CC BY
24
2010 г.
(штамм Внуково-32) при стационарном культивировании с использованием различных вариантов поддерживающих сред наиболее перспективной для производства антирабической вакцины оказалась пе-
ревиваемая клеточная культура Vero B, посевной и рабочий банки которой предполагается в дальнейшем аттестовать в ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития РФ.
МЕНИНГОКОККОВАЯ ЮЛ1-ПРОТЕАЗА КАК ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ СЕРОГРУППЫ В
'Аллилуев А.П., 'Анохина И.В., 2Румш Л.Д., 2Котельникова О.В., 2Дрожжина Е.Ю., ЖигисЛ.С., 2Ягудаева Е.Ю., 'Мельников Э.Э., 2Зуева В.С.,2Разгуляева О.А., 3Козлов Л.В., 3Бичучкр А.М., 4Аваков А.Э.
1Кафедра микробиологии РУДН
2Институт биоорганической химии им. ак. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН 3ФГУН МНИИЭиМ им. Г.Н. Габричевского
4Филиал ФГУН (НПО Микроген) Предприятие МНИИЭиМ им. Г.Н. Габричевского
С помощью современных препаративных методов из культуральной жидкости менингококков серогруппы А, а также из промежуточных продуктов производства поли-сахаридной вакцины этой серогруппы, выделен и охарактеризован препарат высокоочищенной 1дА1-протеазы.
Молекулярная масса фермента составляет примерно 120 КД, что соответствует данным литературы. Его удельная специфическая активность находится в пределах 536 - 959 тыс. ед./мг, что тоже соответствует данным других исследователей. Микробная 1дА1-протеаза является одним из главных факторов патогенности многих возбудителей инфекционных болезней, поэтому представлялось интересным изучить как иммунизация этим препаратом будет влиять на способность лабораторных животных противостоять менингококковой инфекции. Было установлено, что в ответ на введение препарата
1дА1-протеазы мыши линии Ва1Ь/С отвечают индукцией специфических антител и формированием невосприимчивости к менингококковой инфекции, вызываемой заражением вирулентными штаммами менингококков всех основных серогрупп - А, В и С. Протективный эффект и тест ликвидации бактериемии на мышиной лабораторной модели - многолетние свидетели вакцинных потенций менингококковых и ряда других микробных вакцин. Можно считать, поэтому, что препарат изучаемой нами 1дА1-протеазы - перспективная менингококковая поливакцина и, что особенно актуально, отсутствующая до настоящего момента - В-вакцина.
На заявку на патент о безотходном способе выделения 1дА1-протеазы получено положительное решение. Начаты исследования по масштабированию выделяемого фермента методами генной инженерии.
РАЗРАБОТКА И КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПОЛИСАХАРИДНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ДИЗЕНТЕРИИ ФЛЕКСНЕРА
Львов В.Л., Елкина С.И., Головина М.Э.,Ледов В.А., Шехт М.Е., Хржановская И.Н., Рахманов Р.С., Пискарев Ю.Г., Чупринина Р.П., Ковтун В.Ф., Книрель Ю.А., Апарин П.Г.
Предприятие ГРИТВАК, Москва, Российская Федерация ФГБУ;
«ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России, Москва, Россия
Дизентерия Флекснера является одной из самых распространенных бактериальных кишечных инфекций. В России заболеваемость дизентерией Флекснера регистрируется повсеместно; особую значимость имеет для коллективов, находящихся в условиях компактного проживания, работающих в полевых условиях. Заболевание характеризуется достаточно тяжелым течением и нали-
чием летальных случаев, особенно среди лиц пожилого возраста. Опыт применения разработанной нами ранее полисахаридной вакцины против дизентерии Зонне -«Шигеллвак» свидетельствует о возможности снижения заболеваемости шигеллезной инфекцией при иммунизации профессиональных и возрастных групп риска. Мощный О-специфический иммунный ответ с доминировани-
ПРЕПАРАТЫ
ем антител 1дА класса, индуцированный парентеральным введением «Шигеллвак», оказался эффективным и достаточным для создания иммунных контингентов.
Конструирование вакцины против дизентерии Флекснера по аналогии с разработанной ранее вакциной «Шигеллвак» проводилось на основе О-специфи-ческого иммуногена, вводимого парентерально. Однако наличие различных серотипов шигелл Флекснера обуславливает необходимость выбора О-антигена мажорного серотипа или комбинации серотипов, ответственных за формирование протективного ответа при введении препарата.
Нами получен О-антиген высокой степени очистки, структура которого подтверждена методами С13 ЯМР-спектрос-копии и масс-спектрометрии. Данные исследования привели к более глубокому представлению о тонкой химической структуре повторяющего звена О-специфического полисахарида S. Аехпеп 2а. Согласно опубликованным материалам международным коллективом авторов доказано наличие О-Ас групп в составе повторяющего тетрасахаридного звена О-специфического полисахарида.
О-специфический антиген вызывает индукцию иммунологической памяти и высокий вторичный иммунный !дО-ответ у лабораторных животных. Серии кандидата вакцины обладают протективными свойствами при моделировании инфекции шигеллеза Флекснера на морских свинках ^егепитест).
Проведена ! фаза клинических испытаний полисаха-ридной вакцины против дизентерии Флекснера на ограниченном контингенте взрослых добровольцев (28 человек). Подкожное введение препарата в дозах 25 - 125 мкг не приводило к возникновению существенных побочных реакций, зарегистрированные подъемы температуры у привитых не превышали 37,1°С.
Препарат продемонстрировал иммуногенность после первичной иммунизации с увеличением конечного титра антител в 16 раз. Специфические антитела были представлены наиболее важными для анти-шигеллез-ного иммунитета антителами !дА и !дО класса. Нарастание уровня !дМ антител у привитых было незначительно, что сопоставимо с данными по вакцине против шигелл Зонне - «Шигеллвак».
ГЛУБИННОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ BORDETELLA PERTUSSIS ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОКЛЮШНОГО КОМПОНЕНТА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ
Удотов Ю.М., Увицкий А.Ю.
ОАО «Биомед», г. Москва
В настоящее время для получения коклюшного компонента комбинированных вакцин и производства диагностических препаратов применяют метод поверхностного культивирования Bordetella pertussis на питательной среде КУА. Несмотря на очевидные положительные свойства метода, он обладает рядом существенных недостатков, затрудняющих стандартизацию процесса и снижающих выход микробной массы. За последние годы был предложен ряд вариантов культивирования B. pertussis на жидких питательных средах, однако ни один из них до сих пор не получил промышленного внедрения в России.
Нами было проведено исследование глубинного культивирования B. pertussis с целью получения промышленного объема биомассы. Среду для культивирования готовили ex tempore, выполняя стерилизующую фильтрацию без предварительного автоклавирования. Культивирование проводили при температуре (36 ± 1) оС при непрерывном перемешивании под ватно-марлевыми пробками. В качестве посевного материала использовали культуру III пассажа B. pertussis, проверенную по показателям микробиологической чистоты и морфологии. Посевная доза для одной бутыли составляла 20 мл культуры с содержанием микробных клеток 80 - 100 млрд/мл. Таким образом, исходное содержание микробных клеток в жидкой питательной среде составляло не более 1 МОЕ/мл.
€
В процессе культивирования с периодичностью 24 ч. проводили контроль микробиологической чистоты, морфологии, содержания микробных клеток, а также специфических агглютиногенов 1, 2 и 3. Установлено, что наиболее интенсивный рост культуры происходил в первые 24 ч, при этом максимальное содержание микробных клеток по окончании роста составляло 35 - 40 МОЕ/мл. Рост культуры существенно замедлялся при повышении показателя рН до 7.5 и прекращался при рН 8,0. Критичными параметрами в отношении скорости роста и содержания микробных клеток были кратность воздухообмена и содержание дрожжевого экстракта в составе питательной среды. Наличие сорбента (активированный уголь) не влияло на скорость роста и содержание микробных клеток, но в его отсутствие агглютинация со специфическими сыворотками отсутствовала, в том числе и с фактором I (видовой фактор B.pertussis). Сорбент вводили в состав среды в фиксированном виде, дополнительной его элиминации из готового продукта не требовалось.
В настоящее время отделением сорбированных препаратов ОАО «Биомед» проводится работа по внедрению технологии культивирования B. pertussis на жидкой питательной среде для получения коклюшного диагнос-тикума. В качестве перспективной разработки рассматривается также получение на жидкой среде коклюшного компонента вакцины АКДС.
