CC BY
14
:
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
1-2006 I
Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В группе ИК (пассивный контроль) только 40% особей были способны сформировать пищедобыва-тельное поведение. Остальные 60 % (п = 22) "отказывались" обучаться. У этих животных доминировали реакции страха, проявляющиеся в виде частых дефекаций и мочеиспусканий и др.
Курсовое введение ФР (активный контроль) привело к формированию устойчивой оборонительной доминанты, выразившейся в резком (в 2,3 раза) снижении мотивационной и двигательной активности, возрастании доли пассивных форм безусловных реакций. 90 % крыс группы активного контроля "отказались" обучаться в проблемной ситуации.
ВМГ в дозе 64 МЕ/кг оказал весьма сильное активирующее воздействие на процесс обучения. 90 % этих крыс, вместо 40 % крыс в группе пассивного контроля и 10% в группе активного контроля, смогли самостоятельно решить предложенную задачу. У этой группы крыс не только ассоциативные, но и тормозные процессы осуществлялись значимо лучше, чем у контрольных групп животных. Сильные активирующие эффекты ВМГ в дозе 64 МЕ/кг выявлялись у животных с исходно подавленными признаками познавательной деятельности, которые без фармакологического воздействия не способны к обучению. Указанные эффекты ВМГ в дозе 64 МЕ/кг устойчиво проявлялись на протяжении 20 суток после отмены препарата.
Таким образом, в результате проведенного исследования было установлено, что ВМГ в дозе 64 МЕ/кг обладает эффектами антидепрессанта, ан-ксиолитика и психостимулятора.
Среди "некогнитивных" воздействий ВМГ было изучено его влияние на состояние иммунной системы. Нейтрофилы занимают одну из ключевых позиций в системе гуморально-клеточной кооперации крови и соединительной ткани, что делает их универсальной мишенью и индикатором многочисленных нарушений гомеостаза. Одними из наиболее важных веществ содержимого гранул нейтрофилов, способных активно участвовать в регуляции го-меостаза организма, являются катионные белки [2]. После пятикратного введения ВМГ в дозе 64 МЕ/кг, как без обучения, так и после обучения, по сравнению с обеими группами (без обучения и после обучения) ИК наблюдалось снижение содержания кати-онных белков нейтрофилов периферической крови. По-видимому, ВМГ в дозе 64 МЕ/кг вызвал инициацию процессов секреторной дегрануляции нейтрофи-лов, в результате чего уровень катионных белков в нейтрофилах снизился. Активация нейтрофилов обычно сопровождается экзоцитозом гранул и грану-лолизисом. Секретируемые нейтрофилами продукты
оказывают регуляторное влияние на другие клетки и медиаторные системы. Из источников литературы известно, что гепарин может активировать процесс секреторной дегрануляции нейтрофилов [4]. Вероятно, это связано со способностью гепарина регулировать каталитический потенциал фосфолипаз и инози-тол-1,4,5-трифосфата, являющихся ключевыми агентами инициальных реакций процесса секреторной дегрануляции [3].
В группе ИК, прошедших обучение в многоальтернативном лабиринте, содержание катионных белков в нейтрофилах достоверно не отличалось от группы не обучавшихся ИК. Содержание катионных белков в нейтрофилах периферической крови у обеих групп крыс, получавших ФР, оказалось достоверно выше, чем у обеих групп ИК. При сравнении групп крыс, получавших ФР, выяснилось, что после обучения уровень катионных белков был достоверно большим, чем в группе не обучавшихся крыс. Повышение содержания катионных белков в нейтрофи-лах может свидетельствовать об усилении их миграции из костного мозга и нарушении процессов секреторной дегрануляции.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в наших исследованиях мы продемонстрировали, что высокомолекулярный гепарин в дозе 64 МЕ/кг оказывает противострессорное, ан-ксиолитическое, антидепрессивное, психостимулирующее действие и модулирует функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Hatakeyama M., Imaizumi T., Tamo W., et al. // Inflammation. - 2004. - Vol. 28, № 1. - P. 7-13.
2. Пигаревский В.Е., Мазинг Ю.А. // Лаб. дело. - 1981. - № 10.- С. 579-582.
3. Никольская К.А., Ещенко О.В., Шпинькова В.Н. и др. // Вестн. МГУ. - Сер. 3. - 1998. - № 3. - С. 75-79.
4. Freischlag J.A., Colburn M.D., Moore W.S. // J. Surg. Res. - 1992. - Vol. 52, № 5. - P. 523-529.
5. Diccianni M.B., Mistry M.J., Hug K., et al. // Biochim. Biophys. Acta. - 1990. - Vol. 1046, № 3. - P. 242-248.
ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО АДЕНИНА С ПРОТИВОВИРУСНЫМИ СВОЙСТВАМИ В СУБХРОНИЧЕСКИХ ЭКСПЕРИМЕНТАХ
С.А. Лебедева, А.С. Полторацкий, Л.И. Бугаева
НИИ фармакологии ВолГМУ
В НИИ фармакологии ВолГМУ было получено новое противовирусное лекарственное вещество - 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденин под лабораторным шифром ВМА-99-82, которое планируется внедрять в клиническую практику. Учитывая вышесказанное, изучение безопасности и токсикологических свойств для новых веществ, планируемых в даль-
I 1-2006
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
:
неишем стать лекарственными средствами, является обязательным.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучить общетоксические свойства нового противовирусного соединения ВМА-99-82 в субхронических экспериментах.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проводились на 200 крысах с исходной массой 190-220 г. В виварии НИИ фармакологии ВолГМУ животные содержались в стандартных условиях. Из крыс для проведения экспериментов формировали группы: первая интактная -контроль, вторая и третья - опытные. Выбор доз для проведения исследований проводили с учетом интегральных данных функционально-поведенческого профиля вещества. В связи с этим минимальная эффективная доза вещества соответствовала 20 мг/кг, а максимальная - 300 мг/кг. По окончании введения препаратов, а также в отставленных опытах у испытуемых животных исследовали поведенческую активность. Оценивали функциональное состояние сердца, печени и почек. Проводили гематологические, биохимические и морфологические исследования. Затем часть животных подвергали эвтаназии (метод - эфирный наркоз). На вскрытии изучали состояние внутренних органов, рассчитывали их весовые коэффициенты. Другую часть животных оставляли для отставленных экспериментов. В течение этого времени изучаемое вещество ВМА-99-82 крысам не вводили.
Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с помощью программы Excel.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Наблюдения за животными, получавшими в течение одного месяца вещество ВМА-99-82 в дозах 20 и 300 мг/кг, не позволили выявить особых изменений относительно контрольной группы крыс. Все подопытные группы животных одинаково потребляли пищу и воду, имели одинаковое состояние шерстного покрова и слизистых во время введения препарата. Надо отметить, что после введения препарата у животных первой группы наблюдалось увеличение двигательной активности в клетке, тогда как в группе животных, получавших вещество в дозе 300 мг/кг, отмечалась тенденция снижения реакций на внешние раздражители. Эти животные были более спокойными, тогда как болевая, тактильная и другие виды чувствительности соответствовали контролю. Кроме того, у данных животных в первые две недели приема вещества наблюдалось обратимое снижение пищевой активности.
После отмены введения вещества подвижность животных в подопытных группах первоначально (первые две недели) была снижена, затем в течение
последующих 10-15 дней восстанавливалась до контрольного уровня.
При изучении динамики массы тела у животных, получавших вещество ВМА-99-82, прирост массы тела крыс в группе 2 соответствовал контрольным значениям. В группе 3 у животных была выявлена отрицательная динамика прироста массы тела. При этом к окончанию курса введения ВМА-99-82 масса тела у крыс в этой группе снизилась на 15,5 % по отношению к контролю. В период отмены вещества ВМА-99-82 прибавка массы тела у животных второй группы также была положительной, а значения массы тела крыс в 3-й группе животных соответствовала контролю.
При изучении поведения животных в тесте "открытое поле" было выявлено, что по окончанию одного месяца введения нового противовирусного вещества ВМА-99-82 крысам, а также через 1 месяц после его отмены тестируемые параметры поведенческой активности существенно не различаются по группам. Имеющиеся межгрупповые вариации по числу горизонтальных перемещений, а также вертикальной, поисковой активностей оказались недостоверными. В период введения ВМА-99-82 крысам можно лишь отметить реабилитационную тенденцию дозозависимого повышения горизонтальной и вертикальной активностей у животных 3-й группы.
При изучении электрокардиограмм было выявлено, что у животных, получавших вещество ВМА-99-82 в дозе 20 мг/кг, частота сердечных сокращений изменялась несущественно. Вместе с тем уч-режение частот сердечных сокращений в третьей группе было статистически значимо и составило 20% по отношению к контролю. Одновременно в этой группе фиксировалось и понижение зубца "Я" на 16 % (р > 0,05). В исследованиях, проведенных после отмены введения вещества ВМА-99-82, прослеживались тенденции реабилитации выше обозначенных сдвигов.
В периферической крови у второй группы наблюдалось незначительное повышение содержания количества эритроцитов (5,8%), при этом уровень гемоглобина снижался на 4,7% по отношению к контрольным значениям. В крови крыс третьей группы, получавших противовирусное вещество в дозе 300 мг/кг, изменения были более существенными и достоверными. Количество эритроцитов в этой группе снизилось на 10%, гемоглобин на 13% по отношению к контролю. Параллельно эритроцитарным сдвигам у этих же животных прослеживалось статистически значимое снижение и цветового показателя. В белой крови у крыс уровень лейкоцитов изменялся не существенно. Прослеживалась лишь тенденция снижения (в среднем на 20 %) в группе, получавшей вещество ВМА-99-82 в дозе 300 мг/кг. Однако обозначенный сдвиг не выходил за рамки физиологической нормы. Одновременно с этим в лейкоформуле у самцов обозначенной группы понижался уровень ней-
ф| 24 |ф
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
трофилов (42%,р < 0,05), и в среднем на 6% (р > 0,05) повышалось содержание лимфоцитов. В исследованиях, проведенных в период отмены у крыс, ранее получавших вещество ВМА-99-82 в дозе 20 мг/кг, выявлено восстановление до уровня контрольных значений содержания в крови эритроцитов и гемоглобина. В группе 3 (ВМА-99-82 в дозе 300 мг/кг) содержание эритроцитов и гемоглобина оставалось сниженным. Кроме того, у данных животных отмечено существенное (в 2 раза в сравнении с контролем) повышение лейкоцитарного уровня. В мазках крови у этих крыс обнаружены гипохромные эритроциты, а со стороны белой крови - нейтрофилез.
В плазме крыс, получавших вещество ВМА-99-82 в течение одного месяца, следует отсутствие существенного влияния испытуемого вещества в дозе 20 мг/кг на биохимические показатели. У крыс, которым указанное вещество вводили в дозе 300 мг/кг, наблюдалось недостоверное снижение (пределах физиологической нормы) щелочной фосфатазы и колебания уровней мочевины, трансаминаз.
По результатам исследования влияния нового противовирусного вещества ВМА-99-82 на детокси-цирующую функцию печени (гексеналовый сон, по длительности бокового положения крыс) достоверные изменения обнаружены лишь в 3-й группе животных, у которых длительность бокового положения под действием гексенала увеличилась в среднем в два раза. После отмены введения ВМА-99-82 длительность гексеналового сна в этой группе уменьшилась в среднем на 35-45% относительно контрольных величин. В других испытуемых группах у животных изменения оказались несущественными.
При изучении влияния вещества ВМА-99-82 на поглотительно-выделительную функцию печени
1-2006 I
(проба с бромсульфалеином) изменения обнаружены также в третьей группе, где поглотительно-выделительная функция печени снизилась в среднем на 70 %. В экспериментах после отмены введения ВМА-99-82 крысам прослеживались эффекты реабилитации. Вместе с тем функциональная активность печени у крыс в 3-й группе оставалась сниженной.
При исследовании влияния данного вещества на работу почек в экспериментах с нагрузкой феноловым красным количество выделившегося красителя у крыс второй группы соответствовало значениям контрольных животных. В группе 3 реаб-сорбционная активность почек крыс была повышена. При этом количество выделившегося красителя снижалось практически в 2 раза. В исследованиях, проведенных после отмены вещества, значимых различий в экскреторной и реаб-сорбционной активности подопытных и контрольных групп крыс не обнаружено. Во всех случаях феноловый краситель практически одинаково выделялся в мочу исследуемых животных.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, на основании проведенных исследований можно заключить, что новое противовирусное вещество ВМА-99-82 при внутрижелудочном введении крысам в дозе 20 мг/кг не оказывает патологического действия на основные гомеостатические константы, т. е. является малотоксичным, а соответственно и безопасным при курсовом введении один месяц. При введении крысам вещества ВМА-99-82 в дозе 300 мг/кг обнаружены негативные сдвиги (слабо восстанавливающиеся в период отмены) в функциональной активности печени и почек.
