CC BY
22Научные статьи
5. Хаитов Р. М.,Пащенков М. В., Пинегин Б. В. Биология рецепторов врождённой иммунной системы. // Физиология и патология иммунной системы - 2008 - Т. 12 - N 6 -С. 3-28.
6. Blanchard C., Rothenberg M. Biology of the eosinophil. // Advances in Immunology - 2009 - V. 101 - P. 81-121
7. Gevaert P., Gevaert H. Eosinophilic inflammation: causative factors, triggers and mechanisms. // International Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006, цит. Рос. ринология - 2006 - N 2 - С. 29.
8. Involvement of Toll-like receptors in the immune response of nasal polyp epithelial cells / Wang J. [et al.]. // Clin. Immunol. - 2007 - V. 124 - N 3 - P. 345-352.
9. Korono Y. The role of cytokine in eosinophilic infiltration into nasal polips. // International Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006, цит. Рос. ринология - 2006 - N 2 - С. 31.
10. Medzhitov R. Recognition of microorganisms and activation of the immune response. // Nature - 2007 - V. 449 -N 18 - P. 819-826.
11. T-helper cell population and eosinophilia in nasal polyps / Cheng W. [et al.]. // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol.
- 2007 - V. 17 - N 5 - P. 297-301.
12. Th2 cytokines associated with chronic rhinosinusitis with polyps downregulate the antimicrobial immune function of human sinonasal epithelial cells. / Ramanathan M. J. [et al.]. // Am. J. Rhinol. - 2008 - V. 22 - N 2 - P. 115-121.
УДК:616. 323-007. 61:576. 8. 077. 3
ПРОДУКЦИЯ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ
В ТКАНИ ГЛОТОЧНОЙ МИНДАЛИНЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ
ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНОМ СИНДРОМЕ У ДЕТЕЙ
М. В. Дроздова, А. С. Симбирцев, Е. А. Варюшина, Е. В. Тырнова
PRODUCTION OF PROINFLAMMATORY CYTOKINES BY
NASOPHARYNGEAL TONSIL (ADENOID) TISSUE IN CHILDREN WITH
CHRONIC LYMPH PROLIFERATIVE SYNDROME
M. V. Drozdova, A. S. Simbirtzev, E. A. Varushina, E. V. Tyrnova
ФГУ Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи Росмедтехнологий
(Директор - Засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
ФГУП Гос. НИИ Особо чистых биопрепаратов ФМБА России, г. Санкт-Петербург (Директор - проф. В. П. Добрица)
Исследована продукция ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа в ткани глоточной миндалины при хроническом лимфопролиферативном синдроме у детей 3-8 лет. Материал: 1-2 биоптата от 42 детей (32 аденотомиии, 10 аденотонзиллотомии). Методы: непрямая иммуногистохимия с использованием системы экстравидин-биотин-щелочная фосфатаза, гистохимия нейт-рофилов по миелопероксидазе с использованием диаминобензидина. У 16 детей ВЭБ, ЦМВ-ин-фекция (паст-инфекция, ПЦР+ ДНК ВЭБ, ЦМВ в соскобах со слизистой ротоглотки). У15 детей АСЛ-О > 200 МЕ/мл. У 11 детей неясная этиология. Результаты: наличие продукции каждого ИЛ у 25-75% при герпетической инфекции, 91-100% при стрептококковой и неясной этиологии. Интенсивность продукции: ИЛ-1альфа 0,25, ИЛ-1бета 0,25, ИЛ-6 0,5, ИЛ-8 0,93 при ВЭБ, ЦМВ-инфекции;от 1,4 до 1,73 при стрептококковой инфекции. С возрастанием АСЛ-О продукция провоспалительных цитокинов повышалась, но не выше умеренного уровня. Заключение: механизм иммуносупрессии различен при герпесвирусной и стрептококковой этиологии.
Ключевые слова: иммуногистохимия, провоспалительные цитокины, глоточная миндалина.
Библиография: 16 источников.
Production of Il-6, Il-8, Il-1beta, and Il-1alpha by nasopharyngeal tonsil (adenoid) tissue is investigated in children of 3-8 years with chronic lymph proliferative syndrome. Material: 1-2 biopsies from 42 children (32 adenectomy, 10 adenotonsilectomy). Methods: indirect immunohistochemistry with the use of system of extravidin-biotin-alkaline phosphatase, the neutrophil myeloperoxidase histochemistry with the use of diaminobenzidin. At 16 children with VEB, CMV-infection (past-infection,
PCR+ DNA VEB, CMV in oral cavity mucous). At 15 children ASL-O> 200 ME/ml. At 11 children unknown etiology. Results: presence of production of everyone IL at 25-75 % at VEB, CMV-infection, 91-100 % at a streptococcal and unknown etiology. Intensity of production: Il-1alpha 0,25, Il-1beta 0,25, Il-6 0,5, Il-8 0,93 at VEB, CMV-infections; from 1,4 to 1,73 at a streptococcal infection. Production of proinflammatory cytokines rose with increase ASL-O, but not above moderate level. The conclusion: the mechanism of immunosuppression is distinguished at herpes viral and a streptococcal etiology.
Key words: immunohistochemistry, proinflammatory cytokines, nasopharyngeal tonsil (adenoid)
Bibloigraphy: 16 sources.
Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой / антицитокиновой терапии рассматриваются в современной литературе [10]. Цитокины (cytos - клетка, kines -движение) представляют собой множество факторов, активирующих пролиферацию и диф-ференцировку клеток организма. Цитокины играют ведущую роль, как связующее звено между лейкоцитами различных классов в реакциях как общего, так и местного иммунитета. Биологически активные вещества, которые описаны как посредники межклеточной кооперации лейкоцитов, получили название «интерлейкины» (ИЛ). Механизм действия провоспалитель-ных цитокинов связан с активацией естественных защитных реакций путем стимуляции, в первую очередь, неспецифических, а затем и специфических звеньев иммунитета [9].
Миндалины лимфоглоточного кольца Пирогова-Валдейера и слизистая-ассоциированная лимфоидная ткань верхних дыхательных путей расположены на границе дыхательного и пищеварительного трактов при непосредственном контакте с внешней средой, что и обусловливает их функции как органов, которые первыми подвергаются непосредственному воздействию экзогенного антигенного материала, определенным образом реагируют на него и подготавливают организм к наиболее оптимальным вариантам иммунного ответа. Лимфоидная ткань глоточной миндалины реагирует на антигенные раздражители в тесном взаимодействии с покровным эпителием, выстилающим лакуны и люминарную поверхность этого органа. В состоянии гипертрофии глоточная миндалина генерирует специфически реагирующие клоны лимфоидных клеток памяти и поставляЕт их в слизистую оболочку носа и околоносовых пазух, формируя иммунный барьер слизистых оболочек [1].
Наиболее активное воздействие на иммунную систему оказывают возбудители инфекционных заболеваний. Именно они чаще всего являются основным этиологическим фактором вторичных иммунодефицитных состояний. При этом дефицит различных подсистем иммунитета будет отличаться при действии различных возбудителей. Данные литературы свидетельствуют о полиморфизме вирусной и бактериальной микробиоты при воспалении миндалин лимфоидного кольца глотки. Вместе с тем, сложилось мнение о превалирующей роли бета-гемолитического стрептококка, согласно которому небные и глоточные миндалины становятся входными воротами для стрептококковой инфекции [4, 7].
В настоящее время дискутируется вопрос о значимости длительной персистенции вируса Эпштейна-Барра (ВЭБ) в развитии воспалительной патологии верхних дыхательных путей [2, 8]. По классификации T. Schacker (1997) клинические формы заболеваний, обусловленные вирусом Эпштейна-Барра, отличаются при первичном инфицировании и при реактивации. При первичном инфицировании наиболее распространенной формой является инфекционный мононуклеоз. Геном ВЭБ после первичного инфицирования может сохраняться в В-лимфоцитах пожизненно. После получения соответствующего стимула (на фоне стрессов, эндокринных нарушений, у больных с первичными и вторичными иммунодефицитами, а также проходящих иммуносупрессорную терапию) ВЭБ может реактивироваться из латентного состояния. При реактивации возможно развитие такой клинической формы заболевания, как ВЭБ-ассоциированный лимфопролиферативный синдром [11]. Активная пролиферация вируса во всех органах, имеющих лимфоидную ткань, приводит к структурным изменениям, затрагивающим все звенья иммунной системы.
Механизмы функционирования воспалительных и провоспалительных цитокинов, участвующих в регуляции местной иммунной защиты, еще недостаточно изучены. В научной литературе имеются немногочисленные и противоречивые сведения об изучении показателей цито-
кинового статуса ткани глоточной миндалины путем проведения иммуногистохимических исследований у детей с гипертрофическими и воспалительными процессами [5, 6, 12-14, 16]. Информативность метода связана с феноменом иммунологической специфичности на гистологических срезах, что существенно повышает диагностические возможности врача. Таким образом, представляется актуальным изучение продукции провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при лимфопролиферативном синдроме инфекционного генеза у детей для разработки патогенетически обоснованного лечения.
Цель исследования. Оценка местной продукции провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа) в ткани глоточной миндалины при вирусной и бактериальной этиологии лимфоидной пролиферации у детей.
Пациенты, материалы и методы
Материалом исследования служили криостатные срезы глоточной миндалины, полученные при проведении оперативного лечения 42 детей (1-2 биоптата глоточной миндалины от каждого ребенка). В работе использовался операционный материал, полученный в ходе операции аденотомии (32 случая) и аденотонзиллотомии (10 случаев).
Общая характеристика обследованных детей
Отбор больных осуществлялся из числа поступивших в СПб НИИ ЛОР на консультацию и обследование для решения вопроса о необходимости проведения хирургической санации в области лимфоглоточного кольца (аденотомии, тонзиллотомии, тонзиллэктомии). Больные обращались в институт после неэффективного лечения в амбулаторно-поликлинических учреждениях города традиционными методами.
Критерии включения 42 детей в исследование были следующими: возраст от 3 до 8 лет, длительность болезни более 1 года, наличие хронической ЛОР патологии.
Пациенты не имели тяжелой сопутствующей патологии, в течение последнего месяца не принимали антибактериальных, противовоспалительных и иммунокорригирующих препаратов. При клиническом обследовании у всех детей выявлен хронический лимфопролиферативный синдром продолжительностью свыше 3-6 месяцев, симптомы астено-вегетативного синдрома. У больных наблюдалась шейная лимфаденопатия с увеличением лимфатических узлов шейной группы, расположенных по заднему краю грудино-ключично-сосцевидной мышцы. При эндоскопии у детей обнаружены гипертрофия глоточной и небных миндалин 2-3 степени. Гипертрофия лимфоидной ткани носоглотки и глотки проявлялась заложенностью носа, резким нарушением функции носового дыхания, появлением храпа во время сна. У 60% детей выявлено нарушение эквипрессорной функции слуховой трубы на основании характерных жалоб на периодическое или постоянное понижение слуха, отоскопической картины и результатов импедансобарометрии.
Отмечены признаки интоксикационного, инфекционно-воспалительного синдромов. В анамнезе у обследованных больных имелись указания на обострения хронического воспалительного процесса в области лимфоглоточного кольца 4 и более раз в год и повторные бактериальные инфекции (отит, гайморит и т. д.), но отсутствовали сведения о ранее перенесенном инфекционном мононуклеозе. У трети больных выявлены признаки кардиального и артралги-ческого синдромов.
Методы диагностики
В предоперационном периоде больным проводили стандартные лабораторные исследования крови и мочи. Клинико-морфологическое исследование крови позволило провести дифференциальную диагностику лимфаденопатий невоспалительного характера (неопластические процессы, заболевания системы крови и др.), исключить увеличение числа одноядерных элементов и появление атипичных одноядерных элементов.
Для выявления дискретных антигенов, являющихся маркерами тяжести воспалительных процессов и стрептококковой инфекции, использованы слайд-тесты для качественного и количественного экспресс определения содержания С-реактивного белка (СРБ), ревматоидного фактора (РФ), антистрептолизина-О (АСЛ-О) в сыворотке крови методом латексной иммуноагглютинации.
Верификация диагноза герпесвирусной инфекции осуществлялась молекулярно-генетическими методами путем определения ДНК ВЭБ в соскобах со слизистой ротоглотки и лимфоцитах крови, а также иммуноферментным методом (ИФА) с определением антител ^М и IgG к антигенам цитомегаловируса (ЦМВ) и к ядерному, вирусному капсидному и комплексу ранних антигенов ВЭБ. Диагностика герпетической инфекции проводилась на базе «Санкт-Петербургского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера». Результаты ИФА регистрировались с помощью спектрофотометра, при этом измерялась оптическая плотность в двухволновом режиме по соответствующим методикам. Для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) применяли соответствующие реактивы и оборудование.
Иммуногистохимическое исследование (ИГХИ) выполнено на базе ФГУП Гос. НИИ Особо чистых биопрепаратов ФМБА России, г. Санкт-Петербург. Из биоптата глоточной миндалины (операционный материал от 42 детей) готовили криостатные срезы. Определение продукции провоспа-лительных цитокинов ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-6 и ИЛ-8 в ткани глоточной миндалины проводилось методом непрямой иммуногистохимии с использованием системы экстравидин-биотин-щелочная фосфатаза [Ллойда 1982]. Изучение препаратов и получение микрофотографий проводили с использованием системы визуализации фирмы. Положительными считали клетки, в цитоплазме которых наблюдали продукт реакции красного цвета. Просматривали по три среза в каждой серии полностью. Подсчитывали частоту выявления продукции цитокинов - относительное количество препаратов в %, в которых определялась позитивная реакция. Проводили подсчет среднего количества позитивных клеток в поле зрения с определением интенсивности тканевой продукции цитоки-нов в баллах: 0 баллов - нет окрашенных клеток; 1 балл - низкая продукция (1-10 клеток); 2 - умеренная продукция (свыше 10 клеток), 3 - высокая продукция (свыше 15 клеток).
Гистохимическое выявление нейтрофилов проводили путем определения миелоперокси-дазной активности в клетках на криостатных срезах по стандартной методике с использованием диаминобензидина.
Результаты. Иммуногистохимическое исследование показало, что клетки, продуцирующие провоспалительные цитокины, определялись в фолликулярной и экстрафолликулярной зоне глоточной миндалины, их цитоплазма была окрашена в красный цвет (рис. 1).
Рис. 1. Внутриклеточная продукция цитокинов.
Цитоплазма клетки, продуцирующей ИЛ-8, окрашена в красный цвет.
В большинстве наблюдений цитокины выявлялись в крупных клетках макрофагальной природы, однако, в единичных случаях были обнаружены в нейтрофилах (рис. 2).
Позитивная реакция на ИЛ-6 и ИЛ-8 была выявлена у большинства оперированных детей, при этом у разных больных интенсивность продукции была умеренной или высокой. Продукция ИЛ-1альфа и ИЛ-1бета обнаруживалась не у всех больных, при позитивном результате была отмечена интенсивность различной степени.
Иммуногистохимическое выявление провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при хроническом лимфопролиферативном синдроме у детей в зависимости от выявленного инфекционного агента
I 1 >---------------------" Ч
1 ‘
*
Рис. 2. Выявление нейтрофилов в ткани глоточной миндалины.
Был проведен сравнительный анализ продукции ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа тканью глоточной миндалины в зависимости от инфицированности детей бета-гемолитическим стрептококком, герпесвирусами (ВЭБ, ЦМВ), а также при отсутствии вышеуказанных инфекционных агентов.
В первую подгруппу вошли 16 детей, у которых верифицирована герпесвирусная (ВЭБ, ЦМВ) инфекция (стадия паст-инфекции и положительная ПЦР с обнаружением ДНК ВЭБ, ЦМВ в соскобах со слизистой оболочки ротоглотки). Вторую подгруппу составили 15 детей, у которых выявлена стрептококковая инфекция (повышение величины АСЛ-О > 200 МЕ/мл в сыворотке крови). Третью подгруппу составили 11 детей с гипертрофией глоточной миндалины 2-3 степени без маркеров герпесвирусной и стрептококковой инфекции.
Продукция провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины выявлена у абсолютного большинства детей, страдающих стрептококковой инфекцией, и детей с гипертрофией глоточной миндалины 2-3 степени без маркеров герпесвирусной и стрептококковой инфекции, практически с одинаковой частотой (91-100%). В ткани глоточной миндалины ВЭБ, ЦМВ-инфицированных детей местная продукция внутриклеточных провоспалительных ци-токинов встречалась значительно реже (у 25-75% детей) (табл. 1).
Интенсивность продукции провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины обследованных детей наиболее высокая при лимфопролиферативном синдроме стрептококковой этиологии, самая низкая - при герпесвирусной инфекции (табл. 1). Однако по сравнению с референтными границами метода иммуногистохимического исследования внутриклеточной продукции провоспалительных цитокинов даже у детей, страдающих стрептококковой инфекцией, несмотря на индивидуальные различия, среднее значение интенсивности продукции (в баллах) было умеренным (табл. 1), а у ВЭБ, ЦМВ-инфицированных детей - крайне низким. Гиперпродукция эндогенных провоспалительных цитокинов не наблюдались ни у одного ребенка,
Группа по инф.агенту
Рис. 3. Интенсивность продукции ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа в ткани глоточной миндалины при различных инфекционных агентах.
На рисунке 3 представлен профиль продукции провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины оперированных детей по группам, сформированным в зависимости от выявленного инфекционного агента (стрептококковая инфекция, герпесвирусная инфекция, отсутствие маркеров стрептококковой и герпетической инфекции).
Таблица 1
Продукция провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при хроническом лимфопролиферативном синдроме у детей
Цитокин Хронический лимфопролиферативный синдром
Г ерпесвирусная (ВЭБ, ЦМВ) инфекция Стрептококковая инфекция Неясная этиология
Число наблюдений п=16 п=15 п=11
ИЛ- 1альфа Наличие продукции (% от числа наблюдений) 50% 94% 100%
Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,25±0,23 1,4±0,4 1,00
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни * * р<0,05
тх 0,111803 0,190238
Мин. значение 0,000000 0,000000 1,000000
Макс. значение 1,000000 3,000000 1,000000
ИЛ-8 Наличие продукции (% от числа наблюдений) 75% 100% 100%
Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,93±0,36 1,73±0,32 1,00
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни р<0,05
тх 0,170018 0,153271
Мин. значение 0,000000 1,000000 1,000000
Макс. значение 2,000000 3,000000 1,000000
ИЛ-1бета Наличие продукции (% от числа наблюдений) 25% 94% 91%
Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,25±0,23 1,40±0,35 0,90±0,2
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни * * р<0,05
тх 0,111803 0,163299 0,090909
Мин. значение 0,00 0,00 0,00
Макс. значение 1,000000 2,000000 1,000000
ИЛ-6 Наличие продукции (% от числа наблюдений) 50% 100% 100%
Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,50±0,27 1,53±0,28 1,00
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни р<0,05
Критерий Манна-Уитни * * р<0,05
тх 0,129099 0,133333
Мин. значение 0,000000 1,000000 1,000000
Макс. значение 1,000000 2,000000 1,000000
Таблица 2
Продукция провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при повышении титра АСЛ-О в сыворотке крови у детей
Цитокин Уровень АСЛ-0
<200 МЕ/мл 200-300 МЕ/мл 400-600 МЕ/мл
Число наблюдений п=27 п=11 п=4
ИЛ-1альфа Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,55±0,19 1,33±0,38 2,00± 1,29
Критерий Манна-Уитни р<0,05
тх 0,093984 0,166667 0,408248
Мин. значение 0,000000 1,000000 1,000000
Макс. значение 1,000000 2,000000 3,000000
ИЛ-8 Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 1,03±0,21 1,44±0,41 2,250±0,79
Критерий Манна-Уитни * * р<0,05
тх 0,105077 0,175682 0,250000
Мин. значение 0,000000 1,000000 2,000000
Макс. значение 2,000000 2,000000 3,000000
ИЛ-1бета Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,55±0,19 1,55±0,40 1,25±1,52
Критерий Манна-Уитни р<0,05
тх 0,093984 0,175682 0,478714
Мин. значение 0,000000 1,000000 0,000000
Макс. значение 1,000000 2,000000 2,000000
ИЛ-6 Интенсивность продукции (среднее значение в баллах) 0,75±0,19 1,55±0,40 1,50±0,91
Критерий Манна-Уитни р<0,05
тх 0,094884 0,175682 0,288675
Мин. значение 0,000000 0,000000 0,000000
Макс. значение 2,000000 2,000000 2,000000
У детей, страдающих ВЭБ, ЦМВ-инфекцией, статистически достоверно (тест Манна-Уитни, р<0,05 во всех случаях) отмечено снижение интенсивности продукции ИЛ-1бета, ИЛ-1аль-фа, ИЛ-8 и ИЛ-6 в ткани глоточной миндалины по сравнению с больными стрептококковой инфекцией. Аналогичная закономерность, за исключением ИЛ-8, наблюдалась у герпесинфи-цированных детей и по сравнению с детьми, страдающими лимфопролиферативным синдромом неясной этиологии. У стрептококк-инфицированных детей продукция провоспалитель-ных цитокинов ИЛ-1бета, ИЛ-8 и ИЛ-6 в ткани глоточной миндалины достоверно превышает таковую у детей с гипертрофией глоточной миндалины без маркеров герпесвирусной и стрептококковой инфекции.
Иммуногистохимическое выявление провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при лимфопролиферативном синдроме у детей в зависимости от степени повышения антистрептолизина-О
У детей, страдающих стрептококковой инфекцией, наблюдали разные концентрации АСЛ-О в сыворотке крови. Был проведен сравнительный анализ уровней тканевой продукции ци-
Российская оториноларингология №5 (42) 2009
токинов ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа тканью глоточной миндалины в зависимости от степени повышения АСЛ-О в сыворотке крови.
В первую подгруппу вошли 27 детей с нормальным содержанием АСЛ-О. Вторую подгруппу составили 11 детей с умеренным повышением титра АСЛ-О (от 200 до 300 МЕ/мл). Третью подгруппу составили 4 ребенка с высоким содержанием АСЛ-О (400-600 МЕ/мл).
Среди детей с повышенными титрами АСЛ-О продукция цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-8 определялась в 100% биоптатов глоточной миндалины, продукция ИЛ-1альфа и ИЛ-1бета отсутствовала только у одного ребенка с повышением титра АСЛ-О до 200 МЕ/мл. При нарастании титра АСЛ-О отмечено достоверное увеличение интенсивности локальной продукции провос-палительных цитокинов ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-6, ИЛ-8 в ткани глоточной миндалины (табл. 2) по сравнению с детьми, не инфицированными гемолитическим стрептококком (тест Манна-Уитни, р<0,05 во всех случаях).
По мере нарастания титра АСЛ-О отмечалась тенденция к увеличению интенсивности локальной продукции ИЛ-1альфа и ИЛ-8 (табл. 2), но статистически достоверные различия не обнаружены, по-видимому, в связи с малочисленностью этой группы (4 ребенка). Напротив, местная продукция ИЛ-1бета и ИЛ-6 в ткани глоточной миндалины у больных стрептококковой инфекцией не демонстрировала зависимости от степени повышения АСЛ-О в сыворотке крови. Повышение интенсивности локальной продукции ИЛ-1бета и ИЛ-6 у инфицированных стрептококком детей по сравнению с детьми с нормальным титром АСЛ-О обусловлено только наличием антигенного стимула - бета-гемолитического стрептококка, и не является дозозависимым (табл. 2).
На рисунке 4 приведены результаты сравнительной оценки содержания провоспалитель-ных цитокинов в ткани глоточной миндалины у детей разных групп в зависимости от концентрации АСЛ-О в сыворотке крови.
Mean Plot (Дроздова _MnTOKHHbi_95.sta 49v*42c)
Mean; Whisker: Mean-,95 Conf. Interval, Mean+,95 Conf. Interval
Группа в зависимости от повышения АСЛ-0
Рис. 4. Интенсивность продукции ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета в ткани глоточной миндалины при различной степени повышения титра АСЛ-0.
Таким образом, повышение концентрации АСЛ-О в сыворотке крови детей, страдающих хроническим лимфопролиферативным синдромом, сопровождается достоверным повышением уровней продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-8, ИЛ-6 в ткани глоточной миндалины.
Обсуждение
Иммуногистохимическим методом выявлены продуцирующие ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1бета, ИЛ-1альфа клетки в фолликулярной и экстрафолликулярной зоне глоточной миндалины. Основным источником цитокинов в ткани глоточной миндалины являлись макрофаги, в отдельных случаях - нейтрофилы, что согласуется с данными литературы [9]. Подтверждение полу-
ченных нами результатов мы нашли также в работах Ю. А. Джамалудинова и М. З. Саидова, которые проводили оценку клинической информативности иммуногистохимических показателей аденоидных вегетаций при изучении иммунной системы часто и длительно болеющих детей [2, 3, 5]. Авторами показано, что воспалительный инфильтрат при аденоидитах у часто болеющих детей характеризуется интенсивным присутствием в нем иммунокомпетентных клеток СД3+, СД4+, СД8+,СД20+, а также резидентных клеток макрофагально-моноцитарного ряда - СД68+, СД35+, участвующих в развитии экссудативно-пролиферативного воспаления. Ряд публикаций свидетельствует, что хроническое воспаление, ассоциированное с гиперплазией лимфоидной ткани, сопровождается достоверными связями между количеством имму-ноглобулинпродуцирующих клеток и степенью гипертрофии аденоидных вегетаций, длительностью заболевания, наличием эозинофилов в ткани [12, 14, 16]. Однако в научной литературе имеются единичные сведения об изучении показателей цитокинового статуса ткани глоточной миндалины иммуногистохимическим методом у детей при инфекционном мононуклеозе [11].
Одним из важнейших в семействе цитокинов с современных позиций признается интерлейкин-1. ИЛ-1 является медиатором осуществления защитных реакций и восстановления нарушенного гомеостаза, способен повышать иммунологическую реактивность при вторичных иммунодефицитных состояниях [9]. Согласно данным литературы секреция ИЛ-1бета очевидно зависит от локализации миндалин, стимулирующих факторов и клеточной популяции [13]. ИЛ-1 одним из первых цитокинов продуцируется различными клетками при внедрении патогенов, однако, несмотря на синтез эндогенного ИЛ-1, в ряде случаев этого оказывается недостаточно для эффективной борьбы с инфекцией. Более того, отдельные вирусы прямо вмешиваются в процесс секреции биологически активного ИЛ-1, снижая его выход из клеток [15].
Полученные данные о тканевой продукции провоспалительных цитокинов свидетельствуют о несостоятельности иммунной системы детей, страдающих хроническим лимфопролиферативным синдромом, что, вероятно, приводит к недостаточно эффективной борьбе с патогеном и к хронизации процесса. При хроническом воспалении глоточной миндалины наблюдаются достоверные различия интенсивности местной внутриклеточной продукции провоспалитель-ных цитокинов в зависимости от выявленных инфекционных агентов.
Продукция ИЛ-1альфа и ИЛ-1бета обнаруживалась не у всех больных, при позитивном результате была отмечена интенсивность различной степени, преимущественно низкая. Герпесвирусная инфекция (ВЭБ, ЦМВ), выступающая инфекционным агентом хронического лимфопролиферативного синдрома, сопровождается резким угнетением внутриклеточной продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-8, ИЛ-6, как по частоте выявления, так и по средним значениям интенсивности в ткани глоточной миндалины, что свидетельствует о пролонгированной иммуносупрессии и может способствовать хронизации инфекции и клинически наблюдаемой лимфоидной пролиферации.
Самая высокая интенсивность продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-8, ИЛ-6 среди обследованных детей, страдающих хроническим лимфопролиферативным синдромом, наблюдалась при стрептококковой инфекции, однако и у них интенсивность продукции была низкой или умеренной. Провоспалительные цитокины являются индукторами воспалительной реакции. ИЛ-1 способствует запуску иммунного ответа, местные воспалительные реакции сопровождаются индукцией синтеза эндогенного цитокина [9, 13]. ИЛ-6 активирует В-клетки, способствует дифференцировке Т-клеток в цитотоксические. ИЛ-8 - хемоаттаксический фактор, стимулирует трансэндотелиальную миграцию нейтрофи-лов и активирует их к выбросу ферментов лизосом. Полученные данные согласуются с данными литературы об угнетении системы фагоцитоза при стрептококковой инфекции небных миндалин [7]. Повышение локальной продукции ИЛ-8 при параллельном нарастании титра АСЛ-О в сыворотке крови детей с гипертрофией глоточной миндалины подтверждает мнение ряда исследователей о наличии системного ответа на местный воспалительный процесс в миндалинах лимфоидного глоточного кольца.
Заключение
Таким образом, проведенное иммуногистохимическое исследование продукции провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при лимфоидной гиперплазии у детей обнаружило несостоятельность иммунной системы, проявляющуюся разной степенью угнетения внутриклеточной продукции ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета, ИЛ-8, ИЛ-6.
Патофизиологические механизмы хронического воспаления глоточной миндалины в большой мере зависят от этиологического фактора. Герпесвирусная инфекция (вирус Эпштейна-Барра и цитомегаловирус) вызывает наиболее глубокую иммуносупрессию (наиболее резко снижены ИЛ-1альфа, ИЛ-1бета). Стрептококковая инфекция характеризуется наиболее высокими показателями продукции провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины среди обследованных детей с лимфопролиферативным синдромом инфекционного генеза, тем не менее, не превышающими умеренной границы референтного диапазона метода, что может способствовать возникновению дефектов фагоцитоза (незавершенный фагоцитоз).
В целом, подавление продукции регуляторных цитокинов способствует вялому течению заболевания с последующей хронизацией процесса.
Алгоритм диагностики хронического лимфопролиферативного синдрома у детей должен включать серологические и молекулярно-генетические маркеры инфицирования вирусом Эпштейна-Барра, цитомегаловирусом, бета-гемолитическим стрептококком.
Верификация герпесвирусной и стрептококковой инфекции при лимфопролиферативном синдроме у детей требует проведения этиотропного лечения. При развитии вторичного иммунодефицита (фаза «иммунного паралича») целесообразным является проведение адекватной иммунокоррекции для стимуляции защитных реакций организма, сниженных в результате инфекционных заболеваний, и элиминацию патогена.
ЛИТЕРАТУРА
1. Быкова В. П. Отчет о работе Международного симпозиума по проблеме «Миндалины и аденоиды» //Вестн. оторинолар. - 2001. - № 1. - С. 62-63.
2. Богомильский М. Р., Пчелёнок С. В. Шейные лимфаденопатии у детей // Вестн. оторинолар. - 2004. - №6. -С. 49-55.
3. Борзов Е. В. Распространенность патологии ЛОР органов у детей // Новости оторинолар. и логопатол. -2002. - № 1(29). - С. 3 - 8.
4. Взаимосвязь между течением неспецифических воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей и частотой обнаружения стрептококковых и герпетических инфекций / Накатис Я. А. [и др.] // Рос. ринология.
- 2005. - № 2. - С. 151-152.
5. Изучение взаимосвязей между иммуногистохимическими показателями аденоидных вегетаций у часто болеющих детей и клиническим состоянием / Джамалудинов Ю. А. [и др.] // Вестн. оторинолар. -2006. - № 1.
- С. 22 - 25.
6. Клиническая интерпретация показателей системного и местного клеточного иммунитета у часто болеющих детей с патологией ЛОР органов / Джамалудинов Ю. А. [и др.] // Рос. оторинолар. - 2007. - № 4. - С. 19 - 26.
7. Мальцева Г. С. Роль бета-гемолитического стрептококка группы А в тонзиллярной патологии // Там же. -№ 3 (28). - С. 131-139.
8. Савенко И. В., Комарова Е. А. Роль Эпштейн - Барр вирусной инфекции в формировании патологии ЛОР органов в детском возрасте // Там же. - № 6 (31). - С. 138 - 144.
9. Симбирцев А. С. Биология семейства интерлейкина-1 человека // Иммунология. - 1998. - № 3. - С. 9-17.
10. Aggarwal B., Pocsik E. Cytokines: from clone to clinic // Arch. Biochem. Biophys. - 2000. - Vol. 292. - P 335-345.
11. . Cohen J. I. Epstein-Barr virus infection // N. Engl. J. Med. - 2000. - Vol. 343. - P 481-492.
12. Cytokines locally produced by lymphocytes removed from the hypertrophic nasopharyngeal and palatine tonsils / Komorowska A. [et al] // Int. J. of Ped. Otorhinolar. - 2005. - Vol. 69, Issue 7. - P 937-941.
13. . Cytokines produced in lymph follicles / Tsunoda R. [et al] // Immunology Letters. Special Issue: Theoretical Immunology. - 1989. - Vol. 22, Issue 2. - P 129-134.
14. 14. Immune responses of palatine tonsil against bacterial antigens / Tanaka N. [et al] // International Congress Series. Current Topics on Tonsils and Mucosal Barriers of Upper Airways. Proceedings of the 5th Int. Symposium on Tonsils and Mucosal Barriers of Upper Airways. - 2003. - Vol. 1257. - P 141-144.
15. Suppression of inflammatory responses to viral infection: viral inhibition of IL-1b convertase / Pickup D. J. [et al] / / J. Cell. Biochem. - 1992. - Vol. 166. - P 285.
16. Toll-like receptor expression in the human nasopharyngeal tonsil (adenoid) and palantine tonsils: A preliminary report / Lesmeistera M. J. [et al] // Int. J. of Pediatric Otorhinolar. - 2006. - Vol. 70, Issue 6. - P. 987-992.
