CC BY
0
© Коллектив авторов, 2024
Мусаева Э.Я., Кулаковская Е.А., Ведмедская В.А., Родина Ю.А., Першин Д.Е., Щербина А.Ю., Масчан М.А.
Разработка дополнительного метода диагностики Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома второго типа на основании исследования мурамилдипептид-стимулированной экспрессии фактора некроза опухоли моноцитами
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром второго типа (ХЛП2) - редкое первичное иммунодефицитное состояние, характеризующееся высокой частотой развития таких тяжелых осложнений, как гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз и воспалительные заболевания кишечника. В основе заболевания лежат патогенные варианты гена XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis, или X-сцепленный ингибитор апоптоза), кодирующего одноименный белок, обеспечивающий передачу сигнала через рецептор NOD2. На текущий момент крайне актуальным вопросом является разработка методов диагностики, позволяющих своевременно установить диагноз пациентам с ХЛП2.
Цель настоящей работы - исследование экспрессии фактора некроза опухоли (ФНО) моноцитами у пациентов с ХЛП2 в ответ на стимуляцию лигандом рецептора NOD2 мурамилдипептидом (МДП).
Материал и методы. В исследование были включены 4 пациента с ХЛП2, 3 матери с генетически верифицированным носительством патогенных вариантов гена XIAP, а также 21 условно здоровый донор старше 18 лет. Из образцов периферической крови выделяли фракцию мононуклеарных клеток. Стимуляция рецептора NOD2 проводилась путем инкубации клеток в растворе МДП. В качестве положительного контроля использовали раствор липополисахарида, отрицательного - полную культуральную среду. Оценку экспрессии ФНО моноцитами проводили c помощью проточной цитометрии.
Результаты. Нами было сформировано пороговое значение для оценки ответа на стимуляцию МДП. Во всех образцах от условно здоровых доноров наблюдался значимый прирост доли ФНО-продуцирующих моноцитов в ответ на стимуляцию. У матерей -носительниц патогенных вариантов гена XIAP ответ был сравним с таковым у здоровых доноров. В образцах от всех пациентов, включенных в исследование, несмотря на наличие остаточной экспрессии белка XIAP, наблюдалось отсутствие ответа на стимуляцию Ы8-МДП. Дополнительно на образцах 5 условно здоровых доноров и одного пациента продемонстрирована возможность использования криоконсервированных мононуклеаров в качестве материала для исследования.
Заключение. Вышеописанный метод в комбинации с оценкой экспрессии белка XIAP позволяет в короткий срок подтвердить наличие у пациента диагноза ХЛП2.
Ключевые слова: Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром второго типа; воспалительные заболевания кишечника; гемофагоцитарный лимфогистиоцитоз; проточная цитометрия; NOD2; мурамилдипептид
Статья получена 15.12.2023. Принята в печать 07.02.2024.
Для цитирования: Мусаева Э.Я., Кулаковская Е.А., Ведмедская В.А., Родина Ю.А., Першин Д.Е., Щербина А.Ю., Масчан М.А. Разработка дополнительного метода диагностики Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома второго типа на основании исследования мурамилдипептид-стимулированной экспрессии фактора некроза опухоли моноцитами. Иммунология. 2024; 45 (2): 203-211. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-2-203-211
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Вклад авторов. Все авторы внесли равный вклад в написание статьи.
Для корреспонденции
Мусаева Эльвира Яшаровна -врач - аллерголог-иммунолог лаборатории трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемобластозов ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: e.m.69777@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0581-9472
Musaeva E.Ya., Kulakovskaya E.A., Vedmedskaya V.A., Rodina Yu.A., Pershin D.E., Shcherbina A.Yu., Maschan M.A.
Development of an additional method for X-linked lymphoproliferative syndrome type 2 diagnosis based on the assessment of muramyldipeptide-stimulated expression of tumor necrosis factor by monocytes
Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
Abstract
X-linked lymphoproliferative syndrome type 2 (XLP2) is a rare primary immunodeficiency, characterized by high incidence of severe complications such as hemophagocytic lymphohis-tiocytosis and inflammatory bowel disease. The disease is caused by pathogenic variants in the XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis) gene encoding XIAP protein that is involved in NOD2 signaling. Development of new methods for an early diagnosis of XLP2 is a matter of current interest.
The aim of the study was to evaluate tumor necrosis factor (TNF) expression in monocytes of XLP2 patients in response to stimulation by NOD2 ligand muramyldipeptide (MDP).
Material and methods. The study included 4 XLP2 patients, 3 mothers with hemizygous pathogenic variants in the XIAP gene, as well as 21 healthy donors over the age of 18. Fraction of mononuclear cells was isolated from peripheral blood samples, NOD2 receptor stimulation was carried out by incubation of cells in the presence of MDP. Lipopolysaccharide was used as a positive control, and a complete culture medium was used as a negative control. TNF expression in monocytes was evaluated by flow cytometry.
Results. A threshold value for evaluating the response to MDP stimulation was calculated. All samples of healthy donors showed significant increase in the proportion of TNF-producing monocytes in response to stimulation. Mothers with hemizygous pathogenic variants in the XIAP gene demonstrated response that was comparable to that of healthy donors. All patients included in the study, despite the presence of residual XIAP protein expression, showed no response to MDP stimulation. Additionally, the possibility of using cryopreserved mononuclear cells as a material for the assay was demonstrated on samples of 5 healthy donors and one patient.
Conclusion. Diagnostic method described in this study in combination with the assessment of XIAP protein expression allows for an early diagnosis of XLP2.
Keywords: X-linked lymphoproliferative syndrome type 2; lymphohistiocytosis; flow cytometry; NOD2; muramyl dipeptide
inflammatory bowel disease; hemophagocytic
Received 15.12.2023. Accepted 07.02.2024.
For citation: Musaeva E.Ya., Kulakovskaya E.A., Vedmedskaya V.A., Rodina Yu.A., Pershin D.E., Shcherbina A.Yu., Maschan M.A. Development of an additional method for X-linked lymphoproliferative syndrome type 2 diagnosis based on the assessment of muramyldipeptide-stimulated expression of tumor necrosis factor by monocytes. Immu-nologiya. 2024; 45 (2): 203-11. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2024-45-2-203-211 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. Authors declare no conflict of interests.
For correspondence
Elvira Ya. Musaeva -allergologist-immunologist of Lab. of Hematopoietic stem cell transplantation and Immunotherapy, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: e.m.69777@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0581-9472
Authors' contribution. Authors contributed equally to the writing of the article.
Введение
Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром второго типа (ХЛП2) - это редкое заболевание из группы врожденных ошибок иммунной системы, в основе которого лежат патогенные варианты гена XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis, или X-сцепленный ингибитор апоптоза). ХЛП2 характеризуется широким
спектром клинических проявлений: у пациентов наблюдаются высокая предрасположенность к развитию гемо-фагоцитарного лимфогистиоцитоза (ГЛГ), гипогамма-глобулинемия, цитопении, спленомегалия, а также ряд аутоиммунных и аутовоспалительных проявлений - воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), лихорадка, увеит, артрит [1-3]. В российском регистре
Примечание. ХЛП2 -Х-сцепленный лимфопролиферативный синдром второго типа; МДП - мурамилдипептид.
Таблица 1. Характеристика обследованных пациентов с ХЛП2
Пациент Возраст на момент исследования, годы Вариант гена XIAP Экспрессия XIAP в Т-клетках, % Экспрессия XIAP в НК-клетках, % Качественная оценка уровня экспрессии Х1АР Оценка ответа моноцитов на стимуляцию МДП
П1 6 c.del1-3ex, p.? 3 6 Отсутствует Нет ответа
П2 5 c.219G>A, p.Trp73Ter 22 18 Резко снижена Нет ответа
П3 4 с.612 614del, p.Gly205del 51 58 Снижена Нет ответа
П4 2 мес c.894_898del, p.Lys299LeufsTer9 19 15 Резко снижена Нет ответа
пациентов с первичными иммунодефицитными состояниями по состоянию на 2022 г. состоит 22 пациента с диагнозом ХЛП2 [4].
Учитывая высокий риск развития ГЛГ, что сопряжено с высоким риском летальности, а также наличие куративной опции в виде трансплантации гемопоэ-тических стволовых клеток (ТГСК), для пациентов с ХЛП2 крайне важна своевременная постановка диагноза [5-7]. «Золотым стандартом» диагностики является проведение молекулярно-генетического исследования -выявление патогенных вариантов гена XIAP. Однако генетическое тестирование, как правило, занимает длительное время, что может затормозить старт подготовки к ТГСК [8].
Одним из методов ранней верификации диагноза является оценка экспрессии внутриклеточного белка XIAP в Т-лимфоцитах и НК-клетках с помощью проточной цитометрии, позволяющая установить диагноз в течение суток. Однако в ряде случаев у пациентов при наличии патогенного варианта гена XIAP может отмечаться остаточная экспрессия соответствующего белка или даже нормальное ее значение, что создает трудности в интерпретации результата.
В настоящее время на территории Российской Федерации проведение данного исследования возможно только в условиях единичных лабораторий. В то же время ввиду высокой чувствительности белка к условиям транспортировки и хранения образцов его проведение пациентам из удаленных регионов сопряжено с рядом трудностей [9]. Учитывая вышесказанное, крайне актуально внедрение в рутинную практику дополнительных методов лабораторной диагностики, позволяющих обеспечить максимально эффективный алгоритм диагностического поиска для пациентов с ХЛП2.
В 2012 г., помимо известной ранее антиапоптоти-ческой функции белка XIAP, была описана его роль в качестве убиквитинлигазы, обеспечивающей передачу сигнала через рецептор NOD2 (Nucleotide-binding oligomerization domain containing 2) [10]. NOD2 - это цитозольный белок из группы паттерн-распознающих рецепторов. Специфическим лигандом для него явля-
ется компонент пептидогликана клеточной стенки бактерий - мурамилдипептид (МДП), связывание с которым приводит к синтезу ряда провоспалительных цитокинов, хемокинов и дефензинов [11-13]. Нарушение данного процесса, вероятно, приводит к достаточно частому развитию ВЗК, наблюдаемому у пациентов с ХЛП2, что при отсутствии иных проявлений в дебюте заболевания затрудняет своевременную постановку диагноза и, как следствие, проведение ТГСК [5, 6, 14-18]. В 2014 г. S. Ammann и соавт. показали отсутствие повышения экспрессии фактора некроза опухоли (ФНО, или Tumor necrosis factor, TNF) моноцитами у пациентов с ХЛП2 в ответ на стимуляцию МДП [19].
В настоящей работе описан опыт разработки исследования передачи сигнала через рецептор NOD2 у пациентов с ХЛП2 в условиях лаборатории трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемобластозов НМИЦ ДГОИ им. Д. Рогачева.
Материал и методы
Общая характеристика пациентов. В исследование были включены 4 пациента с ХЛП2, диагноз которым был поставлен на основании критериев ESID (European Society for Immunodeficiencies), наличия сниженной экспрессии белка XIAP, а также во всех случаях подтвержден с помощью молекулярно-генетического исследования (табл. 1). Все выявленные варианты XIAP являлись патогенными в соответствии с рекомендациями American College of Medical Genetics and Genomics (ACMG). Медиана возраста на момент исследования составляла 4,5 года (2 мес - 6 лет). В силу Х-сцепленного типа наследования все пациенты - мальчики.
Дополнительно исследование проводилось трем матерям с генетически верифицированным носитель-ством патогенных вариантов гена XIAP. В качестве группы сравнения выбран 21 условно здоровый донор старше 18 лет.
Исследование экспрессии внутриклеточного белка XIAP. Оценка экспрессии внутриклеточного белка XIAP проводилась методом проточной цитофлуо-риметрии с использованием моноклональных анти-
тел Mouse monoclonal anti-human XIAP antibody IgG1 pure (BD, США, clone 48/hILP/ XIAP) согласно протоколу, описанному ранее [9]. Экспрессия белка XIAP считалась сниженной при значении < 80 % для Т-клеток и < 75 % для НК-клеток, резко сниженной при значении < 30 %, за отсутствие белка принималось снижение данного показателя < 10 %.
Исследование МДП-стимулированного ответа. В качестве материала для исследования были взяты образцы венозной крови с консервантом (литий-гепарин), из которых с помощью центрифугирования в градиенте плотности была выделена фракция моно-нуклеарных клеток.
Для образцов всех пациентов, кроме П2, срок от момента забора материала до начала исследования составлял менее 24 ч. Для пациента П2 исследование МДП-стимулированного ответа выполнено с криокон-сервированными мононуклеарами периферической крови. С целью оценки влияния криоконсервирования и разморозки на результат исследования образцы 5 здоровых доноров были криконсервированы в фосфатно-солевом буфере Дульбекко (ФСБД) с добавлением 1 % альбумина (Микроген, Россия), 7,5 % диметилсульф-оксида (CryoMACS DMSO, Milteny Biotec, Германия). Хранили клетки в парах жидкого азота при температуре -180 °С, размораживали путем нагревания до 37 °С, отмывали в 10 мл ФСБД.
Клетки ресуспендировали в полной культуральной среде Iscove's modified Eagle's medium (IMDM) с 1 % содержанием комбинации антибиотика с антимикотиком (пенициллин/стрептомицин) и вносили в 12-луночный плоскодонный планшет из расчета 1 • 106 клеток на лунку с последующей инкубацией в течение 24 ч при температуре 37 °С с концентрацией CO2 5 %.
Далее супернатант удаляли, адгезированные клетки инкубировали в течение 2 ч в полной культуральной среде IMDM, растворе липополисахарида E. coli О26:В6 (Invitrogen eBioscience, США) в концентрации 250 нг/мл или растворе липофильно модифицированного мура-милдипептида ^18-МДП, InvivoGen, США) в концентрации 200 нг/мл. В каждый образец дополнительно вносили ингибитор трансмембранного транспорта белков (GolgiPlug, BD, США). По окончании периода стимуляции клетки снимали с помощью фермента акку-тазы (Accutase, StemCell, США).
При постоянном поддержании температуры 4 °С последовательно проводили поверхностное окрашивание линейно-специфическими антителами Mouse anti-human IgG2b CD14-APC (BD, США, clone M9P9), Human IgG1 anti-human HLA-DR, DP, DQ PE (Miltenyi Biotec, Германия, clone REA332), фиксацию и пермеа-билизацию клеток с помощью набора Cytofix/Cytoperm (BD, США) и внутриклеточное окрашивание антителом Mouse anti-human IgG1 TNF-PECy7 (Invitrogen, США, clone Mab11).
Анализ образцов выполняли на проточном цито-метре CytoFLEX (Beckman Coulter, США), в регионе моноцитов было собрано не менее 1500 событий.
Контроль качества проведения преаналитического и аналитического этапов исследования обеспечивался с помощью параллельного исследования образца условно здорового донора. Контроль качества работы проточного цитометра проводился с помощью регулярной калибровки частицами CytoFLEX Daily QC Fluorospheres (Beckman Coulter, США), что обеспечивало стабильность и воспроизводимость результатов исследований.
Оценку ответа моноцитов на стимуляцию проводили путем определения доли клеток, продуцирующих ФНО, в регионе ОТ14+^А^Р+-событий. Для каждой пробы был проведен расчет ДФНО, соответствующий разнице доли ФНО-продуцирующих моноцитов между образцами, стимулированными МДП, и контрольными без стимуляции. Образец, стимулированный липополисахаридом, служил в качестве положительного контроля.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версия 10.1.0 (GraphPad, США) и Microsoft Excel 2019. Для каждой исследованной группы данные представлены в виде минимального и максимального значений с расчетом медианы.
Результаты
Во всех образцах условно здоровых доноров получен ответ на стимуляцию МДП. Значение показателя ДФНО в данной группе (n = 16) составляло 18-85 % (медиана -46 %), что демонстрировало значимый прирост доли ФНО-продуцирующих моноцитов в ответ на стимуляцию (рис. 1).
Сформировано пороговое значение для оценки ответа на стимуляцию МДП на основании исследования фонового уровня экспрессии ФНО моноцитами в отсутствии стимуляции. Нами были проанализированы значения доли ФНО-продуцирующих моноцитов в образцах отрицательного контроля условно здоровых доноров. В данной выборке доля ФНО-продуцирующих моноцитов составляла 0,65-16,9 % (медиана - 2,23 %), в качестве порогового значения для оценки ответа на стимуляцию МДП была выбрана верхняя граница 95-го процентильного коридора, которая составила 7,9 %. Показатели ДФНО, имеющие значение меньше данной границы, были интерпретированы как отсутствие ответа на стимуляцию.
В образцах от пациентов с ХЛП2 (n = 4) ответа на стимуляцию МДП получено не было. В данной группе образцы, стимулированные МДП, и контрольные имели схожую долю ФНО-продуцирующих моноцитов (рис. 2А), показатели ДФНО не превышали порогового значения и были приравнены к нулю.
В качестве материала для исследования возможно использование криоконсервированных мононукле-аров. Нами была проведена оценка ответа на стимуляцию МДП в образцах 5 условно здоровых доноров и одного пациента с ХЛП2, подвергшихся заморозке. Результаты исследования во всех случаях были срав-
10
Культуральная среда (отрицательный контроль)
10
4
10
,5
TNF PC7-A
106
106
105
103; 0Н 0
Липополисахарид (положительный контроль)
TNF+-cells (97,82 %)
<
ó
гц < 104- ■ : щ
^
а Sei
о
10
4
10
106
TNF PC7-A
106
105
C P
A104
О
C
103
Мурамилдипептид
TNF+-cells (59,51 %)
'* \ "ф -
10
4
10
106
TNF PC7-A
Рис. 1. Доля ФНО-продуцирующих моноцитов в образцах здорового донора, инкубированных в культуральной среде (отрицательный контроль), в присутствии липополисахарида (положительный контроль) и мурамилдипептида Здесь и на рис. 2: TNF (Tumor necrosis factor) - фактор некроза опухоли.
0
0
0
нимы с образцами, для которых исследование было проведено в течение 24 ч после момента забора крови. Таким образом, у пациента с ХЛП2 ответа на стимуляцию получено не было, в группе здоровых доноров, подвергшихся криоконсервированию, значения ДФНО составили 47,2-61,2 % (медиана - 56,2 %).
У матерей - носительниц патогенных вариантов гена XIAP (п = 3) ответ на стимуляцию МДП был сравним с таковым у условно здоровых доноров. Значения ДФНО в данной группе составляли 39,9774,2 % (медиана - 70,8 %), что, как и в группе здоровых доноров, демонстрировало выраженный прирост доли ФНО-продуцирующих моноцитов (рис. 2Б).
Во всех исследованных группах доля ФНО-проду-цирующих моноцитов при стимуляции ЛПС (положительный контроль) увеличивалась на > 75 %, что значительно выше установленного порога для ответа на стимуляцию (7,9 %).
Сводные данные о распределении показателя ДФНО в исследованных группах суммированы на рис. 3.
Обсуждение
ХЛП2 - редкое первичное иммунодефицитное состояние. Высокая частота развития ГЛГ у данных пациентов и сопряженный с этим высокий риск летального исхода, а также длительность времени, необходимого для проведения генетического исследования, обусловливают актуальность разработки дополнительных диагностических методов, способствующих своевременной верификации диагноза и, как следствие, возможности более раннего начала подготовки к проведению ТГСК.
У пациентов с ХЛП2 описано нарушение проведения сигнала через цитозольный рецептор N002, преимущественно экспрессируемый в миелоидных клетках [10, 14, 16, 19]. Соответственно этим данным в нашем исследовании стимуляция моноцитов пациентов спе-
цифическим для данного рецептора лигандом демонстрировала отсутствие синтеза провоспалительного цитокина - ФНО. В то же время инкубация моноцитов, полученных от условно здоровых доноров, с МДП приводила к значимому повышению доли ФНО-продуциру-ющих моноцитов.
Диагностическая значимость вышеописанного исследования обусловлена потребностью в дополнительных методах диагностики для пациентов, имеющих остаточную экспрессию белка Х1АР при исследовании с помощью проточной цитометрии. Подобная картина может наблюдаться в случае синтеза функционально неактивного белка при миссенс-вариантах или в случае расположения варианта в части белка, не специфичной для используемого антитела [2, 9]. Так, например, у П3 из нашей когорты пациентов экспрессия белка Х1АР по данным проточной цитометрии составляет 51 % в Т-клетках и 58 % в НК-клетках (см. табл. 1), при этом ответа на стимуляцию МДП не отмечено, что позволяет судить об отсутствии функционально активного белка.
Таким образом, несмотря на наблюдаемую у пациентов П2, П3 и П4 сохранную частичную экспрессию белка Х1АР, исследование МДП-стимулированного ответа демонстрирует отсутствие увеличения доли ФНО-синтезирующих моноцитов у данных пациентов, позволяя более точно утверждать наличие диагноза ХЛП2.
В то же время одним из преимуществ оценки экспрессии белка Х1АР с помощью проточной цитометрии является возможность определения статуса носитель-ства патогенных вариантов [9]. Нами проведена оценка МДП-стимулированного ответа у трех матерей с геми-зиготными делециями в гене XIAP, имеющих бимодальное распределение экспрессии соответствующего белка, однако отклонений в синтезе ФНО в ответ на стимуляцию не отмечено.
Э
Культуральная среда (отрицательный контроль)
106
105
<
б Рч
2 io4 J
о
о
103 : 0 -i
TNF+-cells (2,40 %)
щ
0
104 105
TNF PC7-A
106
104 105 TNF PC7-A
106
106
105
C
Рч
2 104 j о
C 103
0-.
106
105
C
гц
< 104 J
103
0-.
Липополисахарид (положительный контроль)
104 105 TNF PC7-A
106
TNF-cells (99,39 %)
106
105
C P
A104
о
C
Мурамилдипептид
104 105 TNF PC7-A
106
103-
0-.
104 105 TNF PC7-A
106
104 105 TNF PC7-A
106
Рис. 2. Доля ФНО-продуцирующих моноцитов в образцах пациента с ХЛП2 (А) и матери - носительницы патогенного варианта гена Х1АР (Б), инкубированных в культуральной среде (отрицательный контроль), в присутствии липополисахарида (положительный контроль) и мурамилдипептида
0
0
0
0
0
Важна роль функциональных исследований в оценке значимости ранее неописанных генетических вариантов. К настоящему времени описано более 100 патогенных вариантов, ответственных за развитие ХЛП2 [20]. Из них большинство представлено деле-циями различной протяженности и нонсенс-вариан-
100 П
80 -
60 -
О
к
< 40 -I
20 -
7,90
Пациенты Матери-(n = 4) носительницы (n = 3)
Здоровые доноры (n = 16)
Здоровые доноры после разморозки (n = 5)
5
Рис. 3. Распределение результатов исследования Серым цветом обозначена зона 97,5 процентилъного коридора показателей АФНО, наблюдаемых у здоровых доноров; пунктирной линией обозначено пороговое значение АФНО.
тами, однако также встречаются миссенс-варианты, при которых, как было описано выше, оценка значимости путем определения экспрессии внутриклеточного белка может вызывать трудности [2, 21]. В таких случаях проведение оценки МДП-стимулированного ответа может выступать в качестве дополнительного инструмента для верификации диагноза.
Учитывая широкий спектр клинических проявлений, наблюдаемый у пациентов с ХЛП2, большой интерес представляет исследование специфичности вышеописанного исследования для данных пациентов.
S. Ammann и соавт. в 2014 г. был продемонстрирован нормальный ответ на стимуляцию МДП у пациентов с иммунодефицитами, имевшими схожую с ХЛП2 презентацию заболевания [19]. В то же время дефект в передачи сигнала через рецептор NOD2 обсуждается как этиологический фактор для развития болезни Крона, при которой могут выявляться варианты потери функции данного гена. В настоящее время имеются единичные сообщения о снижении МДП-стимулирован-ного ответа у некоторых пациентов с болезнью Крона при наличии определенных вариантов гена NOD2 [22, 23]. Данные наблюдения подчеркивают необходимость комплексного подхода к диагностике ХЛП2
в виде совместной оценки клинической картины, уровня экспрессии белка и результатов молекулярно-генетичес-кого исследования.
В настоящее время, учитывая малочисленность исследованной группы, требуется проведение исследования на более крупных когортах пациентов, что сопряжено с рядом трудностей в связи с низкой частотой встречаемости заболевания. Однако ввиду распространенности ВЗК среди пациентов с ХЛП2 возможно рассмотрение вопроса о внедрении данного метода исследования в стационарах не только гематологического, но и гастроэнтерологического профиля.
■ Литература
1. Mudde A.C.A., Booth C., Marsh R.A. Evolution of Our Understanding of XIAP Deficiency. Front. Pediatr. 2021; 9: 660520. DOI: https:// doi.org/10.3389/fped.2021.660520
2. Speckmann C., Lehmberg K., Albert M.H., Damgaard R.B., Fritsch M., Gyrd-Hansen M., Rensing-Ehl A., Vraetz T., Grimbacher B., Salzer U., Fuchs I., Ufheil H., Belohradsky B.H., Hassan A., Cale C.M., Elawad M., Strahm B., Schibli S., Lauten M., Kohl M., Meerpohl J.J., Rodeck B., Kolb R., Eberl W., Soerensen J., von Bernuth H., Lorenz M., Schwarz K., Zur Stadt U., Ehl S. X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) deficiency: the spectrum of presenting manifestations beyond hemophago-cytic lymphohistiocytosis. Clin. Immunol. 2013; 149 (1): 133-41. DOI: https://doi.org/10.1016/j.clim.2013.07.004.
3. Basiaga M.L., Weiss P.F., Behrens E.M. BIRC4 Mutation: An Important Rare Cause of Uveitis. J. Clin. Rheumatol. 2015; 21 (8): 444-7. DOI: https://doi.org/10.1097/RHU.0000000000000327
4. Аналитический отчет на основании данных регистра пациентов с первичными иммунодефицитными состояниями. 14 декабря 2023. URL: https://naepid.ru/registr-pid/statistical-reports/
5. Yang L., Booth C., Speckmann C., Seidel M.G., Worth A.J.J., Kindle G., Lankester A.C., Grimbacher B., ESID Clinical and Registry Working Parties, Gennery A.R., Seppanen M.R.J., Morris E.C., Burns S.O. Phenotype, genotype, treatment, and survival outcomes in patients with X-linked inhibitor of apoptosis deficiency. J. Allergy. Clin. Immunol. 2022; 150 (2): 456-66. DOI: https://doi.org /10.1016/j.jaci.2021.10.037
6. Лаберко А.Л., Старичкова Ю.В., Хисматуллина Р.Д., Персиан-цева М.И., Масчан М.А., Балашов Д.Н., Румянцев А.Г. Оптимизация планирования трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток с использованием информационной системы у детей с первичными иммунодефицитами. Иммунология. 2021; 42 (1): 49-59. DOI: https:// doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-1-49-59
7. Tsuma Y., Imamura T., Ichise E., Sakamoto K., Ouchi K., Oso-ne S., Ishida H., Wada T., Hosoi H. Successful treatment of idiopathic colitis related to XIAP deficiency with allo-HSCT using reduced-intensity conditioning. Pediatr Transplant. 2015; 19 (1): E25-8. DOI: https://doi. org/10.1111/petr. 12405
8. Chinn I.K., Orange J.S. A2020 update on the use of genetic testing for patients with primary immunodeficiency. Expert Rev Clin Immunol. 2020; 16 (9): 897-909. DOI: https://doi.org/10.1080/1744666X.2020.1814145
9. Першин Д.Е., Ведмедская В.А., Фадеева М.С., Владимиров И.С., Кулаковская Е.А., Роппельт А.А., Киева А.М., Райки-на Е.В., Родина Ю.А., Масчан М.А., Щербина А.Ю. Использование метода проточной цитофлуориметрии для верификации диагноза Х-сцепленного лимфопролиферативного синдрома 1-го и 2-го типов. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2020; 19 (4): 108-18. DOI: https://doi.org/10.24287/1726-1708-2020-19-4-108-118
10. Damgaard R.B., Nachbur U., Yabal M., Wong W.W., Fiil B.K., Kastirr M., Rieser E., Rickard J.A., Bankovacki A., Peschel C., Ruland J., Bekker-Jensen S., Mailand N., Kaufmann T., Strasser A., Walczak H., Silke J., Jost P.J., Gyrd-Hansen M. The ubiquitin ligase XIAP recruits LUBAC for NOD2 signaling in inflammation and innate immunity. Mol. Cell. 2012; 46 (6): 746-58. DOI: https://doi.org/10.1016/j. molcel.2012.04.014
Заключение
В настоящей работе представлен дополнительный метод лабораторной диагностики для пациентов с ХЛП2, основанный на оценке ответа моноцитов на стимуляцию МДП. Данный метод в сочетании с оценкой экспрессии белка Х1АР в короткий срок позволяет подтвердить наличие у пациента диагноза ХЛП2, а также может являться инструментом для подтверждения клинической значимости неописанных раннее генетических вариантов, полученных в ходе молекулярно-генетического исследования.
11. Negroni A., Pierdomenico M., Cucchiara S., Stronati L. NOD2 and inflammation: current insights. J. Inflamm. Res. 2018; 11: 49-60. DOI: https://doi.org /10.2147/JIR.S137606
12. Лебедева Е.С., Багаев А.В., Гараева А.Я., ЧулкинаМ.М., Пичу-гин А.В., Атауллаханов Р.И. Кооперативное взаимодействие сигнальных путей рецепторов TLR4, TLR9 и NOD2 в макрофагах мыши. Иммунология. 2018; 39 (1): 4-11. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-4-11
13. Дагиль Ю.А., Пащенков М.В. Сопоставление трех видов клеточных тест-систем для оценки биологической активности агони-стов рецептора NOD2. Иммунология. 2020; 41 (4): 304-11. DOI: https:// doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-304-311
14. Topal Y., Gyrd-Hansen M. RIPK2 NODs to XIAP and IBD. Semin Cell. Dev. Biol. 2021; 109: 144-50. DOI: https://doi.org/10.1016/j. semcdb.2020.07.001
15. Nielsen O.H., LaCasse E.C. How genetic testing can lead to targeted management of XIAP deficiency-related inflammatory bowel disease. Genet Med. 2017; 19 (2): 133-43. DOI: https://doi.org/10.1038/ gim.2016.82
16. Quaranta M., Wilson R., Gonjalves Serra E., Pandey S., Schwerd T., Gilmour K., Klenerman P., Powrie F., Keshav S., Travis S.P.L., Anderson C.A., Uhlig H.H. Consequences of Identifying XIAP Deficiency in an Adult Patient With Inflammatory Bowel Disease. Gastroenterology. 2018; 155 (1): 231-4. DOI: https://doi.org/10.1053/j.gastro.2018.03.069
17. Роппельт А.А., Юхачева Д.В., Мякова Н.В., Смирнова Н.В., Скворцова Ю.В., Варламова Т.В., Райкина Е.В., Абрамов Д.С., Уланова Н.Б., Габрусская Т.В., Щербина А.Ю. Х-сцепленный лимфо-пролиферативный синдром 1-го и 2-го типов. Вопросы гематологии/ онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2016; 15 (1): 17-26. DOI: https://doi.org/10.20953/1726-1708-2016-1-17-26
18. Пирожков С.В., Литвицкий П.Ф. Инфламмасомные болезни. Иммунология. 2018; 39 (2-3): 158-65. DOI: http://dx.doi.org/10. 18821/0206-4952-2018-39-2-3-158-165
19. Ammann S., Elling R., Gyrd-Hansen M., Dückers G., Bredius R., Burns S.O., Edgar J.D., Worth A., Brandau H., Warnatz K., Zur Stadt U., Hasselblatt P., Schwarz K., Ehl S., Speckmann C. A new functional assay for the diagnosis of X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) deficiency. Clin. Exp. Immunol. 2014; 176 (3): 394-400. DOI: https://doi.org/10.1111/ cei.12306
20. Tang J., Zhou X., Wang L., Hu G., Zheng B., Wang C., Lu Y., Jin Y., Guo H., Liu Z. Eosinophilic colitis in a boy with a novel XIAP mutation: a case report. BMC Pediatr. 2020; 20 (1): 171. DOI: https://doi. org/10.1186/s12887-020-02075-z
21. Chang I., Park S., Lee H.J., Kim I., Park S., Ahn M.K., Lee J., Kang M., Baek I.J., Sung Y.H., Pack C.G., Kang H.J., Lee K., Im H.J., Seo E.J., Kim K.M., Yang S.K., Song K., Oh S.H. Interpretation of XIAP Variants of Uncertain Significance in Paediatric Patients with Refractory Crohn's Disease. J. Crohns. Colitis. 2021; 15 (8): 1291-304. DOI: https:// doi.org/10.1093/ecco-jcc/jjab013
22. Ammann S., Fuchs S., Martin-Martin L., Castro C.N., Spielber-ger B., Klemann C., Elling R., Heeg M., Speckmann C., Hainmann I., Kaiser-Labusch P., Horneff G., Thalhammer J., Bredius R.G., Stadt U.Z., Lehmberg K., Fuchs I., von Spee-Mayer C., Henneke P., Ehl S. Functional
flow cytometry of monocytes for routine diagnosis of innate primary immunodeficiencies. J. Allergy. Clin. Immunol. 2020; 145 (1): 434-7.e4. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2019.09.002
23. Schwerd T., Pandey S., Yang H.T., Bagola K., Jameson E., Jung J., Lachmann R.H., Shah N., Patel S.Y., Booth C., Runz H., Düker G., Bettels R., Rohrbach M., Kugathasan S., Chapel H., Keshav S., Elkadri A.,
Platt N., Muise A.M., Koletzko S., Xavier R.J., Marquardt T., Powrie F., Wraith J.E., Gyrd-Hansen M., Platt F.M., Uhlig H.H. Impaired antibacterial autophagy links granulomatous intestinal inflammation in Niemann-Pick disease type C1 and XIAP deficiency with NOD2 variants in Crohn's disease. Gut. 2017; 66 (6): 1060-73. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2015-310382
■ References
1. Mudde A.C.A., Booth C., Marsh R.A. Evolution of Our Understanding of XIAP Deficiency. Front Pediatr. 2021; 9: 660520. DOI: https://doi.org/10.3389/fped.2021.660520
2. Speckmann C., Lehmberg K., Albert M.H., Damgaard R.B., Fritsch M., Gyrd-Hansen M., Rensing-Ehl A., Vraetz T., Grimbacher B., Salzer U., Fuchs I., Ufheil H., Belohradsky B.H., Hassan A., Cale C.M., Elawad M., Strahm B., Schibli S., Lauten M., Kohl M., Meerpohl J.J., Rodeck B., Kolb R., Eberl W., Soerensen J., von Bernuth H., Lorenz M., Schwarz K., Zur Stadt U., Ehl S. X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) deficiency: the spectrum of presenting manifestations beyond hemophagocytic lymphohistiocytosis. Clin Immunol. 2013; 149 (1): 133-41. DOI: https://doi.org/10.1016/j.clim.2013.07.004
3. Basiaga M.L., Weiss P.F., Behrens E.M. BIRC4 Mutation: An Important Rare Cause of Uveitis. J Clin Rheumatol. 2015; 21 (8): 444-7. DOI: https://doi.org/10.1097/RHU.0000000000000327
4. Russian register of patients with primary immunodeficiency states analytical report. URL: https://naepid.ru/registr-pid/statistical-reports/ (date of access 14.12.2023)
5. Yang L., Booth C., Speckmann C., Seidel M.G., Worth A.J.J., Kindle G., Lankester A.C., Grimbacher B., ESID Clinical and Registry Working Parties, Gennery A.R., Seppanen M.R.J., Morris E.C., Burns S.O. Phenotype, genotype, treatment, and survival outcomes in patients with X-linked inhibitor of apoptosis deficiency. J Allergy Clin Immunol. 2022; 150 (2): 456-66. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2021.10.037
6. Laberko A.L., Starichkova Yu.V., Khismatullina R.D., Persiant-seva M.I., Maschan M.A., Balashov D.N., Rumyantsev A.G. Optimization of hematopoietic stem cell transplantation planning using medical information system in children with primary immunodeficiencies. Immunologiya. 2021; 42 (1): 49-59. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-1-49-59 (in Russian)
7. Tsuma Y., Imamura T., Ichise E., Sakamoto K., Ouchi K., Osone S., Ishida H., Wada T., Hosoi H. Successful treatment of idiopathic colitis related to XIAP deficiency with allo-HSCT using reduced-intensity conditioning. Pediatr Transplant. 2015; 19 (1): E25-8. DOI: https://doi. org/10.1111/petr. 12405
8. Chinn I.K., Orange J.S. A2020 update on the use of genetic testing for patients with primary immunodeficiency. Expert Rev Clin Immunol. 2020; 16 (9): 897-909. DOI: https://doi.org/10.1080/1744666X.2020.1814145
9. Pershin D.E., Vedmedskaya V.A., Fadeeva M.S., Vladimirov I.S., Kulakovskaya E.A., Roppelt A.A., Kieva A.M., Raykina E.V., Rodina Yu.A., Maschan M.A., Shcherbina A.Yu. Verification of X-linked lympho-proliferative syndrome type 1 and 2 using a flow cytometry method. Pediatric Hematology/Oncology and Immunopathology. 2020; 19 (4): 108-18. DOI: https://doi.org/10.24287/1726-1708-2020-19-4-108-118 (in Russian)
10. Damgaard R.B., Nachbur U., Yabal M., Wong W.W., Fiil B.K., Kastirr M., Rieser E., Rickard J.A., Bankovacki A., Peschel C., Ruland J., Bekker-Jensen S., Mailand N., Kaufmann T., Strasser A., Walczak H., Silke J., Jost P.J., Gyrd-Hansen M. The ubiquitin ligase XIAP recruits LUBAC for NOD2 signaling in inflammation and innate immunity. Mol Cell. 2012; 46 (6): 746-58. DOI: https://doi.org/10.1016/j. molcel.2012.04.014
11. Negroni A., Pierdomenico M., Cucchiara S., Stronati L. NOD2 and inflammation: current insights. J Inflamm Res. 2018; 11: 49-60. DOI: https://doi.org /10.2147/JIR.S137606
12. Lebedeva E.S., Bagaev A.V., Garaeva A.Y., Chulkina M.M., Pichugin A.V., Ataullakhanov R.I. The cooperative interaction of TLR4-, TLR9- and NOD2-signaling pathways in mouse macrophages. Immu-nologiya. 2018; 39 (1): 4-11. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-4-11 (in Russian)
13. Dagil Yu.A., Pashenkov M.V. A comparison of three types of cell-based test systems for the assessment of biological activity of NOD2
receptor agonists. Immunologiya. 2020; 41 (4): 304-11. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-304-311 (in Russian)
14. Topal Y., Gyrd-Hansen M. RIPK2 NODs to XIAP and IBD. Semin Cell Dev Biol. 2021; 109: 144-50. DOI: https://doi.org/10.1016/j. semcdb.2020.07.001
15. Nielsen O.H., LaCasse E.C. How genetic testing can lead to targeted management of XIAP deficiency-related inflammatory bowel disease. Genet Med. 2017; 19 (2): 133-43. DOI: https://doi.org/10.1038/ gim.2016.82
16. Quaranta M., Wilson R., Gonjalves Serra E., Pandey S., Schwerd T., Gilmour K., Klenerman P., Powrie F., Keshav S., Travis S.P.L., Anderson C.A., Uhlig H.H. Consequences of Identifying XIAP Deficiency in an Adult Patient With Inflammatory Bowel Disease. Gastroenterology. 2018; 155 (1): 231-4. DOI: https://doi.org/10.1053Zj.gastro.2018.03.069
17. Roppelt A.A., Yukhacheva D.V., Myakova N.V., Smirnova N.V., Skvortsova Yu.V., Varlamova T.V., Raikina E.V., Abramov D.S., Ula-nova N.B., Gabrusskaya T.V., Shcherbina A.Yu. X-Linked lymphopro-liferative syndrome types 1 and 2. Vopr. gematol./onkol. immunopatol. pediatr. (Pediatric Haematology/Oncology and Immunopathology). 2016; 15 (1): 17-26. DOI: https://doi.org/10.20953/1726-1708-2016-1-17-26 (in Russian)
18. Pirozhkov S.V., Litvitskiy P.F. Inflammasomal diseases. Immunologiya. 2018; 39 (2-3): 158-65. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-2-3-158-165 (in Russian)
19. Ammann S., Elling R., Gyrd-Hansen M., Dückers G., Bredius R., Burns S.O., Edgar J.D., Worth A., Brandau H., Warnatz K., Zur Stadt U., Hasselblatt P., Schwarz K., Ehl S., Speckmann C. A new functional assay for the diagnosis of X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) deficiency. Clin Exp Immunol. 2014; 176 (3): 394-400. DOI: https://doi.org/10.1111/ cei.12306
20. Tang J., Zhou X., Wang L., Hu G., Zheng B., Wang C., Lu Y., Jin Y., Guo H., Liu Z. Eosinophilic colitis in a boy with a novel XIAP mutation: a case report. BMC Pediatr. 2020; 20 (1): 171. DOI: https://doi. org/10.1186/s12887-020-02075-z
21. Chang I., Park S., Lee H.J., Kim I., Park S., Ahn M.K., Lee J., Kang M., Baek I.J., Sung Y.H., Pack C.G., Kang H.J., Lee K., Im H.J., Seo E.J., Kim K.M., Yang S.K., Song K., Oh S.H. Interpretation of XIAP Variants of Uncertain Significance in Paediatric Patients with Refractory Crohn's Disease. J Crohns Colitis. 2021; 15 (8): 1291-304. DOI: https:// doi.org/10.1093/ecco-jcc/jjab013
22. Ammann S., Fuchs S., Martin-Martin L., Castro C.N., Spielber-ger B., Klemann C., Elling R., Heeg M., Speckmann C., Hainmann I., Kaiser-Labusch P., Horneff G., Thalhammer J., Bredius R.G., Stadt U.Z., Lehmberg K., Fuchs I., von Spee-Mayer C., Henneke P., Ehl S. Functional flow cytometry of monocytes for routine diagnosis of innate primary immunodeficiencies. J Allergy Clin Immunol. 2020; 145 (1): 434-7.e4. DOI: https://doi.org/10.1016/jjaci.2019.09.002
23. Schwerd T., Pandey S., Yang H.T., Bagola K., Jameson E., Jung J., Lachmann R.H., Shah N., Patel S.Y., Booth C., Runz H., Düker G., Bettels R., Rohrbach M., Kugathasan S., Chapel H., Keshav S., Elkadri A., Platt N., Muise A.M., Koletzko S., Xavier R.J., Marquardt T., Powrie F., Wraith J.E., Gyrd-Hansen M., Platt F.M., Uhlig H.H. Impaired antibacterial autophagy links granulomatous intestinal inflammation in Niemann-Pick disease type C1 and XIAP deficiency with NOD2 variants in Crohn's disease. Gut. 2017; 66 (6): 1060-73. DOI: https://doi.org/10.1136/gutjnl-2015-310382
Сведения об авторах
Мусаева Эльвира Яшаровна - врач - аллерголог-иммунолог лаб. трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемобластозов ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: e.m.69777@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0581-9472
Кулаковская Елена Александровна - биолог лаб. трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемобластозов ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рога-чева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: alenakulakovskaya@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-9639-2779
Ведмедская Виктория Андреевна - биолог лаб. трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемо-бластозов ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: viktorivez@ya.ru https://orcid.org/0000-0001-7247-4844
Родина Юлия Александровна - канд. мед. наук, зав. отд. иммунологии ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: rodina.julija@rambler.ru http://orcid.org/0000-0001-9857-4456
Першин Дмитрий Евгеньевич - канд. мед. наук, зав. лаб. трансплантационной иммунологии и иммунотерапии гемобластозов ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: dimprsh@icloud.com http://orcid.org/0000-0002-6148-7209
Щербина Анна Юрьевна - д-р мед. наук, проф., зам. директора Института гематологии, иммунологии и клеточных технологий ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
E-mail: shcher26@hotmail.com http://orcid.org/0000-0002-3113-4939
Масчан Михаил Александрович - д-р мед. наук, проф., зам. генерального директора, директор Института молекулярной и экспериментальной медицины ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Д. Рогачева» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: mmaschan@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-1735-0093
Authors' information
Elvira Ya. Musaeva - Allergologist-Immunologist of the Lab. of Hematopoietic Stem Cell Transplantation and Immunotherapy, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: e.m.69777@gmail.com https://orcid.org/0000-0003-0581-9472
Elena A. Kulakovskaya - Biologist of the Lab. of Hematopoietic Stem Cell Transplantation and Immunotherapy, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: alenakulakovskaya@gmail.com https://orcid.org/0000-0002-9639-2779
Viktoria A. Vedmedskaya - Biologist of the Lab. of Hematopoietic Stem Cell Transplantation and Immunotherapy, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: viktorivez@ya.ru https://orcid.org/0000-0001-7247-4844
Julia A. Rodina - PhD, Head of the Dept. of Immunology, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: rodina.julija@rambler.ru http://orcid.org/0000-0001-9857-4456
Dmitry E. Pershin - PhD, Head of the Lab. of Hemato-poietic Stem Cell Transplantation and Immunotherapy, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: dimprsh@icloud.com http://orcid.org/0000-0002-6148-7209
Anna Yu. Shcherbina - MD, PhD, Prof., Deputy Director of the Institute of Hematology, Immunology and Cellular Technologies, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: shcher26@hotmail.com http://orcid.org/0000-0002-3113-4939
Michael A. Maschan - MD, PhD, Prof., Deputy Director, Director of the Institute of Molecular and Experimental Medicine, D. Rogachev FRCPHOI of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: mmaschan@yandex.ru https://orcid.org/0000-0003-1735-0093
