CC BY
21
клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(9) doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
же знает примеры самоотверженного изучения инфекционных болезней, а именно эксперименты по самозаражению орнитоза. Профессор А.М. Минеев в рамках проведения диссертационного исследования в 1963 г. с помощью такого опыта доказал возможность заражения человека Chlamydia psittaci пероральным путем.
Таким образом, имеются основания полагать, что научные данные в области эпидемиологии и профилактики многих инфекционных болезней, существенно обогатились информацией, которая была получена по результатам опытов самозаражения. Проведенная историко-эпидемиологическая оценка экспериментов по самозаражению позволяет говорить об их многогранном значении. Прежде всего, бесспорна их роль в научно-медицинском отношении: установление и доказательство этиологии заболевания (М.С. Балаян, B. Marshall и др.), изучение свойств возбудителя (Ф.Ф. Талызин, А.Н. Брудастов), эпидемиологических характеристик заболеваний, классификация инфекционных болезней (D.A. Carrion, С.С. Андреевский), разработка и оценка эффективности мер профилактики (Д.С. Самойлович, R. Desgenettes и др.). Особо следует подчеркнуть педагогическое и социальное значение результатов и последствий опытов самозаражения, поставленных учеными и рядовыми врачами.
Ж.Ю. Сапожкова. Диагностические возможности цитологического исследования инфекционных патогенов в осадке эякулята. ГК Медхолдинг, Москва
Исследование классического биоматериала - уретрального отделяемого, секрета предстательной железы, первой порции мочи - у мужчин с урогенитальными жалобами часто остаются без выявления патологии. Как следствие этого - увеличение числа хронических форм заболеваний со стертой клинической картиной. В начале 2000-х годов цитологическая диагностика осадка эякулята стала приобретать клиническое признание. Но массовое использование в практике КДЛ было лимитировано ввиду отсутствия единого комплексного решения. Современной тенденцией является использование VisionCyto®SpermSediment (VC®SS) - системы макроскопического исследования эякулята и микроскопического анализа его клеток, нехарактерных для нормальной спермы, появление которых связно с патологическим процессом урогенитального тракта. За основу системы взят уникальный алгоритм VisionSpermSediment (VSS), благодаря которому структурированы все этапы цитологического исследования анализа осадка эякулята. В алгоритме реализована математическая модель описания микроскопической картины с учетом диагностической ценности признаков найденных клеток.
В период 2010-2015 гг. у 787 мужчин двух частных клиник г. Москвы был исследован осадок спермы с помощью VC®SS. Все пациенты имели клинические жалобы, не позволяющие исключить урогенитальные инфекции. Одновременно было проведено тестирование цельного эякулята, секрета предстательной железы, уретрального отделяемого и первой порции мочи микробиологическим методом, световой микроскопией окрашенных по Маю-Грюнвальду-Гимзе образцов и полимеразной цепной реакцией (ПЦР).
У 98% больных осадок спермы был представлен нетипичной для семенной жидкости микробиотой: Gardnerella vaginalis, Bacteroides, Peptostreptococcus, Mobiluncus, элементами гриба рода Candida, стрептококками, стафилококками. В 25% случаев были обнаружены простейшие: Entamoeba histolytica, Lamblia (Giardia) intestinalis, различные морфотипы Trichomonas vaginalis. В 47% случаев выявлены клетки с признаками папилломавирусной (ВПЧ), цитомега-ловирусной (ЦМВ) инфекции, эпителиальные включения, морфологически сходные с хламидийными, многоядерные клетки, пораженные Herpes simplex, клетки типа инородных тел, дегенеративно измененный эпителий простатической
части уретры и т. д. Диагностической информации, полученной другими методами и в другом биологическом материале у этой же группы пациентов, было не достаточно для уверенного суждения о характере процесса и назначения таргетной терапии. Точность алгоритма VSS оценивали путем расчета значений индикатора риска у одного и того же пациента, полученных из нескольких принципиально разных микроскопических изображений. Согласно оценке по методу Корнфель-да, погрешность определения показателя риска ошибочного заключения о наличии инфекционного процесса, связанного с T. vaginalis составила 0,6-1,9%. Это говорит о достаточной для постановки первичного диагноза достоверности результата исследования.
В настоящее время необходимость применения VC®SS у урологических пациентов доказана благодаря уникальному алгоритму, созданному на богатой междисциплинарной практике. Система VC®SS зарекомендовала себя как мощный диагностический инструмент для снижения хронических форм инфекций у мужчин при условии тесного сотрудничества высокопрофессиональных цитологов и урологов.
Н.С. Саркисян, Д.Г. Пономаренко, Е.Л. Ракитина, О.В. Логвиненко, М.В. Костюченко. Разработка метода количественной оценки степени IgE-опосредованной специфической сенсибилизации при бруцеллезе. ФКУЗ «Ставропольский противочумный институт» Роспотребнадзора, Ставрополь
Патогенетическая особенность бруцеллеза - формирование реакций замедленной и немедленной гиперчувствительности. К настоящему времени не предложено информативного методического подхода для оценки интенсивности IgE-опосредованной сенсибилизации при бруцеллезе. Известно, что в развитии гиперчувствительности немедленного типа ведущая роль отводится базофилам. Базофилы обладают способностью проявлять антигенреактивность ex vivo, соответственно эту популяцию лейкоцитов можно использовать для клеточных тестов in vitro. Наиболее информативные рецепторы активации базофилов - внутриклеточные антигены CD63, после стимуляции аллергеном происходит дегрануля-ция и CD63 экспрессируются на поверхности клетки.
Цель работы - разработка метода количественной оценки интенсивности IgE-опосредованной специфической сенсибилизации при бруцеллезе.
Исследован клинический материал от 209 человек с диагнозом «Острый бруцеллез» и 19 добровольцев иммунизированных против бруцеллеза (на 30-35 сутки после вакцинации), Вместе с тем обследовано 93 человека, не переболевших бруцеллезом и не вакцинированных против этой инфекции: 13 беременных (31-33 неделя беременности), 40 добровольцев в возрасте от 2-х до 67 лет с аллергией в анамнезе, 40 человек, не имевших в анамнезе симптомов аллергии.
Наличие и интенсивность IgE-зависимой сенсибилизации к возбудителю бруцеллеза оценивали с помощью теста активации базофилов, используя наборы Flow CAST® («Buhlmann Laboratories AG», Швейцария), в качестве специфического антигена применяли бруцеллин (ФГУП НПО «Микроген», Россия).
Результаты исследования. Для оптимизации методики постановки реакции эмпирически определено количество бру-целлина необходимое для специфической активации клеток. Испытывали следующие дозировки аллергена: 10, 25, 50, 100 и 200 мкл. Стабильно воспроизводимый результат, у 100% больных бруцеллезом и вакцинированных против бруцеллеза, получен при использовании 50 мкл аллергена. При in vitro стимуляции бруцеллином базофилов крови обследуемых контрольной группы, беременных, лиц с аллергиями вне зависимости от количества аллергена полученные результаты не превышали 5%.
Russian clinical laboratory diagnostics. 2016; 61(9)
doi 10.18821/0869-2084-2016-61-9
Диагностическую чувствительность метода оценивали путем определения количества положительных результатов аллерготестирования in vitro с бруцеллином среди лиц с клинически и лабораторно подтвержденным диагнозом «Острый бруцеллез». Из 209 больных острым бруцеллезом со средней степенью тяжести течения, в фазе компенсации, у 202 обследованных получен положительный результат теста - активировались бруцеллином 5,1% и более базофилов, соответственно чувствительность метода - 96,6%,
Диагностическую специфичность определяли при подсчете положительных результатов аллерготестирования in vitro с бруцеллином у лиц не больных, не переболевших бруцеллезом и не вакцинированных против этой инфекции. Из 93 обследованных, положительный результат аллерготестирования с бруцеллином in vitro получен у 4 лиц (4,3%), имевших в анамнезе аллергию, соответственно специфичность метода - 95,7%.
Предложенный методический подход для количественной оценки интенсивности IgE-зависимой специфической сенсибилизации организма при бруцеллезе, можно использовать для неинвазивной экспресс-аллергодиагностики бруцеллеза.
А.В. Сергеева, А.В. Кочубейник, А.С. Благонравова, О.М. Чеканина. Молекулярно-генетический метод выявления пародонтопатогенных микроорганизмов в практике врача-стоматолога. ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия», Нижний Новгород
По данным ВОЗ, болезни пародонта наряду с кариесом зубов и его осложнениями являются самыми распространенными стоматологическими заболеваниями. Воспалительные заболевания пародонта регистрируются среди различных возрастных группа населения в более чем 80% случаев. В многочисленных научных исследованиях доказано, что в основе патогенеза заболеваний пародонта лежит взаимодействие факторов иммунологической реактивности человека и пародонтопатогенной микрофлоры ротовой полости. К представителям такой микрофлоры, относят представителей с преимущественно анаэробным типом дыхания, которые отличаются высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами по отношению к тканям пародонта. Этиологическими причинами развития заболеваний пародонта являются следующие микроорганизмы: Porphyromonas gingivals, Prevotella intermedia, Fusobacterium species и Treponema denticola (Nonnenmacher, 2004). Кроме того, Aggregatibacter actinomycetemcomitans и Porphyromonas gingivalis относятся к маркерами развития острого пародонтита (Richard J. Lamon, Robert A. Burne, Marilyn S. Lantz, 2010). Так называемый «красный комплекс», состоящий из Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia и Treponema denticola, связан с образованием глубоких кровоточащих десневых карманов (Richard J. Lamon, Robert A. Burne, Marilyn S. Lantz, Donald J. LeBlanc, 2010). Являясь анаэробами, данные микроорганизмы плохо поддаются культивированию, что является одной из проблем их диагностики. Необходимость специального оборудования и питательных сред затрудняет применение бактериологических тестов для выявления данных микроорганизмов. Использование молекулярно-генетического метода исследования позволяет не только быстро идентифицировать микроорганизмы, но и назначить адекватный курс лечения с оценкой его эффективности. Целью нашего исследования явилась оценка уровня распространения па-родонтопатогенных возбудителей среди пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта. На базе проблемной научной лаборатории ПЦР-исследований НИИ профилактической медицины Нижегородской ГМА было обследовано 27 пациентов на наличие пародонтопатогенных микроорганизмов методом ПЦР - RT с помощью набора «Дентоскрин» производства НПФ «Литех», Москва. В качестве материала
для исследования отбиралось содержимое пародонтальных карманов. Установлено, что из 189 исследований положительные результаты на наличие пародонтопатогенных возбудителей в клинически значимой концентрации составили 38,09±11,4%. Из них на группу микроорганизмов, имеющих высокий риск в отношении развития заболеваний пародон-та (Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Treponema denticola) приходилось 22,75±12,8%, а на группу с умеренным риском (Fusobacterium nucleatum , Prevotella intermedia, Tannerella forsythia) - 15,34%. Результаты ниже пороговых значений или отсутствие выявления микроорганизмов составили 61,91±8,98%. Процентное распределение возбудителей из группы высокого риска было следующим: Porphyromo-nas endodontalis и Treponema denticola - соответственно по 27,78%, Porphyromonas gingivalis - 20,37%, Aggregatibacter actinomycetemcomitans - 3,7%. Среди возбудителей с умеренным риском преобладала Tannerella forsythia - 42,2±19,0%, а частота выявления Fusobacterium nucleatum и Prevotella intermedia составляла по 1,5% соответственно. Таким образом, доля клинически значимых возбудителей в развитии заболеваний пародонта регистрировалась в 38,09% с преобладанием среди них Porphyromonas endodontalis, Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis и Tannerella forsythia.
Среди 27 пациентов с воспалительными изменениями пародонта было установлено, что в 7,4% случаев это была моноинфекция с наличием только Tannerella forsythia. На долю микст-инфекции приходилось 92,6±10,3%. Микробные ассоциации были представлены преимущественно двумя возбудителями (40,74±29,6%), из которых во всех случаях встречалась Tannerella forsythia. На ассоциацию Porphyromonas endodontalis + Tannerella forsythia приходилось 22,2%, на Treponema denticola + Tannerella forsythia - 11,1%, на Porphyromonas gingivalis + Tannerella forsythia - 7,4%. Микст-инфекция с тремя микроорганизмами регистрировалась в 33,3% случаев, из которых в 18,5% она была образована Porphyromonas endodontalis + Treponema denticola + Tan-nerella forsythia. На ассоциацию с четырьмя возбудителями приходилось 14,8%, а с пятью - 3,7%. Пациенты с «красным комплексом» составили 14,8%. Таким образом, выявление у пациентов стоматологической клиники в более чем 90% случаев микробных ассоциаций доказывает, что в основе патогенеза заболеваний пародонта лежит специфическая инфекционная составляющая со сложными метаболическими, иммунологическими и деструктивными явлениями взаимодействия бактерий и организма человека.
Использование метода ПЦР в практике врача-стоматолога позволяет оценить состояние пациента и дать прогноз течения заболевания, а также проводить контроль за эффективностью лечения.
Сергиев В.П., Продеус Т.В., Продеус А.П., Максимова М.С., Грицюк О.В., Волкова В.В. Бластоцисты как возбудители оппортунистической инфекции. 1ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава РФ; 2Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пи-рогова, Москва
Blastocystis spp. - эукариотный паразитический одноклеточный организм - обитатель просвета толстого кишечника человека и многих животных без предпочтения к какому-либо типу хозяина. Среди наиболее значимых дискутируемых биологических свойств Blastocystis spp. следует отметить низкий патогенный потенциал. К настоящему времени бластоцисты рассматриваются как видовой комплекс, состоящий из 13 и более генетически различных субтипов, из которых 9 обнаружены у человека. Известно, что человек одновременно может быть инфицирован различными субтипами паразита (от
