CC BY
43
Сер. 3 2007 Вып. 4
ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
ГИСТОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ
УМ 612.017.11+593.9
И. В. Кудрявцев, И. С. Дьячков, Д. А. Могиленко, А. Н. Сухачев, А. Д. Харазова, А. В. Полевщиков
ПРОДУКЦИЯ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ЦЕЛОМОЦИТАМИ ИГЛОКОЖИХ: ВЛИЯНИЕ ЛЕКТИНОВ И ЦИТОКИНОВ*
Введение. Реакции врожденного иммунитета всех животных основаны на наличии циркулирующих фагоцитов, способных к продукции токсичных для микроорганизмов метаболитов кислорода и азота. Если механизмы контроля и регуляции клеточных реакций врожденного иммунитета позвоночных уже относительно изучены и определены, то о наличии подобных механизмов у беспозвоночных данные литературы крайне скудны. Литературные данные свидетельствуют о наличии у беспозвоночных некоторых механизмов регуляции защитных реакций, так как внедрение патогена вызывает экспрессию только тех генов, продукты которых обеспечивают наиболее эффективную элиминацию этого вида патогена [15]. Здесь имеет место либо синтез de novo медиаторных молекул, модулирующих активность циркулирующих клеток [9], либо регуляторные свойства приобретают продукты ограниченного протеоли-за циркулирующих гуморальных факторов [18]. На роль регуляторов этих процессов у беспозвоночных могут претендовать цитокиноподобные молекулы [3].
Иглокожие представляют уникальную группу вторичноротых животных, обладающих по современным представлениям разнообразными факторами врожденного иммунитета и лишь зачатками механизмов приобретенного иммунитета. Кооперация клеточных и гуморальных факторов врожденного иммунитета иглокожих обеспечивает быструю и эффективную элиминацию патогена из внутренней среды организма, основанную на циркулирующих целомоцитах и растворенных в целомической жидкости белковых молекулах. Результаты исследований свидетельствуют о ведущей роли клеточных механизмов в системе защитных реакций иглокожих и вспомогательной роли гуморальных факторов [1, 10]. На участие целомоцигов в защитных реакциях, равно как и на их высокую лабильность, указывает то, что через несколько минут после инъекции бактериального ЛПС в клетках увеличивается синтез акгин-связьгвающего белка про филина, играющего важную роль в реорганизации цитоскелета при активации [20]. Столь же сильное влияние на внутриклеточные процессы оказывают и цитокиноподобные молекулы. У морской звезды Asterias forbesi обнаружен белок, обладающий IL-1-подобной активностью [5], внесение поликлональных антител к IL-1 человека блокировало проявление биологических свойств данной молекулы. При помощи методов проточной цитометрии на клетках аксиального органа A. rubens выявлены
* Работа поддержана РФФИ (грант № 07-04-00084 и 07-04-00095).
© И. В. Кудрявцев, И. С. Дьячков, Д. А. Могиленко, А. Н. Сухачев, А. Д. Харазова, А. В. Полевщиков, 2007
поверхностные молекулы, обладающие антигенным перекрестом с рецепторами для IL-1, IL-2, IL-6 и IFNy [14]. Однако при секвенировании генома другого представителя иглокожих— морского ежа Strongylocentrotus purpuratus—удалось обнаружить только гены, гомологичные рецепторам для цитокидав семейства IL-1 [19]. Поэтому вопрос о наличии медиаторных молекул у иглокожих, их роли в процессах межклеточной кооперации и влиянии на функциональную активность целомоцитов сохраняет свою актуальность.
Целомоциты иглокожих являются полифункциональными клетками, принимающими участие в инкапсуляции патогенов, тромбообразовании и репарационных процессах. В ходе фагоцитоза они способны к продукции активных форм кислорода, синтезу оксида азота N0 и продукции широкого спектра гуморальных защитных факторов [1, 8]. Хотя способность к продукции 02~, Н202 и пероксинигриганиона (0N00") показана для циркулирующих клеток морских звезд, до настоящего времени механизмы регуляции, равно как и уровень продукции активных форм кислорода в ответ на различные агенты, остается не изученным, что и составило цель данного исследования.
Материалы и методы исследования. Сбор экспериментальных животных (морская звезда Asterias rubens, тип Echinodcrrnata) производили в июне-сентябре 2004 г. и в июне-августе 2005 г. на базе Беломорской биологической станции им. акад. О. А. Скарлато ЗИН РАН. Отбирали неповрежденных животных с длиной луча не более 6 см. Для предотвращения коагуляции к образцам целомической жидкости (ЦЖ) добавляли раствор ЭДТА (финальная концентрация ЗОмМ), клеточный осадок получали путем центрифугирования при 100g в течение 5 мин, отмывая охлажденным раствором Дальбекко без Са2+ и Mg2+. Полученные клетки переводили в охлажденную до 4 °С полную культуральную среду (ПКС) на основе RPMI-1640 с добавлением NaCl до 24 %о, 10 %-ной стерильной пулированной ЦЖ A. rubens, 10 мМ HEPES, 2 мМ L-гтотамина и 80 мкг/мл гентамицина. Подсчет числа клеток проводили в гемощггометре Горяева.
При оценке кислородного метаболизма целомоцитов базовой методикой служил автоматизированный НСТ-тест в спонтанной и индуцированной модификациях. Для определения спонтанного показателя к 100 мкл клеточной суспензии (3 • 106 клеток/мл) в лунки добавляли по 50 мкл фильтрованной морской воды (ФМВ), а для определения индуцированного показателя НСТ-теста—равный объем стимуляторов, в качестве которых использовали 0,4 или 0,2 %-ные суспензии зимозана в ФМВ, ОД или 0,05 %-ные суспензии St. aureus на ФМВ или раствор ЛПС S. typhimurium в концентрациях 25, 50 и 100 мкг/мл на ФМВ. Каждую пробу ставили в не менее чем в двух параллелях. Далее во все лунки добавляли по 50 мкл 0,2 %-ного раствора пара-НСТ. После внесения всех реагентов планшеты инкубировали в течение 12 ч при 10 °С в атмосфере 3 % С02. По завершении инкубации надосадок удаляли, лунки промывали избытком фильтрованной морской воды, образцы фиксировали этанолом. Полного растворения гранул диформазана НСТ достигали внесением 120 мкц 2М КОН и 140 мкл ДМСО. Спектроскопию проводили при X = 620 нм. Результат выражали в единицах ОП на 3 • 105 целомоцитов.
Для оценки влияния рекомбинантных IL-la, IL-ip, IL-8 и IFNy человека (ООО «Цито-кин», Россия) в культуры клеток дополнительно вносили по 20 мкл раствора цитокинов в полной культуральной среде, устанавливая финальную концентрацию в лунке 25, 50 и 100 пг/мл. Контролем служило внесение равною объема полной культуральной среды. Спонтанную продукцию активных форм кислорода оценивали, внося в культуры 50 мкл ФМВ, а в индуцированную—равный объем 0,2 %-ной суспензии зимозана.
Было изучено влияние лекгинов различной углеводной специфичности на продукцию активных форм кислорода целомоцитами морских звезд. Для этого использовали следующие лек-тины: арахиса (PNA, специфичный к pDGal), завязей пшеницы (WGA, специфичный к NAcotDGlc), улитки (НРА, специфичный к NAcaDGal), сои (SBA, специфичный к NAcDGal), бузины черной (SNA специфичный к aNAcNANA(2—>6)Gal/NAcGal), бобовника (LAL, специфичный к aLFuc), гороха (PSA специфичный к aDMan), конканавалин А (СопА специфичный к ocDMan) и фито-гемагппотинин (РНА, специфичный к NAcaDGal). В культуры клеток добавляли по 20 мкл раствора каждого лектина на ПКС в концентрации 250 мкг/мл. Контролем служило внесение 20 мкл
ПКС. Спонтанную продукцию активных форм кислорода оценивали, внося в культуры 50 мкл ФМВ, а в индуцированную — равный объем 0,2 %-ной суспензии зимозана.
Результаты экспериментов выражали как среднее ¿ошибка среднего. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью пакетов программ Excel, STATISTI-СА 5.0. Для статистической обработки и определения различий между независимыми группами нормально распределенных данных использовали /-критерий и Z-критерий.
Результаты исследований и их обсуждение. Литературные данные и собственные исследования свидетельствуют о быстрой активации клеточного звена врожденного иммунитета иглокожих, что выражается в резком увеличении численности циркулирующих целомоцитов [1] и в изменении уровня экспрессии генов, кодирующих различные защитные факторы (белки острой фазы, антимикробные пептиды и т.д.) [3, 10]. Однако механизмы распознавания патогенов, равно как и их спектр, остаются мало изученными. В результате исследований in vitro максимальные значения синтеза 02~ наблюдаются при внесении в культуру клеток 0,4 %-ной суспензии зимозана, когда данный показатель превышает показатели спонтанного НСТ-теста на 148 % (рис. 1). В то же время внесение 0,2 %-ной суспензии зимозана приводило к увеличению продукции супероксиданиона лишь на 57 %. При использовании ОД % суспензии S. aureus для стимуляции целомоцитов имел место прирост синтеза активных форм кислорода на 33 %. Более низкие концентрации данного стимулятора не сопровождались изменением активности клеток. Бактериальный ЛПС в высоких и низких концентрациях (100 и 25 мкг/мл) повышал продукцию 02~ примерно на 20 %. При этом ответ на корпускулярные антигены (зимозан и S. aureus) носит более выраженный характер, чем ответ на растворимый ЛПС (см. рис. 1). Увеличение синтеза 02~ при ответе на ЛПС имело место лишь в случае высокой (свыше 100 мкг/мл) концентрации бактериального эндотоксина [8], при этом низкие концентрации стимулятора в экспериментах не использовались. Усиление продукции активных форм кислорода имело место и в случае стимуляции целомоцитов морского ежа эритроцитами человека в условиях in vitro [12]. При этом наблюдался почти трехкратный прирост синтеза Н202 по сравнению с контролем.
Внесение в культуры клеток лектинов также приводило к изменению активности целомоцитов. Культивирование клеток с лектином арахиса сопровождалось увеличением спонтанной продукции активных форм кислорода на 56,4 %, а на фоне стимуляции зимозаном — на 52,1 % по сравнению с соответствующим контролем (табл. 1). Для лектина завязей пшеницы эти величины составили 42,8 и 40,5 % соответственно. Примерно такие же повышения синтеза О, были зарегистрированы при добавлении
1 2 3 4 5 6 7 8
Рис. 1. Оценка продукции активных форм кислорода целомоцитами A.rubens in vitro. По оси ординат: продукция 02, ед. ОП/З-Ю5 клеток; по оси абсцисс: 1—спонтанный НСТ-тест, 2 и 3—0,4 и ОД %-ная суспензия зимозана соответственно, 4 и 5—0,05 и 0,1 %-ная суспензия St aureus соответственно, 6-8 — ЛПС в финальной концентрации 25 мг/мл, 50 и 100 мг/мл соответственно; я>12.
Здесь и далее: *, **, ***—различия с контрольной точкой достоверны при р<0,05, р<0,01 и ¿><0,001 соответственно по критерию t, Z—различия с исходной точкой достоверны по критерию Z при р< 0,05.
Таблица 1
Влияние лектинов различной углеводной специфичности на продукцию активных форм кислорода целомоцитами морской звезды А.гиЬет, Х±$, п>15, ед.ОП (>¿=620 нм)/3-105 клеток
Лектин Углеводная Продукция
специфичность спонтанная стимулированная
Лектин арахиса, PNA ßDGal 0,749±0,033*** 0,853±0,019***
Лектин завязей пшеницы, WGA NAcaDGIc 0,684 ±0,024*** 0,788±0,018***
Кон А, СопА aDMan 0,675 ±0,026*** 0,824 ±0,018***
Лекган виноградной улитки, НРА NAcaDGal 0,621 ±0,019** 0,804 ±0,024***
ФГА, РНА NAcaDGal 0,529 ±0,022 0,702 ±0,029**
Лектин сои, SBA NAcDGal aNAcNANA 0,514±0,018 0,692 ±0,038**
Лектин бузины черной, SNA (2—>6)Gal/ NAcGal 0,523 ±0,029 0,695 ±0,024**
Лекшн бобовника, LAL aLFuc 0,507±0,013 0,661 ±0,031*
Лектин лимской фасоли, LBA NAcDGal 0,565 ±0,034* 0,644 ±0,025*
Лектин гороха, PSA aDMan 0,430 ±0,026 0,563 ±0,035
Контроль (полная культуральная среда) 0,479 ±0,015 0,561 ±0,019
в культуры конканавалина А (КонА): в случае спонтанного НСТ-теста—40,9 %, стимулированного — 46,8 %. Несколько меньшие значения были получены для лектина виноградной улитки (29,6 и 43,3 % соответственно). Внесение фитогемагтлютинина (ФГА), лектинов сои и бобовника приводило к приросту спонтанной продукции активных форм кислорода на 5-10%, а на фоне внесения зимозана— 17-25 %. Использование лектина гороха мало влияло на активность целомоцитов. На ранних сроках наблюдения (менее 2 ч) интенсивность продукции активных форм кислорода при стимуляции пектинами уступает таковой в случае стимуляции клеток бактериями или их токсинами [8]. По данным литературы внесение КонА в финальной концентрации от 50 до 200 мкг/мл приводило к обратной зависимости между концентрацией лектина и уровнем продукции 0~. В ходе нашей работы все тестируемые лектины (в том числе и КонА) вносились в финальной концентрации 25 мкг/мл. Снижение концентрации стимулятора и увеличение срока инкубации до 12 ч приводили к достоверному приросту синтеза 02 целомоцитами в ответ на внесение как КонА, так и других лектинов (см. табл.1). Полученные результаты свидетельствует о наличии распознаваемых лектинами углеводных детерминант на поверхности циркулирующих клеток морской звезды, что может быть использовано для типирования клеточных популяций. Использование тех же лектинов в опытах с моллюсками (Mytilus edulis, Cerastoderma edule и Ensis siliqua) показало, что PHA не связывается с гемоцитами ни одного из исследованных видов [23]. КонА взаимодействовал с циркулирующими клетками всех видов моллюсков, менее выраженным было взаимодействие с WGA и НРА. Кроме того, КонА наравне с ФГА стимулирует пролиферацию гемоцитов различных видов беспозвоночных в условиях in vitro, что позволяет, по мнению некоторых авторов, рассматривать данный лек-тин в качестве универсального митогена позвоночных и беспозвоночных [3, 5, 17].
С целью поиска медиаторных молекул, способных к изменению функциональной активности циркулирующих клеток, была предпринята серия экспериментов in vitro, в которой оценивали влияние рекомбинантных цитокинов человека на продукции О. целомоцитами морских звезд. До настоящего времени у беспозвоночных гомологи цитокинов млекопитающих не обнаружены, а отправной точкой в становлении регуляторных молекул,
характерных для иммунной системы позвоночных, являются хрящевые рыбы, у которых по молекулярно-биологическим данным впервые появляются гомологи 1Ь-1(3 млекопитающих [6] и СХС хемокины [11]. Наличие последовательностей, гомологичных рецепторам некоторых семейств цигокинов и хемокинов, показано для иглокожих и асцидий [2, 19]. Так, результаты секвенирования генома морских ежей показали наличие генов, кодирующих рецепторы и лиганды, относящиеся к семействам Т№\ 1Ь-17,1Ь-111 и МБ [19]. Одна-ко считается, что прямые гомологи цигокинов млекопитающих у беспозвоночных отсутствуют. Вместе с тем в литературе находятся свидетельства влияния рекомбинантных цигокинов человека на функциональную активность циркулирующих клеткок моллюсков [16] и низших хордовых [17]. Особое внимание в подобных исследованиях уделяется белкам семейства 1Ь-1, которые традиционно рассматриваются в качестве очень древних регуля-торных молекул всех вторичноротых животных. В ходе исследований было показано, что при внесении рекомбинантного 1Ь-1а в культуры целомоцитов наблюдается увеличение как спонтанной, так и зимозан-индуцированной продукции активных форм кислорода (рис. 2, А), что согласуется с данными литературы о наличии у иглокожих рецепторов для белков семейства 1Ь-1 [19]. 1Ь-1ос в концентрации 100 пг/мл приводил к приросту синтеза 02~ на 48 % в случае спонтанного НСТ-теста и на 28,5 %—в случае стимуляции зимозаном. Сходные результаты были получены при внесении в культуры клеток 1Ь-1а в концентрации 25пг/мл, тогда как использование 1Ь-1(3 не приводило к изменению активности целомоцитов в условиях культуры (рис. 2, Б). Помимо усиления синтеза 02~, 1Ь-1-подобные молекулы активируют целомоцигы, усиливая фагоцитоз и продукцию оксида азота N0 [4].
Рис. 2. Влияние рекомбинантных 1Ь-1а (а) и 1Ь-1р (б) человека на продукцию активных форм
кислорода целомоцитами А гибеш1 По оси абсцисс: 1—контроль (ПКС), 2-4—внесение цитокина в концентрациях 25, 50 и 100 пг/лунку соответственно; по оси ординат: продукция 02~, ед. ОП/ 3-Ю5 клеток, п>12. Белые столбцы—результаты спонтанного НСТ-теста, заштрихованные столбцы—результаты зимозан-индуцированного НСТ-теста.
При использовании рекомбинантного 1Шу показано усиление синтеза 02~ (табл. 2), что согласуется с данными о наличии на циркулирующих клетках морских звезд структур, имеющих антигенный перекрест с рецепторами ИТ^у человека [14]. Под действием рекомбинантного 1Ь-8 отмечено падение синтеза 02" как в спонтанной, так и в зимозан-индуцированной модификациях НСТ-теста (см. табл. 2). Аналогичные результаты были получены при использовании рекомбинантного 1Ь-8 человека в экспериментах с фагоцитами асцидий, когда внесение цитокина приводило к снижению фагоцитарной активности клеток [13].
Таблица 2
Влияние рекомбинантных IL-8 и IFNy на продукцию активных форм кислорода целомоцитами морской звезды A. rubens in vitro, X±s, я>8, ед. ОП (а=620 нм)/3-105 клеток
Конц., пг/лунку Спонтанный НСТ-тест Зимозан-индуцированный НСТ-тест
IL-8 IFNy IL-8 IFNy
0 0,503 ±0,009 0,492 ±0,030 0,718±0,015 0,682 ±0,016
25 0,450 ±0,031 0,419 ±0,026z 0,530±0,017** 0,503 ±0,045**
50 0,520 ±0,012 0,583±0,019** 0,681 ±0,015 0,652 ±0,026
100 0,404 ±0,016** 0,392 ±0,015** 0,562±0,014** 0,489±0,032**
Наличие у иглокожих каскада комплемента, состоящего из СЗ компонента и фактора В и выполняющего функции распознавания и опсонизации патогена [21], позволило использовать рекомбинантные белки СЗа и С5а человека для исследования особенностей продукции активных форм кислорода. У млекопитающих СЗа и С5а обладают анафилатоксическими свойствами и способны стимулировать синтез 02" макрофагами [22]. У рыб собственный С5а усиливал как миграцию лейкоцитов, так и продукцию активных форм кислорода, в то время как рекомбинангный С5а человека действовал только как хемапракгант [7]. В ходе нашего исследования также не отмечено изменения продукции активных форм кислорода под действием СЗа и С5а человека.
Приведенные выше данные доказывают, что целомоциты иглокожих способны к распознаванию широкого спектра патогенных микроорганизмов и продукции суперок-сиданиона в ответ на них. Можно обратить внимание именно на установленный факт распознавания, когда продукция активных форм кислорода в ответ на корпускулярные частицы зимозана была значительно выше, чем на растворимые молекулы ЛПС. Также, помимо традиционных для сравнительной иммунологии модельных антигенов (зимозан или золотистый стафилококк), было исследовано влияние нескольких лектинов различной углеводной специфичности на продукцию активных форм кислорода целомоцитами. Все галактоза-специфичные лектины стимулировали кислородный метаболизм целомо-цитов A. rubens. На роль регуляторных факторов иглокожих могут, по-видимому, претендовать IL-1-подобные молекулы. Эти данные представляют особый интерес с точки зрения общности сигнальных путей, используемых для передачи сигнала от рецепторов IL-1 и То11-подобных белков, которых у иглокожих описано свыше двухсот. Не исключено, что дальнейшие исследования в этой области помогут обосновать точку зрения
об общих путях становления и эволюции распознающих и регуляторных молекул.
* * *
Авторы выражают искреннюю благодарность всем сотрудникам Беломорской Биологической стации им. акад. О. А. Скарлато «Картеш» ЗИН РАН (директор — профессор В. Я. Бергер) за создание оптимальных условий для работы.
Summary
KudryavtsevI. V, DyachkovI. S., Mogilenko D. A, SukhachevAN., KharazovaAD., PolevschikovA. V. Reactive oxygen species production by echinoderm coelomocytes: the influence of lectins and cytokines.
This article is devoted to the investigation of starfish Asterias rubens defense reactions. Reactive oxygen species was stimulated by galactose-specific lectins and recombinant human IL-1 a but not by recombinant human IL-ip.
E-mail: alexpol512@yandex.ru
Литература
1. Кудрявцев И. В., Дьячков И. С., Казаков А. А. Клеточные реакции врожденного иммунитета морской звезды Asterias rubensll Журн. эволюц. физиол. и биохим. 2005. Т. 41. № 2. С. 107-113. 2. AzumiК., De SantisR,, DeTomasoA. Genomic analysis of immunity in a Urochor-date and the emergence of the vertebrate immune system: «waiting for Godot» // Immunogenetics. 2003. Vol. 55. P. 570-581. 3. Beck G. Macrokines: invertebrate cytokine-like molecules?//Frontiers in Bioscience. 1998. Vol. 3. P. 559-569. 4. BeckG., Ellis Т., ZhangH. Nitric oxide production by coelomocytes of Asterias forbesi//Dev. Сотр. Immunol. 2001. Vol. 25. N1. P. 1-10. 5. BeckG., HabichtG. Isolation and characterization of a primitive IL-l-like protein from an invertebrate, Asterias forbesi //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. Vol. 83. N. 19. P. 7429-7433. 6. BirdS., Wang Т., ZouJ, The first cytokine sequence within cartilaginous fish: IL-1 beta in the small spotted catshark (Scyliorhinus canicula) II J. Immunol. 2002. Vol. 168. P. 3329-3340. 7. BoshraH., Peters R., Li J., SunyerJ.O. Production of recombinant С 5a from rainbow trout (Oncorhynchus my kiss): role in leucocyte chemotaxis and respiratory burst//Fish Shellfish Immunol. 2004. Vol. 17. P. 293-303.
8. CoteurG., WarnauM., Jangoux M. Reactive oxygen species (ROS) production by amoebocytes of Asterias rubens (Echinodermata)//Fish Shellfish Immunol. 2002. Vol. 12. N 3. P. 187-200.
9. Ferrandon D., ImlerJ.-L., Hoffmann L.A. Sensing infection in Drosophila: Toll and beyond // Sem. Immunol. 2004. Vol. 16. 43-53. 10. Gross PS., Al-SharifW. Z, Clow L.A. Echinoderm immunity and the evolution of the complement system//Dev. Сотр. Immunol. 1999. Vol. 23. P. 429-442. 11. HuisingM.O., StetR.J.M., KruiswijkC.P. Response to Shields: Molecular evolution of CXC chemokines and receptors//Trends in Immunol. 2003. Vol. 24. P. 356-357. 12. J to Т., Matsutani Т., Mori K. Phagocytosis and hydrogen peroxide production by phagocytes of the sea urchin Strongylo-centrotus nudus II Dev. Сотр. Immunol. 1992. Vol. 16. P. 287-294. 13. MeninA., BallarinL. Exogenous IL-8 induces phagocyte activation in the compound ascidian Botryllus schlosseri // IS J. 2006. Vol. 3. P. 18-24. 14. LegasE., VaugierG.L., Bousquet F. Primitive cytokines and cytokine receptors in invertebrates: the sea star Asterias rubens as a model of study//Scand. J, Immunol. 1996. Vol. 44. N 4. P. 375-380. 15. Little T. J., O'Connor В., Colegrave N. Maternal transfer of strain-specific immunity in an invertebrate//Curr. Biol. 2003. Vol. 13. P. 489-492. 16. Ottaviani E., FranchiniA., Cassanelli S. Cytokines and invertebrate immune responses//Biol. Cell. 1995. Vol. 85. P. 87-91. 17. RaftosD., CooperE., HabichtG. Invertebrate cytokines: tunicate cell proliferation stimulated by an IL-l-like molecule//PNAS. 1991. Vol. 88. P. 9518-9522. 18. Raftos D.A., RobbinsJ., Newton R. A. A complement component СЗа-like peptide stimulates chemotaxis by hemocytes from an invertebrate chordate—the tunicate, Pyura stolonifera II Сотр. Biochem. Physiol. Pt. A. 2003. Vol. 34. P. 377-386. 19. Sea Urchin Genome Sequencing Consortiu The Genome of the Sea Urchin Strongy-locentrotus purpuratus II Science. 2006. Vol. 314. P. 941-952 20. Smith L.C., Britten R. J., Davidson E.H. SpCoell, a sea urchin profilin gene expressed specifically in coelomocytes in response to injury // Mol. Bio. Cell. 1992. Vol. 3. P. 403-414. 21. Smith L.C., Clow L. A., TerwilligerD.P. The ancestral complement system in sea urchins//Immunol. Rev. 2001. Vol. 180. N 12. P. 16-34. 22. Wal-portM.J. Complement. First of Two Parts//N. Engl. J. Med, 2001. Vol. 344. P. 1058-1066. 23. Woot-tonE.C., Dyrynda E.A., Ratcliffe N.A. Bivalve immunity: comparisons between the marine mussel (Mytilus eduiis), the edible cockle (Cerastoderma edule) and the razor-shell (Ensis siliqua) I I Fish Shellfish Immunol. 2003. Vol. 15. P. 195-210.
Статья принята к печати 15 мая 2007 г.
