Научная статья на тему 'Глубинное культивирование бактерий Bordetella pertussis для получения коклюшного компонента иммунобиологических препаратов'

Глубинное культивирование бактерий Bordetella pertussis для получения коклюшного компонента иммунобиологических препаратов Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

CC BY
196
37
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по промышленным биотехнологиям , автор научной работы — Удотов Ю. М., Увицкий А. Ю.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Глубинное культивирование бактерий Bordetella pertussis для получения коклюшного компонента иммунобиологических препаратов»

.ПРЕПАРАТЫ

ем антител 1дА класса, индуцированный парентеральным введением «Шигеллвак», оказался эффективным и достаточным для создания иммунных контингентов.

Конструирование вакцины против дизентерии Флекснера по аналогии с разработанной ранее вакциной «Шигеллвак» проводилось на основе О-специфи-ческого иммуногена, вводимого парентерально. Однако наличие различных серотипов шигелл Флекснера обуславливает необходимость выбора О-антигена мажорного серотипа или комбинации серотипов, ответственных за формирование протективного ответа при введении препарата.

Нами получен О-антиген высокой степени очистки, структура которого подтверждена методами С13 ЯМР-спектрос-копии и масс-спектрометрии. Данные исследования привели к более глубокому представлению о тонкой химической структуре повторяющего звена О-специфического полисахарида S. Аехпеп 2а. Согласно опубликованным материалам международным коллективом авторов доказано наличие ОАс групп в составе повторяющего тетрасахаридного звена О-специфического полисахарида.

О-специфический антиген вызывает индукцию иммунологической памяти и высокий вторичный иммунный !дО-ответ у лабораторных животных. Серии кандидата вакцины обладают протективными свойствами при моделировании инфекции шигеллеза Флекснера на морских свинках ^егепитест).

Проведена ! фаза клинических испытаний полисахаридной вакцины против дизентерии Флекснера на ограниченном контингенте взрослых добровольцев (28 человек). Подкожное введение препарата в дозах 25 - 125 мкг не приводило к возникновению существенных побочных реакций, зарегистрированные подъемы температуры у привитых не превышали 37,1°С.

Препарат продемонстрировал иммуногенность после первичной иммунизации с увеличением конечного титра антител в 16 раз. Специфические антитела были представлены наиболее важными для анти-шигеллез-ного иммунитета антителами !дА и !дО класса. Нарастание уровня !дМ антител у привитых было незначительно, что сопоставимо с данными по вакцине против шигелл Зонне - «Шигеллвак».

ГЛУБИННОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ BORDETELLA PERTUSSIS ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОКЛЮШНОГО КОМПОНЕНТА ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Удотов Ю.М., Увицкий А.Ю.

ОАО «Биомед», г. Москва

В настоящее время для получения коклюшного компонента комбинированных вакцин и производства диагностических препаратов применяют метод поверхностного культивирования Bordetella pertussis на питательной среде КУА. Несмотря на очевидные положительные свойства метода, он обладает рядом существенных недостатков, затрудняющих стандартизацию процесса и снижающих выход микробной массы. За последние годы был предложен ряд вариантов культивирования B. pertussis на жидких питательных средах, однако ни один из них до сих пор не получил промышленного внедрения в России.

Нами было проведено исследование глубинного культивирования B. pertussis с целью получения промышленного объема биомассы. Среду для культивирования готовили ex tempore, выполняя стерилизующую фильтрацию без предварительного автоклавирования. Культивирование проводили при температуре (36 ± 1) оС при непрерывном перемешивании под ватно-марлевыми пробками. В качестве посевного материала использовали культуру III пассажа B. pertussis, проверенную по показателям микробиологической чистоты и морфологии. Посевная доза для одной бутыли составляла 20 мл культуры с содержанием микробных клеток 80 - 100 млрд/мл. Таким образом, исходное содержание микробных клеток в жидкой питательной среде составляло не более 1 МОЕ/мл.

В процессе культивирования с периодичностью 24 ч. проводили контроль микробиологической чистоты, морфологии, содержания микробных клеток, а также специфических агглютиногенов 1, 2 и 3. Установлено, что наиболее интенсивный рост культуры происходил в первые 24 ч, при этом максимальное содержание микробных клеток по окончании роста составляло 35 - 40 МОЕ/мл. Рост культуры существенно замедлялся при повышении показателя рН до 7.5 и прекращался при рН 8,0. Критичными параметрами в отношении скорости роста и содержания микробных клеток были кратность воздухообмена и содержание дрожжевого экстракта в составе питательной среды. Наличие сорбента (активированный уголь) не влияло на скорость роста и содержание микробных клеток, но в его отсутствие агглютинация со специфическими сыворотками отсутствовала, в том числе и с фактором I (видовой фактор B.pertussis). Сорбент вводили в состав среды в фиксированном виде, дополнительной его элиминации из готового продукта не требовалось.

В настоящее время отделением сорбированных препаратов ОАО «Биомед» проводится работа по внедрению технологии культивирования B. pertussis на жидкой питательной среде для получения коклюшного диагнос-тикума. В качестве перспективной разработки рассматривается также получение на жидкой среде коклюшного компонента вакцины АКДС.

О7

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.