CC BY
137
/ Питер Л. Стерн, Генри С. Китченер.П М.: МЕДпресс-информ, 2009. □ С. 85-95.
9. Пожарская, В.О. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией / В.О. Пожарская, Б.Н. Райкис, А.Х. Казиев.П М.: Триада-Х, 2008.П С . 97П191.
10. Прилепская, В.Н. Патология шейки матки и генитальные инфекции / В.Н. Прилепская.П М.: МЕД пресс-информ, 2008. □ С. 53-86.
11. Роговская, С.И. Папилломавирусная инфекция гениталий: роль интерферонов в патогенезе и лечении / С.И. Роговская // Гинекология. □ 2003.П Т. 5.П № 5.П С. 195П198.
12. Сидорова, И.С. Фоновые и предраковые процессы шейки матки / И.С. Сидорова, С.А. Леваков.П М.: Медицинское информационное агентство, 2006.П С. 9П20.
13. Хаитов, Р.М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы: руководство для врачей / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин, А.А. Ярилин.П М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.ПС. 88Q03.
HUMORAL IMMUNITI INDICES OF CERVIX UTERI DISEASES OF INFEKTIONS GENESIS
L.D. ANDOSOVA, O.V. KACHALINA, S.YU. KUDELKINA,
O.V. MIKHALEVA
Nizhny Novgorod State Medical A cademy
The article highlights studying local humoral immunity indices of cervical and vaginal biotope of cervix uteri diseases of infectious genesis.
Key words: humoral immunity, secretory immunoglobulin A, cervix uteri diseases, inflammation.
УДК 616.6+616.9]:541.182.644
РАЗРАБОТКА ГЕЛЯ С АЗИТРОМИЦИНОМ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Т.А. БРЕДИХИНА*, Т.А. ПАНКРУШЕВА**, О.А. МЕДВЕДЕВА**,
Г.И. ШВЕДОВ*
Предложен состав геля для применения в дерматовенерологической практике, содержащий в качестве активного компонента антибиотик широкого спектра действия азитромицин. На основании результатов, полученных при изучении процессов его высвобождения, изученных методом диффузии в агар с тест-микроорганизмами и методом равновесного диализа через мембрану, осуществлен выбор концентрации лекарственного вещества, основообразующих компонентов и вспомогательных веществ в лекарственной форме.
Ключевые слова: азитромицин, гель, биофармацевтические и микробиологические исследования.
Заболевания, передаваемые половым путем (ЗППП), относятся к числу наиболее часто регистрируемых во всем мире, включая страны, имеющие высокий уровень развития системы здравоохранения и качества оказываемой клинической и фармацевтической помощи. Основной группой лекарственных средств, используемых в терапии урогенитальных инфекций, являются антибиотики. Выбор препаратов и схем лечения проводится с учетом анамнестических данных, а также наличия активности в отношении основных возможных возбудителей [6,9].
Широким спектром противомикробного действия обладает азитромицин □ антибиотик группы азалидов, класс макролидов. Он действует бактериостатически и бактерицидно, активен в отношении большинства грамположительных и грамотрицатель-ных штаммов микроорганизмов, анаэробных, внутриклеточных и атипичных возбудителей [7,8]. В настоящее время выпускаются лекарственные формы азитромицина для энтерального и парентерального применения. Однако, комплексная терапия дерматовенерологических инфекций включает также использование лекарственных средств в форме препаратов локального действия.
Цель исследования □ разработка состава и технологии аппликационной лекарственной формы азитромицина в виде геля. Основные этапы эксперимента включали обоснование оптимальной концентрации антибиотика в предлагаемой лекарственной
* Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко, 394036 г. Воронеж, ул. Студенческая, 10, тел. 8 (919) 235-79-40, е-шаП: Ъге&сЫпаЧа^уапёех. ги
Курский государственный медицинский университет, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3, тел. 8(4712) 58-07-39
форме, а также выбор основы и вспомогательных веществ, которые в значительной степени определяют проявление в ее составе терапевтической эффективности лекарственной субстанции.
Материалы и методы исследования. В настоящее время в фармацевтической практике в качестве основообразующих компонентов часто применяют гели высокомолекулярных соединении (ВМС), в том числе полусинтетических производных целлюлозы и полиэтиленоксидов (ПЭО) с различной молекулярной массой. Они обеспечивают равномерность распределения лекарственных веществ и высокую биологическую доступность, обладают выраженной осмотической активностью и способны поглощать патологические выделения [4,5]. Учитывая указанные преимущества, при выборе основообразующего полимера были исследованы гидрофильные носители на основе метилцеллюлозы (МЦ) и натрии карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ), содержащие полимер в интервале концентраций 3-5%, а также композиции, включающие ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 6:3; 7:2 и 7,5:2. В связи с тем, что характерной особенностью гидрофильных целлюлозных основ является их способность высыхать, в разрабатываемые образцы гелей в качестве пластификатора вводили 5-10% глицерина.
В качестве фармакологически активной субстанции, обуславливающей терапевтическое действие, использовали азитромицин [2]. Выбор предварительного интервала его концентрации в разрабатываемом геле (от 0,25% до 2%) был осуществлен с учетом данных литературы о содержании противомикробных веществ в мазях для наружного, в том числе вагинального применения. Как правило, она не превышает 4% и чаще находится в пределах 1-2%.
Обоснование концентрации антибиотика и оптимального состава основообразующих и поверхностно-активных веществ осуществляли по результатам изучения антимикробной активности азитромицина в составе модельных образцов гелей микробиологическим методом диффузии в агар по зонам угнетения роста наиболее чувствительных к азитромицину тест-штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р, Bacillus cereus АТСС 10702, Bacillus subtilis АТСС 6633 и Escherichia coli АТСС 25922. Метод является фармакопейным и широко используется при разработке новых лекарственных препаратов [1,2].
При проведении эксперимента для получения чистой культуры бактерии инкубировали на скошенном агаре при температуре (37±1)[С в течение 24 ч. С помощью стерильного изотонического раствора натрия хлорида по стандарту мутности на 10 ЕД готовили взвесь микроорганизмов для посева. Предварительно рассчитанная микробная нагрузка составила 10 000 микробных клеток в 1 мл среды. Посев проводили по типу суспензии в стерильную агаровую среду, которую затем разливали в чашки Петри. Исследуемые образцы геля массой по 0,1 г с различным содержанием азитромицина помещали в центр стерильных цилиндров из нержавеющей стали, расположенных на поверхности засеянной среды. В качестве сравнения использовали водную суспензию антибиотика в соответствующей концентрации. После тер-мостатирования образцов в течение 24 ч при температуре (36±1)[С измеряли диаметры зон угнетения роста микроорганизмов при помощи микролинейки с точностью до 0,1 мм.
Для достижения необходимой степени измельченности нерастворимого в компонентах основы азитромицина, его равномерного распределения по всему объему носителя и для предотвращения процесса седиментации при изготовлении и хранении лекарственной формы, в ее состав вводили поверхностноактивные вещества (ПАВ): твин-80 и натрия лаурилсульфат в соответствии с их свойствами и общими правилами технологии.
Размеры частиц дисперсной фазы, представленной азитро-мицином, оценивали с помощью модифицированной методики ОФС СМазиП(ГФ XI изд., 1990, вып. 2), используя микроскоп Микмед-1 снабженный камерой CMintonD MTV-62 W1P. На предметное стекло помещали пробы геля, накрывали покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха, и просматривали под микроскопом, используя объектив 40х [3]. Средний размер частиц и их процентное содержание в препарате рассчитывали с помощью бесплатной программы «Image tool» разработанной Техасским университетом.
Определение биодоступности азитромицина из гелевых основ осуществляли методом равновесного диализа по Крувчин-скому. Метод основан на способности действующих веществ высвобождаться в течение времени из лекарственной формы, диффундировать через полупроницаемую мембрану в акцептор-
ную среду и является моделью кинетики лекарственных веществ на стадии всасывания [4,5].
Oбpaзцы экспериментальных гелей массой по 1,0 г помещали в диализатор, представляющий собой стеклянную трубку диаметром 20 мм, закрытую с одной стороны полупроницаемой мембраной, которую опускали в среду высвобождения объемом 50 мл на глубину 2 мм. В качестве мембраны использовали нелакированный целлофан, а в качестве диализной среды (с учетом свойств растворимости азитромицина) □ 0,05 M раствор калия фосфата двузамещенного в смеси вода □ ацетонитрил (9:11). В ходе эксперимента система термостатировалась при температуре (36±1)[С. Oт'боp проб по 5 мл проводили через 1 ч, восполняя объем до исходного; время опыта □ 6 ч. Содержание вещества в диализате определяли методом УФ-спектрофотометрии (раствор сравнения □ чистая диализная среда). Степень высвобождения активной субстанции выражали в процентах по отношению к содержанию в исследуемой навеске лекарственной формы.
^личественное определение проводили спектрофотометрическим методом в УФ-области, в качестве экстрагента и раствора сравнения использовали 0,05 M раствор калия фосфата двузамещенного в смеси вода □ ацетонитрил (9:11). Oптичеcкyю плотность измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 210±2 нм в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 10 мм. Для определения влияния основообразующих компонентов на поглощение азитромицина измеряли оптическую плотность растворов гелевых основ без активного ингредиента при аналитической длине волны азитромицина 210±2 нм. Установлено, что растворы основ оптической плотностью при указанной длине волны не обладают (D<0,05).
Важным критерием оценки качества лекарственных препаратов является микробиологическая чистота. Для ее обеспечения в состав экспериментальных препаратов вводили смесь консервантов нипагина и нипазола в соотношении 3:1 в концентрации
0,1% от общей массы геля. Исследование микробиологической чистоты проводили в соответствие с требованиями, предъявляемыми ГФ XII изд. к лекарственным препаратам для наружного и интравагинального применения [2].
Статистическую обработку результатов исследований проводили согласно ГФ XI изд. с использованием пакета компьютерных программ Microsoft Excel 2002 (номер продукта 54521-7013227086-17559). Достоверность различий средних величин между опытными сериями оценивали по t-критерию Стьюдента при уровне значимости р = 0,05. Данные исследований представлены в виде средних величин и стандартного отклонения (M±SD).
Результаты и их обсуждение. При выборе гелеобразовате-ля на первом этапе проводили органолептическую оценку качества внешнего вида и консистенции исследуемых образцов □ все полученные составы представляли собой бесцветную вязкую массу, однородную, без механических включений. Наиболее приемлемыми оказались 4% глицерогели MЦ и Na-KM^ поли-этиленоксидная основа с содержанием ПЭO-400 и ПЭO-1500 в соотношении 6:3.
Выбор концентрации азитромицина в разрабатываемой лекарственной форме осуществлен методом диффузии в агар на экспериментальных образцах, изготовленных на 4% глицерогеле Na-KMЦ с различным содержанием антибиотика. Результаты шести параллельных опытов представлены на рис. 1.
Полученные результаты свидетельствуют, что противомик-робное действие препарата, обуславливающее задержку роста микроорганизмов на плотной питательной среде, возрастает пропорционально увеличению концентрации антибиотика в геле. При этом, наибольшую активность проявляют гели, содержащие 1 и 2% активного вещества. Oднaко, при увеличении концентрации до 2% изменение диаметра ингибирования роста тест-штаммов статистически недостоверно и, поэтому, оптимальной концентрацией следует считать 1%.
Для выбора гелеобразователя изучена высвобождаемость активного вещества методом равновесного диализа на образцах глицерогелей M^ Na-KMЦ и ПЭO с установленной концентрацией азитромицина 1%. За результат анализа принимали среднее значение пяти параллельных опытов, проведенных в равных условиях (рис. 2).
Установлено, что гидрофильные основы обеспечивают достаточно высокие показатели биодоступности азитромицина. Процесс высвобождения действующего вещества из экспериментальных гелей характеризуется постепенным увеличением его кон-
центрации в акцепторной среде: в течение 3 ч во всех диализных системах продиффундировало более 25% азитромицина, содержащегося в навеске лекарственной формы. Однако, большая интенсивность его высвобождения отмечена для состава, приготовленного на основе 4% глицерогеля МЦ □ через 6 ч от начала эксперимента содержание азитромицина в диализной среде составило 51,26% и превысило аналогичный показатель из гелей на основе Ка-КМЦ и ПЭО. Из результатов проведенного опыта следует, что лучшие биофармацевтические показатели обеспечивает состав на основе МЦ.
& 5ч
^н^трация азитромицина. в модельном геле, %
Рис. 1. Результаты оценки антимикробной активности азитромицина в составе модельных гелей на основе Na-КМЦ Примечание: тест-культуры St. aureus (1), B. cereus (2), B. subtilis (3), E. Coli (4).
Рис. 2. Динамика процесса высвобождения азитромицина из гелей на основе полимеров: МЦ (1), №-КМЦ (2), ПЭО (3).
Оценку влияния гелеобразователя на степень высвобождения азитромицина из исследуемых композиций проводили также с помощью микробиологического теста диффузии в агар по зонам ингибирования роста тест-микроорганизмов. В контроле на питательную среду вносили водную суспензию азитромицина в концентрации 1%. Среднее значение шести параллельных определений представлены в табл. 1.
Таблица 1
Влияние типа основы на антимикробную активность гелей с азитромицином
Oбъекты исследования Зоны задержки роста тест-микроорганизмов, мм
St. aureus АТСС 6538-Р B. cereus АТСС 10702 E. coli АТСС 25922
1% гель азитромицина на основе MЦ 28,07±0,32 20,07±0,85 18,32±0,43
Na- ШЦ 23,27±0,53 18,28±0,54 16,39±0,90
roO 23,32±0,61 18,41±0,32 16,02±0,21
1% водная суспензия азитромицина (контроль) 28,52±0,43 21,48±0,91 18,59±0,73
При исследовании антимикробной активности экспериментальных препаратов установлено, что значение данного параметра для геля на основе МЦ статистически достоверно превышает аналогичный показатель для гелей на основах Ка-КМЦ и ПЭО.
Таким образом, природа полимера, используемого для получения гелевой основы, оказывает значительное влияние на динамику высвобождения азитромицина из лекарственной формы. По результатам ее изучения, полученным двумя методами □ равновесного диализа через мембрану и фармакопейного теста диффузии в агар, в качестве оптимальной основы для азитроми-
цина выбран 4% глицерогель МЦ.
С целью выбора ПАВ и обоснования его концентрации в составе глицерогеля МЦ изучен процесс высвобождения азитро-мицина в присутствии твина-80 и натрия лаурилсульфата методом диализа через полупроницаемую мембрану. В контрольном опыте исследовали высвобождение антибиотика из основы МЦ без добавления ПАВ. Результаты исследований, как среднее пяти определений, представлены в табл. 2.
Таблица 2
Влияние ПАВ на высвобождение азитромицина из гелей
Содержание ПАВ в геле, % Соде эжание азитромицина в диализате (%) за время опыта (ч)
1 2 3 4 5 6
твин-80 0,1 21,25±0,90 32,56±1,07 40,28±0,89 46,43±0,75 51,19±1,18 57,42±0,85
0.25 23,65±1,22 34,75±0,93 42,85±1,04 48,90±0,92 53,79±0,82 59,52±0,88
0.5 24,33±1,11 35,81±0,95 43,31±0,93 49,57±0,81 54,30±0,79 60,81±0,72
натрия лаурил сульфат 0,1 18,24±0,59 28,41±0,75 36,15±0,59 42,24±0,73 46,39±0,83 53,50±0,42
0,25 19,62±0,64 29,82±0,62 37,36±0,57 43,80±0,68 48,49±0,73 54,32±0,35
0,5 20,61±0,58 29,96±0,39 38,09±0,48 44,18±0,72 49,90±0,81 54,87±0,44
гель без (контро ПАВ ль) 15,37±1,12 26,85±1,07 34,72±0,95 40,23±0,87 45,33±0,93 51,26±0,89
Полученные результаты свидетельствуют, что введение ПАВ в состав лекарственной формы оказывает положительное влияние на показатели высвобождения азитромицина □ в диализных средах для образцов с добавлением ПАВ отмечено увеличение содержания действующего вещества по сравнению с контролем. При сравнении двух ПАВ установлено, что увеличение интенсивности процессов высвобождения и диффузии антбиотика через мембрану в большей степени происходит в присутствии твина-80 в концентрации 0,25%. При этом, увеличение его концентрации не приводит к статистически достоверному влиянию на процесс и полноту высвобождения азитромицина. Поэтому, в состав глицерогеля вводили твин-80 в 0,25% концентрации.
С целью установления влияния твина-80 на размеры частиц азитромицина был проведен дисперсионный анализ экспериментальных гелей, содержащих субстанцию антибиотика измельченную per se, а также в присутствии твина-80. Установлено, что присутствие ПАВ при измельчении не оказывает существенного влияния на дисперсность субстанции действующего вещества □ в исследуемых образцах, содержащих и не содержащих твин-80, величина частиц не превышала 10 мкм. При этом фракция с размерами до 5 мкм в гелях с азитромицином, измельченным per se составила около 92%, измельченным в присутствии твина-80 □ 96%. Однако, в препаратах с добавлением ПАВ отмечается более равномерное распределение и отсутствие слипания диспергированных частиц по сравнению с экспериментальными образцами без твина-80, что обеспечивает однородность дозирования лекарственного средства.
По результатам исследования микробиологической чистоты экспериментальных гелей, приготовленных в условиях асептики и не содержащих консерванты, не обнаружено энтеробактерий и других грамотрицательных бактерий, а также Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. Однако, при определении числа аэробных бактерий и грибов в 1 г геля установлено, что их суммарное количество превышает нормируемые показатели, как для образцов, хранившихся при комнатной температуре, так и в условиях холодильника. В связи с чем сделан вывод о необходимости консервирующего агента, в качестве которого использовали 0,1% смесь нипагина и нипазола, взятых в соотношении 3:1. Введение консервантов обеспечило показатели микробиологической чистоты, соответствующие нормативным требованиям, предъявляемым ГФ XII изд.
Таким образом, на основании проведенных исследований осуществлен выбор основообразующей композиции лекарственной формы □ 4% глицерогеля метилцеллюлозы, концентрацию в ней азитромицина (1%) и вспомогательных веществ □ твина-80 и консервирующей смеси нипагина и нипазола (3:1) в концентрациях 0,25% и 0,1%, соответственно.
Литература
1. Микробиологические исследования при разработке стоматологической пленки антибактериального действия / Н.В. Ав-тина [и др.] // Вестник новых медицинских технологий.- 2010.-Т. XVII, № 1.- С. 120Q21.
2. Государственная фармакопея РФ XII издание, Ч !.□ М.:
Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. □ 704 с.
3. Государственная фармакопея СССР XI изд., Вып. 2.- М.: Медицина, 1989.- 400 с.
4. Камаева, С.С. Биофармацевтические исследования мази с метиленовым синим / С.С. Камаева, Л.А. Поцелуева, Р.С. Сафи-уллин // Фармация.- 2006.- №. 2.- С. 20-21.
5. Кобзарева, Е.В. Разработка и исследование многокомпонентных мазей на полимерной основе с фурацилином и этакри-дина лактатом для лечения местных гнойно-воспалительных процессов : автореф. дис. ... канд. фарм. Наук / Е.В. Кобзаорева.-Курск. гос. мед. ун-т.- Курск.- 2000.- 23 с.
6. Разработка новой стратегии контроля над распространением инфекций, передаваемых половым путем, на территории Российской Федерации / А.А. Кубанова [и др.]// Вестник дерматологии и венерологии.- 2009.- № 3.- С. 4П12.
7. Майоров, М.В. Макролиды в акушерстве и гинекологии /М.В. Майоров// Провизор.- 2007.- № 1.- С. 22-25.
8. Стецюк, О.У. Перспективные области клинического применения азитромицина в акушерстве, гинекологии и неонато-логии / О.У. Стецюк, И.В. Андреева // Фарматека.- 2008.- №19.-С. 44-48.
9. Хрянин, А.А. Рациональная антибактериальная и неспецифическая терапия инфекций, передаваемых половым путем : фармакологические и иммунологические обоснования / А. А. Хрянин, М. А. Королев, Н.А. Гришина // Клиническая дерматология и венерология.- 2006.- №2.- С. 103-108.
THE DEVELOPMENT OF GEL WITH AZITHROMYCIN FOR THE TREATMENT OF THE UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES
T.A. BREDIKHINA, T.A. PANKRUSHEVA, O.A. MEDVEDEVA,
G.I. SHVEDOV
Voronezh State Medical Academy after N.N. Burdenko Kursk State Medical University
A gel compound for dermatovenereological practice containing a wide range action antibiotic, azithromycin, as an active component is offered. On the basis of the results of studying the processes of its extrication obtained by the method of diffusion into agar with test microorganisms and by the method of equal-weight dialysis through the membrane, the choice of medicinal substance concentration, the main components and additional substances was made.
Key words: azithromycin, gel, biopharmaceutical and microbiological studies.
УДК 616-002.4
ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ АДИПОЦИТОВ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ЛИПОФИЛИНГА
И.Э. ХРУСТАЛЕВА*, Е.П. СУХОПАРОВА**
В статье приводятся данные касающиеся морфологических изменений, происходящих в аутожировом трансплантате после выполнения липофиллинга на 3, 5, 7, 30, 90, и 180 сутки после проведения операции. Производится оценка количества выживших адипоцитов в аналогичные сроки, а также оценка выраженности развития фиброза аутожирового трансплантата. Исследуется влияние на выживаемость адипоцитов и фиброз аутожирового трансплантата препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1, введенного в реци-пиентную для липофиллинга зону.
Ключевые слова: липофиллинг, аутожировой трансплантат, адипо-цит, фиброз, некроз, рецепторный антагонист интерлейкина-1.
В последнее время во всем мире отмечается интенсивное развитие пластической и эстетической хирургии. Это связано, прежде всего, с увеличением продолжительности жизни и, как следствие, с желанием людей повысить качество жизни и устранить различные возрастные изменения внешности. Изменения мягких тканей, которые возникают вследствие старения лица, затрагивают все его области и структуры. Очевидным является то, что наряду с изменениями кожи, мышечных структур и связочного аппарата лица происходит и атрофия жирового слоя лица.
* РГМУ им. Н.И.Пирогова, 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.
** ГОУ ДПО СПбМАПО Росздрава, 191015, Санкт-Петербург, ул. Кироч-ная, д. 41.
