CC BY
31
2004 ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. Сер. 3. Вып. 4
ГИСТОЛОГИЯ .
УДК 612.0 п. 11+593.9 J
И. В. Кудрявцев, М. В. Злобина, А. В. Баскаков, Н. К. Галактионов, Д. П. Канайкин,
А. Б. Козлова, А. Д Харазова, А. В. Полевщиков .
АНАЛИЗ МЕХАНИЗМОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS'
• % *
Проблема становления механизмов приобретенного иммунитета неразрывным образом связана с ранними этапами эволюции вторичноротых. Эволюционные корни реакций приобретенного иммунитета, а следовательно, и причины их возникновения, и исходные ' функции остаются неясными до настоящего времени. Появление приобретенного иммунитета уникально с той точки зрения, что параллельно шел процесс развития гораздо более . древней и не менее эффективной системы врожденного иммунитета. Поэтому Echinoder-mata представляют важнейшую группу организмов, в пределах которой можно наблюдать как наличие сложных механизмов врожденного иммунитета, так и первые признаки зарождения реакций приобретенного иммунитета, план организации и иерархия которых будут едины для всех вторичноротых и максимально разовьются у позвоночных животных. . , Ранее был установлен ряд характеристик защитной системы иглокожих. В опытах с
ауто- и аллотрансплантатами участков покровов морских ежей была показана способность . их клеток различать свое и не-свое [16]. Вместе с тем не удалось показать наличие у данной группы ни иммунологической памяти [26], ни способности к специфическому распознаванию антигенов [12]. В рамках данной работы термины «иммунизация», «защитные реакции», «клеточный и гуморальный ответы» и другие, традиционно используемые для описания механизмов приобретенного иммунитета, употребляются в той степени, в которой они применимы к описанию реакций врожденного иммунитета, как это принято в современной сравнительной иммунологии. Обладая всеми основными защитными механизмами, свойственными большинству беспозвоночных животных, иглокожие проявляют некоторые защитные реакции, характерные для системы врожденного иммунитета высших позвоночных животных. Так, целомоциты морских звезд в ответ на стимуляцию способны продуцировать активные формы кислорода и оксид азота N0 [4]. В ответ на стимуляцию в этих клетках удалось показать экспрессию ряда регуляторных молекул, гомологичных таким транскриб-ционным факторам лимфоцитов млекопитающих, как NF-кВ, GATA и Runt [21]. Кроме того, комплемент-подобная активность была выявлена в целомической жидкости ряда представителей иглокожих, а у морских ежей были выделены гомологи фактора В и СЗ компонента комплемента млекопитающих [24]. Есть основания предполагать, что на целомоцитах морских ежей имеются рецепторы для продуктов ограниченного протеолиза СЗ - одного из самых эволюционно ранних и важнейших компонентов комплемента, играющего роль оп-сонина и вовлеченного во все пути активации этого каскада [5, 7]. Некоторые клетки акси-
* Работа выполнена при поддержке РФФИ (фант № 04-04-49069). . >
© И. В. Кудрявцев, М. В. Злобина, А. В. Баскаков, Н. К. Галактионов, Д. П. Канайкин, А. Б. Козлова, А. Д. Харазова, А. В. Полевщиков, 2004 . ...
ального органа морской звезды Asterias rubens способны к синтезу цитокиноподобных молекул и экспрессии рецепторов, схожих с рецепторами для интерлейкинов-1, -2, -6, а также для интерферона-у [20]. В аксиальном органе этой морской звезды также подозревают существование двух популяций лимфоцитоподобных клеток, обладающих рядом свойств Т- и В-лимфоцитов млекопитающих [18]. К тому же в ответ на стимуляцию клетки аксиального органа отвечали увеличением продукции антителоподобного фактора, гомологичного легкой к-цепи иммуноглобулинов [17]. t
Но, несмотря на обилие данных, посвященных строению и структуре молекул и клеток, вовлеченных в защитные реакции, информация о динамике этих факторов в процессе элиминации патогенов практически отсутствует.
Целью наших'экспериментов было изучение динамики клеточных и гуморальных составляющих защитных реакций морских звезд Asterias rubens в ответ на введение эритроцитов человека - традиционной модели в сравнительно-иммунологических исследованиях.
Материалы и методы. Объект исследования - Asterias rubens (тип Echinodermata: класс Asteroidea, отряд педицилляриевые морские звезды (Forcipulata)). Сбор животных производили в конце августа 2003 г. на базе Беломорской биологической станции им. акад. О. А. Скарлато Зоологического ин-та РАН. В работе использовали около 200 неповрежденных особей с длиной луча от 25 до 50 мм. Все животные до начала эксперимента были разделены на три равноценные по размерам животных группы. Животным опытной группы вводили путем инъекции 1 мл 1%-ной суспензии эритроцитов человека (ЭЧ) в конец луча. Контрольной группе вводили равный объем
0,14 М раствора NaCI (ФР) аналогичным способом. Еще одну группу составили интактные животные (нулевая точка), которым не производили введения ЭЧ или повреждения покровов. После иммунизации животные групп 1 и
2 были помещены в естественную среду обитания в садках, погруженных на глубину 1,5-2 м.
Забор целомической жидкости (ЦЖ) осуществляли у интактных животных (точка 0 ч) и у животных опытной и контрольной групп - через 1, 3,6,9, 12, 24,48, 72,96, 120 и 168 ч после иммунизации. Число наблюдений по каждой из точек - не менее 6. Для предотвращения коагуляции, образования тромбов и секреторной дегрануляции целомоцитов образцы ЦЖ немедленно после забора разбавляли в 2 раза 0,015 М раствором ЭДТА в 0,5 М растворе NaCI по методу из работы [10]. Для всех полученных образцов определяли объем полученной ЦЖ, отбирали аликвоту объемом 20 мкл для подсчета числа целомоцитов, а остаток мягко центрифугировали при 100 g в течение 10 мин. Клеточный осадок использовали для других тестов, методики которых изложены ниже, а надосадок - для реакций гемагглютинации и гемолиза.
. Для определения числа целомоцитов 20 мкл разбавленной ЦЖ ex tempere смешивали со 180 мкл фильтро-
ванной морской воды (ФМВ), на которой был приготовлен 0,1%-ный раствор кристалл-виолета, получая финальное разведение ЦЖ в 20 раз. Подсчет проводили в гемоцитометре Горяева при увеличении 200'. Каждую пробу гемолимфы просчитывали дважды и на основании среднего значения вычисляли количество клеток на 1 мл ЦЖ и общее число клеток. .
Для оценки кислородного метаболизма целомоцитов использовали тест восстановления нитро-синего тет-разолия (НСТ-тест). Полученный после центрифугирования образцов ЦЖ клеточный осадок ресуспендировали в 700 мкл ФМВ, и клеточную суспензию вносили по 100 мкл в лунки плоскодонных планшетов. Для определения спонтанного показателя НСТ-теста в лунки добавляли по 50 мкл ФМВ. а для определения индуцированного показателя НСТ-теста добавляли равный объем 0,05%-ной суспензии зимозана в ФМВ. Далее во все лунки добавляли по 50 мкл 0,2%-ного раствора пара-НСТ. Каждую пробу ставили в двух параллелях. После внесения всех реагентов планшеты инкубировали в течение 24 ч при температуре, соответствовавшей температуре морской воды. По завершении инкубации надосадок удаляли. Для фиксации образцов в каждую из лунок вносили по 50 мкл 96%-ного этанола и планшеты помещали в термостат (56°С) до полного высушивания. Образцы хранили при -20°С до проведения спектрофотометрического учета. • ч - •
Перед проведением этого учета из лунок удаляли избыток солей. После декантирования осадка и высушивания планшетов в лунки вносили по 120 мкл 2 М водного раствора КОН и 140 мкл ДМСО. Полного растворения гранул НСТ-диформазана достигали инкубацией планшета при 37°С в течение 3-4 ч на шейкере. Спектроскопию проводили на многоканальном спектрофотометре Spektra при длине волны к = 620 нм. Результат выражали в единицах ОП на 1 млн целомоцитов. • . .
Метаболическую активность циркулирующих целомоцитов определяли в МТТ-тесте, основанном на восстановлении 3(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолий бромида (МТТ). В лунки плоскодонного планшета вносили по 100 мкл суспензии целомоцитов, затем добавляли по 10 мкл 0,25%-ного раствора МТТ. Планшет инкубировали 24 ч при t * Ю°С, удаляли надосадок, помещали в термостат до полного высушивания. Затем в лунки вносили по 100 мкл лизирующего буфера, а планшеты помещали в термостат (37°С) на шейкер до полного растворения кристаллов красителя. Спектроскопию проводили при длине волны X = 570 нм. Результат выражали в единицах ОП на 1 млн целомоцитов. По литературным данным, существует высокая корреляция между результатами МТТ-теста и уровнем включения в клетки 3Н-тимидина (Т. Mossman, 1983).
Титры ГА оценивали в реакции гемагглютинации (РГА), а титр ГЛ - в реакции гемолиза ЭЧ по общепринятой методике. РГА и реакцию гемолиза осуществляли в круглодонных планшетах для иммунологических реакций, заполняя лунки 50 мкл ФР. Серийные двукратные разведения исследуемых образцов ЦЖ готовили, перенося из лунки в лунку по 50 мкл серийных разведений индивидуальных образцов ЦЖ. Рабочую 1%-ную суспензию ЭЧ добавляли в лунки по 25 мкл. Для РГА использовали те же ЭЧ, которыми ранее иммунизировали животных Для оценки уровней ГА планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 1,5 ч, а для оценки уровня ГЛ -
3 ч. Реакцию оценивали визуально. Результат обеих реакций выражали в виде титра, равного -log*, где х - последнее разведение ЦЖ, при котором наблюдали формирование типичного агглютината или выход гемоглобина из ЭЧ в раствор.
В работе применяли следующие статистические методы: вычисление средних, квадратичного отклонения, доверительных интервалов. Сравнение выборок производили с помощью /-критерия и Z-критерия Обработку данных вели на микрокалькуляторе МК-52 по программам, разработанным Ю. И. Ивановым и О. Н. Погорелюком ГП а также на ПК Celeron 366 по программе Excel.
Результаты исследований и их обсуждение. В ответ на введение ЭЧ были выявлены изменения в численности цело-моцитов относительно исходной точки. В опытной группе уже на сроке 1 ч было установлено достоверное снижение числа циркулирующих целомо-цитов по сравнению с исходной точкой (рис. 1). В дальнейшем, число целомоцитов в опытной группе волнообразно изменялось, достигая максимума на сроке 48 ч после иммунизации. Обращает на себя внимание тот факт, что повышению числа циркулирующих целомоцитов предшествовали . приросты удельных показателей МТТ-теста на сроках 6, 24 и 96 ч (рис. 2). В контрольной группе число целомоцитов на протяжении всего эксперимента достоверно не отличалось от исходной точки, за исключением срока 168 ч, когда снижение показателя, может быть связано с длительностью эксперимента.
Согласно результатам оценки спонтанного НСТ-теста, в опытной и контрольной группах наблюдается сходная динамика этого показателя (рис. 3, А). На сроках 12 и 48 ч отмечено падение спонтанной продукции активных форм кислорода цело-моцитами с последующим ее восстановлением до исходных
Рис. 1. Изменение числа целомоцитов в гемолимфе А. гиЪет в ответ на введение ЭЧ.
Здесь и далее: черные кружки - опытная группа; белые квадраты — контроль, число наблюдений по каждой.точке — не менее'6. * - различия с исходной точкой достоверны при р < 0,05 по критерию V, ** прир < 0,01; *** при р < 0,001. ’ >
ed
ь
и
н
■
Н
Н
2
«а
е;
и
Ё
3
«
о
С
6 9 12 24 48
Время опыта, час
96 120 168
Рис. 2. Результаты оценки метаболической активности целомоцитов A. rubens по данным МТТ-теста.
030 •1
0.25 -1 -1
0.20 -
0,\5 -
ж
и 0,10 -
£
5 0,05 -
о
о
ОС
5
2
>»
ч
о
о.
показателей. Обращает на себя внимание, что именно на этих сроках наблюдается при- . рост показателей МТТ-теста. Не исключено, что повышение спонтанной продукции активных форм кислорода на более поздних сроках может быть связано с появлением в циркуляции новых .целомоцитов, о чем косвенно свидетельствуют результаты, приведенные на рис. 2.
Особый интерес представляют результаты зимо-зан-индуцированной продукции активных форм кислорода целомоцитами А: гиЬет в опытной группе (рис. 3, Б). На фоне максимального снижения числа целомоцитов в циркуляции на сроке 1 ч именно в этой точке наблюдается максимальный прирост удельной продукции су-пероксиданиона. Иными словами, в ответ на введение ЭЧ це^омоциты А. гиЬет, обеспечивающие элиминацию патогена, либо выводятся из циркуляции, либо остаются в целомической жидкости в активированном состоянии. В контрольной группе повышение показателя НСТ-теста удается зарегистрировать лишь на сроке 6 ч. На сроке 48 ч в опытной группе при максимальной концентрации клеток наблюдается достоверное снижение удельной продукции активных форм кислорода, что свидетельствует об уменьшении пула НСТ-позитивных целомоцитов в циркуляции. В дальнейшем на сроке 96 ч при сниженном количестве целомоцитов наблюдается прирост продукции супероксианиона, что, вероятно, свидетельствует о появлении в циркуляции большего по сравнению с контрольной группой числа НСТ-позитивных целомоцитов. Данное обстоятельство косвенно свидетельствует о том, что клеточное звено врожденного иммунитета А. гиЬет имеет более тонкую регуляцию, чем принято считать. .
Из приведенных в таблице результатов следует, что в ответ на введение ЭЧ титр ГА резко снижается до неопределяемых уровней. По всей видимости, это связано с быстрым расходованием циркулирующих в целомической жидкости молекул агглютининов в ходе ответа на антиген и его элиминации. В ходе защитных реакцийГА могут играть роль опсо-нинов и участвовать в реакциях фагоцитоза и инкапсуляции, как это показано для голоту-
0,8 0,7 -0,6 0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 -0
• *
0 1 3
6 9 12. 24 48
Время опыта, час
—■1— 72
96 120 168
Рис. 3. Динамика спонтанной продукции активных форм кислорода (А) и зимозан-индуцированной продукции активных форм кислорода (£) целомоцитами морской звезды А. тЬею по данным НСТ-теста.
Ъ - различия с исходной точкой достоверны по критерию 2. при р < 0,05. Число наблюдений по каждой точке - йе менее 6.
рий НоШИипа стегазсет и Н. роШ [11]. В дальнейшем отмечалось увеличение концентрации ГА, по всей видимости, благодаря активации процессов их синтеза и экзоцитоза в це-. ломическую жидкость. Высокая корреляция между титрами агглютининов в опытной и контрольной группах свидетельствует об отсутствии какой-либо специфичности в ответ на введение ЭЧ. Но в целом можно отметить, что титр ГА в контрольной группе в большинстве случаев превышает таковой опытной группы. Это может свидетельствовать о большем расходе пула гемагглютинирующих факторов в ходе их взаимодействия с ЭЧ. Динамики титров лизинов опытной и контрольной групп достоверно коррелируют, что косвенно также указывает на отсутствие какой-либо специфичности ответа на введение антигена.
Динамика титров гемагглютининов и гемолизинов
Время, ч Титр гемагглютининов Титр гемолизинов
Контроль Опыт Контроль Опыт
0 1,50*0,22 • 2,00*0,00 ,
I ОДНО,00*** 0,00±0,00*** 3,00*0,00** 3,00*0,00**
3 3.75*0,95* 0,00±0.00*** 3,00*0,00** 3,00*0,00**
6 1.71*0,18 0,00±0.00*** 1.71*0,18 1,86*0,14
9 1,86*0,14 0,00±0,00*** 3,00*0.00** 3,00*0,00**
12 4,00±0,00** 3,86*0,14 3,00*0,00** 3,00*0,00**
24 1,00±0,00 0,00*0,00*** 2,00*0,00 2,00*0,00
48 3,67*0,21** 2,43*0,37* 2,00*0,00 2,00*0,00
72 2,00*0,00 2,14*0,14 2,00*0,00 2,00*0,00
96 0,00±0,00*** 0,00*0,00*** 3,00*0,00** 3,00*0,00**
120 4,00*0,38*** 4,29*0,18*** 4,57*0,53*** 4,43*0,30***
168 2,86*0,14*** 3,00*0,00*** 3,00*0,00** 3,00*0,00**
Примечание. Выявлена положительная корреляция между титрами гемагглютинирующих (/• = 0,654 ± 0,240, р < 0,05) и гемолизирующих (г = 0,923 ± 0,134, р < 0,001) факторов контрольной и опытной групп.
. См. объяснение *, **, *** к рис. 1.
Как показывают литературные данные, клеточные реакции являются важнейшими составляющими врожденных защитных механизмов иглокожих. Именно на циркулирующие в целомической жидкости клетки ложится основная нагрузка по элиминации патогенов у морских ежей [26] и морских звезд [3]. Причем система клеточных реакций является очень чувствительной, так как в ответ на минимальное ранение или инъекцию небольшого количества бактериальных липополисахаридов в целомоцитах морского ежа резко увеличивается синтез профилина - одного из актин-связывающих белков, что, по мнению авторов, указывает на переход клеток в активированное состояние [23]. Наши данные, полученные в ходе исследования ответа морских звезд на инъекцию суспензии ЭЧ, также свидетельствуют о ведущей роли клеточной составляющей защитных реакций.
В ответ на рану или инъекцию ЭЧ наблюдается достоверное понижение числа циркулирующих клеток. В контрольной группе животных достоверное снижение концентрации клеток наблюдается на сроке 24 ч, в то время как в Опытной группе концентрация клеток снижается лишь к сроку 96 ч, после чего вновь возрастает. Эта динамика количества цело-моцитов в 1 мл целомической жидкости в обеих группах может свидетельствовать о том,
что после нарушения целостности покровов часть клеток выходит из циркуляции и, возможно, участвует в формировании тромба, что подтверждается данными литературы [8]. При одновременном с повреждением покровов введении суспензии эритроцитов может иметь место не только выход целомоцитов из циркуляции в формирующийся тромб, но и гибель клеток в ходе различного рода защитных реакций, когда наполненные фагоцитированными частицами целомоциты выбрасываются наружу, например, через стенку желудка [2]. Но в ответ на введение чужеродных клеток или частиц может происходить поступление новых клеток из клеточных депо либо из органов гемопоэза. Некоторые авторы связывают изменения в численности циркулирующих клеток именно с их участием в образовании агг-лютинатов, состоящих из целомоцитов и объектов фагоцитоза, причем ранее формирование подобных структур было показано лишь в ответ на иммунизацию бактериальными культурами, а не эритроцитами млекопитающих или зимозаном [6, 26]. Однако, согласно данным других авторов, у голотурий как раз отмечено формирование подобных агглютинатов («узелков», по авторской терминологии) в ответ на введение другого' традиционного модельного объекта - эритроцитов барана [9, 10].
Следует отметить, что при инъекции суспензии бактерий в целом морского ежа 81гоп%у1осегагоШ с1гоеЬасЫет15 также наблюдалось падение численности целомоцитов, однако реакция носила более быстрый характер. Уже через 1,5—2 ч после начала эксперимента наблюдалось снижение концентрации клеток на 93% [26]. Морская звезда А. /огбау/ также отвечала на введение гемоцитов краба и ЭЧ резким снижением числа циркулирующих клеток [22]. Другой представитель типа иглокожие - голотурия Н. роШ - отвечал на введение в ЭЧ увеличением общего числа целомоцитов [10]. Причем максимальная числен4 ность циркулирующих клеток была зарегистрирована на сроке 48 ч, а исходные показатели достигались лишь на 10-е сутки после начала эксперимента, что практически совпадает с
нашими результатами.
До сих пор нет единого мнения о происхождении циркулирующих целомоцитов. Источниками клеточных элементов целомической жидкости могут служить стволовые клетки аксиального органа [13], тяжи мезенхимной ткани [15] или жгутйковый целомический эпителий [25]. Присутствие в полости целома малодифференцированных лимфоцитоподобных клеток послужило основанием для рассмотрения этих клеток в качестве предшественников амебоцитов и морул. Некоторые авторы обнаружили переходные формы между этими тремя типами клеток [14, 15]. Для морской звезды А. гиЬет было показано, что в ответ на ми-тогены В-лимфоцитов млекопитающих одна из клеточных популяций аксиального органа способна к пролиферации [19]. Кроме того, ранее отмечалось, что циркулирующие целомоциты не способны к делению, во всяком случае, по данным морфологических исследований целомоцитов, не взаимодействовавших с чужеродными клетками [10]. Напротив, полученные нами в ходе работы результаты не позволяют исключить возможности пролиферации циркулирующих клеток по данным МТТ-теста. .
Помимо основных функций целомоцитов, описанных в литературе (фагоцитоз, инкапсуляция, тромбообразование, репарация), можно выделить еще и способность клеток целомической жидкости к продукции активных форм кислорода, что было показано в ходе НСТ-теста. Так как целомоциты морской звезды способны к продукции 02”, то данные, полученные в результате анализа показателей НСТ-теста на 1 млн клеток, отражают количество НСТ-позитивных клеток на 1 млн. Тогда особый интерес представляют показатели на сроках 48-96 ч: в опытной группе наблюдается достоверное пикообразное увеличение НСТ* клеток в случае индуцированного НСТ-теста, а в контрольной группе данный показатель не превышает исходного. После введения ЭЧ происходит медленное снижение количества НСГ клеток (возможно, в результате их гибели в ходе защитных реакций), вслед за которым идет увеличение их количества (возможно, за счет выхода новых клеток в дифференцировку).
Заключение. На основании полученных результатов можно утверждать, что клеточно-опосредованные реакции у морской звезды Asterias rubens играют важную роль в защите животного от чужеродных молекул и клеток. Введение эритроцитов человека морской звезде Asterias rubens ведет к снижению числа целомоцитов и к повышению ими удельной продукции активных форм кислорода через 1 и 96 ч после иммунизации. Одновременно факторы гуморальной защитной системы не играют главенствующей роли в защите морских звезд от проникших патогенов.
Summary
Kudryavtsev I. У., Zlobina М. V., Baskakov А. V., Galaktionov N. К., Kanaykin D. P., Kozlova A. В., Khara-zovaA. D., Polevschikov A. V. Innate immunity mechanisms of sea star Asterias rubens.
This article is devoted to the investigation of starfish A. rubens innate immunity reactions. The dynamics of innate immunity cellular and humoral factors in response to human erythrocyte injection revealed the main part of cellular defense mechanisms, whereas it is considered that humoral factors are thought to play a subsidiary part in defense but may be involved in starfish regeneration. .
I
Литература
1. Иванов Ю. И., Погорелюк О. Н. Статистическая обработка медико-биологических исследований на микрокалькуляторах. М., 1990. 2. Коренбаум Е. С. Защитно-морфологические реакции целомоцитов морской звезды Asterias amurensis: Автореф. канд. дис. Владивосток, 1989. 44 с. 3. Коренбаум Е. С., Воробьев В. А. Клетки целомической жидкости морской звезды Asterias amurensis II Биология моря. 1988. № 1. С. 27-33. 4. BeckG., Ellis Т., Zhang Н. е. a. Nitric oxide production by coelomocytes of Asterias forbesi // Dev. Comp. Immunol. 2001. Vol. 25. P .1-10.
5. Bertheussen K. Complement-like activity in sea urchin coelomic fluid // Dev. Comp. Immunol. 1983. Vol. 7. P. 21-34.
6. Bertheussen K. Endocytosis by echinoid phagocytes in vitro. I. Recognition of foreign matter // Dev. Comp. Immunol.
1981. Vol. 5. P. 241-250. 7. Bertheussen K. Receptors for complement on echinoid phagocytes. II. Purified human complement mediates echinoid phagocytosis // Dev. Comp. Immunol. 1982. Vol. 6. P. 635-642. 8. Boolootain R. A., Guise A. C. Clotting of echinoderm coelomic fluid // J. Exp. Zool. 1959. Vol. 140. P. 207-229. 9. CanicattiC., Farina-LipariE. Dynamics and morphological.aspects of coelomocytes clotting in Holothuria polii II J. Invert. Pathol. 1990. Vol. 56. P. 63-69. 10. Canicatti C, D'Ancona G. Cellular ^pects of Holothuria polii immune response // J. Invert. Pathol. 1989. Vol. 53. P. 152-158. 11. CanicattiC., Rossigno F. Cellular reactions mimicking encapsulation in Holothuria polii (Echinodermata) // Eur. Arch. Biol. 1992. Vol. 103. P. 51—55. 12. Coffalo K.. Hinegardner R. Immune response in the sea urchin Lytechinus pictus II Science. 1977. Vol. 197. P. 1389-1390. 13. EndeanR. The coelomocytes and coelomic fluid // Physiology of Echinodermata. New York, 1966. P. 301-328. 14. FontainA.R., Lambert P. The fine structure of the leukocytes of holothurian, Cucumaria miniata // Canad. J. Zool. 1977. Vol. 55. P. 1530-1544. 15. HetzelH. R. Studies on holothurian coelomocytes. 2. The origin of coelomocytes and the formation of brown bodies // Biol., Bull. 1965. Vol. 128. P. 102-111. 16. Kard R. D., Hildemann-W. H. Specific allograft reactivity in the sea star Desmasterias imbricata II Transplantation. 1976. Vol. 22. P. 434-445. 17. Leclerc M. Human kappa-like expression in the axial organ of the sea star Asterias rubens (Echinoderma) // Eur. J. Morphol. 2000. Vol. 38. P. 206-207. 18. Leclerc М., Ameodo V. J., LegasE., Bajelan М., Vaugier G. L. Identification of T-like and В-like lymphocyte subsets in sea star Asterias rubens by monoclonal antibodies to human leukocytes // Thymus. 1993. Vol. 21. P. 133-139. 19. Leclerc М., BahmaoudT., BrillouetC. e. a. Stimulation of sea star Asterias rubens axial organ B-Iike cells by Nocardia-delipidated cell mitogen and derived fractions // Folia Biol. (Praha). 1988. Vol. 34. P. 182-191. 20. LegasE., Vaugier G. L„ BousquetE, Bajelan М., LeclercM. Primitive cytokines and cytokine receptors in invertebrates: the sea star Asterias rubens as a model of study // Scand. J. Immunol. 1996. Vol. 44. P. 375—380. 21. Pancer Z., RastJ. PDavidson E. H. Origins of immunity: transcription factors and homologues of effector genes of the vertebrate immune system expressed in sea urchin coelomocytes // Immunogenetics. 1999. Vol. 49. P. 773-786. 22. Reinisch C. L. Phylogenetic origin of xenogeneic recognition // Nature. 1974. Vol. 250. P. 349—350. 23. Smith L.C., Britten R. J., Davidson E. H. Lipopolysaccharide activates the sea urchin immune system // Dev. Comp. Immunol. 1995. Vol. 19. P. 217-224. 24. Smith L.C., Shin C. S., Dachenhausen S. G. Coelomocytes express SpBf, a homologue of factor B, the second component in the sea urchin complement system IIJ Immunol. 1998. Vol. 161. P. 6784-6793. 25. Vethamany V. G.. Fung M. The fine structure of the coelomocytes of the
sea urchin Strongylocentrotus droebachiensis II Canad. J. Zool. 1972. Vol. 50. P. 77-81. 26. YuiM.ABayne.C.J. Echinoderm immunology: bacterial clearance by the sea urchin Strongylocentrotus purpuratus II Biol Bull 1983 Vol. 165. P. 478-486.
Статья поступила в редакцию 17 июня 2004 г.
