CC BY
45
Приложение
Различия в поведении генов-партнеров по хромосомным транслокациям, ассоциированным с вторичными лейкозами, в условиях ингибировании ДНК-топоизомеразы II
М.А. Рубцов С.И. Глухов Л.В. Агеева С.В. Разин '■ 2, О.В. Яровая 2 1 Кафедра молекулярной биологии Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова;
2 Институт биологии гена РАН, Москва, Россия
Гены AML1 и ETO человека, равно как и пара MLL/AF9, известны как частые партнеры по хромосомным транслокациям, ассоциированным с развитием так называемых "обусловленных лечением" или "вторичных" лейкозов (treatment-related leukaemias, t-ANLL) у пациентов, получавших химиотерапевтическое лечение с применением препаратов, специфически ингибирующих фермент ДНК-топоизомеразу II. Для лучшего понимания механизмов, приводящих к возникновению перестроек t(8;21)(q22;q22) и t(9; 11)(p22;q23), мы проанализировали степень взаимной колокализации генов AML1/ETO и MLL/AF9 попарно в культуре клеток человека лимфоидной природы (линия Jurkat). С применением техники трехмерной флуоресцентной гибридизации in situ (3D FISH), мы показали, что, по меньшей мере, в 5% популяции клеток Jurkat, аллели AML1 и ETO находятся в непосредственной близости. И количество сближенных аллелей AML1 и ETO двукратно возрастает в клетках, обработанных этопо-зидом - специфическим ингибитором ДНК-топоизомеразы II. Причем более чем в половине детектированных случаев, колокализация генов AML1 и ETO в необработанных клетках наблюдается на поверхности ядрышка, а в клетках, обработанных этопозидом, доля таких сигналов увеличивается до 80%. Что же касается генов MLL и AF9, то, несмотря на высокую вероятность нахождения на поверхности ядрышка вне
зависимости от обработки этопозидом (до 14% в случае каждого из генов), доля сближенных аллелей MLL и AF9 остается стабильно невысокой (не более 2%), что практически не отличается от вероятности случайной встречи двух генов в трехмерном пространстве ядра.
Роль ядрышка в сближении и процессировании разорванных концов ДНК на сегодняшний день остается не выясненной, несмотря на то, что возможность участия этого многофункционального ядерного компартмента в репарации ДНК обсуждается в последние годы многими исследователями. В связи с этим, мы провели исследование, в результате которого показали, что сверхэкспрессия нуклеолина - одного из мажорных белков ядрышка, существенно изменяет чувствительность клеток Jurkat к обработке этопозидом. Полученные результаты позволяют предполагать наличие различных механизмов репарация разрывов ДНК, вносимых ДНК-топоизомеразой II, ошибки в которых могут приводить к хромосомным транслокациям.
Работа была выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (ГК П1339, 16.740.11.0629, 14.740.11.1201), с частичным использованием средств РФФИ (гранты 10-04-00305-а, 09-04-93105-CNRS-а), программы МКБ президиума РАН, гранта компании ОПТЭК (Carl Zeiss) и гранта Президента Российской Федерации (MK-222.2011.4).
Эффективность трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток в лечении больных
миелодиспластическим синдромом
Ю.В. Рудницкая, Е.В. Морозова, Н.Н. Мамаев, А.Л. Алянский, Б.В. Афанасьев Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Санкт-Петербург; Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова
Введение. Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) является единственным методом излечения больных миелодиспластическим синдромом (МДС). Консервативная терапия больных МДС (заместительная терапия компонентами крови и ростовыми факторами, цитостатики, иммуносупрессивная терапия; гипометилирующие препараты) носит преимущественно паллиативный характер. Алло-ТГСК при МДС сопряжена с высокой летальностью, которая зависит от развития таких осложнений как, отторжение трансплантата, реакции "трансплантат против хозяина" (РТПХ), инфекционных осложнений. МДС - заболевание лиц старшей возрастной группы, имеющих ряд сопутствующих заболеваний. Таким образом, отдаленные результаты алло-ТГСК зависят от степени токсичности режима кондиционирования. Миелоаблативные режимы кондиционирования (МАК) сопровождаются развитием органной недостаточности, мукозитом тяжелой степени, веноокклюзионной болезнью. В тоже время режимы кондиционирования со сниженной интенсивностью доз (РКСИД) могут увеличивать частоту рецидивов основного заболевания. Цель исследования - оценить эффективность алло-ТГСК с использованием различных режимов кондиционирования и источников трансплантата у больных МДС.
Материалы и методы. Алло-ТГСК выполнена у 70 больных в возрасте 18-73 лет (медиана возраста 53 года). По классификации IPSS 21 (30%) больных отнесены к группе промежуточного-1 риска, 23 (32%) к группе промежуточно-го-2, 13 (19%) к группе высокого риска, у 13 больных - диагноз ХММЛ. Родственная алло-ТГСК проведена у 16 (23%), неродственная - у 54 (77%) больных. Костный мозг (КМ) в качестве источника гемопоэтических клеток использовали у 9 (13%), периферические стволовые клетки крови (ПСКК) - у
61 (87%) больных. От полностью совместимых доноров проведено 47 (67%) алло-ТГСК, от частично несовместимых -23 (33%). РКСИД перенесли - 55 (79%), МАК - 15 (21%). Профилактику острой РТПХ проводили циклоспорином-А (ЦСА) у 63 (91,3%) больных в комбинации с метотрексатом (10 мг/м2 дни +1, +3, +6) или микофенолат мофетилом (ММФ), либо такролимусом - у 6 (8,7%) в комбинации с ММФ или метотрексатом. Метотрексат получили 22 из 70 больных (31%). В случае алло-ТГСК от неродственного донора использовали, АЛГ в дозе 60-80 мг/кг.
Результаты и обсуждение. Общая 5-летняя выживаемость (ОВ) составила 70 (53%). МАК имеют большую эффективность по сравнению с РКСИД: показатели ОВ у больных МДС составили 80% и 45% соответственно (р = 0,08). ОВ больных при неродственной алло-ТГСК не отличается от ОВ при родственной алло-ТГСК и не зависит от источника трансплантата. Возраст больного (старше 50 лет) и неблагоприятный кариотип являются факторами, снижающими ОВ после алло-ТГСК. Показатели ОВ выше в группе, где донором был мужчина, а реципиентом женщина - 77% (р = 0,04). Показатели ОВ выше при количестве CD34+ в трансплантате более 3,0 х 106/кг (р = 0,04). Кумулятивная частота отторжения ниже у больных, получивших трансплантат с высокой клеточностью (2% по сравнению с 24% в группе больных с трансплантатом с низкой кле-точностью; р = 0,004). При использовании ПСКК кумулятивная частота отторжения трансплантата меньше, чем у больных, получивших КМ - 2% и 22%-, соответственно (р = 0,005). Применение метотрексата в профилактике острой РТПХ увеличивает ОВ больных после алло-ТГСК с применением РКСИД (с/ без метотрексата - 70% и 38% соответственно; р = 0,06). Острая РТПХ тяжелой (III-IV) степени развивается чаще при МАК по
23
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
сравнению с РКСИД 33% и 12% соответственно (р = 0,07). Вероятность рецидива заболевания выше при проведении РКСИД (р = 0,05) и неблагоприятном кариотипе (р = 0,01).
Заключение. Алло-ТГСК является методом выбора у больных МДС высокого риска. При отсутствии противопо-
казаний целесообразно проведение МАК. Для увеличения ОВ больных при РКСИД необходимо проведение профилактики острой РТПХ, содержащей метотрексат. Использование трансплантата с высокой клеточностью (CD34+ более
3,0 х 106/кг) улучшает результаты алло-ТГСК.
Роль инфузий донорских лимфоцитов в профилактике и лечении онкогематологических заболеваний после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток
О.А. Слесарчук, Е.В. Семенова, С.Н. Бондаренко, Е.В. Бабенко, М.А. Эстрина, И.В. Казанцев, Л.С. Зубаровская, Б.В. Афанасьев Институт детской гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой, Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
им. акад. И. П. Павлова
Материалы и методы. Нами был проведен ретро спек-тивный анализ данных 95 больных в возрасте от 1 года до 67 лет (средний возраст 25,8 года), получавших терапию по поводу острых лейкозов (п = 63), миелодиспластического синдрома (п = 7), хронический миелолейкоз (ХМЛ) (п = 9), лимфом (п = 16). Трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) выполняли от совместимого родственного (п = 32), совместимого неродственного (п = 43) либо от гаплоидентичного родственного донора (п = 20). Ми-елоаблативный режим кондиционирования использовали у 26 больных, режим кондиционирования со сниженной интенсивностью доз проведен 69 больным. Инфузий донорских лимфоцитов (ИДЯ) выполняли с целью лечения рецидива (или прогрессии) основного заболевания (п = 69), профилактики рецидива в связи с высоким риском (п = 7), наличием признаков "минимальной остаточной болезни" (МОБ) (п = 7) или смешанного химеризма (п = 12). Медиана времени использования ИДЯ после трансплантации аллогенного костного мозга (алло-ТКМ) с лечебной целью составила 98 (13-1212) дней, с профилактической - 113 (33-137) дней. Больные получили от 1 до 6 ИДЯ с целью профилактики (начальная доза в среднем составила 1 х 106 (1 х 104—6,6 х 106) CD3+/кг), от 1 до 5 ИДЯ с целью лечения рецидива (или прогрессии) основного заболевания (начальная доза в среднем составила 2,2 х 106 (1,3 х 104-1,5 х 107) CD3+/et). Больным, получавшим повторные ИДЯ, проводили эскалацию дозы. У 5 из 26 больных с профилактической ИДЯ проводили дополнительную терапию (иматиниб, дазати-ниб, дакоген). С целью лечения рецидива (или прогрессии) основного заболевания ИДЯ в монорежиме получили 9 больных, в комбинации с дополнительной терапией (циторедуктивная терапия, ингибиторы тирозинкиназ, цитокины) - 60 больных.
Результаты и обсуждение. Время наблюдения с момента 1-й ИДЯ составило от 1 до 59 мес. Среди больных, получивших терапевтические ИДЯ, 27 (39%) ответили на терапию, из них 18 (67%) достигли полной ремиссии. Полный донорский химеризм был достигнут у 7 (58%), полная ремиссия - у 5 (71%) больных с МОБ. После профилактического использования ИДЯ длительность ремиссии составила от 1 до 26 мес. У 2 больных диагностирован рецидив основного заболевания в течение 1 и 4 мес после ИДЯ. У 5 (19%) больных с профилактическими ИДЯ наблюдали острую РТПХ III-IV степени, из них 2 больных умерли при наличии признаков острой РТПХ IV степени. Распространенную хроническую РТПХ наблюдали у 7 (27%) больных с профилактическими ИДЯ. Среди больных, получивших терапевтические ИДЯ острую РТПХ наблюдали у 18 (26%), острую РТПХ III-IV степени - у 9 (13%), 5 больных умерли по причине острой РТПХ IV степени. Распространенную хроническую РТПХ наблюдали у 8 (12%) больных после терапевтических ИДЯ. Общая 5-летняя выживаемость больных, получивших ИДЯ, составила 22%. Показатель общей 5-летней выживаемости больных с профилактическими ИДЯ был выше, чем у больных с терапевтическими ИДЯ (44% против 16% соответственно; р = 0,004).
Заключение. Использование ИДЯ у больных после алло-ТГСК является эффективным методом для профилактики и лечения рецидива заболевания. Метод ассоциирован с высоким риском развития острой РТПХ III-IV степени, которая может стать основной причиной смерти. Вероятность данного осложнения может быть уменьшена при разработке новых методов адоптивной иммунотерапии, основанной на клеточной селекции и использования препаратов "таргетного" воздействия.
Особенности диагностического подхода к эритроцитозам различного происхождения
М.А. Соколова, Н.Д. Хорошко, М.Г. Дмитриева, В.С. Журавлев, Н.Ш. Сагдиева, М.О. Егорова, Н.С. Моисеева,
М.В. Нарейко, Э.Г. Гемджян, Я.Д. Сахибов ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Цель исследования - показать распределение исследуемых пациентов по диагностическим группам; выявить диагностическую ценность значений гематокрита и гемоглобина, как возможных маркеров абсолютного эритро-цитоза в группе больных с эритремией.
Материалы и методы. Обследован 61 больной (9 женщин и 52 мужчины) в возрасте 18-82 лет (средний возраст 46 лет) до начала какой-либо терапии. Средние значения концентрации гемоглобина у женщин 171 г/л (143-190 г/л), ге-матокрита 52% (49-61%). У мужчин средние значения гемоглобина 187 г/л (168-196 г/л) и гематокрита 57,8% (49-65%). Все образцы крови были взяты в утренние часы. Полная гемограмма образцов венозной крови с консервантом (ЭДТА) исследована по принципу Культера с помощью анализатора крови Gen S ("Beckman-Coulter", США). С помощью радиоизотопного метода (51Cr) были определены масса циркулирующих эритроцитов и объем плазмы. Результаты рассчитаны
с учетом площади тела пациента и интерпретировались с использованием рекомендаций Международного комитета по стандартизации в гематологии (ICSH) (Pearson et al., 1995).
Результаты и обсуждение. Только у 19 (31%) из 61 исследуемого была выявлена эритремия, 15 пациентов отказались от дальнейшего обследования. Из 46 оставшихся пациентов группу с вторичным эритроцитозом составили 14 человек, их них 9 с абсолютным, эритроцитозом (гипоксический) и 5 - с идиопатическим эритроцитозом. Относительный ("видимый") эритроцитоз представили 13 пациентов. Измерение массы циркулирующих эритроцитов выделило группы больных с абсолютным и относительным эритроцитозом. Так, лабораторные параметры, включая гемоглобин, число эритроцитов и гематокрит не всегда полностью отражают значения массы эритроцитов из-за возможных вариаций объема плазмы и не могут являться основанием для установления гематологического заболевания. Показано, что содержание гемоглобина
24
