Различия в поведении генов-партнеров по хромосомным транслокациям, ассоциированным с вторичными лейкозами, в условиях ингибировании ДНК-топоизомеразы II Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

Приложение

Различия в поведении генов-партнеров по хромосомным транслокациям, ассоциированным с вторичными лейкозами, в условиях ингибировании ДНК-топоизомеразы II

М.А. Рубцов С.И. Глухов Л.В. Агеева С.В. Разин '■ 2, О.В. Яровая 2 1 Кафедра молекулярной биологии Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова;

2 Институт биологии гена РАН, Москва, Россия

Гены AML1 и ETO человека, равно как и пара MLL/AF9, известны как частые партнеры по хромосомным транслокациям, ассоциированным с развитием так называемых "обусловленных лечением" или "вторичных" лейкозов (treatment-related leukaemias, t-ANLL) у пациентов, получавших химиотерапевтическое лечение с применением препаратов, специфически ингибирующих фермент ДНК-топоизомеразу II. Для лучшего понимания механизмов, приводящих к возникновению перестроек t(8;21)(q22;q22) и t(9; 11)(p22;q23), мы проанализировали степень взаимной колокализации генов AML1/ETO и MLL/AF9 попарно в культуре клеток человека лимфоидной природы (линия Jurkat). С применением техники трехмерной флуоресцентной гибридизации in situ (3D FISH), мы показали, что, по меньшей мере, в 5% популяции клеток Jurkat, аллели AML1 и ETO находятся в непосредственной близости. И количество сближенных аллелей AML1 и ETO двукратно возрастает в клетках, обработанных этопо-зидом - специфическим ингибитором ДНК-топоизомеразы II. Причем более чем в половине детектированных случаев, колокализация генов AML1 и ETO в необработанных клетках наблюдается на поверхности ядрышка, а в клетках, обработанных этопозидом, доля таких сигналов увеличивается до 80%. Что же касается генов MLL и AF9, то, несмотря на высокую вероятность нахождения на поверхности ядрышка вне

зависимости от обработки этопозидом (до 14% в случае каждого из генов), доля сближенных аллелей MLL и AF9 остается стабильно невысокой (не более 2%), что практически не отличается от вероятности случайной встречи двух генов в трехмерном пространстве ядра.

Роль ядрышка в сближении и процессировании разорванных концов ДНК на сегодняшний день остается не выясненной, несмотря на то, что возможность участия этого многофункционального ядерного компартмента в репарации ДНК обсуждается в последние годы многими исследователями. В связи с этим, мы провели исследование, в результате которого показали, что сверхэкспрессия нуклеолина - одного из мажорных белков ядрышка, существенно изменяет чувствительность клеток Jurkat к обработке этопозидом. Полученные результаты позволяют предполагать наличие различных механизмов репарация разрывов ДНК, вносимых ДНК-топоизомеразой II, ошибки в которых могут приводить к хромосомным транслокациям.

Работа была выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (ГК П1339, 16.740.11.0629, 14.740.11.1201), с частичным использованием средств РФФИ (гранты 10-04-00305-а, 09-04-93105-CNRS-а), программы МКБ президиума РАН, гранта компании ОПТЭК (Carl Zeiss) и гранта Президента Российской Федерации (MK-222.2011.4).

Эффективность трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток в лечении больных

миелодиспластическим синдромом

Ю.В. Рудницкая, Е.В. Морозова, Н.Н. Мамаев, А.Л. Алянский, Б.В. Афанасьев Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Санкт-Петербург; Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова

Введение. Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) является единственным методом излечения больных миелодиспластическим синдромом (МДС). Консервативная терапия больных МДС (заместительная терапия компонентами крови и ростовыми факторами, цитостатики, иммуносупрессивная терапия; гипометилирующие препараты) носит преимущественно паллиативный характер. Алло-ТГСК при МДС сопряжена с высокой летальностью, которая зависит от развития таких осложнений как, отторжение трансплантата, реакции "трансплантат против хозяина" (РТПХ), инфекционных осложнений. МДС - заболевание лиц старшей возрастной группы, имеющих ряд сопутствующих заболеваний. Таким образом, отдаленные результаты алло-ТГСК зависят от степени токсичности режима кондиционирования. Миелоаблативные режимы кондиционирования (МАК) сопровождаются развитием органной недостаточности, мукозитом тяжелой степени, веноокклюзионной болезнью. В тоже время режимы кондиционирования со сниженной интенсивностью доз (РКСИД) могут увеличивать частоту рецидивов основного заболевания. Цель исследования - оценить эффективность алло-ТГСК с использованием различных режимов кондиционирования и источников трансплантата у больных МДС.

Материалы и методы. Алло-ТГСК выполнена у 70 больных в возрасте 18-73 лет (медиана возраста 53 года). По классификации IPSS 21 (30%) больных отнесены к группе промежуточного-1 риска, 23 (32%) к группе промежуточно-го-2, 13 (19%) к группе высокого риска, у 13 больных - диагноз ХММЛ. Родственная алло-ТГСК проведена у 16 (23%), неродственная - у 54 (77%) больных. Костный мозг (КМ) в качестве источника гемопоэтических клеток использовали у 9 (13%), периферические стволовые клетки крови (ПСКК) - у

61 (87%) больных. От полностью совместимых доноров проведено 47 (67%) алло-ТГСК, от частично несовместимых -23 (33%). РКСИД перенесли - 55 (79%), МАК - 15 (21%). Профилактику острой РТПХ проводили циклоспорином-А (ЦСА) у 63 (91,3%) больных в комбинации с метотрексатом (10 мг/м2 дни +1, +3, +6) или микофенолат мофетилом (ММФ), либо такролимусом - у 6 (8,7%) в комбинации с ММФ или метотрексатом. Метотрексат получили 22 из 70 больных (31%). В случае алло-ТГСК от неродственного донора использовали, АЛГ в дозе 60-80 мг/кг.

Результаты и обсуждение. Общая 5-летняя выживаемость (ОВ) составила 70 (53%). МАК имеют большую эффективность по сравнению с РКСИД: показатели ОВ у больных МДС составили 80% и 45% соответственно (р = 0,08). ОВ больных при неродственной алло-ТГСК не отличается от ОВ при родственной алло-ТГСК и не зависит от источника трансплантата. Возраст больного (старше 50 лет) и неблагоприятный кариотип являются факторами, снижающими ОВ после алло-ТГСК. Показатели ОВ выше в группе, где донором был мужчина, а реципиентом женщина - 77% (р = 0,04). Показатели ОВ выше при количестве CD34+ в трансплантате более 3,0 х 106/кг (р = 0,04). Кумулятивная частота отторжения ниже у больных, получивших трансплантат с высокой клеточностью (2% по сравнению с 24% в группе больных с трансплантатом с низкой кле-точностью; р = 0,004). При использовании ПСКК кумулятивная частота отторжения трансплантата меньше, чем у больных, получивших КМ - 2% и 22%-, соответственно (р = 0,005). Применение метотрексата в профилактике острой РТПХ увеличивает ОВ больных после алло-ТГСК с применением РКСИД (с/ без метотрексата - 70% и 38% соответственно; р = 0,06). Острая РТПХ тяжелой (III-IV) степени развивается чаще при МАК по

23