CC BY
199. Pimenta F.C., Gertz R.E., Jr., Roundtree A. et al. Rarely occurring 19A-like cps locus from a serotype 19F pneumococcal isolate indicates continued need of serology-based quality control for PCR-based serotype determinations. J. Clin. Microbiol. 2009, 47 (7): 2353-2354.
10. Pimenta F.C., Roundtree A., Soysal A. et al. Sequential triplex real-time PCR assay for detecting 21 pneumococcal capsular serotypes that account for a high global disease burden. J. Clin. Microbiol. 2013, 51 (2), 647-652.
Поступила 18.06.13
Контактная информация: Миронов Константин Олегович, к.м.н., 111123, Москва, ул. Новогиреевская, 3А, р.т. (495)974-96-46
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
О.В.Макаров1, А.З.Хашукоева1, О.А.Свитич2, Э.А.Маркова1, С.А.Хлынова1, П.А.Лабжинов2, В.В.Зверев2
ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ ФОТОДИНАМИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VITRO
Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пиро-гова, 2НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва
Цель. Оценка противовирусного эффекта ФДТ in vitro непосредственно на вирус простого герпеса (ВПГ), а также на вирусинфицированные клетки. Материалы и методы. Использована культура клеток Vero, инфицированная вирусами простого герпеса; штаммы ВПГ-1 (штамм VR-3) и ВПГ-2 (штамм MS). В качестве фотосенсибилизатора применяли Препарат «Фотодитазин» (производное хлорина Е6). Для лазерного облучения использовали аппарат физиотерапевтический «АФС». Варианты экспериментов: изучение прямого и опосредованного фотодинамического воздействия на вируссодержащую жидкость (ВПГ-1 и ВПГ-2) и на неинфицированную культуру клеток; на разработанной схеме эксперимента проводилась оценка противогерпетического эффекта фотодинамической терапии (ФДТ) и изучение действия на «потомство» вновь продуцируемого вируса ВПГ-1. Результаты. Была разработана схема проведения эксперимента для изучения опосредованного фотодинамического воздействия на ВПГ. Выявлено достоверное снижение титра вируса более чем на два порядка (в 100 — 1000 раз). Были определены оптимальные концентрация фотосенсибилизатора и доза лазерного облучения, которые приводили к снижению титра ВПГ-1 в 1000 и более раз (1,5-2,5 порядка) и снижению титра ВПГ-2 в 10 и более раз (1,5 порядка). Заключение. Полученные данные помогут подобрать адекватную схему проведения ФДТ для пациентов с рецидивирующей герпесвирусной инфекцией, в том числе и у пациенток с привычным невынашиванием беременности.
Журн. микробиол, 2014, № 1, С. 48—55
Ключевые слова: вирус простого герпеса, фотодинамическая терапия, фотосенсибилизатор, привычное невынашивание беременности
O.V.Makarov1, A.Z.Khashukoeva1, O.A.Svitich2, E.A.Markova1, S.A.Khlynova1, P.A.Labzhinov2, V.V.Zverev2
ANTI-HERPETIC EFFECT OF PHOTODYNAMIC ACTION IN AN IN VITRO EXPERIMENT
1Pirogov Russian National Research Medical University, 2Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, Russia
Aim. Evaluation of photodynamic therapy (PDT) in vitro antiviral effect directly on the herpes simplex virus (HSV) as well as on virus infected cells. Materials and methods. HSV infected Vero cell culture; HSV-1 (VR-3 strain) and HSV-2 (MS strain) were used. Fotoditazin preparation
(chlorin E6 derivative) was used as a photosensitizer. AFS physiotherapy apparatus was used for laser irradiation. Experiment variants: study of direct and mediated photodynamic effect on virus-containing fluid (HSV-1 and HSV-2) and on non-infected cell culture; evaluation of anti-herpet-ic effect of PDT and study of the effect on the newly produced HSV-1 progeny were carried out within the developed experiment scheme. Results. A scheme of experiment conduction for study of mediated photodynamic effect of HSV was developed. A significant reduction of virus titers for more than 2 orders of magnitude (100-1000 times) was detected. Optimal concentration of photosensitizer and laser irradiation dose that results in reduction of HSV-1 titers by 1000 and more times (1.5 — 2.5 orders of magnitude) and reduction of HSV-2 titers by 10 and more times (1.5 order of magnitude) were determined. Conclusion. The data obtained will help selection of adequate scheme of PDT conduction for patients with recurrent herpes virus infection including patients with recurrent miscarriage.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 1, P. 48—55
Key words: herpes simplex virus, photodynamic therapy, photosensitizer, recurrent miscarriage ВВЕДЕНИЕ
Герпесвирусная инфекция — хроническое, часто рецидивирующее заболевание с выраженным полиморфизмом клинических проявлений и пожизненной перси-стенцией в организме человека [7, 13, 16]. Свыше 90% населения планеты инфицировано вирусом простого герпеса (ВПГ), большинство носителей имеют клинические проявления [10].
Результаты исследований, выполненных в последние годы, свидетельствуют, что вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) и цитомегаловирус (ЦМВ) — этиологические факторы в патологии и привычном невынашивании беременности (ПНБ) [6, 9, 17, 20]. Несмотря на значительные успехи в изучении патогенеза герпесви-русной инфекции при ПНБ, а также на фоне внедрения в практику принципиально новых методов лечения, в настоящий момент отмечается тенденция к повышению процента случаев заболевания герпесвирусной инфекцией при ПНБ.
В литературе встречаются данные о недостаточной эффективности стандартной терапии герпетической инфекции при ПНБ. Это обусловлено многими причинами: персистенцией герпесвирусов в организме человека и специфическим иммунодефицитом, формирующимся у пациенток с рецидивирующим герпесом, устойчивостью вируса к антивирусным препаратам [11]. Поэтому лечение герпес-вирусной инфекции у пациенток с ПНБ до сих пор представляет значительную трудность. Существует много методов лечения герпесвирусной инфекции, одним из которых в перспективе может стать фотодинамическая терапия (ФДТ). ФДТ — метод, основанный на использовании фотодинамического повреждения клеток в ходе фотохимических реакций. Данный подход уже применяется в качестве антимикробной ФДТ для инактивации возбудителей бактериальных и грибковых инфекций [8, 12]. В настоящее время появляются работы по воздействию ФДТ на вирус папилломы человека, вирус иммунодефицита человека и на другие вирусы [21 — 23]. Эффективность метода ФДТ и противовирусного фотодинамического воздействия была подтверждена в экспериментальных работах и в ряде клинических исследований [1, 2, 4, 8, 14, 18]. Вышеуказанные данные стали предпосылками к проведению нами работы в этом направлении.
Принимая во внимание факт о фотодинамической инактивации вирусных частиц, мы предположили, что в качестве метода лечения герпесвирусной инфекции у женщин с ПНБ вирусного генеза может быть применен метод ФДТ Поэтому первоначально было необходимо оценить противогерпетический эффект ФДТ in vitro.
Целью настоящей работы явилась оценка противовирусного эффекта ФДТ in
4. ЖМЭИ 1 № 29
49
vitro непосредственно на вирус простого герпеса (ВПГ), а также на вирусинфи-цированые клетки.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Использовали перевиваемую культуру клеток почки африканской зеленой мартышки — Vero (институт им. Пастера, Санкт-Петербург). Культуру клеток пересевали регулярно каждые 3 — 4 дня c использованием среды DMEM с глута-мином («ПанЭко», РФ) с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки («HyClone», США). Для приготовления плашки клетки Vero культивировали в стерильных 96-луночных плоскодонных планшетах («Costar», USA), вносили 10 тыс. клеток в лунку и инкубировали в ростовой среде DMEM.
Использовали вирусы герпеса ВПГ-1 (штамм VR-3) и ВПГ-2 (штамм MS), полученные из Национальной вирусной коллекции Великобритании. До начала экспериментов вирусы прошли 5 — 7 последовательных пассажей на культуре клеток Vero.
В качестве фотосенсибилизатора (ФС) использовали препарат «Фотодитазин» («Вета-Гранд», РФ), который содержит в качестве основного компонента производное хлорина Е6. Препарат ФС разводили физиологическим раствором (NaCl 0,9%).
В качестве источника светового воздействия для лазерного облучения применяли аппарат физиотерапевтический «АФС» (ООО «Полироник», РФ) с длиной волны 662 нм и максимальной мощностью излучения на выходе 180 мВт.
Эксперименты осуществляли по общей схеме: проводили заражение культуры клеток Vero ВПГ-1 и ВПГ-2 в различных ТЦД50/мл. В полученной системе подбирали оптимальные условия для моделирования фотодинамической обработки лазерным светом: использовали различные концентрации препарата ФС, различные дозы лазерного облучения, изменяли время инкубации до и после облучения. Группу сравнения составляла инфицированная культура клеток Vero, которая не подвергалась облучению и воздействию ФС.
Варианты проведения экспериментов: изучение прямого и опосредованного фотодинамического воздействия на вируссодержащую жидкость (ВПГ-1 и ВПГ-2) и на неинфицированную культуру клеток; моделирование герпесвирусной инфекции для оценки противогерпетического эффекта ФДТ и изучение действия ФДТ на «потомство» вновь продуцируемого ВПГ.
Использовали метод определения титра вируса по способу Рида и Менча [3]. Значимым результатом считается, когда титр полученного после обработки вируса отличается от исходного значения на 1,5 — 2 и более lg ТЦД50/0,1мл.
Статистический анализ проводили с использованием программы Excel и Statistica 7.0. Для сравнения групп данных использовали критерий Манна-Уитни
[5].
РЕЗУЛЬТАТЫ
При исследовании цитотоксического действия лазерного излучения и препарата фотосенсибилизатора на культуру клеток проводился подбор дозы лазерного облучения и дозы препарата фотосенсибилизатора. Для этого все образцы были облучены лазерным светом в дозах 0,285; 0,57; 1,8; 3,42; 10,62 Дж/см2. Инкубацию культуры клеток проводили при 37°C в атмосфере 5% СО2 в течение 48 часов. При анализе монослоя культуры клеток было установлено, что максимальная доза лазерного облучения, при которой не наблюдалась значительных изменений в культуре клеток, составила 1,8 Дж/см2. При дозах 3,42 Дж/см2 и 10,62 Дж/см2 наблюдалась деградация клеток. Затем проводился подбор оптимальной
Таблица 1. Жизнеспособность клеток Vero (%) после воздействия ФС и лазерного облучения
Доза лазерного облучения, Дж/см2
Концентрация ФС «Фотодиазин», мкг/мл
0
10
50
100
0
0,285
100+12 98+15 96+9 94+17
87+11 85+16 75+10 51*+14
25*+9 23*+7 21*+11
24*+8
21*+11 23*+13 23*+9 22*+10
1,8
3,42
Примечание. Данные представлены в процентах живых клеток в исследуемых образцах. *Достоверность различий (р<0,05) при сравнении между основными и контрольными образцами.
концентрации препарата ФС, при которой изменения в культуре клеток были незначительными. Для эксперимента были взяты разведения препарата ФС в концентрациях 0, 10, 25, 50 и 100 мкг/мл, которые были добавлены в лунки с культурой клеток в объеме 200 мкл. Последовательно после инкубации препарата ФС в культуре клеток в течение 30 минут проводилось лазерное облучение образцов экспериментальными дозами облучения 0; 0,285 и 1,8 Дж/см2. Инкубацию культуры клеток проводили при 37°C в атмосфере 5% СО2 в течение 48 часов. При анализе монослоя культуры клеток было установлено, что при концентрации ФС 100 и 200 мкг/мл происходит полная деградация клеток, следовательно, такие концентрации губительны для культуры клеток. Дозы лазерного облучения никак не влияли на полученный результат (табл. 1).
Были определены оптимальные дозы лазерного облучения и препарата ФС, при которых значительных изменений в культуре клеток не наблюдалось. При концентрации ФС 10 мкг/мл были незначительные изменения в культуре клеток, поэтому можно считать эту концентрацию и выбранную экспериментальную дозу облучения (1,8 Дж/см2) оптимальными для последующих экспериментов.
После определения оптимальных доз лазерного облучения и препарата ФС проводили анализ опосредованного эффекта после фотодинамического воздействия на культуру клеток Vero, инфицированную ВПГ-1 и ВПГ-2. С этой целью была разработана определенная схема проведения экспериментов. Экспериментальный титр ВПГ-1 составлял 6,0 ТЦД50/0,1мл, а ВПГ-2 — 4,5
Проводили инфицирование культуры клеток Vero ВПГ-1 (дозы заражения 6,0; 5,0; 4,0 ТЦЦ5о/0,1мл) и ВПГ-2 (дозы заражения 4,5; 3,5; 2,5 ТЦЦ5о/0,1мл). Затем в полученную систему вводили раствор ФС «Фотодитазин» в концентрациях 1 и 10 мкг/мл и осуществляли лазерное облучение в дозе 1,8 Дж/см2. Также изменяли время инкубации до и после облучения, которое составило 0 и 30 мин. Были подобраны оптимальные условия, при которых был реализован противогерпетиче-ский фотодинамический эффект in vitro (концентрация ФС «Фотодитазин» 10 мкг/мл, оптимальная доза лазерного облучения 1,8 Дж/см2, время облучения 30 сек). Оптимальные условия экспериментов — соблюдение инкубации до и после облучения не менее 30 мин. Затем было изучено комплексное воздействие лазерного облучения и ФС на культуру клеток, инфицированных ВПГ-1 и ВПГ-2 после ее раститровки, т.е. на «потомство» вновь продуцируемого вируса. После расти-тровки культуральной жидкости в образцах, не подверженных облучению и действию препарата ФС, определяли цитопатическое действие вируса, титр которого составил 2 — 3 ТЦД50/0,1 мл в зависимости от исходного разведения вируссодержащего материала. Под действием лазерного облучения титр вновь
ТЦД50/0,1мл.
продуцируемого вируса снижался на 1 ТЦД5о /0,1 по сравнению с контрольными образцами. Таким образом, доза облучения 1,8 Дж/см2 обладает противогерпети-ческим действием. Препарат ФС (без воздействия лазерного облучения) обладает противогерпетическим действием, при этом титр вирусного «потомства» снижается на 2 ТЦД50/0,1. При комплексом воздействии лазерного облучения и ФС на культуру клеток, инфицированных ВПГ-1, титр вновь продуцируемого вируса снижался более, чем на 2 ТЦД50/0,1 (т.е. в 100 — 1000 раз). Под действием лазерного облучения в сенсибилизированных образцах с оптимальной концентрацией ФС 10 мкг/мл и наименьшей концентрацией вновь продуцируемого вируса 4,0 ТЦД50/0,1 мл наблюдали 25% цитопатическое действие (ЦПД) с применением инкубации до и после облучения, т.е. титр вновь продуцируемого вируса снижался на 2 ТЦД50/0,1. В таких же образцах без предварительной инкубации ЦПД составило 50%, т.е. в эксперименте с 30-минутной инкубацией после действия ФС (до действия лазерного облучения) на систему «вирус-клетка» титр ВПГ-1 достоверно снижался, но не столь значимо, как в экспериментах без инкубации (1 ТЦД50/0,1) (табл. 2).
Результаты, полученные в данной схеме эксперимента при соблюдении таких же условий, по ВПГ-2 показали достоверное снижение титра вируса на полтора порядка (в 10 и более раз).
На следующем этапе работы был проведен анализ прямого эффекта препарата ФС «Фотодитазин» (в комплексе с лазерным облучением) на вируссодержащую жидкость ВПГ-1 и ВПГ-2. В данной схеме использовали образцы препарата ФС в таких же концентрациях, как и в эксперименте по подбору оптимальной дозы ФС. В эти образцы была добавлена вируссодержащая жидкость ВПГ-1 и ВПГ-2. Часть образцов была незамедлительно облучена лазерным светом в оптимальной дозе, полученной ранее — 1,8 Дж/см2. Другие группы образцов были облучены позже той же дозой после предварительной инкубации, которая составила 30 и 90 минут соответственно. После облучения часть образцов сразу же была перенесена на 24-часовой монослой культуры клеток. Другие образцы были вторично инкубированы в течение 1 и 3 часов. Затем все образцы были перенесены на 24-часовой монослой культуры клеток. В качестве ростовой среды применяли питательную среду DMEM с добавлением 2% эмбриональной телячьей сыворотки крови. Инкубацию культуры клеток проводили при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 7 дней. Вирусингибирующую активность фотодинамического воздей-
Таблица 2. Противовирусная активность фотодинамического воздействия на инфицированную ВПГ-1 культуру клеток до и после лазерного облучения
Концентрация ФС «Фотодитазин»^ мкг/мл
^^^^^^^^ Концентрация вируса ВПГ-1 4,0 ТЦД50/0,1мл 5,0 ТЦД50/0,1мл 6,0 ТЦД50/0,1мл
0 Образцы без облучения 3,75 3,25 3,5
1 3,5 3,5 3,25
10 3,5 3,25 3,0
0 Образцы после облучения 3,25 3,25 3,0
1 3,0 3,0 2,75*
10 2,75* 2,75* 2,5*
Примечание. ^Достоверность различий (р<0,05) при сравнении между основными и контрольной группами.
ствия на ВПГ-1 и ВПГ-2 оценивали по ингибированию их цитопатического действия в культуре клеток. Цитопатическое действие вируса выражали в цитопати-ческих дозах (lg ТЦД50/мл). В результате эксперимента было показано, что оптимальная концентрация ФС составила не более 50 мкг/мл и доза лазерного облучения 1,8 Дж/см2. Оптимальные условия эксперимента — соблюдение инкубации до и после облучения не менее 30 минут. Вирус ВПГ-1 был инактивирован препаратом ФС после лазерного облучения, и на фоне инкубации до и после облучения в концентрациях от 50 до 200 титр ВПГ-1 составил >1 ТЦД50 /0,1 мл. Дозы ФС более 50 мкг/мл приводили к снижению титра вируса ВПГ-1 в 1000 и более раз (1,5 — 2,5 порядка). При анализе прямого эффекта препарата ФС «Фотодита-зин» в комплексе с лазерным облучением на вируссодержащую жидкость ВПГ-2 было показано, что, несмотря на то, что ВПГ-2 обусловливает более медленное развитие ЦПД, дозы ФС более 50 мкг/мл приводили к снижению титра вируса ВПГ-2 в 10 и более раз (1,5 порядка). Титр ВПГ-2 составил >0,5 — 1 ТЦД50 /0,1 мл.
ОБСУЖДЕНИЕ
В проведенной экспериментальной работе по оценке эффективности фотодинамических воздействий на ВПГ использовалась разработанная схема эксперимента для определения прямого и опосредованного действия ФДТ на вирус, на инфицированную ВПГ-1 и ВПГ-2 культуру клеток Vero, на «потомство» вновь продуцируемого вируса in vitro. Одновременное использование всех трех подходов необходимо для оценки механизмов противогерпетического действия ФДТ, которые заключаются в действии представленной терапии. Полученные данные в дальнейшем, возможно, помогут подобрать эффективную схему проведения ФДТ для пациентов с рецидивирующим течением герпесвирусной инфекции.
Таким образом, нами был показан противогерпетический эффект фотодинамического воздействия в культуре клеток с использованием препарата ФС на основе хлорина Е6. В доступной нам литературе мы не нашли сведений об использовании производных хлорина Е6 («Фотодитазин») для фотодинамического ингибирования герпесвирусной инфекции. Известно, что у оболочечных вирусов после обработки их рядом ФС и облучения светом видимого диапазона или лазерным светом происходит разрушение оболочки [15, 24]. Хлорины, как и другие ФС, при поглощении кванта света генерируют синглетный кислород и образование свободных радикалов, которые окисляют клеточные компоненты и, возможно, компоненты мембраны вируса, вызывая гибель клеток и повреждение внутри- и внеклеточных вирусных частиц. В результате проведенных нами исследований определены условия вирусингибирующего эффекта фотодинамического воздействия на культуру клеток, инфицированную ВПГ 1 и 2 типов, при использовании ФС «Фотодитазин». Разработанная нами схема проведения эксперимента по противовирусной ФДТ на примере герпесвирусной инфекции имеет практический выход: позволяет изучать точки действия ФС при фотодинамическом воздействии на вирус герпеса (механизм действия ФДТ на вирус); на созданной модели может быть изучен механизм действия других ФС при моделировании фотодинамической терапии герпесвирусной инфекции.
В литературе опубликованы экспериментальные работы Avala F. et al. по фотодинамическому ингибированию герпесвирусной инфекции (ВПГ-1) с использованием в качестве ФС 5-аминолевуленовой кислоты (5-АЛК). Установлена повышенная способность клеток-мишеней накапливать 5-АЛК, что обусловило избирательность их фотоповреждения. Получены вирусингибирующие эффекты ВПГ-1 [13]. Таким образом, было показано противогерпетическое действие 5-АЛК через независимый механизм апоптоза.
Лполихиной ИА. и др. также получены данные по противовирусному эффекту в отношении вируса папилломы человека с использованием ФДТ и ФС 5-ЛЛК на примере ВПЧ-ассоциированных заболеваний наружных половых органов (вульвы, влагалища и шейки матки) [1].
Tao J.N. et al. проводили экспериментальные исследования по фотодинамической инактивации ВПГ in vivo на моделях герпесвирусной инфекции ВПГ-1 и ВПГ-2 морских свинок. В экспериментах при использовании фотосенсибилизатора 5-аминолевуленовой кислоты был получен противогерпетический эффект, сопоставимый с эффектом ацикловира [19].
Таким образом, полученные результаты способствуют дальнейшему изучению противогерпетических механизмов ФДТ на модели in vitro и открывают подходы для разработки фотодинамической терапии герпесвирусной инфекции in vivo, а также для разработки метода лечения хронической герпесвирусной инфекции, в том числе и у пациенток с ПНБ в анамнезе. Данный метод может быть использован как в комбинированной терапии хронической герпесвирусной инфекции, так и как отдельный метод лечения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Aполихина ИА., Денисова Е.Д. Папилломавирусная инфекция гениталий: актуальная проблема современной гинекологии и пути ее решения. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2007, 6 (6): 70-75.
2. Белый ЮА., Терещенко АВ., Володин П.Л. и др. Экспериментальное обоснование применения транспупиллярной фотодинамической терапии с производным хлорина Е6 в лечении меланом сосудистой оболочки глаза. Рефракционная хирургия и офтальмология. 2007, 7 (4): 22-26.
3. Биргер М.О., Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., Медицина, 1982.
4. Васильченко С.Ю. и др. Оптическая диагностика и фотодинамическая терапия атеро-склеротических бляшек. Лазерная медицина. 2011, 15 (2): 32-38.
5. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., Практика, 1999.
6. Макаров О.В., Озолиня ЛА., Сумеди Т.Н. Изменение показателей иммунитета у пациенток с невынашиванием беременности инфекционного генеза в I триместре. Рос. вестник акушера-гинеколога. 2008, 6: 28-32.
7. Мельниченко A^., Мезенцева М.В., Шаповал И.М. и др. Сравнительная оценка показателей интерферонового и цитокинового статуса при компелксном исследовании больных с герпесвирусными инфекциями. Вопросы вирусологии. 2011, 6: 33-36.
8. Пальчун В.Т., Лапченко A.C., Лапченко A.A. и др. Современный взгляд на антимикробную фотодинамическую терапию. Вестник отоларингологии. 2009, 3: 4-6.
9. Попова A.O., Пастушенков В.Л. Клинические и лабораторные аспекты герпетической инфекции у пациенток с невынашиванием беременности. Журнал акушерства и женских болезней. 2010, LIX (6): 58-68.
10. Сморчков A.A., Князькин И.В., Зезюлин П.Н. Проблема семейного герпеса. Вестник РГМУ. 2009, 5: 20-22.
11. Соснова E.A. Предгравидарная подготовка пациенток с вирусными инфекциями. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2011, 10 (5): 2-7.
12. Странадко Е.Ф., Кулешов И.Ю., Караханов Г.И. Фотодинамическое воздействие на патогенетические микроорганизмы (Современное состояние проблемы антимикробной фотодинамической терапии). Лазерная медицина. 2010, 14 (2): 52-56.
13. Avala F., Grimaldi E., Perfetto B. et al. 5-aminolaevulinic acid and photodynamic therapy reduce HSV-1 replication in HaCat cells through an apoptosis-independent mechanism. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2008, 24 (5): 237-243.
14. Bachmann B., Knuver-Hopf J., Lambrecht B. J. Target structures for HIV-1 inactivation by methylene blue and light. Virology. 1995, 47: 172-178.
15. Costa L., Amparo M., Faustino F. et al. Photodynamic Inactivation of mammalian viruses and bacteriophages. Viruses. 2012, 4 (7): 1034-1074.
16. Chan T., Barra N.G., Lee A.J. et al. Innate and adaptive immunity against herpes simplex vurus type 2 in the genital mucosa. J. Reproductive Immunology. 2011, 88: 210-218.
17. Nigro G., Mazzocco M., Mattia E. et al. Role of the infections in recurrent spontaneous abortion. J. Mater. Fetal Neonatal Med. 2011, 24 (8): 983-989.
18. North J., Coombs R., Levy J. Photodynamic inactivation of free and cell-associated HIV-1 using the photosensitizer, benzoporphyrin derivative. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 1994, 7 (9): 891-898.
19. Tao J.N., Duan S.M., Li J. Experimental studies on treatment of HSV infections with photo-dynamic therapy using 5-aminolevulinic acid. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. 2007, 21 (1): 79-82.
20. Tao L., Suhua C., Juanjuan C. et al. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early pregnancy villous EVT's invasion function. Virology J. 2011, 8: doi: 10.1186/1743-422X-8-114.
21. Yang Y.G., Zou X.B., Zhao H. et al. Photodynamic therapy of condyloma acuminata in pregnant women. Chin. Med. J. 2012, 125 (16): 2925-2928.
22. Yin H., Li Y, Zheng Y. et al. Photoinactivation of cell-free human immunodeficiency virus by hematoporphyrin monomethyl ether. Lasers in Medicine Science. 2012, 27 (5): 943-950.
23. Wainwright M. Local tretment of viral disease using photodynamic therapy. Photochem Photobiol. Sci. 2004, 3 (5): 406-411.
24. Wainwright M. Photoinactivation of viruses. Photomed Laser Surgery. 2009, 27 (2): 357363.
Поступила 18.06.13
Контактная информация: Свитич Оксана Анатольевна, д.м.н.,
105064, Москва, М.Казенный пер., 5А, р.т. (495)674-55-01
КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
А.В.Семенов1, И.А.Власова2, Ю.В.Останкова1, Арег А.Тотолян1
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ HBsAg В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И КОЛЬЦЕВОЙ КОВАЛЕНТНО ЗАМКНУТОЙ ДНК ВИРУСА ГЕПАТИТА В В ТКАНИ ПЕЧЕНИ КАК МАРКЕРЫ АКТИВНОСТИ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В
1НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, 2Городской вирусологический консультативно-диагностический центр, Санкт-Петербург
Цель. Количественная оценка содержания кольцевой ковалентно замкнутой ДНК (ккзДНК) ВГВ в тканях печени пациентов с ХВГВ умеренной активности течения по сравнению с неактивными носителями HBsAg, а также установление возможной связи между количеством ккзДНК ВГВ в клетках печени и уровнем HBsAg в сыворотке крови у этих групп пациентов. Материалы и методы. Пациентов (п=34) с диагнозом ХВГВ обследовали на уровень АЛТ, HBsAg (качественно и количественно), анти-НВсог IgG, анти-НВе IgG, анти-НСУ IgG+IgM, анти-ВГД IgG+IgM, ВГВ ДНК в качественном и количественном варианте. У всех пациентов взята биопсия печени. В ткани печени определяли ккзДНК ВГВ по методу РоШсто Т. et а1. (2004). Результаты. По результатам ПЦР ДНК ВГВ пациенты выделены в группу неактивных носителей HBsAg (п=16) и ХВГВ (п=18) умеренной активности. Вирусная нагрузка у пациентов с ХВГВ составила в среднем 540+230 МЕ/мл. Уровень АЛТ у носителей был несколько ниже, чем у пациентов с ХВГВ. Уровень HBsAg в крови у неактивных носителей был значительно ниже и составил 940+259 МЕ/мл против
