CC BY
21
I 1-2006
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
:
300 мг/кг, что соответствует 16 у. е. В дальнейшем же предикторы побочных реакций нарастают, что сопряжено со снижением фармакологической эффективности вещества, но побочные эффекты вещества в диапазоне активности от 300 до 1200 мг/кг обратимы. Учитывая это, можно предположить, что вещество ВМА-99-82 безопасно в плане его энтерального введения крысам в дозах до 1200 мг/кг, а значит уровень его безопасного действия (диапазон точек 1-7 или от 18,7 до 1200 мг/кг) равен 64 у. е.
Токсическое действие у вещества прослеживается в дозах от 2400 до 4800 мг/кг. В данном диапазоне доз (8-9-е точки на интегральной "дозовой траектории") эффекты влияния вещества были необратимы, инвертированы диапазону активности 2 и 3, т. е. их можно расценивать как токсические (ТУ). При расчете (ТУ = 4800/18,7) установили, что достоверно токсический уровень вещества ВМА-99-82 оказался равным от 128 до 256 у. е.
Таким образом, по результатам проведенных исследований можно заключить, что по степени токсичности новое противовирусное средство относится к классу малотоксичных соединений. При этом установленные интегральным путем значения диапазонов терапевтического (16 у. е.) и токсического (256 у. е.) уровня действий отражают степень "пользы/риска" данного вещества и могут быть использованы в доклиническом обосновании критериев его безопасности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Петров В.И., Озеров А.А., Новиков М.С. и др. // Химия гетероциклич. соед. - 2003. - Вып. 9. - С. 1389-1397.
2. Петров В.И., Озеров А.А., Новиков М.С. // Тез. II Съезда Рос. науч. общ. фармакол. - М., 2003. - Ч. 2. - С. 79.
3. Irvin S. // Animal and Clinical Pharmacologic Techniques in Drug Evaluation. - Chicago, 1964.
4. Бугаева Л.И., Веровский В.Е., Иежица И.Н. и др. // Эксп. клин. фармакол. - 2000. - Т. 63, № 1. - С. 3-6.
5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л: Медгиз, 1961. - 152 с.
ПРОТИВОСТРЕССОРНЫЕ И ИММУНО-МОДЕЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА МАЛЫХ ДОЗ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ГЕПАРИНА
М.В. Кондашевская, О.В. Макарова, В.Л. Ковалева
ГУ НИИ морфологии человека РАМН, Всероссийский научный центр биологически активных веществ, г. Москва
Эмоциональные стрессы, как сейчас бесспорно установлено, являются главной причиной иммуно-дефицитных состояний и повышения заболеваемости вирусными инфекциями. Для профилактики и лечения вирусных заболеваний следует включать препараты, оказывающие комплексное противовирусное, иммуномодулирующее и антистрессорное действие.
Мы предположили, что таким препаратом является высокомолекулярный гепарин (ВМГ), относящийся к классу гликозаминогликанов. ВМГ ингиби-рует инфицирование клеток многими разновидно-
стями вирусов, воздействуя на АТФ-азу и транскрипцию РНК в бактериальных клетках. Кроме того, ВМГ играет важную роль в воспалительных реакциях и иммунном ответе [5].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Настоящее исследование направлено на экспериментальную проверку гипотезы о возможности влияния высокомолекулярного гепарина на психоэмоциональные, поведенческие, когнитивные (познавательные) характеристики и функциональную активность нейтрофилов периферической крови крыс Вистар при курсовом введении в дозе ниже терапевтической.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проведены на самцах крыс аут-бредной линии Вистар с массой тела 250-280 г (n = 90), которых содержали в отдельных клетках группами по 10 особей. Опытная группа до обучения в многоальтернативном лабиринте получала ВМГ (фирма "Serva") в дозе 64 МЕ /кг (внутримышечно, 1 р/день, 5 сут.). Контролем служили интактные животные (ИК) и крысы, которым вводили 0,3 мл 0,9% физиологического раствора (ФР).
Для исследований функциональной активности нейтрофилов приготовляли мазки периферической крови, которые окрашивали по В.Е. Пигаревскому с соавт. [2]. Содержание лизосомально-катионных белков определяли полуколичественным методом, вычисляя средний цитохимический коэффициент.
Информационный стресс создавали в модельных условиях обучения в многоальтернативном лабиринте, где животные должны были по методике свободного выбора (без вмешательства экспериментатора) найти правило многократного получения пищи в течение опыта: после взятия пищи (семечки подсолнуха) в одной или двух кормушках из четырех, имеющихся в лабиринте, животные должны были самопроизвольно покинуть пищевую среду - выйти в свободное поле (не пищевую среду), для того чтобы, вновь зайдя в лабиринт, иметь возможность получить новую порцию корма в тех же кормушках. Регистрировали локомоторную активность, число заходов в лабиринт, количество подкреплений и ошибок, совершенных за опыт. Анализ психоэмоционального состояния крыс во время процесса обучения производили на основании подсчета безусловных реакций, которые затем подразделяли на активные и пассивные классы. Подробное описание поведенческой модели описано в ряде публикаций (Никольская К.А. с соавт., 1998). Обучение проводили ежедневно в течение 20 дней.
Регистрация и первичный анализ данных осуществлялись с помощью компьютерной программы "Labyrinth" [1]. Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью статистического пакета "STATGRAF" для Windows 6.0. и "ANOVA", достоверность значений оценивали по критерию Колмогорова-Смирнова и /-критерию
:
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
1-2006 I
Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В группе ИК (пассивный контроль) только 40% особей были способны сформировать пищедобыва-тельное поведение. Остальные 60 % (п = 22) "отказывались" обучаться. У этих животных доминировали реакции страха, проявляющиеся в виде частых дефекаций и мочеиспусканий и др.
Курсовое введение ФР (активный контроль) привело к формированию устойчивой оборонительной доминанты, выразившейся в резком (в 2,3 раза) снижении мотивационной и двигательной активности, возрастании доли пассивных форм безусловных реакций. 90 % крыс группы активного контроля "отказались" обучаться в проблемной ситуации.
ВМГ в дозе 64 МЕ/кг оказал весьма сильное активирующее воздействие на процесс обучения. 90 % этих крыс, вместо 40 % крыс в группе пассивного контроля и 10% в группе активного контроля, смогли самостоятельно решить предложенную задачу. У этой группы крыс не только ассоциативные, но и тормозные процессы осуществлялись значимо лучше, чем у контрольных групп животных. Сильные активирующие эффекты ВМГ в дозе 64 МЕ/кг выявлялись у животных с исходно подавленными признаками познавательной деятельности, которые без фармакологического воздействия не способны к обучению. Указанные эффекты ВМГ в дозе 64 МЕ/кг устойчиво проявлялись на протяжении 20 суток после отмены препарата.
Таким образом, в результате проведенного исследования было установлено, что ВМГ в дозе 64 МЕ/кг обладает эффектами антидепрессанта, ан-ксиолитика и психостимулятора.
Среди "некогнитивных" воздействий ВМГ было изучено его влияние на состояние иммунной системы. Нейтрофилы занимают одну из ключевых позиций в системе гуморально-клеточной кооперации крови и соединительной ткани, что делает их универсальной мишенью и индикатором многочисленных нарушений гомеостаза. Одними из наиболее важных веществ содержимого гранул нейтрофилов, способных активно участвовать в регуляции го-меостаза организма, являются катионные белки [2]. После пятикратного введения ВМГ в дозе 64 МЕ/кг, как без обучения, так и после обучения, по сравнению с обеими группами (без обучения и после обучения) ИК наблюдалось снижение содержания кати-онных белков нейтрофилов периферической крови. По-видимому, ВМГ в дозе 64 МЕ/кг вызвал инициацию процессов секреторной дегрануляции нейтрофи-лов, в результате чего уровень катионных белков в нейтрофилах снизился. Активация нейтрофилов обычно сопровождается экзоцитозом гранул и грану-лолизисом. Секретируемые нейтрофилами продукты
оказывают регуляторное влияние на другие клетки и медиаторные системы. Из источников литературы известно, что гепарин может активировать процесс секреторной дегрануляции нейтрофилов [4]. Вероятно, это связано со способностью гепарина регулировать каталитический потенциал фосфолипаз и инози-тол-1,4,5-трифосфата, являющихся ключевыми агентами инициальных реакций процесса секреторной дегрануляции [3].
В группе ИК, прошедших обучение в многоальтернативном лабиринте, содержание катионных белков в нейтрофилах достоверно не отличалось от группы не обучавшихся ИК. Содержание катионных белков в нейтрофилах периферической крови у обеих групп крыс, получавших ФР, оказалось достоверно выше, чем у обеих групп ИК. При сравнении групп крыс, получавших ФР, выяснилось, что после обучения уровень катионных белков был достоверно большим, чем в группе не обучавшихся крыс. Повышение содержания катионных белков в нейтрофи-лах может свидетельствовать об усилении их миграции из костного мозга и нарушении процессов секреторной дегрануляции.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в наших исследованиях мы продемонстрировали, что высокомолекулярный гепарин в дозе 64 МЕ/кг оказывает противострессорное, ан-ксиолитическое, антидепрессивное, психостимулирующее действие и модулирует функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Hatakeyama M., Imaizumi T., Tamo W., et al. // Inflammation. - 2004. - Vol. 28, № 1. - P. 7-13.
2. Пигаревский В.Е., Мазинг Ю.А. // Лаб. дело. - 1981. - № 10.- С. 579-582.
3. Никольская К.А., Ещенко О.В., Шпинькова В.Н. и др. // Вестн. МГУ. - Сер. 3. - 1998. - № 3. - С. 75-79.
4. Freischlag J.A., Colburn M.D., Moore W.S. // J. Surg. Res. - 1992. - Vol. 52, № 5. - P. 523-529.
5. Diccianni M.B., Mistry M.J., Hug K., et al. // Biochim. Biophys. Acta. - 1990. - Vol. 1046, № 3. - P. 242-248.
ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО АДЕНИНА С ПРОТИВОВИРУСНЫМИ СВОЙСТВАМИ В СУБХРОНИЧЕСКИХ ЭКСПЕРИМЕНТАХ
С.А. Лебедева, А.С. Полторацкий, Л.И. Бугаева
НИИ фармакологии ВолГМУ
В НИИ фармакологии ВолГМУ было получено новое противовирусное лекарственное вещество - 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденин под лабораторным шифром ВМА-99-82, которое планируется внедрять в клиническую практику. Учитывая вышесказанное, изучение безопасности и токсикологических свойств для новых веществ, планируемых в даль-
