CC BY
18
V Евразийский гематологический форум
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ УРОВНЯ ГЕНА WT1 У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕКОЗАМИ С ИЗОЛИРОВАННОЙ МУТАЦИЕЙ NPM1 И МУТАЦИЕЙ NPM1 С ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМИ МОЛЕКУЛЯРНЫМИ МАРКЕРАМИ
И.Г. Будаева, Л.Л. Гиршова, С.О. Кузин, Е.Г. Овсянникова, Т. С. Никулина, Ю.В. Миролюбова, Д.В. Моторин, А.Ю. Зарицкий
ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация
Введение. Наличие мутации гена NPM1 у пациентов с острыми миелоидными лейкозами (ОМЛ) является одним из предикторов благоприятного прогноза, встречается примерно у 30 % больных ОМЛ. WT1 — неспецифический универсальный маркер эффективности лечения.
Цель. Оценить корреляцию между уровнями редукции NPM1 и WT1 на разных этапах лечения. Выявить дополнительные прогностические факторы у больных ОМЛ с мутацией NPM1.
Материалы и методы. В исследование включено 14 больных ОМЛ с мутацией NPM1 (7 — с ОМЛ de novo и 7 — с первым рецидивом ОМЛ). Все имели гиперэкспрессию WT1. Дополнительные маркеры обнаруживались у 7 пациентов: гиперэкспрессия BAALC (n = 2), гиперэкспрессия MLL (n = 1), мутация FLT3-ITD (n = 3), мутация DNMT3A (n = 1). Медиана возраста составила 49 лет (диапазон 30-64 года). У пациентов с первичным ОМЛ использовалась полихимиотерапия (ПХТ) «7+3», а с рецидивами ОМЛ — ПХТ FLAG. Медиана значений мутации NPM1 составляла 642,3/100 копий ABL (диапазон 238,8-2565,04). Уровень мутации NPM1 оценивался в дебюте, на 28-й день терапии и при рецидивах, уровень WT1 — в дебюте, на 14-й и 28-й дни терапии и при рецидивах. Медиана наблюдения составила 8 мес. Мутация NPM1 и экспрессия WT1 исследовались с помощью метода ПЦР в реальном времени (Ipsogen (Qiagen) NPM1 mut A, B, D MutaQuant and the Ipsogen WT1 ProfileQuant Kit).
Результаты. Полные ремиссии достигнуты у 13 (92,8 %) из 14 пациентов. У 4 (38,4 %) из 13 пациентов в последующем диагностирован костномозговой рецидив. Во всех случаях с рецидивом заболевания были те же мутации, что и на момент постановки диагноза. Медиана уровня редукции NPM1 после курса индукционной терапии составила 3 log. Медиана WT1 на 14-й день ПХТ была 1 log, на 28-й день ПХТ — 2 log. Уровень WT1 был значительно меньше на 14-й и 28-й дни у пациентов с редукцией NPM1 > 3 log на 28-й день (232,96 vs 1131,87/104 копий ABL, p < 0,05 и 40,75 vs 8 60,33/104 копий ABL, p < 0,05). Пациенты с ранним рецидивом (< 6 мес.) имели редукцию NPM1 < 3 log (100 vs 12,5 p = 0,016). Показатели общей (ОВ) и безрецидивной выживаемости (БРВ) были ниже у пациентов со снижением уровня NPM1 < 3 log (87,5 vs 20 %, p = 0,001; 42,9 vs 0 %, p = 0,008). БРВ была выше у пациентов с редукцией уровня WT1 < 100 копий на 28-й день (80 vs 0 %; p = 0,02) и < 250 копий на 14-й день (83,3 vs 33,3 %; p = 0,006). Отсутствие редукции NPM1 > 3 log статистически значимо коррелирует с наличием прогностически неблагоприятных молекулярных маркеров FLT3-ITD, BAALC, MLL, DNMT3A (83,3 vs 0 %; p = 0,0129). Эти пациенты имеют более низкие показатели БРВ и ОВ (33,3 vs 85,7 %, p = 0,002 и 0 vs 50 %, p = 0,008). Частота редукции уровня WT1 > 100 копий на 28-й день была выше у пациентов с изолированной мутацией NPM1 в отличие от пациентов с дополнительными прогностически неблагоприятными молекулярными маркерами (72,7 vs 27,3 %; p = 0,006).
Заключение. В работе показано, что редукция уровня NPM1 на 3 log влияет на показатели ОВ и БРВ. У пациентов с дополнитель-
PROGNOSTIC VALUE OF WT1 GENE LEVEL IN PATIENTS WITH ACUTE MYELOID LEUKEMIA WITH ISOLATED NPM1 AND NPM1 MUTATION WITH ADDITIONAL MOLECULAR MARKERS
IG Budaeva, LL Girshova, SO Kuzin, EG Ovsyannikova, TS Nikulina, YuVMirolyubova, DVMotorin, AYu Zaritskii
VA Almazov National Medical Research Center, Saint Petersburg, Russian Federation
Background. The NPM1 mutation in patients with acute myeloid leukemia (AML) is one of the predictors of a favorable prognosis. It occurs in about 30 % of patients with AML. WT1 is a nonspecific universal marker of treatment efficacy.
Aim. To evaluate the correlation between the reduction levels of NPM1 and WT1 at different stages of treatment and to reveal additional prognostic factors in patients with AML with NPM1 mutation.
Materials & Methods. The study included 14 patients with AML and NPM1 mutation (7 patients with de novo AML and 7 patients with the first AML relapse). Every patient had the overexpression of WT1. Additional markers were detected in 7 patients: overexpression of BAALC (n = 2), overexpression of MLL (n = 1), FLT3-ITD mutation (n = 3), DNMT3A mutation (n =1). The median age was 49 years (range 30-64 years). For patients with primary AML, polychemotherapy (PCT) "7+3" was used, and PCT FLAG was administered to patients with relapses of AML. The median value of the NPM1 mutation was 642.3/100 copies ABL (range 238.8-2565.04). The level of NPM1 mutation was evaluated at the onset, on day 28 and during relapses; the level of WT1 was evaluated at the onset, on days 14 and 28 and during relapses. The median follow-up period was 8 months. The NPM1 mutation and WT1 expression were examined by real-time PCR (Ipsogen (Qiagen) NPM1 mut A, B, D MutaQuant and the Ipsogen WT1 ProfileQuant Kit).
Results. Complete remissions were achieved in 13 (92.8 %) of 14 patients. Four (38.4 %) of 13 patients were subsequently diagnosed with bone marrow relapse. In all cases with recurrence of the disease, the mutations were the same as at the time of diagnosis. The median level of NPM1 reduction after the course of induction therapy was 3 log. The median level of WT1 reduction on day 14 of PCT was 1 log, and on day 28 of PCT it was 2 log. The level of WT1 was significantly lower on days 14 and 28 in patients with a reduction of NPM1 > 3 log at day 28 (232.96 vs 1131.87/104 copies ABL, p <0.05 and 40.75 vs 860.33/104 copies ABL, p <0.05). Patients with early relapse (< 6 months) had a reduction of NPM1 < 3 log (100 vs 12.5, p = 0.016). The overall (OS) and disease-free survival (DFS) were lower in patients with a decrease in the level of NPM1 < 3 log (87.5 vs 20 %, p = 0.001; 42.9 vs 0 %, p = 0.008). DFS was higher in patients with a reduction in the WT1 level < 100 copies on day 28 (80 vs 0 %, p = 0.02) and < 250 copies on day 14 (83.3 vs 33.3 %, p = 0.006). Absence of NPM1 reduction > 3 log significantly correlates with the presence of prognostically unfavorable molecular markers FLT3-ITD, BAALC, MLL, DNMT3A (83.3 vs 0 %, p = 0.0129). These patients had lower DFS and OS values (33.3 vs 85.7 %, p = 0.002 and 0 vs 50 %, p = 0.008). The frequency of reduction of the WT1 level > 100 copies on day 28 was higher in patients with isolated mutation of NPM1, in contrast to patients with additional prognostically unfavorable molecular markers (72.7 vs 27.3 %, p = 0.006).
Conclusion. The research shows that the reduction in the NPM1 level by 3 log affects OS and DFS. In patients with additional molecular markers, a minimal decrease in the level of NPM1 and WT1 was observed. The decrease in the level of WT1 serves as a favorable prog-
http://bloodjournal.ru/ V Евразийский гематологический форум 531
ными молекулярными маркерами наблюдалось незначительное снижение уровня НРМ1 и ШТ1. Снижение уровня ]МТ1 служит благоприятным прогностическим маркером у пациентов с изолированной мутацией НРМ1 и у пациентов с дополнительными молекулярными маркерами. В настоящем исследовании показано, что уровень ]МТ1 на 14-й день после начала индукционной терапии — ранний и важный прогностический маркер.
Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.
nostic marker in patients with isolated mutation of NPM1 and in patients with additional molecular markers. In this study, it is shown that the level of WT1 on day 14 after the start of induction therapy is an early and important prognostic marker.
Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.
Funding. The study received no external funding.
ПОТЕРЯ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ В ГЕНЕ ТР53 У ПАЦИЕНТОВ С ДВКЛ - НОСИТЕЛЕЙ RS78378222 КАК СЛУЧАЙ КЛАССИЧЕСКОГО «DOUBLE-HIT» МЕХАНИЗМА КАНЦЕРОГЕНЕЗА
Е.Н. Воропаева, Т.И. Поспелова, М.И. Воевода, В.Н. Максимов, Т.А. Агеева
НИИ терапии и профилактической медицины, Новосибирск, Российская Федерация
Новосибирский государственный медицинский университет, Новосибирск, Российская Федерация
Введение. Известно, что rs78378222 гена ТР53 находится под действием отрицательного естественного отбора, а механизмом такого отбора являются злокачественные новообразования.
Цель. Выявить частоту rs78378222 гена ТР53 в опухолевой ткани больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВКЛ).
Материалы и методы. Геномная ДНК была выделена из парафиновых блоков биоптатов опухолевых лимфатических узлов и экстранодальных очагов поражения 92 пациентов с ДВКЛ методом фенольно-хлороформной экстракции с применением гуаниди-на. В работу брали срезы ткани, содержащие не менее 80-90 % опухолевых клеток. Генотипирование rs78378222 гена ТР53 проводили методом ПЦР с анализом полиморфизма длины рестрикци-онных фрагментов. Для подтверждения наличия редкого аллеля С rs78378222 выполняли прямое секвенирование по Сэнгеру.
Результаты. Частота выявления rs78378222 в опухолевой ткани ДВКЛ составила 9 (9,8 %) из 92. Обращало на себя внимание обнаружение у 5 из 9 пациентов минорного аллеля С в гомозиготном состоянии. Поскольку случаи редкого гомозиготного генотипа С/С rs78378222 в нормальной ткани не описаны, полученные результаты свидетельствуют о потере гетерозиготности в гене ТР53 в опухолевой ткани ДВКЛ.
Выводы. Явление потери гетерозиготности в гене ТР53 у носителей гетерозиготного генотипа А/С rs78378222 в опухолевой ткани больных ДВКЛ служит примером классического «double-hit» механизма канцерогенеза, описанного Кнудсеном.
Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.
LOSS OF HETEROZYGOSITY OF THE TP53 GENE IN PATIENTS WITH DLBCL, RS78378222 CARRIERS AS A CASE OF CLASSIC "DOUBLE-HIT" MECHANISM OF CARCINOGENESIS
EN Voropaeva, TI Pospelova, MI Voevoda, VN Maksimov, TA Ageeva
Research Institute of Therapy and Preventive Medicine, Novosibirsk, Russian Federation
Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk, Russian Federation
Background. It is known that rs78378222 of the TP53 gene is a subject of negative natural selection, and malignant neoplasms are the mechanism of such selection.
Aim. To identify the frequency of rs78378222 of TP53 in cancer cells of patients with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).
Materials & Methods. Genomic DNA was isolated from paraffin blocks of biopsies of involved lymph nodes and extranodal lesions of 92 patients with DLBCL by phenol-chloroform extraction using guani-dine. Tissue samples containing no less than 80-90 % of cancer cells were used. Genotyping of rs78378222 TP53 gene was performed by PCR with restriction fragment length polymorphism analysis. To confirm the presence of a rare allele C rs78378222, direct Sanger sequencing was used.
Results. The incidence of rs78378222 in the tumor tissue of DLBCL patients was 9 (9.8 %) of 92. It was interesting to detect a minor allele C in the homozygous state in 5 of 9 patients. Since no occurrence of a rare homozygous genotype C/C rs78378222 in normal tissue had been described, the obtained results indicate a loss of heterozygosity in the TP53 gene in the tumor tissue of DLBCL patients.
Conclusions. The phenomenon of the loss of heterozygosity in the TP53 gene in carriers of heterozygous genotype A/C rs78378222 in the tumor tissue of patients with DLBCL is an example of the classical "double-hit" carcinogenesis mechanism described by Knudsen.
Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.
Funding. The study received no external funding.
