соединений. - Киев, 1976. - 260 с.
2. Варабой В.А. Ан і иоксиданч ы и здоровье // Валсо-логия: диагностика, срсдсчва и Пракчика обеспечен ния здоровья. -СПб., 1993. -С.107-1 14,
3. Блюгср А.Ф., Майоре А.Я. Современное сосчоянис проблемы кле ї очной и субклсчочной экспсримсн-чальной пачологии печени // Клсчочная и субклс-чочная экспериментальная пачология печени, - Рига, 1982. -С.5-7.
4. Бобснко Г.А., Гайнадкий М.Н. Определение ак-чивносчи качалазы в эричроцичах и сыворочкс крови йодмсчричсским мечодом // Лаб. дело. - 1976. -№3. - С. 157-158.
5. Государсчвенная фармакопея СССР: вып. 2. Общие меч оды анализа. Лскарсч венное расчичсльнос сырье. М.З. СССР. - 11-е изд., доп. - М: Медицина, 1 990.-400 с.
6. Мансурова И.Д., Олимова С.О. Акчивносчь микро-сомальной эчанолокисляюшсй сисчсмы при алкогольной инчоксикации // Экспсримснчальная гспа-чология. - Рига: Зиначнс, 1985. - С.41.
7. Николаев С.М. Экспсримснчальная фармакочера-пия анчиоксиданчами повреждений печени // Фар-макол. и чоксикол. - 1983. - №1 - С.79-81.
8. Николаев С.М. Расчичсльныс лскарсч венные препараты при повреждениях гспачобилиарной сисчс= мы. - Новосибирск: Наука, 1992. - 153 с.
9. Счальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Мсчод определения малонового диальдегида с помощью чиобарби-чуровой кисло ї ы // Современные меч оды в биохимии. - М„ 1977. - С.66-68.
10. Тсмирбулачов Р.А., Селезнев И.И. Мсчод повышения инчснсивносчи свободнорадикального окисления липидсодсржащих компоненчов крови и его диагносчичсскос значение // Лаб. дело. - 1981. -№4, - С.209-21 1.
11. Чсвари С., Чаба И., Ссксй И. Роль супсроксиддис-мучазы в окисличсльных процессах клечки и мсчод определения сс в биологических мачериалах // Лаб. дело. - 1985. -№11. -С.678-681.
12. Srccjayan Nair, Rao Mysore N.A. Free radical scavenging activity ofcurcuminoids // Arzncim. - I'orsch. -1996. - Vol.46, N.2 - P.169-171.
О ЮГДУРОВА Е.Д., НИКОЛАЕВА Г.Г., НАГАСЛАЕВА Л.А., НИКОЛАЕВ С.М., МАРКАРЯН А.А. -
МЕТОДИКА УФ-СИЕКТРОФОТОМЕТРИЯ В КОЛИЧЕСТВЕННОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ЧАЕ " БАЙКАЛ ЬСКИЙ-6"
Е.Д. Югдурова, Г.Г. Николаева, Л.А. Нагаслаева, С.М. Николаев, А.А. Маркарян.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г.Улан-Удэ, директор - чл.-корр. РАН, проф. В.М. Корсунов)
Резюме. Разработана биологически активная добавка к пище в виде чая, для профилактики заболеваний мочевыводящей системы, в состав которой входят официнальные лекарственные растения. Для стандартизации выбрана методика количественного определения суммы фла-новоидов методом дифференциальной спектрофотометрии.
Ключевые слова: УФ-спектрофотометрия, методика количественного определения суммы флавоноидов,"Байкальский" чай.
Поиск и разработка новых эффективных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний ночек, обусловлены широким распространением, особой тяжестью их течения, приводящих к потере трудоспособности населения [3,4,10].
Актуальность разработки лекарственных препаратов из растительного сырья, обладающих малой токсичностью и не оказывающих побочные действия при длительном применении, продиктована многообразием патогенеза заболеваний почек [3]. Для профилактики и лечения заболеваний почек целесообразно создание комплексных фитопрепаратов, обеспечивающих адекватность терапии в соответствии с поливалентным механизмом повреждений почек [8,10]. Заслуживает вни-
мания опыт зарубежных фирм по выпуску лечебных чаев, представляющих собой легкорастворимые в воде комплексы биологически активных соединений из лекарственных растений.
На основании вышеизложенного нами была разработана биологически активная добавка к пище, в виде чая, обладающая противовоспалительной, антимикробной, спазмолитической, диуретической активностью, состоящая из смеси лекарственных растений: травы горца птичьего, листьев брусники обыкновенной, толокнянки обыкновенной и крапивы двудомной, цветков ноготков лекарственных.
В последние годы для вновь создаваемой продукции предъявляется высокая степень стандартизации, как для лекарственных сборов, так и для
чаев [2,7,9]. В связи с этим, нами предложена методика стандартизации сбора, основанная на снек-трофотометричееком определении суммы флаво-ноидов, поскольку флавоноиды являются доминирующей группой биологически активных веществ, входящего в состав сбора, во многом обуславливая их суммарный фармакологический эффект [1].
Материалы и методы Объектом для исследования служили образцы растений: листья брусники обыкновенной, крапивы двудомной и толокнянки обыкновенной, трава горца птичьего, цветки календулы лекарственной. Листья, цветки и траву собирали в период цветения растений.
Высушенное воздушным способом сырье, измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 2-7 мм. Для исследования использовали воздушно-сухое сырье с содержанием влаги от 9,06 до 12,00%. Сгущение полученных извлечений на стадии экспериментальных исследований проводилось на вакуум-вынарном ротационном испарителе марки ИРМ-1.
Исследование качественного состава проводили методом одномерной и двумерной хроматографии на бумаге марки "Ленинградская-М", Р1Ч-16, Р1Ч-13 (Германия) и пластинках "Сорбил -УФ-254" в системах растворителей:
1. н-бутанол-укеуеная кислота- вода (4:1:2);
2. уксусная кислота 15%;
3. электронные спектры соединений в УФ- и видимой областях записывали на приборах СФ-26 (Россия), иУ-УШ (Германия) и ННаеЫ (Яно-ния) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Для регистрации УФ-енектров исследуемых
веществ готовили 1-10% растворы в абсолютном этиловом спирте.
При разработке методик количественного определения были использованы хроматографически чистые вещества - стандарты: рутин-стандарт (ФС 42 -2508-87, ВИЛР).
Разработке методики количественного определения предшествовала работа но изучению поглощений в УФ-облаети спектра водного и водноспиртового извлечений.
Для этого были приготовлены: водное и вод-но-ениртовое извлечение но следующей методике: Около 10,0 г воздушно-сухого сырья чая "Бай-кальекий-6" помещают в колбу объёмом 200 мл, прибавляют 70 мл 70%, этилового спирта или 70 мл воды очищенной, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания водной или водно-спиртовой смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр и объём доводят соответствующим растворителем до метки (раствор А).
1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50,0 мл, доводят соответствующим растворителем до метки и перемешивают.
Спектр поглощения полученного раствора снимают в диапазоне длин волн 210-400 нм на саморегистрирующем спектрофотометре ГЕЛИОС
(ТОи) в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно снимают УФ спектры раствора РСО рутина в 70% этиловом спирте.
Для приготовления рабочих стандартных образцов: 0,05 г (точная навеска) РСО рутина, помещают мерные колбы объемом 100 мл, прибавляют 50 мл 70% спирта этилового и перемешивают до растворения рутина и доводят до метки тем же растворителем.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу объёмом 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта, перемешивают и доводят тем же растворителем до метки.
Результаты и обсуждение Для разработки методики количественного определения нами проведена работа но изучению поглощений в УФ-облаети спектра водного и вод-но-ениртового извлечений, полученных вышеописанными методами.
Результаты проведенных исследований приведены в таблице 1, и на рисунках 1 и 2.
Согласно полученным данным, приведенным в таблице 1 и рисунках 1 и 2 можно сделать следующие выводы, что спектры поглощения водного извлечения и извлечения 70 % этанолом отличаются наличием максимума поглощения при длине волны 268 нм.
Таблица 1.
Результаты спектрофотометрического исследования водно-спиртового и водного извлечений чая "Байкальский-6"
УФ-енектры поглощения Максимумы, нм Идентифи- цировано
Извлеч. 70% этанолом 282 нм
Водное извлечение 268 нм 283нм
Рутина 256 нм 359 нм 258 нм 290 нм 358 нм
№п А
268.00 0,386
283.00 0,392
Рис. 1. УФ-сискчры поглощения водного извлечения чая "Байкальский-6"
Наличие полос поглощения при 250-290 и 320380 нм характерны для соединений флавонов и флавонолов [5]. Следовательно можно сделать вывод, что в водном и водно-спиртовом извлечениях из чая "Байкальский-6" обнаружены флавоноид-ные вещества и фенолкарбоновые кислоты, что
согласуется с данными исследовании методом хроматографии в тонком слое сорбента.
Ыт
281,00
А
0,499
Рис,2, УФ - спектры поглощения извлечения из чая Байкальского 70% спиртом
В целях унификации методики количественного определения суммы флавоноидов, выбран в качестве стандартного вещества - рутин, как доминирующий компонент,
В основу разрабатываемой методики положен спектрофотометрический метод после реакции комплексообразования суммы флавоноидов со спиртовым раствором хлористого алюминия [5],
” /
N111
354,51
413,00
А
0.009
0,500
Рис.З. Дифференциальные систры поглощения спиртового извлечения и сіандаріного рас і вора: 1 - РСО ручина с алюминия хлоридом; 2 - исследуемого рас і вора с алюминия хлоридом
При образовании комплекса наблюдается батохромний сдвиг 1 полосы поглощения флавоноидов от 300-350 нм до 380-400 нм. Эта область достаточно удалена от спектров поглощения других фенольных соединений, содержащихся в исходном сырье. Чтобы исключить влияние сопутствующих окрашенных веществ, входящих в состав испытуемого чая, используется метод дифференциальной спектрофотометрии: раствор сравнения содержит те же компоненты, что и испытуемый, за исключением хлорида алюминия, а спектр приобретает четкий вид с ясно выраженным максимумом поглощения (рис.З),
Методика количественного определения суммы
флавоноидов методом спектрофотометрии Сырье измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм (ТУ 23,2,2068-89),
Около 1,0000 г (точная навеска) измельченного сырья пометают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 60% этилового спирта, Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем извлечение процеживают через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл, избегая попадания частиц сырья на вату. Вату помещают в колбу для экстрагирования, прибавляют 30 мл 60% этилового спирта и экстрагируют на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Экстракцию повторяют в тех же условиях дважды, процеживая извлечение в ту же мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводят 60% этиловым спиртом до метки и перемешивают (испытуемый раствор),
В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора, прибавляют
2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% этиловом спирте и доводят объем тем же спиртом до метки, перемешивают и через 40 мин, измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 413 нм в кювете с толщиной слоя жидкости 10 см,
В качестве раствора сравнения используют раствор: 1 мл испытуемого раствора; 0,1 мл разведенной уксусной кислоты доводят 95% этиловым спиртом до метки в колбе вместимостью 25 мл.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
Р* -т-100-100-100 ~ Б-ш* -ЮО-(ЮО-\¥)' где Б* - оптическая плотность испытуемого раствора; Б - оптическая плотность РСО рутина; т* - масса сырья в граммах; т - масса РСО рутина в граммах; XV - потеря в массе при высушивании сырья в процентах. Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы флавоноидов представлена в таблице 2,
Таблица 2
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы флавоноидов в чае в пересчете на РСО рутина
Ї X в Р, % *(Р,0 Дх Е, %
10 1,45 0,02 95 2,78 0,024 ±0,76
Как видно из данных таблицы, относительная ошибка единичного определения с 95% вероятностью составляет: +0,76, Отсутствие систематиче-
ской ошибки м с і о д и к и доказано при помощи опытов с добавками при помощи ГСО рутина в навсску сырья. Результаты анализа прсдставлсны в і аблицс 3.
На основании "опыюв с добавками" можно сделать вывод, что относительная ошибка опыта находится в пределах случайной ошибки предложенной методики, 410 свидстсльствусі об отсутствии систематической ошибки при определении суммы флавоноидов в час в пересчете на РСО рут и на.
Таблица 3
Результаты опытов с добавками РСО рутина
№ Содержание суммы флао-ноидов в час, мг Добавлено РСО рут и на, мг Должно быть, мг Найдено, мг Абсо- лютная ошибка, мг От нос и-тсльная ошибка,
1. 1,4 од 1,5 1,49 -0,01 -0,69
2, 1,4 0,2 1,6 1,59 -0,01 -0,62
3, 1,4 0,3 1,7 1,71 -0,10 +0,59
WORKING OUT THE METHOD OF QUANTATTVE DETERMINATION OF THE SUM OF PHLAVANOID BY U V-S PECT RO PHOTOMETR Y IN THE TEA "BA I K ALSK Y-6"
E.D. Yugdurova, G.G. Nikolaeva, L.A. Nagaslacva, S.M. Nikolaev, A.A. Markaryan
(Institute of General and Experimental Biology, Sub. Dcp. of PAS. Ulan-Ude-City)
The tea, the biological activc additive to the food was worked out for preventive Iralnicnl of diseases of urogenital system. The method of qualitative determination of the sum of flavanoid by UV-spcctrophotomctry was choscn for standartizalion.
Литература
1. Азизов И.К. Анализ и контроль качества лекарственных веществ с использованием спектральных методов анализа в видимой области спектра. -Дисс. на соиск. уч. стсп. докт. фарм. наук. - М., 1993.-222 с.
2. Акашкина Л.В., Российская Г.И., Лякина М.Н. Разработка и стандартизация фитопрепаратов // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения / Матер. 2-го Мсждунар. съезда, Санкт-Петербург - Валаам, 29 июня-2 июля.
3. Борисов И.А. Пиелонефрит // Нефрология / Под. ред. И.И, Тарссва, - М. - 2000. - С.383-400.
4. Всльтишсв ЮЛ;., Юрьева Э.А., Баландина И.К.
Хронический Пиелонефрит у детей. - М., 1980. -
С.32-33.
5. Ермакова В.А., Самылина И.А., Баландина И.А, Вопросы стандартизации лекарственного растительного сырья // Лекарственные растения ботанического сада / Матер, тез. науч. конф., поев. 50-лс-тию ботанического сада ММА им. И.М. Сеченова. - М.: Издательский дом "Русский врач". - 1996.
6. Здоровье населения России и деятельность учреждений здравоохранения (Статистический справочник). - М„ 1995; 1999; 2000.
7. Ладыгина И.Я., Самылина И.А. Роль нормативнотехнической документации в повышении качества лекарственного растительного сырья // Сб. научн. трудов "Актуальные проблемы современной фармации". - М „ 1996. -С.П 9-1 22.
8. Разработка новых нсфрозашитных препаратов на основе тибетской рецептуры // Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты. -М., 1994. - С.190-191. (Шантанова Л.Н., Николаев С.М., Глызин В.И., Мондодосв А.Г., Ха-масв Б.И.).
9. Самылина И.А.. Ермакова В.А. Современное со-
стояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья // Химико-фармацсв-тичсский вестник. - М: Информация. - 1996. -
№6. - С. 19-20.
10. Ужсгов Г.Н. Здоровье мочеполовой системы. - М.: Книжный дом "АНС", 1999. - С.7-8.
