CC BY
51
цина выбран 4% глицерогель МЦ.
С целью выбора ПАВ и обоснования его концентрации в составе глицерогеля МЦ изучен процесс высвобождения азитро-мицина в присутствии твина-80 и натрия лаурилсульфата методом диализа через полупроницаемую мембрану. В контрольном опыте исследовали высвобождение антибиотика из основы МЦ без добавления ПАВ. Результаты исследований, как среднее пяти определений, представлены в табл. 2.
Таблица 2
Влияние ПАВ на высвобождение азитромицина из гелей
Содержание ПАВ в геле, % Соде эжание азитромицина в диализате (%) за время опыта (ч)
1 2 3 4 5 6
твин-80 0,1 21,25±0,90 32,56±1,07 40,28±0,89 46,43±0,75 51,19±1,18 57,42±0,85
0,25 23,65±1,22 34,75±0,93 42,85±1,04 48,90±0,92 53,79±0,82 59,52±0,88
0,5 24,33±1,11 35,81±0,95 43,31±0,93 49,57±0,81 54,30±0,79 60,81±0,72
натрия лаурил сульфат 0,1 18,24±0,59 28,41±0,75 36,15±0,59 42,24±0,73 46,39±0,83 53,50±0,42
0,25 19,62±0,64 29,82±0,62 37,36±0,57 43,80±0,68 48,49±0,73 54,32±0,35
0,5 20,61±0,58 29,96±0,39 38,09±0,48 44,18±0,72 49,90±0,81 54,87±0,44
гель без (контро ПАВ ль) 15,37±1,12 26,85±1,07 34,72±0,95 40,23±0,87 45,33±0,93 51,26±0,89
Полученные результаты свидетельствуют, что введение ПАВ в состав лекарственной формы оказывает положительное влияние на показатели высвобождения азитромицина □ в диализных средах для образцов с добавлением ПАВ отмечено увеличение содержания действующего вещества по сравнению с контролем. При сравнении двух ПАВ установлено, что увеличение интенсивности процессов высвобождения и диффузии антбиотика через мембрану в большей степени происходит в присутствии твинa-80 в концентрации G,25%. При этом, увеличение его концентрации не приводит к статистически достоверному влиянию на процесс и полноту высвобождения азитромицина. Поэтому, в состав глицерогеля вводили твин-80 в G,25% концентрации.
С целью установления влияния твинa-80 на размеры частиц азитромицина был проведен дисперсионный анализ экспериментальных гелей, содержащих субстанцию антибиотика измельченную per se, а также в присутствии твина-80. Установлено, что присутствие ПАВ при измельчении не оказывает существенного влияния на дисперсность субстанции действующего вещества □ в исследуемых образцах, содержащих и не содержащих твин-80, величина частиц не превышала 10 мкм. При этом фракция с размерами до 5 мкм в гелях с азитромицином, измельченным per se составила около 92%, измельченным в присутствии твина-80 □ 96%. Однако, в препаратах с добавлением ПАВ отмечается более равномерное распределение и отсутствие слипания диспергированных частиц по сравнению с экспериментальными образцами без твина-80, что обеспечивает однородность дозирования лекарственного средства.
По результатам исследования микробиологической чистоты экспериментальных гелей, приготовленных в условиях асептики и не содержащих консерванты, не обнаружено энтеробактерий и других грамотрицательных бактерий, а также Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. Однако, при определении числа аэробных бактерий и грибов в 1 г геля установлено, что их суммарное количество превышает нормируемые показатели, как для образцов, хранившихся при комнатной температуре, так и в условиях холодильника. В связи с чем сделан вывод о необходимости консервирующего агента, в качестве которого использовали 0,1% смесь нипагина и нипазола, взятых в соотношении 3:1. Введение консервантов обеспечило показатели микробиологической чистоты, соответствующие нормативным требованиям, предъявляемым ГФ XII изд.
Таким образом, на основании проведенных исследований осуществлен выбор основообразующей композиции лекарственной формы □ 4% глицерогеля метилцеллюлозы, концентрацию в ней азитромицина (1%) и вспомогательных веществ □ твина-80 и консервирующей смеси нипагина и нипазола (3:1) в концентрациях 0,25% и 0,1%, соответственно.
Литература
1. Микробиологические исследования при разработке стоматологической пленки антибактериального действия / Н.В. Ав-тина [и др.] // Вестник новых медицинских технологий.- 2010.-Т. XVII, № 1.- С. 120Q21.
2. Государственная фармакопея РФ XII издание, Ч !.□ М.:
Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. □ 704 с.
3. Государственная фармакопея СССР XI изд., Вып. 2.- М.: Медицина, 1989.- 400 с.
4. Камаева, С.С. Биофармацевтические исследования мази с метиленовым синим / С.С. Камаева, Л.А. Поцелуева, Р.С. Сафи-уллин // Фармация.- 2006.- №. 2.- С. 20-21.
5. Кобзарева, Е.В. Разработка и исследование многокомпонентных мазей на полимерной основе с фурацилином и этакри-дина лактатом для лечения местных гнойно-воспалительных процессов : автореф. дис. ... канд. фарм. Наук / Е.В. Кобзаорева.-Курск. гос. мед. ун-т.- Курск.- 2000.- 23 с.
6. Разработка новой стратегии контроля над распространением инфекций, передаваемых половым путем, на территории Российской Федерации / А.А. Кубанова [и др.]// Вестник дерматологии и венерологии.- 2009.- № 3.- С. 4П12.
7. Майоров, М.В. Макролиды в акушерстве и гинекологии /М.В. Майоров// Провизор.- 2007.- № 1.- С. 22-25.
8. Стецюк, О.У. Перспективные области клинического применения азитромицина в акушерстве, гинекологии и неонато-логии / О.У. Стецюк, И.В. Андреева // Фарматека.- 2008.- №19.-С. 44-48.
9. Хрянин, А.А. Рациональная антибактериальная и неспецифическая терапия инфекций, передаваемых половым путем : фармакологические и иммунологические обоснования / А. А. Хрянин, М. А. Королев, Н.А. Гришина // Клиническая дерматология и венерология.- 2006.- №2.- С. 103-108.
THE DEVELOPMENT OF GEL WITH AZITHROMYCIN FOR THE TREATMENT OF THE UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES
T.A. BREDIKHINA, T.A. PANKRUSHEVA, O.A. MEDVEDEVA,
G.I. SHVEDOV
Voronezh State Medical Academy after NN. Burdenko Kursk State Medical University
A gel compound for dermatovenereological practice containing a wide range action antibiotic, azithromycin, as an active component is offered. On the basis of the results of studying the processes of its extrication obtained by the method of diffusion into agar with test microorganisms and by the method of equal-weight dialysis through the membrane, the choice of medicinal substance concentration, the main components and additional substances was made.
Key words: azithromycin, gel, biopharmaceutical and microbiological studies.
УДК 616-002.4
ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-1 ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ АДИПОЦИТОВ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ЛИПОФИЛИНГА
И.Э. ХРУСТАЛЕВА*, Е.П. СУХОПАРОВА**
В статье приводятся данные касающиеся морфологических изменений, происходящих в аутожировом трансплантате после выполнения липофиллинга на 3, 5, 7, 30, 90, и 180 сутки после проведения операции. Производится оценка количества выживших адипоцитов в аналогичные сроки, а также оценка выраженности развития фиброза аутожирового трансплантата. Исследуется влияние на выживаемость адипоцитов и фиброз аутожирового трансплантата препарата рецепторного антагониста интерлейкина-1, введенного в реци-пиентную для липофиллинга зону.
Ключевые слова: липофиллинг, аутожировой трансплантат, адипо-цит, фиброз, некроз, рецепторный антагонист интерлейкина-1.
В последнее время во всем мире отмечается интенсивное развитие пластической и эстетической хирургии. Это связано, прежде всего, с увеличением продолжительности жизни и, как следствие, с желанием людей повысить качество жизни и устранить различные возрастные изменения внешности. Изменения мягких тканей, которые возникают вследствие старения лица, затрагивают все его области и структуры. Очевидным является то, что наряду с изменениями кожи, мышечных структур и связочного аппарата лица происходит и атрофия жирового слоя лица.
* РГМУ им. Н.И.Пирогова, 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.
** ГОУ ДПО СПбМАПО Росздрава, 191015, Санкт-Петербург, ул. Кироч-ная, д. 41.
Одним из перспективных и даже патогенетических направлений в эстетической медицине является коррекция возрастных изменений лица, связанных с возрастной атрофией жирового слоя лица. Данная коррекция осуществляется посредством пересадки аутологичной жировой ткани □ липофиллинга [5]. По данным литературы [4] жировая ткань является идеальным филлером. Наряду с этим жировая ткань, как филлер, обладает существенным недостатком. После проведения липофиллинга для коррекции эстетических возрастных деформаций по данным различных авторов [2,3,6,7] происходит лизис с последующим фиброзом от 40 до 60 % аутожирового трансплантата в течение 2-6 месяцев, в результате чего возникает необходимость в повторных операциях. Предполагается, что это, прежде всего, связано с механизмом развития воспаления [1]. После трансплантации жировой ткани адипоциты в результате патофизиологического воспалительного каскада подвергаются альтерации, гибели и последующей абсорбции и организации.
В результате изучения доступной отечественной и зарубежной литературы выявлено то, что не изучены в достаточной степени механизмы воспаления, обусловливающие снижение жизнеспособности и гибель пересаженных адипоцитов. Наряду с этим накоплено большое количество сведений о значительной роли процессов перекисного окисления липидов и изменений в антиоксидантной системе клетки в развитии фиброза. Все вышеперечисленное обусловило проведение данного исследования.
Рецепторный антагонист интерлейкина-1 (ИЛ-1) относится к семейству белков ИЛ-1. Помимо него в семейство входят еще ряд белков, среди которых хорошо изучены функции ИЛ-1а, ИЛ-1р, ИЛ-18. Первые два очень близки по своим функциям и обозначаются как ИЛ-1. Белки данного семейства производятся мо-ноядерными фагоцитирующими клетками крови, нейтрофилами, фибробластами, кератиноцитами, клетками эпителия, центральной нервной системы (ЦНС) и другими. Спонтанный уровень ИЛ-1 и ИЛ-18 во взрослом организме, в норме близок к нулю. Они синтезируются лишь в ответ на внешние воздействия, к которым могут быть отнесены инфекционные агенты и факторы, вызывающие повреждения тканей и клеток. Эти белки исполняют роль агонистов, активируя ранний воспалительный ответ и иммунную систему организма. При этом они стимулируют пролиферацию Т-лимфоцитов, синтез и секрецию ростовых факторов, ряда других провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухолей альфа, интерлейкин-8), острофазовых белков, генерацию медиаторов воспаления, таких как лейкотриены и другие молекулы. В отличие от ИЛ-1, рецепторной антагонист ИЛ-1 продуцируются клетками конституитивно. Его концентрация в крови поддерживается на достаточно высоком для цитокинов: около 0,5 нг/мл.
Рецепторный антагонист ИЛ-1 играет уникальную роль, являясь эндогенным антагонистом ИЛ-1, он осуществляет баланс активностей интерлейкина-1 в крови и тканях. Функциональный ответ клеток на интерлейкины-1 осуществляется через их взаимодействие со специфическими рецепторами (1Ь-1Я1 и IL-1R.II). Рецепторный антагонист ИЛ-1 конкурирует с интерлейкинами-1 за их взаимодействие с рецепторами и таким образом блокирует передачу сигнала в клетку от рецептора 1ИЫ. Суперпродукция итерлейкина-1 приводит к развитию патологических процессов. Большинство аутоиммунных болезней и ряд хронических воспалительных заболеваний связаны именно с гиперпродукцией провоспалительных цитокинов, в том числе ИЛ-1. В связи с этим рецепторный антагонист ИЛ-1 может являться весьма перспективным противовоспалительным препаратом.
Цель исследования □ повышение эффективности результатов липофиллинга за счет улучшения выживаемости адипоцитов в аутожировом трансплантате.
Материалы и методы исследования. Совместные экспериментальные исследования проводились на кафедрах пластической и реконструктивной хирургии ГОУ ДПО СПбМАПО Росзд-рава и патологической анатомии ВМедА им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург) в 2008 - 2009 годах.
Экспериментальная часть включала изучение 20 кроликов мужского пола, породы «шиншилла-с массой тела от 3 до 3,5 кг, в возрасте 75 дней, содержавшихся в виварии клиники экспериментальных животных ВМедА в одинаковых условиях. В рамках поставленных задач работа была разделена нами на 2 основные серии. Срок наблюдения в обеих сериях составил 6 месяцев.
Забор материала проводили на 3, 5, 7, 30, 60, 90 сутки после
операции. Последовательный забор материала для морфологических исследований производили параллельно с наблюдением за особенностями заживления раневой поверхности с трансплантацией. Для гистологического исследования выполнялась биопсия аутожирового трансплантата и окружающих его тканей. Для светооптического исследования материал фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24 часов, затем делили образец на две части. Одну часть после обезвоживания в спиртах восходящей концентрации заливали в парафин, изготавливали срезы толщиной 7-10 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином. Из другой части на замораживающем микротоме делали срезы и окрашивали Суданом III.
Гистологическое исследование, морфометрию и микрофотографирование проводили в проходящем свете с использованием универсального микроскопа "ШКАМЕЭ-2" (Германия).
При гистологическом исследовании оценивали наличие, характер и динамику воспалительных и компенсаторноприспособительных изменений, изменения жировой клетчатки имплантата с оценкой количества выживших адипоцитов в поле зрения при увеличении 400. Всего изучено 120 препаратов.
Результаты и их обсуждение. В контрольной группе животных на третьи сутки после операции в биоптатах было обнаружено умеренное количество живых (содержащих ядра) клеток жировой клетчатки, но уже на 5 и 7 сутки их количество снижалось и можно было обнаружить лишь единичные живые адипоциты. В центральной части пересаженного жирового трансплантата отмечена Слабая лейкоцитарная реакция внутри с примесью единичных плазматических клеток и лимфоцитов. По периферии был выявлен выраженный вал воспалительной инфильтрации с начальными признаками фиброгенеза. Степень жизнеспособности адипоцитов была оценена как слабая. В более поздние сроки (30 и особенно □ 90) в тканях происходили рубцовые изменения. Фиброз был выражен не только по периферии, но и распространялся внутрь зоны трансплантированной жировой клетчатки.
В опытной группе (где применялся препарат рецепторного антагониста ИЛ-1) через трое суток морфологическая картина была несколько лучше, чем в контрольной группе животных в те же сроки наблюдения. При гистологическом исследовании было выявлено умеренное количество жизнеспособных адипоцитов, лейкоцитарная реакция по периферии трансплантата была незначительной, помимо лейкоцитов присутствовали плазматические клетки и лимфоциты в небольшом количестве. В сравнении с контролем демаркационный вал лейкоцитов был выражен слабо значительно слабее. В меньшей степени указанные клетки присутствовали в центральной части трансплантата. В динамике отмечалось незначительное нарастание выраженности лейкоцитарной инфильтрации к пятым суткам, после чего указанные явления теряли свою выраженность и сходили практически на нет в более поздние сроки наблюдения. В динамике отмечено нарастание явлений фиброза, выраженное в меньшей степени по сравнению с контролем. При этом фибротические изменения происходили с вовлечением узкой периферической зоны имплантата. Внутри трансплантата даже в поздние сроки наблюдения оставались некротизированные фрагменты жировой клетчатки и небольшие очаги воспалительной инфильтрации.
Принципиальным стало отличие в исследуемых группах по степени воспаления и фиброза в динамике (рис. 1).
В ходе проведения многофакторного корреляционного анализа было обнаружено достоверной прямой корреляционной связи средней силы между применением препарата рецепторгого антагониста ИЛ-1 и наличием сохраненных адипоцитов в поле зрения (г=0,59, р<0,05), что наглядно свидетельствует об эффективности использования данного препарата. Кроме того, были выявлены и другие достоверные корреляционные связи. В частности, были выявлены отрицательные зависимости степени выживаемости адипоцитов от выраженности воспалительной реакции по периферии (г=-0,5, р<0,05) и внутри трансплантата (г=-
0,62, р<0,01), от наличия некротических изменений в центральной части пересаженных жировых трансплантатов (г=-0,73, р<0,01), от степени развития грануляционной ткани (г=-0,63, р<0,01) и от выраженности фиброгенеза (г=-0,64, р<0,01). Отрицательная зависимость выживаемости адипоцитов от вышеперечисленных факторов свидетельствует о том, что именно последующая гибель клеток обусловлена каскадом воспалительных реакций в реципиентной зоне. Предотвращение воспалительной реакции за счет выключения одного из ключевых механизмов,
связанных с действием интерлейкина-1, в свою очередь, предотвращает эту гибель.
Рис. 1. Выраженное нарастание фиброза в первой группе по сравнению со второй группой.
Следует отметить, что в контрольной группе с течением времени количество жизнеспособных клеток (из числа пересаженных) уменьшалось (г=-0,32, р=0,19), и при этом нарастали явления фиброза. В опытной группе выживаемость пересаженных клеток была выше во все сроки, чем в контрольной группе. Если в ранние сроки эти различия можно было оценивать только как тенденцию, то через месяц и далее (рис. 2, 3) они стали статистически достоверными.
К 0.4
Jm
• Группа
Рис. 2. Различия в количестве адипоцитов, содержащих ядра, в поле зрения через 30 суток после имплантации. 1 □ контрольная группа; 2 □ опытная.
При проведении корреляционного анализа в опытной группе отмечена обратная зависимость выживания адипоцитов от выраженности локальной воспалительной реакции (г=-0,82, р<0,05). Влияние других патогенетических факторов на выживаемость адипоцитов не столь существенно. На этом основании можно сделать вывод о важности предотвращения развития воспалительной реакции в реципиентной зоне.
2,5
|аЕШМ!
Группа
Рис. 3. Выживаемость адипоцитов через 90 суток после имплантации.
1 □ контрольная группа; 2 □ опытная группа.
Выводы:
1. Некроз аутожирового трансплантата отрицательно влияет на выживаемость жировых клеток из-за активного развития организации (разрастания соединительной ткани).
2. Применение препарата рецепторного антагониста ИЛ-1 повышает выживаемость пересаженных жировых клеток в реципиентной зоне и уменьшает развитие фиброза аутожирового трансплантата.
Литература
1. Серов, В.В. Воспаление. / В.В. Серов, В.С. Пауков //
Руководство для врачей.- М: Медицина, 1995.- С. 78-84.
2. Шандалова, Л.Б. Контурная пластика жировой тканью.// Вестн. хир. Им. Грекова.- 1972.- Т.109, №12.- С. 62-54.
3. Amar, RE. Adipocite microinfiltration in the face or tissue restructuration with fato //Ann. Chir. Plast. Esthet.- 1999.- Vol.44. № 6.- P. 593-608.
4. Bartynski, J., Marion, M.S., Wang, T.D. Histopathologic evaluation of adipose autografts in a rabbit ear model.//Otolaryngol. Head. Neck. Surg.- 1990.- Vol. 102.- №4.-Р. 314^21.
5. Carpaneda, C.A., Riberiro, M.T. Percentage of graft viability versus injected volume in adipose autotransplants.
//Aesth.Plast,Surg.- 1994.- Vol.18, №1.- P. 17Q9.
6. Chajchir, A, Benzaquen, I, Wexler, E, Arellano, A. Fat in-jection//Aesth. Plast. Surg.- 1990.- Vol.14.- №.2.- P. 127-136.
7. Coleman, W.P. Fat transplantation.//Dermatol. Clin.-1999.- Vol. 17.- №4.- P. 891-398.
APPLICATION OF DRUG RECEPTOR ANTAGONIST OF INTERLEUKIN -1 FOR IMPROVING THE SURVIVAL OF ADDIPOCYTES AT LIPOFILLING
I.E. KHRUSTALEVA, YE.P. SUKHOPAROVA
Russian State Medical University after N.I. Pirogov St. Petersburg Medical Academy of Post-Graduate Education
The article presents the data concerning morphological changes in auto-adipose transplant after lipofilling on the 3, 5, 7, 30, 90, and 180th day after surgery. The assessment of the number of surviving adipocites on similar terms, as well as the assessment of auto-adipose transplant fibrosis intensity is performed. The effect on adipocite survival and auto-adipose transplant fibrosis of the receptor antagonist of interleukin-1 injected into the lipofilling reception zone is under research.
Key words: lipofilling, auto-adipose, adipocite, fibrosis, necrosis, receptor antagonist of interleukin-1.
УДК 616.5-009.7
ИННОВАЦИИ В СИСТЕМЕ САНАТОРНО-КУРОРТНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ БОЛЬНЫХ ЗУДЯЩИМИ ДЕРМАТОЗАМИ
М.М. ТЛИШ*
Предлагаемый опыт лечения зудящих дерматозов позволяет активно использовать фторсодержащие питьевые природные минеральные воды Краснодарского края, процедуры талассолечения вкупе с прогрессивными методами физиотерапии для предупреждения обострения хронических форм течения названных заболевания Ключевые слова: зудящие дерматозы, немедикаментозное лечение.
Актуальность затронутой проблемы соотносится с тем фактом, когда -Ъ отличие от России в США профессиональные заболевания кожи, в т.ч. зудящие дерматозы, регистрируются и афишируются Бюро трудовой статистики, которое иллюстрирует выборочно данные по некоторым частным предприятиям [5]. В Великобритании проект -ЭПИДЕРМ- не только предназначен для формирования подобной статистики (регистрации заболеваемости), но и задействован для подтверждения этого диагноза дерматолога в ряде центров, которые обязательно должны иметь сведения о роде профессиональной деятельности пациента [7]. В Дании национальная программа исследования профессиональных дерматитов, относящихся к категории зудящих дерматозов, показала их наличие в объеме 17 700 случаев на 2,6 млн. работающих в сельском хозяйстве, то есть 0,8 на 1000 работающих в год [6]-. Подобная проблема крайне актуальна для России, поскольку на территории бывшего СССР, по данным официальной статистики, находится более 200 000 тонн накопленных непригодных и запрещенных для использования пестицидов, большинство из которых относятся к 1 или 2 классу опасности. По данным независимых исследований это количество может составлять более 250 000 тонн. Для сравнения, по данным ФАО (Food and Agricultural Organization of the United Nations - Организация ООН по вопросам продовольствия и сельского хозяйства) в мире к 2007 году было накоплено до 500 000 тонн непригодных пестицидов. В том числе, в Африке - до 25000 тонн; в России - до 25 000 тонн; в Польше - до 60 000 тонн; в Беларуси - 45 000 тонн; в Литве -
«Кубанский государственный медицинский университет»] 350063, город Краснодар, улица Седина, дом 4
