Научная статья на тему 'Разработка и валидация методик количественного определения суммы флавоноидов в сборах № 1 и № 2 для профилактики и лечения отморожений'

Разработка и валидация методик количественного определения суммы флавоноидов в сборах № 1 и № 2 для профилактики и лечения отморожений Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
650
123
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
СБОРЫ / ОТМОРОЖЕНИЯ / КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ / ФЛАВОНОИДЫ / ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Шацких Ал, Киселева Т. Л.

В статье представлены результаты разработки спектрофотометрической методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в Сборах №1 и №2, используемых для профилактики и лечения отморожений. Проведена валидация методик по критериям: линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность. По результатам анализа серийных образцов предложены нормы содержания суммы флавоноидов в препаратах: в Сборе № 1 не менее 2,5%, в Сборе № 2 не менее 2,2%.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Шацких Ал, Киселева Т. Л.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Разработка и валидация методик количественного определения суммы флавоноидов в сборах № 1 и № 2 для профилактики и лечения отморожений»

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ И ФАРМАКОГНОЗИЯ

УДК 615.015.32

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В СБОРАХ № 1 и № 2 ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОТМОРОЖЕНИЙ

АД. ШАЦКИХ1 ТЛ. КИСЕЛЕВА2

1} ГНУ Всероссийский научноисследовательский институт лекарственных и ароматических растений, г. Москва

ч НИЦ НО «Профессиональная ассоциация натуро терапевтов», г. Москва

e-mail: KiselevaTL@yandex.ru

В статье представлены результаты разработки спектрофотометрической методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в Сборах №1 и №2, используемых для профилактики и лечения отморожений. Проведена валидация методик по критериям: линейность, повторяемость, внугрилабораторная воспроизводимость и правильность. По результатам анализа серийных образцов предложены нормы содержания суммы флавоноидов в препаратах: в Сборе № 1 - не менее 2,596, в Сборе № 2 - не менее 2,296.

Ключевые слова: сборы, отморожения, количественное определение, флавоноиды, валидация методик.

В последние годы прослеживается четкая тенденция к увеличению числа пострадавших от холодовой травмы в регионах с умеренным климатом [9, 19]. Несмотря на то, что сегодня патогенез отморожений во многом изучен, клиническая ситуация, связанная с оказанием эффективной помощи пострадавшим, еще далека от совершенства [20].

Основой терапии отморожений в ранние сроки после травмы является введение антиспастических, сосудорасширяющих, антикоагулянтных и других препаратов синтетического происхождения, обладающих выраженными побочными видами действия, в том числе гормональных. Нами разработаны рецептуры двух растительных препаратов - (Сборов № 1 и № 2) для профилактики и лечения отморожений. Доклинические исследования [1-3] подтвердили наличие у них выраженного фригопротекторного эффекта. Составы сборов защищены патентами [17,18].

Важнейшим этапом создания новых препаратов, в том числе растительных, является разработка методов их стандартизации. В качестве одного из критериев оценки качества сборов нами предложено количественное содержание суммы флавоноидов, которые присутствуют во всех ингредиентах сборов, имеют широкий спектр фармакологической активности и во многом обусловливают суммарный терапевтический эффект сборов.

Целью настоящей работы являлась разработка и валидация методик количественного определения суммы флавоноидов в Сборах № 1 и № 2, рекомендуемых для профилактики и лечения отморожений.

В основу разработанных методик положен спектрофотометрический метод после реакции комплексообразования суммы флавоноидов со спиртовым раствором А1С13 [4, ю-12, 15]. В результате образования комплекса наблюдается батохромный сдвиг

ціщ

длинноволновой полосы поглощения флавоноидов до 390-410 нм [4, и, 15]. Эта область достаточно удалена от спектров поглощения других фенольных соединений, содержащихся в исходном сырье (фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества и др.), что практически исключает их влияние на результаты количественного определения флавоноидов [4, и].

Для подбора оптимальных условий извлечения суммы флавоноидов использовали по одному экспериментальному образцу каждого сбора (табл. 1-3: среднее из 5 определений, масса каждой навески 2,5 г, кипящая водяная баня с обратным холодильником).

Таким образом, оптимальными условиями выделения суммы флавоноидов из сборов № 1 и № 2 являются: измельченность сборов 1 и 3 мм соответственно; экстрагент - 40% спирт; соотношение сырья и экстрагента 1:20; двукратная экстракция (по 30 мин.) на кипящей водяной бане с обратным холодильником.

Затем были отработаны условия проведения фотометрической реакции ком-плексообразования суммы флавоноидов водно-спиртовых извлечений из сборов со спиртовым раствором А1С13: область максимального поглощения света комплексом, концентрация и количество спиртового раствора А1С13, необходимые для полного связывания суммы флавоноидов в комплексное соединение, зависимость светопоглоще-ния фотометрируемых соединений от времени [5].

Таблица 1

Влияние концентрации спирта на выход суммы флавоноидов из сборов (измельченность — 3 мм, продолжительность экстракции — 1 час)

Таблица 3

Влияние измельченности сборов на выход суммы флавоноидов при двукратной экстракции

Конц. спирта, 96 Выход суммы флавоноидов из сбора, 96 на абс. сухое сырье

Сбор №1 Сбор №2

40 1,70 2,26

50 1,06 2,07

70 1,34 1,92

Условия экстрагирования Выход суммы флавоноидов из сбора, 96, в пересчете на абс. сухое сырье

Конц. спирта, 96 Измельченность, мм

Сбор №1 Сбор №2

40 1 3,05 2,27

3 1,8о 2,66

5 1,73 1,96

Таблица 2

Влияние продолжительности однократной экстракции и кратности экстрагирования на выход суммы флавоноидов из сборов

Условия экстрагирования Выход суммы флавоноидов из сбора, в 96 на абс. сухое сырье

Кратность экстракции Время экстракции, мин Кол-во 4096 спирта, мл

Сбор № 1 Сбор №2

1-кратная 60 50,0 1,70 2,26

1-кратная 120 50,0 1,72 2.41

2-кратная 30 25,0

30 25,0 1,8о 2,66

Оптическую плотность предложено регистрировать при длине волны 410 нм, а расчет процентного содержания суммы флавоноидов в сборах проводить в пересчете на СО рутина, поскольку области максимального светопоглощения комплекса суммы флавоноидов извлечений из сборов и комплекса СО рутина со спиртовым раствором А1С13 совпадают (рис. 1).

Ьс *ГУ *

Б

0,20

350,00 370,00 390,00 410,00 430,00 450,00 470,00 490,00

^ ^

/

/

/ N

/ \

/

/ / N

А.

----Ряд1

Ряд2

Рис. 1. УФ-спектр продуктов реакции комплексообразования раствора СО рутина (ряд 1) и суммы флавоноидов водно-спиртового извлечения из сбора № 1 (ряд 2) с 3% спиртовым раствором А1С1з

На основании полученных данных для проведения фотометрической реакции в дальнейшем использовали з% спиртовой раствор А1С13

Как видно из данных табл. 5, при использовании 2 мл з% спиртового раствора А1С13 наблюдается наибольшее увеличение значений суммы флавоноидов в обоих сборах.

Для изучения зависимости светопоглощения от времени фотометрической реакции комплексообразования регистрировали оптическую плотность растворов через каждые 5 мин. Установлено, что в течение 30-35 мин. идет процесс образования комплексов, при этом оптическая плотность растет. При дальнейшем наблюдении какого-либо значительного роста оптической плотности не происходит, что соответствует на графиках почти горизонтальным участкам. Поэтому регистрацию оптической плотности предложено осуществлять через 40 мин. после добавления реактива.

Таблица 4 Влияние концентрации спиртового раствора А1С13 на полноту протекания реакции комплексообразования с суммой флавоноидов сборов (средние из 5 определений)

Таблица 5

Влияние количества 3% раствора А1С13 на полноту протекания реакции комплексообразования с суммой флавоноидов сборов

Концентрация раствора АЮ13, % Сумма флавоноидов в сборах, % в пересчете на абс. сухое сырье

Сбор № 1 Сбор № 2

1 2,57 2,08

2 2,58 2Д7

3 3,05 2,66

Кол-во;]% раствора А1С13, мл Сумма флавоноидов в сборах, в % на абс. сухое сырье

Сбор №1 Сбор №2

1 3,04 2,60

2 3,20 2,66

3 ЗД9 2,55

4 ЗД9 2,51

Методика количественного определения содержания суммы флавоноидов в сборах. Около 2,5 г (точная навеска) Сбора № 1 или Сбора № 2, измельченного до размера частиц 1 или 3 мм, соответственно, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 200 мл, прибавляют мерной пипеткой 25 мл 40% спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Горячее извлечение перемешивают и фильтруют через фильтр «Красная лента», избегая попадания сырья на фильтр, в мерную колбу, вместимостью 50 мл. Экстракцию повторяют в тех же условиях. Горячее извлечение перемешивают и филь-

труют в ту же мерную колбу через тот же фильтр. Затем доводят объем раствора в мерной колбе до метки 40% спиртом, перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А, прибавляют

2 мл 3 % спиртового раствора А1С13, доводят объем колбы 95% спиртом до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр «Красная лента». В качестве раствора сравнения используют смесь 1 мл раствора А, помещенного в мерную колбу вместимостью 25 мл, 2-3 капель кислоты уксусной разведенной и доведенной 95% спиртом до метки. Оптическую плотность полученных растворов измеряют через 40 минут на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя ю мм в области максимума при длине волны 410 нм. Параллельно, в указанных выше условиях, измеряют оптическую плотность 0,05% раствора СО рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов (X), в процентах в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье, рассчитывают по формуле:

= Рхт0 х 1x50x25x100 у ^>

£>0 х 100 х 25 х »? х 1 х (100 - IV) где В - оптическая плотность испытуемого раствора; В 0 - оптическая плотность раствора СО рутина; т - масса навески сбора, г; т 0 - масса навески СО рутина, г; IV -потеря в массе при высушивании сбора, %.

Валидацию методик проводили по следующим критериям: линейность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и правильность [6-8,13,14,16].

Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций рутина — 30%, 50%, 100%, 150%, 200%, от нормируемого значения. Значение оптической плотности (А) рассчитывалось как среднее из трех измерений.

Таблица 6

Результаты проверки линейности методик

№ измерения Содержание, % от нормируемого значения (около) Концентрация стандартного вещества (рутина), мкг/мл Аналитический отклик (оптическая плотность)

Сбор №1

1 30 3,6 0,1б1

2 50 6 0,243

3 100 12 0,577

4 150 18 0,763

5 200 24 0,993

Сбор №2

1 30 3,6 ОД57

2 50 6 0,233

3 100 12 0,545

4 150 18 0,759

5 200 24 0,982

Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции, и если его величина близка единице, то совокупность данных можно описать прямой линией. Величина коэффициента корреляции должна быть не менее 0,995.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Коэффициент корреляции составил 0,9951 (для Сбора № 1) и 0,9973 (для Сбора № 2) (табл. 6, рис. 2, з).

Повторяемость методик определяли на одном образце каждого сбора в 6 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов и оборудования. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно превышать ю%. Он составил

1,28% (для Сбора № 1) и 1,42% (для Сбора № 2) (табл. 7), что свидетельствует о прецизионности методик в условиях повторяемости.

График зависимости оптической плотности от концентрации рутина

Концентрация рутина, мкг.'мл

Рис. 2. График зависимости оптической плотности спиртовых извлечений Сбора № 1 от концентрации рутина

График зависимости оптической плотности от концентрации рутина

Концентрация рутина, мкг'мл

Рис. 3. График зависимости оптической плотности спиртовых извлечений Сбора № 2 от концентрации рутина

2.0

1.5

0.5

00

100

400 500

УУа>е1епд1И (пт)

600

2.0

1.5

0.5

400 500

<пт>

600

Рис. 4. Спектры спиртовых извлечений из Сбора № 1

1 - спектр спиртового извлечения из Сбора № 1,

2 - спектр спиртового извлечения из Сбора № 1 с добавлением 2% спиртового раствора А1С13,

3 - спектр комплексов рутина А1С13 в спиртовых извлечениях Сбора № 1, 4 - спектр спиртового раствора СО рутина, 5 - спектр спиртового раствора СО рутина с добавлением А1С13. По оси абсцисс - длина волны, нм; по оси ординат -

оптическая плотность, ед.

Рис. 5. Спектры спиртовых извлечений из Сбора № 2

1 - спектр спиртового извлечения из Сбора № 2,

2 - спектр спиртового извлечения из Сбора № 2 с добавлением 2% спиртового раствора А1С13,

3 - спектр комплексов рутина с А1С13 в спиртовых извлечениях Сбора № 1, 4 - спектр спиртового раствора СО рутина, 5 - спектр спиртового раствора СО рутина с добавлением А1С13. По оси абсцисс - длина волны, нм; по оси ординат -

оптическая плотность, ед.

Определение внутрилабораторной воспроизводимости методик проводили два инженера-химика на з образцах в трех повторностях (табл. 8). Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое не должно было превышать 15%. Он составил 3,88% (для Сбора № 1) и 2,57% (для Сбора № 2), что указывает на прецизионности методик в условиях воспроизводимости.

Правильность методик устанавливали путем измерения количественного содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин в растворах, полученных путем добавления необходимого количества стандарта к исследуемому раствору для концентраций 125%, 151%, 177%; 202% (для Сбора № 1) и 125%, 147%, 175%> 200% (для Сбора № 2) (четыре уровня). Критерием приемлемости являлся средний % восстановления при использовании растворов концентраций 125%, 151%, 177%, 202% (для Сбора № 1) и 125 %, 147 %, 175 %, 200 % (для Сбора № 2), скорректированный на 100%, и его средняя величина должна находиться в пределах 100+5 %• Показано, что % восстановления находился для Сбора № 1 в пределах от 99,40% до 103,64%, и его средняя величина составила - 101,07%, а для Сбора № 2 в пределах от 97,52% до 102,37%, и его средняя величина составила - 100,31% (табл. 9).

Таблица 7

Результаты проверки повторяемости методик

Повторность Содержание суммы флаво-ноидов в пересчете на рутин, % Повторность Содержание суммы флаво-ноидов в пересчете на рутин, %

Сбор №1 Сбор №2

1 2,88 1 2,39

2 2,96 2 2,35

3 2,99 3 2,36

4 2,95 4 2,3

5 2,96 5 2,31

6 2,97 6 2,35

Среднее значение 2,95 2,34

Относительное стандартное отклонение (КЭБ), % 1,28 1,42

Результаты проверки воспроизводимости методик

Таблица 8

Повгорносп) Анадишк Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, %

Образец 1 Образец 2 Образец 3

Сбор №1

1 1 2,88 3,оо 2,81

2 1 2,96 3,05 2,99

3 1 2,99 3,01 2,71

4 2 2,95 2,94 2,96

5 2 2,96 2,91 2,95

6 2 2,97 2,99 2,97

Среднее значение 2,95 2,98 2,90

Относительное стандартное отклонение (К81)), % 1,28 1,69 3,88

Сбор №2

1 1 2,39 2,29 2,33

2 1 2,35 2,40 2,39

3 1 2,36 2,33 2,36

4 2 2,30 2,51 2,39

5 2 2,31 2,6 2,45

6 2 2,35 2,34 2,50

Среднее значение 2,34 2,41 2,40

Относительное стандартное отклонение (К81)), 96 1,42 4,97 2,57

На основании полученных результатов данные методики можно считать прошедшими валидацию.

Таблица д

Результаты проверки правильности методик

№№ п/п Найдено, мг Добавлено СО рутина, мг Ожидаемое значение, мг Полученное значение, мг Выход 96

Сбор №1

1 1,4600 0,3750 1,8350 1,8240 99,40

2 1,4600 0,3750 1,8350 1,8655 101,66

3 1,4600 0,3750 1,8350 1,8761 102,24

4 1,4600 0,7500 2,2100 2,2330 101,04

5 1,4600 0,7500 2,2100 2,2345 101,11

6 1,4600 0,7500 2,2100 2,2905 103,64

7 1,4600 1,1250 2,5850 2,6050 100,77

8 1,4600 1,1250 2,5850 2,6045 100,75

9 1,4600 1,1250 2,5850 2,5990 100,54

10 1,4600 1,5000 2,9бОО 2,9650 100,17

її 1,4600 1,5000 2,9бОО 2,9780 100,61

12 1,4600 1,5000 2,9бОО 2,9855 100,86

Среднее значение выхода, 96:101,07

Сбор №2

1 1,1760 0,2940 1,4700 1,4582 99,20

2 1,1760 0,2940 1,4700 1,4790 100,61

3 1,1760 0,2940 1,4700 1,4864 101,12

4 1,1760 0,5880 1,7640 1,7755 100,65

5 1,1760 0,5880 1,7640 1,7562 99,56

6 1,1760 0,5880 1,7640 1,7588 99,71

7 1,1760 0,8820 2,0580 2,0933 101,72

8 1,1760 0,8820 2,0580 2,0433 99,29

9 1,1760 0,8820 2,0580 2,0656 100,37

10 1,1760 1,1760 2,3520 2,3898 101,61

її 1,1760 1,1760 2,3520 2,4078 102,37

12 1,1760 1,1760 2,3520 2,2936 97,52

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Среднее значение выхода, 96:100,31

Анализ опытно-производственных серий сборов показал, что содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин колеблется для Сбора №1 от 2,82% до 3>21%, что позволяет предложить норму содержания БАВ не менее 2,5%, а для Сбора № 2 от 2,47% ДО 2,66%, что позволяет предложить норму содержания флавоноидов не менее 2,2% (табл. ю).

Таблица ю

Результаты определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сборах № 1 и № 2

Опытнопроизводственные серии сборов Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, 96 Опытнопроизводственные серии сборов Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, 96

Сбор № 1 Сбор № 2

0108 2,82 0108 2,53

0208 2,95 0208 2,58

0308 2,94 0308 2,47

0408 2,92 0408 2,62

0508 3,21 0508 2,66

0608 2,99 0608 2,59

Выводы:

1. Разработаны методики количественного спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в Сборах №і и №2.

2. Установлены параметры правильности, повторяемости, внутрилаборатор-ной воспроизводимости и линейности разработанных методик. Предложены нормы содержания суммы флавоноидов в Сборе №і - не менее 2,5% и Сборе №2 - не менее 2,2%.

Литература

1. Алиева, А.А. Сравнительное изучение влияния дексаметазона и фитосборов на гематологические показатели крови крыс при острой Холодовой травме / АЛ. Алиева, М.Ю. Назаренко, Т.Л. Киселева, Н.А. Назаренко // I Российский фитотерапевтический съезд : сб. науч. трудов, г. Москва, 14-16 марта 2008 г. - М.: ФНКЭЦ ТМДЛ Росздрава, 2008. - С. 164-169.

2. Алиева, А.А. Сравнительное изучение влияния дексаметазона и лекарственного сбора на уровень мочевины крови крыс при Холодовой травме / А.А. Алиева, Н.А. Назаренко, ТЛ. Киселева, М.Ю. Назаренко // Экология человека. - 2007. - № 5. - С. 43-46.

3. Алиева, А.А. Изучение влияния фитосборов на рост клеточной культуры почек мыши / АЛ. Алиева, В.П. Пащенко, ТЛ. Киселева, НА. Назаренко // I Российский фитотерапевтический съезд : сб. науч. трудов, г. Москва, 14-16 марта 2008 г. - М. : ФНКЭЦ ТМДЛ Росздрава, 2008.- С. 162-164.

4. Беликов, В.В. Количественное определение основных действующих веществ у видов Hypericum L. / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, Л.В. Шатунова, Н.Т. Колесник, И.И. Баяндина // Растительные ресурсы. - 1990. - Т. 26, вып. 4. - С. 571-578.

5. Булатов, М.И. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа / М.И. Булатов, И.П. Калинкин.- 2-е изд., перераб. и доп. -Л.: Химия, Ленингр. отд., 1968. - 384 с.

6. ГОСТ Р ИСО 5725-1-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 1. Основные положения и определения».

7. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений». - М.: Госстандарт, 28 с.

8. Евдокимова, О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пастушьей сумки / О.В. Евдокимова // Традиционная медицина. -2011. - № 1 (24). - С. 50-53-

д. Гостищев, В.К. Инфекции в хирургии. Рук-во для врачей / В.К. Гостищев. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 768с.

ю. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / М3 СССР. - ll-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

11. Куркин, В.А. Определение флавоноидов в траве чистотела большого / В.А. Куркин, Е.С. Артамонова // Фармация. - 2007. - № 5. - С. 10-12.

12. Куркин, В.А.Вопросы стандартизации сырья и препаратов зверобоя / В.А. Куркин, О.Е. Правдивцева, Л.Н. Зимина // Фармация. - 2007. - № 4. - С. 12-14.

13. Основные принципы проведения валидации на фармацевтическом производстве // под ред. проф. В.В. Береговых. - М.: Русский врач, 2005. - С. 73-97.

14. ОФС 42-0113-09 Валидация аналитических методик.

15. Попов, Д.М. Контроль качества сырья и препаратов пустырника спектрофотометрическим методом / Д.М. Попов, Е.В. Пащинская, Л.И. Коваленко // Фармация. - 1992. - № 4. - С. 27-31.

16. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств / сост.: ВЛ. Ба-гирова, А.И. Гризодуб, Т.Х. Чибиляев и др.; под ред. Н.В. Юргеля и др. - М., 2007. - 48 с..

17. Средство из растительного сырья для профилактики и лечения отморожений / Н.А. Назаренко, ТЛ. Киселева, А.А. Алиева, М.Ю. Назаренко (РФ).- А. с. 2326684; заявл. 26.10.06.; опубл. 20.06.08.

18. Сбор лекарственных растений «Фитоморозко», обладающий фригопротекторным действием / Н.А. Назаренко, ТЛ. Киселева, А.А. Алиева, М.Ю. Назаренко, А.А. Карпеев (РФ).-А. с. 2336896; заявл. 30.11.06.; опубл. 27.10.08.

19. Day, M.W. Frostbite / M.W. Day // Nursing. - 2008. - Jan. - Vol. 38 (1). - P. 72.

20. Keskin, M. Frostbite injuri due to improper usage of an ice pack / M. Keskin, Z. Tosun, A. Duymaz et al. // Ann Plast Surg. - 2005. - Oct. -№ 55 (4). - P. 437-438.

DEVELOPMENT AND VALIDATION OF METHODS FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE SUM OF FLAVONOIDS IN HERDAL DRUG PREPARATIONS №1 AND №2 FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF FROSTDITE

AJI.SHATSKIKH1 The article presents the results of a quantitative spectrophoto-

T L KISELEVA2 metric method development for quantitative determination of the

" " flavonoid amount in terms of routine in the Herbal Drug Preparations

№l and №2, used for the prevention and treatment of frostbite. Held 11 GNU VILAR Rosselhosacademici, validation of techniques criteria: linearity, repeatability, intra-

Moscoiv laboratory reproducibility and accuracy. According to the results of

the analysis of serial samples standards for levels of flavonoids in s)SRC of NO «Professional Association preparations were proposed - №l- not less than 2,5, №2 - not less ofNaturotherapists», Moscow than 2,296.

e-mail: KiselevaTL@yandex.ru

Key words: Herbal Drug Preparations, frostbite, quantification, flavonoids, validation of methods

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.