CC BY
32
.ПРЕПАРАТЫ
личество ингибитора трипсиноподобных протеиназ содержалось в отходах первой и второй стадии получения гамма-глобулина, которые идут на утилизацию. Коммерческие отечественные препараты: иммуноглобулин человеческий, интерферон и герпетическая вакцина содержали в своем составе трипсиноподобную протеина-зу и ее ингибитор, что свидетельствует об их недостаточной очистке. Гоновакцина не содержала ни протеиназы, ни ее ингибитора, а туляремийная вакцина содержала только следы ингибитора. Иммуноглобулин человека содержал в четыре раза больше ингибитора трипсиноподобных протеиназ, чем интерферон человеческий. Зарубежные гриппозные вакцины «Инфлувак», «Ваксигрип», «Флюарикс»; вакцина против гепатита А -«Аваксим»; препараты из крови - «Фраксипарин» и «Солкосерил» содержали в своем составе трипсиноподобную протеиназу и ее ингибитор. Меньше всего ингибитора и трипсиноподобной протеиназы содержалось в вакцине «Аваксим», а больше всего ингибитора содержалось в препарате «Фраксипарин». Определение активности трипсиноподобной протеиназы и ее ингибитора может служить маркером чистоты препарата при изготовлении вакцин (особенно противогриппозных) и препаратов из крови человека. Методом ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе из отходов 1-й и !У-й стадий получения гамма-глобулина промышленным способом было выделено по девять изоформ ингибитора трипсиноподобных протеиназ. Игибиторы трипсиноподобных протеиназ были очищены от балластных белков в среднем на 99,6 %. Наибольший процент выхода ингибитора трипсиноподобных протеиназ установлено
к девятой изоформе ингибитора, а удельная активность к четвертой изоформе ингибитора. Выделенные изо-формы ингибитора трипсиноподобных протеиназ были гетерогенны по молекулярной массе с преобладанием высокомолекулярных компонентов (480 кДа). В первой, второй и девятой изоформах ингибитора трипсиноподобных протеиназ был обнаружен и белок гаммаглобу-лина (160 кДа). Пятая изоформа ингибитора трипсино-подобных протеиназ, выделенная из отходов первой стадии получения гамма-глобулина, защитила от смерти 80 % белах мышей, зараженных смертельной дозой вируса гриппа А/^/8/34 (А/Н1Ж). Ингибиторы трипсиноподобных протеиназ, выделенных из отходов четвертой стадии получения гаммаглобулина, не обладали защитными свойствами при экспериментальном гриппе.
На основании результатов проведенных исследований предложено использовать:
1. Биоматериал для производства ингибитора трипсиноподобных протеиназ в качестве противовирусного препарата для человека.
2. Способ получения ингибитора трипсиноподобных протеиназ из промышленных отходов получения гамма-глобулина.
3. Пятую изоформу ингибитора трипсиноподобных протеиназ в качестве противовирусного препарата. 4. Способ лечения гриппа путем введения ингибитора трипсиноподобных протеиназ.
5. Способы определения активности трипсиноподобной протеиназы и ее ингибитора в донорской крови человека.
ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ НАКОПЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА БЕШЕНСТВА (ШТАММ ВНУКОВО-32) НА РАЗЛИЧНЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЕЛЬ-ХРОМА-ТОГРАФИЧЕСКОГО МЕТОДА ЕГО ОЧИСТКИ
1Якин О.Г., 2Сергеев А.Н., 1Хафизова Л.Г., 2Глазатов В.В., Алсынбаев Р.М., 2Красильников И.В.
1 Филиал ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Уфа «Иммунопрепарат», г. Уфа, Россия
2 ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Москва, Россия
Представлены результаты изучения динамик накопления антигена вируса бешенства (штамм Внуково-32) при стационарном монослойном культивировании на первичной и перевиваемых клеточных культурах: клетках почек сирийских хомяков (ПСХ), Vero, Vero B, соответственно. При культивировании вируса бешенства на перевиваемых культурах клеток Vero B в присутствии поддерживающей среды, содержащей 2,5% сыворотки крови плодов коровы (КПК), отмечено 2 пика (большой и малый) накопления антигена в культуральных жидкостях. Независимо от видов используемой добавки в сос-
таве поддерживающей среды (2,5% сыворотки КПК, 2% сыворотки крупного рогатого скота и 5% аминопептида) более высокие концентрации антигена вируса бешенства были получены при культивировании на культуре клеток Vero B, чем на Vero и клетках ПСХ. При этом перевиваемые культуры клеток существенно дольше сохраняли свою жизнеспособность в процессе культивирования вируса, по сравнению с таковой культур клеток ПСХ.
Из трех испытанных клеточных культур (ПСХ, Vero и Vero B) с точки зрения продукции вируса бешенства
€
2010 г.
(штамм Внуково-32) при стационарном культивировании с использованием различных вариантов поддерживающих сред наиболее перспективной для производства антирабической вакцины оказалась пе-
ревиваемая клеточная культура Vero B, посевной и рабочий банки которой предполагается в дальнейшем аттестовать в ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития РФ.
МЕНИНГОКОККОВАЯ ЮЛ1-ПРОТЕАЗА КАК ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ СЕРОГРУППЫ В
'Аллилуев А.П., 'Анохина И.В., 2Румш Л.Д., 2Котельникова О.В., 2Дрожжина Е.Ю., ЖигисЛ.С., 2Ягудаева Е.Ю., 'Мельников Э.Э., 2Зуева В.С.,2Разгуляева О.А., 3Козлов Л.В., 3Бичучкр А.М., 4Аваков А.Э.
1Кафедра микробиологии РУДН
2Институт биоорганической химии им. ак. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН 3ФГУН МНИИЭиМ им. Г.Н. Габричевского
4Филиал ФГУН (НПО Микроген) Предприятие МНИИЭиМ им. Г.Н. Габричевского
С помощью современных препаративных методов из культуральной жидкости менингококков серогруппы А, а также из промежуточных продуктов производства поли-сахаридной вакцины этой серогруппы, выделен и охарактеризован препарат высокоочищенной 1дА1-протеазы.
Молекулярная масса фермента составляет примерно 120 КД, что соответствует данным литературы. Его удельная специфическая активность находится в пределах 536 - 959 тыс. ед./мг, что тоже соответствует данным других исследователей. Микробная 1дА1-протеаза является одним из главных факторов патогенности многих возбудителей инфекционных болезней, поэтому представлялось интересным изучить как иммунизация этим препаратом будет влиять на способность лабораторных животных противостоять менингококковой инфекции. Было установлено, что в ответ на введение препарата
1дА1-протеазы мыши линии Ва1Ь/С отвечают индукцией специфических антител и формированием невосприимчивости к менингококковой инфекции, вызываемой заражением вирулентными штаммами менингококков всех основных серогрупп - А, В и С. Протективный эффект и тест ликвидации бактериемии на мышиной лабораторной модели - многолетние свидетели вакцинных потенций менингококковых и ряда других микробных вакцин. Можно считать, поэтому, что препарат изучаемой нами 1дА1-протеазы - перспективная менингококковая поливакцина и, что особенно актуально, отсутствующая до настоящего момента - В-вакцина.
На заявку на патент о безотходном способе выделения 1дА1-протеазы получено положительное решение. Начаты исследования по масштабированию выделяемого фермента методами генной инженерии.
РАЗРАБОТКА И КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПОЛИСАХАРИДНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ДИЗЕНТЕРИИ ФЛЕКСНЕРА
Львов В.Л., Елкина С.И., Головина М.Э.,Ледов В.А., Шехт М.Е., Хржановская И.Н., Рахманов Р.С., Пискарев Ю.Г., Чупринина Р.П., Ковтун В.Ф., Книрель Ю.А., Апарин П.Г.
Предприятие ГРИТВАК, Москва, Российская Федерация ФГБУ;
«ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России, Москва, Россия
Дизентерия Флекснера является одной из самых распространенных бактериальных кишечных инфекций. В России заболеваемость дизентерией Флекснера регистрируется повсеместно; особую значимость имеет для коллективов, находящихся в условиях компактного проживания, работающих в полевых условиях. Заболевание характеризуется достаточно тяжелым течением и нали-
чием летальных случаев, особенно среди лиц пожилого возраста. Опыт применения разработанной нами ранее полисахаридной вакцины против дизентерии Зонне -«Шигеллвак» свидетельствует о возможности снижения заболеваемости шигеллезной инфекцией при иммунизации профессиональных и возрастных групп риска. Мощный О-специфический иммунный ответ с доминировани-
