CC BY
115
УДК 615.322'454.015:616-001.17'4-002-092.9
РАНОЗАЖИВЛЯЮЩАЯ, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНАЯ И АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ ГЕЛЯ С СУХИМ ЭКСТРАКТОМ АСТРАГАЛА ЭСПАРЦЕТНОГО
© 2009 г. Ю.А. Огурцов1, Н.Н. Гужва1, Л.Б. Гужва
2
1Пятигорская государственная фармацевтическая академия, 1Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy,
357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11. 357532, Pyatigorsk, Kalinin Ave, 11, [email protected]
[email protected] 2Piedmont Distri^ Veterinary Laboratory,
2Предгорная районная ветеринарная лаборатория, 357390, Stavropolskiy Krai, Predgorniy Rayon,
35 7390, Ставропольский край, Предгорный район, st. Suvorovskaya, Partizanskaya St., 18 ст. Суворовская, ул. Партизанская, 19
Мазевая композиция на гидрофильной основе (гель) с сухим экстрактом астрагала эспарцетного разработана на кафедре технологии лекарств ПятГФА. Разработанная мазь (гель) обладает высокой специфической активностью при лечении экспериментальных ожоговых и травматических ран во второй фазе раневого процесса, проявляя при этом выраженное антимикробное, противовоспалительное и регенерирующее действие на рану, способствуя ее заживлению в короткие сроки.
Ключевые слова: сухой экстракт астрагала, мазь, противовоспалительная активность, флавоноиды, заживление ожогов, солкосерил, бутадион.
The ointment (gel) obtained was found to possess a high specific activity in the treatment of experimental burned and traumatic wounds in the second phase the wound process, exerting a marked antimicrobial, anti-inflammatory and regenerating effect on the wound promoting its healing in a short time.
Keywords: dry astragalus extract, ointment, antiphlogistic activity, flavonoids, the healing of burns, solkoseril, butadion.
В последнее время в комплексной терапии при лечении ран, для стимуляции регенерации тканей широко используются препараты, содержащие извлечения из растений. Эти препараты активизируют и стимулируют обменные процессы организма, ускоряют различные стадии заживления, обладают бактериостатическим действием [1, 2].
Природные соединения и содержащие их лекарственные препараты являются более физиологичными и менее токсичными, обладают более широким терапевтическим действием, значительно реже, чем синтетические вещества, вызывают побочные эффекты и индуцируют аллергические реакции [2-4].
Сухой экстракт астрагала эспарцетного обладает противовоспалительной, ранозаживляющей и антимикробной активностью и в своем составе содержит флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, тритерпено-вые сапонины дамаранового ряда, кумарины, аминокислоты [3-6].
В медицинской практике пока не используются препараты, содержащие биологические активные вещества из надземной части астрагала эспарцетного [7].
Использование гидрофильной мази астрагала на основе метилцеллюлозы (геля) дает возможность создать достаточно простую композицию веществ для
эффективного лечения ожоговых и гнойных ран при переходе во вторую фазу и непосредственно в ней. При этом мы учитывали тот факт, что эффективное лечение ожоговых и гнойных ран обеспечивается увеличением оттока из раны гнойного экссудата, подавлением микрофлоры, противовоспалительным действием ингредиентов мази [2].
Экспериментальная часть
Экспериментальная часть работы осуществлялась на базе кафедры физиологии, биологии и патологии ПятГФА, вивария ГУ «Предгорная райСББЖ» Предгорной районной ветеринарной лаборатории Ставропольского края. Мазевая композиция на гидрофильной основе, разработаная на кафедре технологии лекарств ПятГФА, содержала: метилцеллюлозы - 5,0; воды очищенной - 80; глицерина - 10; сухого экстракта астрагала - 5. Все размешивалось на электромагнитной мешалке до однородности, и образовался гель.
Оценку ранозаживляющего действия проводили анализом динамики уменьшения площади раны (термическое повреждение кожи контактным способом)
после нанесения данной мази на гидрофильной основе и также тензинометрическим способом [1, 6].
Ранозаживляющую активность изучали in vivo на крысах Wistar весом 210±10 г. Термическое повреждение кожи производили контактным способом, а динамику оценивали по площади раны весовым методом на 2- и 8-е сут. Исследуемые лекарственные формы и гель «Солкосерил» (используемый как препарат сравнения) наносились ежедневно на поврежденную поверхность кожи тонким слоем (не втирая) в количестве 250 мг [1, 6].
Опытных животных подбирали по принципу аналогов. Они содержались в равноценных условиях кормления и содержания в виварии в соответствии с требованиями санитарных правил по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологи-
ческих клиник. Животные содержались на стандартном режиме вивария: температура окружающего воздуха - 22±2 °С, комбинированный корм и воду животные получали аd libitum [8, 9].
У животных контрольной группы ожоговое повреждение, вызванное контактным способом, на 2-е сут имело площадь раны в весовых единицах 7,32±0,52 мг, а на 8-е - 5,31±0,25 мг, что было принято за 100 %. У животных, получивших солкосерил, ожоговое повреждение на 2-е сут было меньше на 59,21, на 8-е - на 39,6 %. По сравнению с этим показателем в контрольной группе на 2-е сут - площадь ожоговой поверхности понизилась только на 27,5 %. Действие мази на основе МЦ на 2-е сут. на 31,54, а на 8-е сут площадь поверхности ожоговой раны уменьшилась на 93,18 % (табл. 1).
Таблица 1
Влияние мази на гидрофильной основе с сухим экстрактом астрагала на заживление ожоговой раны
Группа животных, п=8 Площадь раны в весовых единицах
2-е сут 8-е сут
M+m р % M+m P %
Контрольная 7,32+0,48 100 5,31+0,22 100
Получавшие гель «Солкосерил» 4,33+0,31 p1<0,05 59,21 2,1+0,13 p1<0,05 39,6
Получавшие гель с 5 % сухим экстрактом астрагала 2,31+0,08 p1<0,05 p2<0,05 31,54 4,95+0,28 P1<0,01 P1<0,01 93,18
Примечание. п - количество животных; p1 - вероятность различия по сравнению с данными у контрольных животных; p2 -вероятность различия по сравнению с данными у животных, получавших cолкосерил.
Результаты опытов обрабатывали методами вариационной статистики с использованием таблицы ускоренной оценки фармакологического эффекта. Статистическую обработку проводили с использованием критерия Стьюдента для независимых рядов (компьютерная программа Microsoft Excel, version 7.0). Изменения исследуемых показателей считали статистически значимыми при р<0,05.
Раны у всех животных с нанесенным на них испытываемым препаратом были с менее выраженной воспалительной реакцией, образованием нежного струпа, хорошо выраженной краевой эпителизацией, раны покрыты пленкой высохшего геля, защищающей от загрязнения.
Оценка ранозаживляющего действия методом тензинометрии. Опыты проводили in vivo на крысах Wistar весом 210±10 г. Линейные кожные раны наносили под эфирным наркозом. Кожу спины разрезали до собственной фасции. Длина разреза составила 5 см. Затем на равном расстоянии накладывали 3 шва, сближающие края раны [1, 6].
Мазь на гидрофильной основе (гель) «Астрагал» наносили на рану ежедневно 2-кратно на протяжении 8 дней. Препарат сравнения (мазь «Солкосерил») наносился на раны по аналогичной схеме. Третья группа животных не лечилась (контроль).
На 8-е сут после операции животных (по 8 в каждой группе) наркотизировали этаминалом натрия (20 мг/кг) и вырезали кусочки кожи шириной 1, длиной 3 см, фиксировали одним концом в верхней точке с помощью специального зажима, а к нижнему концу кусочка подвешивали другой зажим с
площадкой для установки гирь, массу которых постепенно увеличивали до получения разрыва рубца (рисунок). Большая масса, необходимая для разрыва рубца, свидетельствовала о большей её прочности.
з
Прибор для оценки ранозаживляющего действия методом тензинометрии: 1 - упор; 2 - зажим; 3 - лоскут с раной;
4 - блок; 5 - площадка с гирями
Опыты показали, что в группах животных, где для леченния использовали гели «Астрагал» и «Солкосерил», к 8-му дню после операции происходило полное отторжение корочек. По ходу раны был виден сформировавшийся рубец. В контрольной группе отторжение корочек наблюдалось лишь в одном случае из 8.
При тензинометрической оценке прочности рубца получены следующие результаты. В группе животных леченных, где лечили мазью «Астрагал» на гидрофильной основе, вес гирь, приводивших к разрыву рубца, составил 452,0±42,2 г, получавших гель «Солкосерил» - 407,2±67,2 г (табл. 2).
Таким образом, гели «Астрагал» и «Солкосерил» статистически достоверно увеличивают прочность рубца по отношению к контролю. Астрагал проявил
большую тенденцию в ранозаживляющем действии, чем Солкосерил, в 1,11 раз.
Полученные положительные результаты опытов на крысах послужили основанием для проведения лечения домашних животных.
Таблица 2
Оценка ранозаживляющего действия методом тензинометрии
Срок Вес гирь, г
Контроль Астрагал Солкосерил
8 сут. 215,3±67,2 452,0±42,2 407,2±20,5
Р р<0,05 Pi<0,05 р<0,05
Примечание. p - по отношению к контролю; p1 - по отношению астрагала к cолкосерилу.
Изучение противовоспалительного действия 5%-й мази с экстрактом астрагала эспарцетного на гидрофильной основе (астрагал). Противовоспалительное действие геля «Астрагал» изучали на модели отёка лапки крысы, вызванного каолином. Суспензию каолина
вводили под апоневроз подошвенной поверхности лапки. Динамику нарастания отёка измеряли методом онкометрии. Регистрировали объём лапки через 1, 2, 3 и 24 ч после введения каолина.
Мазь наносили на кожу лапки дважды в день предшествующий опыту и за 30 мин до введения каолина. В качестве препарата сравнения использовали 5%-ю мазь «Бутадион», которую наносили в группе сравнения по аналогичной схеме.
Опыты показали, что мазь «Астрагал» достоверно снижает степень отёка лапки крыс относительно контроля во все сроки измерения (т.е. через 1, 2, 3 и 24 ч после введения каолина). Относительно группы животных, получивших мазь «Бутадион», не достоверное отличие наблюдалось лишь через 1 ч после введения каолина. Через 2, 3 и 24 ч различия были достоверны (табл. 3).
При наблюдении мы обратили внимание на то, что данный гель обладает выраженным противовоспалительным действием, защищает рану от вторичной инфекции и может быть использован для лечения ожоговых ран на стадии пролиферации.
Таблица 3
Изучение противовоспалительной активности мази (геля) «Астрагал» (n=6)
Мазь Исходный объём Объём лапки после введения каолина, мл
лапки, мл через 1 ч через 2 ч через 3 ч через 24 ч
Контроль 1,08±0,047 1,52±0,041 1,66±0,072 1,90±0,083 2,01±0,066
Мазь «Бутадион» 5% 1,00±0,069 1,23±0,09 1,49±0,064 1,69±0,068 1,91±0,071
Мазь-гель «Астрагал» 5 % 1,06±0,052 1,11±0,064 1,29±0,072 1,41±0,068 1,67±0,071
p1<0,05 Р2>0,05 p1<0,05 Р2<0,05 p1<0,05 p2<0,05 p1<0,05 Р2<0,05 p1<0,05 p2<0,05
Таким образом, гель, содержащий сухой экстракт астрагала, проявил выраженный противовоспалительный эффект на модели каолинового отёка лапки крыс, превосходящий таковой 5%-й мази «Бутадион».
Исследование биологической безвредности мази на 4 видах лабораторных животных показало, что в условиях «острого» и «хронического» опыта разработанный гель безвреден в дозах, превышающих возможное его применение в клинике. Изучение острой токсичности позволило установить, что при внутрибрюшинном введении мышам 50 % раствора геля в г/кг массы животных LD100 составляет 25,0, LD50 = 13,2. Гель не обладает местнораздражающим, аллергизирующим (морские свинки, п = 10; кролики,
n = 8) и парааллергизирующим действием на организм животных [8, 9].
Изучение противомикробной активности мази с экстрактом астрагала эспарцетного на гидрофильной основе (геля) (астрагал). Исследования противомикробной активности проводили в опытах in vitro методом диффузии в агар на плотных питательных средах в отношении следующих тест-штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus АТСС 25923, Escherichia coli АТСС 25922, Bacillus subtilis штаммы 8236, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. Контролем являлись водные растворы сухого экстракта астрагала. Результаты исследования представлены в табл. 4.
Таблица 4
Изучение противомикробной активности мази (геля) «Астрагал»
№ п/п Мазь Диаметр зон ингибиции роста микроорганизмов, мм
Staph. aureus АТСС 25923 E. coli АТСС 25922 Bac. subtil. штаммы 8236 Ps. aerug. АТСС 27853
1 Контроль (раствор сухого экстракта, %) 13,5+0,2 14,6+0,1 22,6+0,0 18,2+0,4
2 5% мазь с экстрактом астрагала 26,7+0,4 22,8+0,7 28,7+0,7 26,8+0,5
Анализ данных таблицы показал, что мазь на гидрофильной основе, содержащая 5 % сухого экстракта аст-
рагала, обладает значительным антимикробным действием и с успехом может применяться при лечении гнойных ран.
Из вышеизложенного следуют выводы:
- в эксперименте на лабораторных животных установлено, что разработанная мазь (гель) обладает высокой специфической активностью при лечении экспериментальных ожоговых и травматических ран во второй фазе раневого процесса, проявляя при этом выраженное антимикробное, противовоспалительное и регенерирующее действие на рану, способствуя ее заживлению в короткие сроки;
- проведены доклинические исследования мази (геля) «Астрагал» на кафедре фармакологии и кафедре биологии, физиологии и патологии. Клинические исследования мази (геля) «Астрагал» проведены в ветеринарных лечебницах Ставропольского края и г. Москвы.
Литература
1. А.с. СССР №305549, 1979. МКИ кл. 61. К 9/06, бюл. № 36.
2. Гужва Н.Н. Мази фитопрепаратов. Пятигорск, 2006. 23 с.
Деп. в ВИНИТИ РАН 28.07.06. №1018.-В2006 // Деп. науч. работы (естеств. и точн. науки, техника). 2006. № 9.
3. Расширение номенклатуры ветеринарных лекарственных форм с сухим экстрактом астрагала эспарцетного / Н.Н. Гужва [и др.]. Материалы Междунар. конф., по-свящ. 30-летию Всесоюз. науч.-иссл. ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии. 3-4 октября 2000, Воронеж. Воронеж, 2000. Т. 2. С. 45-46.
4. К итогам исследования растений рода Астрагал в ПятГ-
ФА / Н.Н. Гужва [и др.] // Материалы Регион. конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров. Пятигорск, 2001. С. 21.
5. Перспективы использования растений рода Астрагал в
медицине / Н.Н. Гужва [и др.] Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса. М., 2001. С. 689.
6. Кованов В.В., Сычеников И.А. // Коллагенопластика в
медицине. М., 1978. С. 92-130.
7. Реестр лекарственных средств. М., 1993.
8. Фисенко В.П. Руководство по экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000.
9. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной
фармакологии. М., 2000.
Поступила в редакцию_10 апреля 2008 г.
